前列腺增生症各区细胞EGF、EGF-R、bFGF和TGF-β1表达的意义
作者：蔡文清 凌亦凌 黎玮 张勇 王东彬
单位：蔡文清(河北医科大学第二医院泌尿外科 石家庄050000)；凌亦凌(河北医科大学基础医学院病理生理学教研室)；黎玮(河北医科大学第二医院泌尿外科 石家庄050000)；张勇(河北医科大学第二医院泌尿外科 石家庄050000)；王东彬(河北医科大学第二医院泌尿外科 石家庄050000)
关键词：前列腺肥大；诊断；表皮生长因子；表皮生长因子受体；碱性纤维细胞生长因子；转化生长因子β
河北医科大学学报000113
分类号：R697+.32▲
良性前列腺增生症(benign prostatic hyperplasia,BPH)是老年男性常见病，但病因至今尚无定论。1972年McNeal将前列腺的功能、病理变化与形态学联系起来，将其分为周边区(peripheral zone,PZ)、移行区(transitional zone,TZ)和中央区(central zone,CZ)，并提出周边区为前列腺癌最常发生的区域，而移行区则是前列腺增生症发生的唯一部位。经过多年研究,这一理论已得到多数学者的认可。本研究通过对3个区组织的表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(epidermal growth factor receptor,EGF-R)、碱性纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)分别进行检测，探讨其表达在BPH发病中的意义。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 一般资料:33例87份标本均取自经膀胱前列腺摘除术的患者，全部患者术后光镜病理证实为BPH，年龄58～83岁，平均66.4岁。取出前列腺后立即按McNeal解剖分区取材，分别用70 %酒精固定,4 ℃冰箱保存。
1.2 单细胞样品制备：将70 %酒精固定的标本用生理盐水冲洗后，用搓网法制备单细胞样品，置0～4 ℃冰箱备检。
1.3 试剂：①EGF，克隆144-8,鼠抗人单克隆抗体,效价1∶100,No sc-38。②EGF-R,克隆1005,鼠抗人单克隆抗体,效价1∶100,No sc-03。③bFGF,克隆147-G,兔抗人多克隆抗体,效价1∶50,No sc-79。④TGF-β1,克隆V,兔抗人多克隆抗体,效价1∶50,No sc-146。⑤羊抗鼠(二抗)FITC-IgG,批号JF-0309和羊抗兔(二抗)FITC-IgG,批号ZF-0308。以上各种试剂均由美国 Santa Cruz Biotechnology公司生产。
, 百拇医药
1.4 免疫荧光检测样品制备：采用间接免疫荧光标记法，取1×106/ml细胞，用PBS液洗涤2次，每次2 min，1 000 r/min离心去上清液，加入1∶100的鼠抗人单克隆抗体(EGF,EGF-R)或1∶50的兔抗人多克隆抗体(bFGF,TGF-β1)，在37 ℃水浴中温育30 min，用PBS离心洗涤2次，弃上清，加入1∶100稀释的羊抗鼠(或羊抗兔)FITC-IgG 100 μl，37 ℃温育30 min，离心洗涤2次，弃上清，除去未结合的多余荧光抗体，上机检测前加入1.0 ml PBS液，经400目筛网过滤。同时设有：①PBS代替一抗的阴性对照；②只加一抗的阳性对照；③只加1∶100 FITC-IgG(二抗)的阳性对照；④用小鼠血清或兔血清的同型对照。
1.5 流式细胞检测：应用FACS-420型流式细胞仪(美国B.D公司)进行检测。数据和图像送入Hp-300 Consort 30计算机，应用相应的程序软件分别进行资料处理。测定前以鸡红细胞作为标准样品调整仪器的CV值在5 %以内。
, 百拇医药
1.6 统计学处理:所得数据标记率的中位值(%)和单细胞表达量的中位值(pg)采用SPSS软件行多个样本两两比较的秩和检验(非参数统计)进行统计学处理。
2 结 果
2.1 3个区中3种生长因子和EGF-R的标记率:见表1。
表1 3个区中3种生长因子和EGF-R的标记率
(%) 组织部位
EGF
EGF-R
bFGF
TGF-β1
PZ
, 百拇医药
16.50
14.00
16.40
15.20
TZ
24.10*
19.80*
22.50
22.60
CZ
12.90
15.50
, http://www.100md.com
18.80
15.80
* P<0.01与PZ和CZ比较 P>0.05其余各组两两比较(秩和检验)
2.2 3个区中3种生长因子和EGF-R的表达量:见表2。
表2 3个区中3种生长因子和EGF-R的表达量
(m/pg) 组织部位
EGF
EGF-R
bFGF
TGF-β1
PZ
, http://www.100md.com
49.00
48.00
44.96
46.00
TZ
76.99*
70.00*
69.98*
61.98*
CZ
50.99
49.00
, 百拇医药
44.96
50.00
* P<0.01与PZ和CZ比较 P>0.05其余各组两两比较(秩和检验)3 讨 论
虽然BPH的真正病因目前尚不清楚,但许多研究都认为BPH的发生除与雌、雄激素失衡有关外,3种生长因子的局部作用也是不可忽视的重要因素。本研究结果表明,在发生BPH的移行区中EGF、EGF-R、bFGF和TGF-β1的表达量明显高于周边区和中央区,EGF和EGF-R的标记率在移行区也明显高于周边区和中央区,提示BPH的发生很可能与这些生长因子的长期作用有关。正常情况下,EGF和TGF-β1对前列腺上皮细胞的作用效果是相反的,EGF促使其增生,而TGF-β1对增生起抑制作用,两种因子的相互作用维持前列腺组织的正常形态。值得提出的是,本研究发现TGF-β1在移行区也有高表达,该因子属细胞增殖抑制因子,其高表达应该抑制细胞增殖,以防止BPH的发生,但结果并不如此。这种矛盾结果的解释是:①BPH组织对TGF-β1的反应与正常前列腺组织不同,或细胞上的受体有差别,TGF-β1与其结合后,不但不能抑制增生,反而起到刺激增生的作用;②EGF和bFGF的联合作用大于TGF-β1的作用,尽管TGF-β1有高表达,但也不能抑制EGF和bFGF的促增生作用;③bFGF和TGF-β1在前列腺组织中有1个相对恒定的比例,这个比例一旦被破坏,就可引起增生。总之,这些生长因子在BPH的发生中是1个重要的因素,但哪个或哪些因素是起动因子、它们之间及其与其它因子之间的相互关系还有待进一步研究。■
基金项目：博士研究生课题
收稿日期：1999-09-15, http://www.100md.com
单位：蔡文清(河北医科大学第二医院泌尿外科 石家庄050000)；凌亦凌(河北医科大学基础医学院病理生理学教研室)；黎玮(河北医科大学第二医院泌尿外科 石家庄050000)；张勇(河北医科大学第二医院泌尿外科 石家庄050000)；王东彬(河北医科大学第二医院泌尿外科 石家庄050000)
关键词：前列腺肥大；诊断；表皮生长因子；表皮生长因子受体；碱性纤维细胞生长因子；转化生长因子β
河北医科大学学报000113
分类号：R697+.32▲
良性前列腺增生症(benign prostatic hyperplasia,BPH)是老年男性常见病，但病因至今尚无定论。1972年McNeal将前列腺的功能、病理变化与形态学联系起来，将其分为周边区(peripheral zone,PZ)、移行区(transitional zone,TZ)和中央区(central zone,CZ)，并提出周边区为前列腺癌最常发生的区域，而移行区则是前列腺增生症发生的唯一部位。经过多年研究,这一理论已得到多数学者的认可。本研究通过对3个区组织的表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)及其受体(epidermal growth factor receptor,EGF-R)、碱性纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)分别进行检测，探讨其表达在BPH发病中的意义。
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1 材料和方法
1.1 一般资料:33例87份标本均取自经膀胱前列腺摘除术的患者，全部患者术后光镜病理证实为BPH，年龄58～83岁，平均66.4岁。取出前列腺后立即按McNeal解剖分区取材，分别用70 %酒精固定,4 ℃冰箱保存。
1.2 单细胞样品制备：将70 %酒精固定的标本用生理盐水冲洗后，用搓网法制备单细胞样品，置0～4 ℃冰箱备检。
1.3 试剂：①EGF，克隆144-8,鼠抗人单克隆抗体,效价1∶100,No sc-38。②EGF-R,克隆1005,鼠抗人单克隆抗体,效价1∶100,No sc-03。③bFGF,克隆147-G,兔抗人多克隆抗体,效价1∶50,No sc-79。④TGF-β1,克隆V,兔抗人多克隆抗体,效价1∶50,No sc-146。⑤羊抗鼠(二抗)FITC-IgG,批号JF-0309和羊抗兔(二抗)FITC-IgG,批号ZF-0308。以上各种试剂均由美国 Santa Cruz Biotechnology公司生产。
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1.4 免疫荧光检测样品制备：采用间接免疫荧光标记法，取1×106/ml细胞，用PBS液洗涤2次，每次2 min，1 000 r/min离心去上清液，加入1∶100的鼠抗人单克隆抗体(EGF,EGF-R)或1∶50的兔抗人多克隆抗体(bFGF,TGF-β1)，在37 ℃水浴中温育30 min，用PBS离心洗涤2次，弃上清，加入1∶100稀释的羊抗鼠(或羊抗兔)FITC-IgG 100 μl，37 ℃温育30 min，离心洗涤2次，弃上清，除去未结合的多余荧光抗体，上机检测前加入1.0 ml PBS液，经400目筛网过滤。同时设有：①PBS代替一抗的阴性对照；②只加一抗的阳性对照；③只加1∶100 FITC-IgG(二抗)的阳性对照；④用小鼠血清或兔血清的同型对照。
1.5 流式细胞检测：应用FACS-420型流式细胞仪(美国B.D公司)进行检测。数据和图像送入Hp-300 Consort 30计算机，应用相应的程序软件分别进行资料处理。测定前以鸡红细胞作为标准样品调整仪器的CV值在5 %以内。
, 百拇医药
1.6 统计学处理:所得数据标记率的中位值(%)和单细胞表达量的中位值(pg)采用SPSS软件行多个样本两两比较的秩和检验(非参数统计)进行统计学处理。
2 结 果
2.1 3个区中3种生长因子和EGF-R的标记率:见表1。
表1 3个区中3种生长因子和EGF-R的标记率
(%) 组织部位
EGF
EGF-R
bFGF
TGF-β1
PZ
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16.50
14.00
16.40
15.20
TZ
24.10*
19.80*
22.50
22.60
CZ
12.90
15.50
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18.80
15.80
* P<0.01与PZ和CZ比较 P>0.05其余各组两两比较(秩和检验)
2.2 3个区中3种生长因子和EGF-R的表达量:见表2。
表2 3个区中3种生长因子和EGF-R的表达量
(m/pg) 组织部位
EGF
EGF-R
bFGF
TGF-β1
PZ
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49.00
48.00
44.96
46.00
TZ
76.99*
70.00*
69.98*
61.98*
CZ
50.99
49.00
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44.96
50.00
* P<0.01与PZ和CZ比较 P>0.05其余各组两两比较(秩和检验)3 讨 论
虽然BPH的真正病因目前尚不清楚,但许多研究都认为BPH的发生除与雌、雄激素失衡有关外,3种生长因子的局部作用也是不可忽视的重要因素。本研究结果表明,在发生BPH的移行区中EGF、EGF-R、bFGF和TGF-β1的表达量明显高于周边区和中央区,EGF和EGF-R的标记率在移行区也明显高于周边区和中央区,提示BPH的发生很可能与这些生长因子的长期作用有关。正常情况下,EGF和TGF-β1对前列腺上皮细胞的作用效果是相反的,EGF促使其增生,而TGF-β1对增生起抑制作用,两种因子的相互作用维持前列腺组织的正常形态。值得提出的是,本研究发现TGF-β1在移行区也有高表达,该因子属细胞增殖抑制因子,其高表达应该抑制细胞增殖,以防止BPH的发生,但结果并不如此。这种矛盾结果的解释是:①BPH组织对TGF-β1的反应与正常前列腺组织不同,或细胞上的受体有差别,TGF-β1与其结合后,不但不能抑制增生,反而起到刺激增生的作用;②EGF和bFGF的联合作用大于TGF-β1的作用,尽管TGF-β1有高表达,但也不能抑制EGF和bFGF的促增生作用;③bFGF和TGF-β1在前列腺组织中有1个相对恒定的比例,这个比例一旦被破坏,就可引起增生。总之,这些生长因子在BPH的发生中是1个重要的因素,但哪个或哪些因素是起动因子、它们之间及其与其它因子之间的相互关系还有待进一步研究。■
基金项目：博士研究生课题
收稿日期：1999-09-15, http://www.100md.com