肿瘤患者血浆P-sel、LN和NO水平及临床意义
作者：唐湘涓 徐军发 官成浓 陈小芳 吴华 周克元
单位：
唐湘涓(广东医学院检验系，湛江 524023)；徐军发(广东医学院检验系，湛江 524023)；官成浓(广东医学院附属医院肿瘤科，湛江 524001)；陈小芳(广东医学院检验系，湛江 524023)；吴华(广东医学院附属医院肿瘤科，湛江 524001)；周克元(广东医学院检验系，湛江 524023)
关键词：肿瘤；P-选择素；层粘连蛋白；一氧化氮
广东医学院学报000108 摘 要：目的：观察肿瘤患者血浆P-选择素(P-sel)、层粘连蛋白(LN)和一氧化氮(NO)的水平，并探讨其临床意义。方法：用ELISA法检测169例不同肿瘤患者血浆中P-sel和LN含量，比色法检测NO的含量。结果：除鼻咽癌组LN与正常人组间差异无显著性外，其余各肿瘤组血浆P-sel、LN和NO含量均明显高于正常对照组(P<0.05或P<0.01)，且P-sel和LN的升高与NO呈正相关(P<0.001)。结论：提示肿瘤患者体内有大量的血小板和内皮细胞活化或遭到破坏，细胞外基质也遭到破坏，这些变化与NO的增高可能有一定的关系。
, 百拇医药
分类号：R446.1
文章编号：1005-4057(2000)01-0019-03
Determination of plasma P-selectin,laminin and nitric oxide in tumor patients and their clinical significance
Tang Xiangjuan,Xu Junfa,Guan Chengnong,et al
(Department of Laboratory Medicine,Guangdong Medical College,Zhangjiang 524023)
Abstract：Objective：To observe the plasma levels of Pselectin (P-sel),laminin (LN) and nitric oxide (NO) in tumor patients and their clinical significance.Methods：The plasma concentrations of P-sel,LN in 169 tumor patients were determined by ELISA and that of NO was detected by a colorimetry.Results：The plasma levels of P-sel,LN and NO in all groups of tumor patients were significantly higher than those of the control group(P<0.05 or P<0.01),but the LN in nasopharyngeal carcinoma was not(P>0.05).The elevation of P-sel and LN in tumor patients were positively correlated with NO.Conclusion：The activation and destruction of platelet and endothelial cells and destruction of extracellular matrix in tumor patients may be related to the elevation of NO.
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Key words：tumor patients;P-selectin;laminin;nitric oxide▲
P-选择素(P-sel)是存在于血小板α颗粒和内皮细胞分泌颗粒(Weibel Palade body)内的一种糖蛋白。层粘连蛋白(LN)是细胞外间质中的一种非胶原性糖蛋白，广泛存在于基底膜的透明层。这两种糖蛋白都属于粘附分子，介导细胞与细胞、细胞与细胞间质之间的粘附，在调节细胞的分化、迁移和增殖中起重要作用。研究表明P-sel和LN与肿瘤的浸润及转移有着密切的关系。本研究对 169例不同肿瘤患者血浆 P-sel、LN和NO的水平进行了检测，并对 P-sel、LN与 NO的相关性进行了分析。
1 材料与方法
1.1 研究对象
169例肿瘤患者(男118例、女51例，年龄 25～73岁，平均48岁)为我院附属医院肿瘤科住院患者，其中肝癌组45例、肺癌组36例、胃癌组20例、鼻咽癌组18例、肠癌组21例、食道癌组17例、肾癌组12例。各组病例均根据临床表现和CT或MRI及细胞学或组织学检查确诊。30例体检者正常人为正常对照组，其中男17例、女13例，年龄20～55岁，平均42岁。
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1.2 方法
早晨空腹采静脉血，用20 g/L EDTA-Na2-7.0g/LNaCl抗凝。立即分离血浆，放于-70℃保存待检。P-sel和LN均采用ELISA双抗 体夹心法检测，试剂盒分别由苏州医学院血栓研究所和上海海军医学研究所提供。NO采用硝酸还原酶法测定血浆NO3-/NO2-，代表NO浓度，由南京建成生物医学工程研究所提供试剂盒。实验操作严格按试剂说明书进行。每份标本均作两个平行管，且所有标本均在同一批内检测。使用∑960型全自动酶标仪测定。
1.3 统计方法
数据用
表示，经方差齐性检验发现各肿瘤组与正常人组间方差不齐，故采用秩和检验进行组间比较。相关性采用单因素直线相关分析。
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2 结果
2.1 肿瘤患者和正常人血浆P-Sel、LN和NO含量见表1。表1显示除鼻咽癌组LN与正常人组间差异无显著性外，其它各肿瘤组血浆P-sel、LN和NO含量与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01)。
表1 肿瘤患者和正常人血浆P-sel、LN和NO含量() 组别
n
P-sel/(ρ/μg.L-1)
LN/(ρ/μg.L-1)
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NO/(c/μ mol.L-1)
肝 癌
45
188.92±102.73*
157.88±62.27*
175.23±48.52*
肺 癌
36
168.02±88.08*
143.81±49.58**
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158.35±56.08*
胃 癌
20
145.63±95.51*
149.54±40.87**
142.03±68.05**
鼻咽癌
18
125.91±105.32**
140.72±31.72
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156.25±74.23*
肠 癌
21
194.85±112.07*
170.39±58.05*
166.05±56.18*
食道癌
17
185.12±98.21*
160.04±53.24**
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146.25±44.14*
肾 癌
12
165.23±112.72*
178.25±85.13**
172.21±78.15*
正常人
30
18.47±3.76
108.58±20.38
72.25±12.03
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与正常人组比较，*P<0.01； **P<0.05
2.2 肿瘤患者血浆P-sel、LN与NO的相关性
将169例患者血浆P-sel和LN的浓度与NO的浓度分别进行单因素直线相关分析，r值分别为0.425和0.382，两者P<0.001。
3 讨论
肿瘤细胞的浸润及转移可由肿瘤细胞与正常细胞或细胞间质间在粘附分子介导下实现。P-sel和 LN均属于粘附分子。P-sel的受体主要存在于白细胞和内皮细胞的表面，介导嗜中性粒细胞和单核细胞与血小板和内皮细胞的粘附[1]。LN主要由基底膜的上皮细胞和内皮细胞产生，其受体主要是整合素 (integrin)，LN与其受体的结合在调节细胞的分化、迁移和增殖中发挥重要作用[2]。某些肿瘤细胞表面也可表达P-sel和LN受体，因此，肿瘤细胞可与LN结合，并粘附于胶原基质，或经P-sel介导与血小板及内皮细胞的粘附，从而促进肿瘤细胞转移[3～5]。正常人血液中P-sel和LN含量甚微。当血小板与内皮细胞被活化或被破坏时，一部分P-sel释放至血液中，使P-sel增加[6]。所以血液P-sel增高是血小板与内皮细胞活化和破坏的标志。而LN在血液中的增加是由于细胞外基质遭到破坏，或体内合成增多所致。NO作为一种重要的生物信使，在抗肿瘤免疫及促进肿瘤生长、转移等方面有双重作用[7]。目前，关于血液P-sel、LN与肿瘤的关系报道不多。本研究结果显示除鼻咽癌组LN与正常人组间差异无显著性外，其它肿瘤组血浆中P-sel、LN和NO含量均明显高于正常人对照组。说明肿瘤患者体内有大量的血小板和内皮细胞活化或血小板和内皮细胞遭到破坏，这样有利于肿瘤细胞的粘附和浸润。LN的增加可能是由于肿瘤细胞浸润或转移过程中粘附于基底膜，并破坏基底膜所致，这样有利于肿瘤细胞浸润[8]。NO的增高一方面是由于机体抗肿瘤免疫过程中巨噬细胞活化，产生NO；另一方面是肿瘤细胞内源性合成NO[9]。鼻咽癌组LN与正常人组之间差异无显著性，可能是由于样本太小所致。通过对P-sel、LN与NO的相关性进行分析，发现P-sel和LN的增高与NO的增高呈正相关，提示肿瘤患者体内血小板和内皮细胞的活化或破坏以及细胞外基的破坏可能与NO的产生有一定的关系。■
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基金项目：广东省卫生厅立项课题，编号：1997120
作者简介：唐湘涓，女1969年10月出生，大专，检验师
参考文献：
[1]Gamble JR，Skinner MP，Berndt MC，et al.Prevention of activated neutrophils adhesion to endothelium by soluble adhesion protein GMP-140.Science(Wash.DC).1990，249：414
[2]蔡毅，黄松明.层粘连蛋白的研究进展.国外医学生理病理科学与临床分册，1998，18：86
[3]Aznavoorian S，Murphy AN，Stetler-Stevenson WG，et al.Molecular aspects of tumor cell invasion and metastasis.Cancer，1993，71：1368
, 百拇医药
[4]Hida J，Matsuda T，Kitaoka M，et al.The role of basement membrane in colorectal cancer invasion and liver metastasis.Cancer，1994，74：592
[5]Kannagi R，Kawakami N，Narita T.Structure and function of cell adhesion molecules in selectin family and their roles in cancer metastasis.Nippon Rinsho，1995，53：1721
[6]Dunlop LC，Skinner MP，Bendall LJ，et al.Characterization of GMP-140(P-selectin)as a circulating plasma protein.J Exp Med，1992，175：1147
, http://www.100md.com
[7]Jjenkings DC，Charles IG，Thomsen LL，et al.Role of nitric oxide in tumor growth.Proc Natl Acad Sci USA.1995，92：4392
[8]Aznavoorian S，Murphy AN，Stetler-Stevenson WG，et al.Molecular aspects of tumor cell invasion and metastasis.Cancer，1993，71：1368
[9]Thomsen LL，Miles DW，Happerfield L，et al.Nitric oxide synthase activity in human breast cancer.Br J Cancer，1995，72：41
收稿日期：1999-07-13
修稿日期：2000-01-14, 百拇医药
单位：
唐湘涓(广东医学院检验系，湛江 524023)；徐军发(广东医学院检验系，湛江 524023)；官成浓(广东医学院附属医院肿瘤科，湛江 524001)；陈小芳(广东医学院检验系，湛江 524023)；吴华(广东医学院附属医院肿瘤科，湛江 524001)；周克元(广东医学院检验系，湛江 524023)
关键词：肿瘤；P-选择素；层粘连蛋白；一氧化氮
广东医学院学报000108 摘 要：目的：观察肿瘤患者血浆P-选择素(P-sel)、层粘连蛋白(LN)和一氧化氮(NO)的水平，并探讨其临床意义。方法：用ELISA法检测169例不同肿瘤患者血浆中P-sel和LN含量，比色法检测NO的含量。结果：除鼻咽癌组LN与正常人组间差异无显著性外，其余各肿瘤组血浆P-sel、LN和NO含量均明显高于正常对照组(P<0.05或P<0.01)，且P-sel和LN的升高与NO呈正相关(P<0.001)。结论：提示肿瘤患者体内有大量的血小板和内皮细胞活化或遭到破坏，细胞外基质也遭到破坏，这些变化与NO的增高可能有一定的关系。
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分类号：R446.1
文章编号：1005-4057(2000)01-0019-03
Determination of plasma P-selectin,laminin and nitric oxide in tumor patients and their clinical significance
Tang Xiangjuan,Xu Junfa,Guan Chengnong,et al
(Department of Laboratory Medicine,Guangdong Medical College,Zhangjiang 524023)
Abstract：Objective：To observe the plasma levels of Pselectin (P-sel),laminin (LN) and nitric oxide (NO) in tumor patients and their clinical significance.Methods：The plasma concentrations of P-sel,LN in 169 tumor patients were determined by ELISA and that of NO was detected by a colorimetry.Results：The plasma levels of P-sel,LN and NO in all groups of tumor patients were significantly higher than those of the control group(P<0.05 or P<0.01),but the LN in nasopharyngeal carcinoma was not(P>0.05).The elevation of P-sel and LN in tumor patients were positively correlated with NO.Conclusion：The activation and destruction of platelet and endothelial cells and destruction of extracellular matrix in tumor patients may be related to the elevation of NO.
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Key words：tumor patients;P-selectin;laminin;nitric oxide▲
P-选择素(P-sel)是存在于血小板α颗粒和内皮细胞分泌颗粒(Weibel Palade body)内的一种糖蛋白。层粘连蛋白(LN)是细胞外间质中的一种非胶原性糖蛋白，广泛存在于基底膜的透明层。这两种糖蛋白都属于粘附分子，介导细胞与细胞、细胞与细胞间质之间的粘附，在调节细胞的分化、迁移和增殖中起重要作用。研究表明P-sel和LN与肿瘤的浸润及转移有着密切的关系。本研究对 169例不同肿瘤患者血浆 P-sel、LN和NO的水平进行了检测，并对 P-sel、LN与 NO的相关性进行了分析。
1 材料与方法
1.1 研究对象
169例肿瘤患者(男118例、女51例，年龄 25～73岁，平均48岁)为我院附属医院肿瘤科住院患者，其中肝癌组45例、肺癌组36例、胃癌组20例、鼻咽癌组18例、肠癌组21例、食道癌组17例、肾癌组12例。各组病例均根据临床表现和CT或MRI及细胞学或组织学检查确诊。30例体检者正常人为正常对照组，其中男17例、女13例，年龄20～55岁，平均42岁。
, http://www.100md.com
1.2 方法
早晨空腹采静脉血，用20 g/L EDTA-Na2-7.0g/LNaCl抗凝。立即分离血浆，放于-70℃保存待检。P-sel和LN均采用ELISA双抗 体夹心法检测，试剂盒分别由苏州医学院血栓研究所和上海海军医学研究所提供。NO采用硝酸还原酶法测定血浆NO3-/NO2-，代表NO浓度，由南京建成生物医学工程研究所提供试剂盒。实验操作严格按试剂说明书进行。每份标本均作两个平行管，且所有标本均在同一批内检测。使用∑960型全自动酶标仪测定。
1.3 统计方法
数据用
表示，经方差齐性检验发现各肿瘤组与正常人组间方差不齐，故采用秩和检验进行组间比较。相关性采用单因素直线相关分析。, 百拇医药
2 结果
2.1 肿瘤患者和正常人血浆P-Sel、LN和NO含量见表1。表1显示除鼻咽癌组LN与正常人组间差异无显著性外，其它各肿瘤组血浆P-sel、LN和NO含量与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01)。
表1 肿瘤患者和正常人血浆P-sel、LN和NO含量(
) 组别n
P-sel/(ρ/μg.L-1)
LN/(ρ/μg.L-1)
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NO/(c/μ mol.L-1)
肝 癌
45
188.92±102.73*
157.88±62.27*
175.23±48.52*
肺 癌
36
168.02±88.08*
143.81±49.58**
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158.35±56.08*
胃 癌
20
145.63±95.51*
149.54±40.87**
142.03±68.05**
鼻咽癌
18
125.91±105.32**
140.72±31.72
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156.25±74.23*
肠 癌
21
194.85±112.07*
170.39±58.05*
166.05±56.18*
食道癌
17
185.12±98.21*
160.04±53.24**
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146.25±44.14*
肾 癌
12
165.23±112.72*
178.25±85.13**
172.21±78.15*
正常人
30
18.47±3.76
108.58±20.38
72.25±12.03
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与正常人组比较，*P<0.01； **P<0.05
2.2 肿瘤患者血浆P-sel、LN与NO的相关性
将169例患者血浆P-sel和LN的浓度与NO的浓度分别进行单因素直线相关分析，r值分别为0.425和0.382，两者P<0.001。
3 讨论
肿瘤细胞的浸润及转移可由肿瘤细胞与正常细胞或细胞间质间在粘附分子介导下实现。P-sel和 LN均属于粘附分子。P-sel的受体主要存在于白细胞和内皮细胞的表面，介导嗜中性粒细胞和单核细胞与血小板和内皮细胞的粘附[1]。LN主要由基底膜的上皮细胞和内皮细胞产生，其受体主要是整合素 (integrin)，LN与其受体的结合在调节细胞的分化、迁移和增殖中发挥重要作用[2]。某些肿瘤细胞表面也可表达P-sel和LN受体，因此，肿瘤细胞可与LN结合，并粘附于胶原基质，或经P-sel介导与血小板及内皮细胞的粘附，从而促进肿瘤细胞转移[3～5]。正常人血液中P-sel和LN含量甚微。当血小板与内皮细胞被活化或被破坏时，一部分P-sel释放至血液中，使P-sel增加[6]。所以血液P-sel增高是血小板与内皮细胞活化和破坏的标志。而LN在血液中的增加是由于细胞外基质遭到破坏，或体内合成增多所致。NO作为一种重要的生物信使，在抗肿瘤免疫及促进肿瘤生长、转移等方面有双重作用[7]。目前，关于血液P-sel、LN与肿瘤的关系报道不多。本研究结果显示除鼻咽癌组LN与正常人组间差异无显著性外，其它肿瘤组血浆中P-sel、LN和NO含量均明显高于正常人对照组。说明肿瘤患者体内有大量的血小板和内皮细胞活化或血小板和内皮细胞遭到破坏，这样有利于肿瘤细胞的粘附和浸润。LN的增加可能是由于肿瘤细胞浸润或转移过程中粘附于基底膜，并破坏基底膜所致，这样有利于肿瘤细胞浸润[8]。NO的增高一方面是由于机体抗肿瘤免疫过程中巨噬细胞活化，产生NO；另一方面是肿瘤细胞内源性合成NO[9]。鼻咽癌组LN与正常人组之间差异无显著性，可能是由于样本太小所致。通过对P-sel、LN与NO的相关性进行分析，发现P-sel和LN的增高与NO的增高呈正相关，提示肿瘤患者体内血小板和内皮细胞的活化或破坏以及细胞外基的破坏可能与NO的产生有一定的关系。■
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基金项目：广东省卫生厅立项课题，编号：1997120
作者简介：唐湘涓，女1969年10月出生，大专，检验师
参考文献：
[1]Gamble JR，Skinner MP，Berndt MC，et al.Prevention of activated neutrophils adhesion to endothelium by soluble adhesion protein GMP-140.Science(Wash.DC).1990，249：414
[2]蔡毅，黄松明.层粘连蛋白的研究进展.国外医学生理病理科学与临床分册，1998，18：86
[3]Aznavoorian S，Murphy AN，Stetler-Stevenson WG，et al.Molecular aspects of tumor cell invasion and metastasis.Cancer，1993，71：1368
, 百拇医药
[4]Hida J，Matsuda T，Kitaoka M，et al.The role of basement membrane in colorectal cancer invasion and liver metastasis.Cancer，1994，74：592
[5]Kannagi R，Kawakami N，Narita T.Structure and function of cell adhesion molecules in selectin family and their roles in cancer metastasis.Nippon Rinsho，1995，53：1721
[6]Dunlop LC，Skinner MP，Bendall LJ，et al.Characterization of GMP-140(P-selectin)as a circulating plasma protein.J Exp Med，1992，175：1147
, http://www.100md.com
[7]Jjenkings DC，Charles IG，Thomsen LL，et al.Role of nitric oxide in tumor growth.Proc Natl Acad Sci USA.1995，92：4392
[8]Aznavoorian S，Murphy AN，Stetler-Stevenson WG，et al.Molecular aspects of tumor cell invasion and metastasis.Cancer，1993，71：1368
[9]Thomsen LL，Miles DW，Happerfield L，et al.Nitric oxide synthase activity in human breast cancer.Br J Cancer，1995，72：41
收稿日期：1999-07-13
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