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编号:10221046
胃癌高、低发区人群中幽门螺杆菌感染儿童抗CagA抗体的比较
http://www.100md.com 《广州医学院学报》 2000年第1期
     作者:陈为 曾志荣 彭仲生 胡品津

    单位:陈为 曾志荣 胡品津(中山医科大学附属第一医院消化内科,广州 510089);彭仲生(广州医学院第一附属医院消化内科)

    关键词:

    广州医学院学报000105

    提要 目的:明确我国胃癌高、低发区普通人群中Hp感染儿童抗Cag A抗体的差异。方法:采用Helico blot 2.0系统检测胃癌高发区(陕两省安塞县)和低发区(广东省从化县)年龄、性别匹配的Hp阳性无症状儿童血清标本各30例,并对两地儿童的胃窦、胃体粘膜组织学进行比较。结果:(1)安塞县Hp感染儿童血清抗Cag A(116kDa)、VacA(89kDa)、35kDa、30kDa、26.5kDa和19.5kDa抗体阳性率分别为90%、30%、90%、100%、100%和56.67%,从化县分别为96.67%、30%、83.33%、86.67%、86.67%和43.33%,两者比较无显者性差异(P>0.05)。(2)两地儿童胃粘膜慢性炎症、活动性炎症发生率均无统计学差异(P>0.05),但萎缩及淋巴滤泡形成在胃癌高发区有增多的趋势。结论:我国胃癌高、低发区普通人群从儿童期开始感染的Hp绝人多数为cagApH阳性Hp,CagA基因不能作为我国胃癌危险性的预测指标。
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    中图分类号 R735.2 文献标识码:A 文章编号:1008-1836(2000)01-0020-04

    A Comparison of Prevalence of Antibody to Cag A in

    Children with Infection of Helicobacter Pylori

    between Aeras of High and Low Incidenes

    Chen Wei,Zeng Zhirong,(The First Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University of Medical Sciences,Guangzhou 510089)

    Peng Zhongsheng
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    (The First Affiliated Hospital,Guangzhou Medical College,Guangzhou 510120)

    Objective:To make certain whether there is a difference in the seroprevalence of antibody to Cag A in Helicobacter Pylori (H.pylori) infected children in areas with high and low incidences of the infection in China. Methods:Serum specimens from 30 cases of sex and age matched asymptomatic children were sampled out from children population at Ansai County (an area with high incidence of gastric cancer),Shanxi Province,and Conghua County (an area with low incidence of gastric cancer),Guangdong Province,respectively.Serum antibodies to specific antigens of H.pylori were detected using Helico-blot 2.0 Western blot system,the histopathological features of the gastric biopsy samples from the antrum and the body of stomach were assessed by Sydney System. Results:1.At Ansai County the positive rates of serum antibodies to H.pylori specific antigens such as CagA,VacA,antibody of 35kDa,30kDa,26.5kDa and 19.5kDa were 90%,30%,90%,100%,100%and 56.67%,respectively,and that at Conghua County were 96.67%,30%,83.33%,86.67%,86.67% and 43.33%,no difference in the positive rates between the two counties was observed (P>0.05). 2.The incidences of chronic and active gastritis at the two counties were with no statistically significant difference (P>0.05),but there seemed to be a trend of increase in the rates of atrophy and lymphocyte follicle at Ansai county. Conclusion:Our data suggest that the seroprevalence of antibody to CagA is very common in H.pylori-positive children,and CagA gene may not be a predictive marker of gastric cancer in China.
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    Key words Helicobacter pylori;CagA antibody;Western blot;Gastric cancer

    研究证明幽门螺杆菌(Hp)产生的由细胞毒素相关基因(cagA)编码的CagA蛋白是HP的重要致病因子。西方发达国家的研究报道在消化性溃疡或胃癌患者中Hp的cagA检出率或血清的抗CagA抗体检出率显著高于单纯慢性胃炎,因而提示cagA阳性Hp菌株与消化性溃疡和胃癌发病有关。然而中国和韩国等的研究却发现无论消化性溃疡、胃癌还是Hp阳性的NUD患者均有非常高的cagA或CagA检出率[1,2]。要解释这些研究结果的矛盾必须先了解cagA阳性Hp在该地区普通人群中的流行情况,现已公认获得Hp感染的关键年龄在儿童期,因此调查cagA阳性Hp在普通人群中儿童的流行情况更具代表性。1 材料和方法

    1.1 病例资料

    我们先前在我国胃癌高发区陕西省安塞县(胃癌死亡率54/10万)和低发区广东省从化县(胃癌死亡率3/10万)用群体抽样法对353例7~13岁儿童进行了胃镜及Hp血清学调查[3]。本研究随机从血清标本库中抽取两地年龄、性别匹配的Hp阳性(组织学、尿素酶和血清学均阳性)无症状儿童的血清标本各30例,10例Hp阴性血清标本作为对照。所有标本均有完整的组织学资料,采用慢性胃炎悉尼系统对胃窦、胃体粘膜组织中各项指标进行评定。
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    1.2 Hp IgG ELISA检查

    为证实所选标本均为Hp血清学阳性,我们参照先前所建立的方法再次进行了Hp IgG ELISA 检查[4]

    1.3 免疫印迹(Western blot)检查

    Helico Blot 2.0系统试剂盒购自Genelabs Diagnostics公司,该试剂盒为一种简易的Western blot系统,其硝化纤维膜上预先经Hp抗原处理,含有几种Hp重要抗原,包括CagA、VacA、尿素酶亚单位和一些小分子抗原。主要的操作方法如下:1.将硝化纤维膜条放于反应槽,每槽加入洗涤缓冲液2ml,放于摇床上孵育5min;2.弃洗涤缓冲液,加入印迹缓冲液2ml和对照血清(1个批号试剂盒提供一个阳性和一个阴性对照)及待检血清标本20μl(1:100),放于摇床上孵育1h;3.弃上述液体并洗板,加1∶1000的联结了碱性磷酸酶的羊抗人IgG 2ml,孵育1h;4.洗板后加入2ml底物溶液(5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸,BCIP;四唑氮蓝,NBT),孵育15min显色;5.与阳性、阴性对照血清标本条带比较,记录各待检标本出现的条带。
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    Hp阳性的判断标准为出现116kDa(CagA)、89kDa(VacA)和35kDa中的任何一条带,或30kDa、26.5kDa和19.5kDa中的任何二条带。

    1.4 统计方法

    采用χ2检验或精确概率法比较两地区相应抗体出现的百分率及两地组织学差异。

    2 结果

    2.1 两地区血清标本抗CagA抗体及其它Hp特异性抗原抗体阳性率的比较

    60例标本经再次ELISA检查证实均为阳性。Helico blot 2.0系统检查试剂盒提供的标准Hp阳性对照血清出现上述所有条带,标准阴性对照血清无阳性条带出现。待检标本经Helico blot 2.0系统检查均为阳性,10例Hp阴性血清Helico blot 2.0系统检查均为阴性,两地血清标本识别的抗原分布如下表1。
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    表1 两地血清标本识别Hp特异性抗原分布(%) 地区

    例数

    Hp特异性抗原

    19.5kDa

    26.5kDa

    30kDa

    35kDa

    89kDa

    116kDa

    从化

    30

    43.33%
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    86.67%

    86.67%

    83.33%

    30%

    96.67%

    (13/30)

    (26/30)

    (26/30)

    (25/30)

    (9/30)

    (29/30)

    安塞

, 百拇医药     30

    56.67%

    100%

    100%

    90%

    30%

    90%

    (17/30)

    (30/30)

    (30/30)

    (29/30)

    (9/30)

    (27/30)
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    P>0.25

    P=0.056

    P=0.056

    P>0.25

    P>0.25

    从表中可见此两地区Hp感染儿童血清识别CagA抗原(116kDa)、VacA抗原(89kDa)、尿素酶亚单位(30kDa)和一些小分子抗原无明显差异(P>005)。

    2.2 两地区儿童标本组织学比较

    两地区Hp感染儿童标本的组织学比较见表2。

    从表中可见,两地区CagA 阳性儿童其胃窦均表现为中-重度慢性炎症,安塞地区有82%(22/27)儿童胃粘膜表现为活动性炎症,从化地区有83%(24/29)的儿童表现为活动性炎症,两者比较无明显差异(P>0.05);在安塞有7%(2/27)和59%(16/27)儿童分别出现胃粘膜萎缩和淋巴滤泡形成,而在从化分别为0和41%(12/29),两者比较虽统计学上无差异(P>0.05),但胃癌高发区安塞地区的儿童出现胃粘膜萎缩和淋巴滤泡与胃癌低发区的从化地区相比有增加的趋势。
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    表2 两地儿童标本的组织学比较[CagA(+)率%] Hp(+)慢性胃炎

    安塞(%)

    从化(%)

    中-重度慢性

    炎症(胃窦)

    27/27(100)

    29/29(100)

    (窦+体)

    11/27(41)

    11/29(38)

    活动性炎症

, 百拇医药     22/27(82)

    24/29(83)

    萎缩*

    2/27(7)

    0/29(0)

    淋巴滤泡

    16/27(59)

    12/29(41)

    注:*安塞2例萎缩改变均为轻度3 讨论

    国外众多的流行病学调查显示cagA基因编码的CagA蛋白和消化性溃疡、严重的胃炎及胃癌的发病有关[5,6,7],胃癌患者血清抗CagA抗体阳性率高于单纯胃炎患者[8]。尽管CagA的确切的致病作用尚未阐明,西方国家认为CagA可以作为Hp的致病标志。然上述观点在我国并没得到确认,我们先前比较了我国胃癌患者和无症状Hp感染者的抗CagA抗体的发生率,结果发现前者为85.7%,后者为83.3%,两者无显著差异[1]。Pan等[9]采用分子生物学技术比较了83株Hp,其中48株来自消化性溃疡患者,另35株来自慢性胃炎患者,结果发现cagA+在上述菌株中的发生率为98%(47/48)和100%(35/35)。有研究还比较了cagA+和cagA-Hp感染引起的慢性胃炎严重程度的差异,发现后者重于前者[10]。这些与西方国家迥然不同的结果表明在我国大多数Hp菌株含cagA,cagA基因不能作为我国Hp感染所致胃肠疾病严重程度的唯一指标。但这些研究大多是在成年患者中进行的,由于成年人社会接触的广泛性,因此可能在原有的Hp感染基础上感染新的菌株,如cag+菌株,这将导致血清抗CagA抗体阳性率升高。己确认获得Hp感染的关键年龄在儿童期,分析儿童Hp感染患者cagA+菌株发生率将可避免成年人中的多株感染因素的干扰,其资料更有说服力,然而有关儿童Hp感染人群中cagA+菌株流行情况以及cagA基因在儿童胃肠疾病中的地位等资料甚少。本研究比较了我国胃癌高、低发区Hp感染儿童的血清Hp特异性抗体,发现两地区抗CagA抗体阳性率高达90%或以上,两者无差异(90%比96.67%,P>0.05),抗VacA及其它小分子抗原抗体之间亦无差异,提示在我国无论胃癌高、低发区普通人群从儿童期开始感染的Hp绝大多数为cagA阳性菌株。
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    比较胃癌高、低发区抗CagA抗体阳性Hp感染儿童的胃粘膜组织学发现,慢性胃炎严重程度及活动性炎症两者无差异,但胃癌高发区儿童胃粘膜萎缩和淋巴滤泡形成却比低发区有增加的趋势,这提示CagA虽是Hp的重要致病因素,但在胃癌的发病中尚不足够,可能还有其它因素参与,如环境、宿主等因素[11]。其次,在我国是否存在和胃癌发病有密切关系的Hp新的基因或表型,尚有待进一步探索。总之,我们的结果表明cagA阳性菌株在我国胃癌高、低发区Hp感染儿童中非常普遍,cagA不能作为我国胃癌危险性的预测指标。

    作者简介:陈为,女(1965.5-),大专,主治技师。研究方向:胃癌的诊断与治疗。

    参考文献

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    [2]Miehlke S,Kibler K,Kim JG,et al.Allelic variation in the cagA gene of Helicobacter pylori obtained from Korea compared to the United States[J]. Am J Gastroenterol,1996;91(7):1322~1325

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    (收稿:1999-11-22), http://www.100md.com