细胞骨架光镜制片的简便方法
作者：林颖 刘玉良
单位：林颖(福建医科大学 生物学教研室,福州 350004); 刘玉良(福建医科大学 生物学教研室,福州 350004)
关键词：细胞支架；上皮细胞；口腔
福建医科大学学报000138
中图分类号:Q245 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)01-0026-01
在真核细胞的胞质中，存在许多纤维状结构--微管、微丝、中间纤维，它们共同组成细胞骨架。细胞生物学实验中，观察细胞骨架是一项重要内容。学生实验教学中常用洋葱鳞茎内表皮细胞临时装片和用人成纤维细胞或Hela细胞制成的永久片来观察细胞骨架[1]。笔者经过实验，摸索出一种用人口腔上皮细胞制作细胞骨架制片的简便方法，介绍如下。
1 材料和方法
1.1 材料 人口腔上皮细胞
1.2 方法
(1)涂片 用干净牙签刮取人口腔上皮细胞，置于装有生理盐水试管中，洗涤离心1～2次，剩约0.5～1 ml上清液，吸管吹打均匀、涂片、晾干。
(2)漂洗 M缓冲液[1]漂洗3次。
(3)处理 1%Triton X-100-PPS 37℃处理30 min[2]，M缓冲液漂洗3次。
(4)固定 3%戊二醛固定15～20 min，PPS洗数次，滤纸吸干。
(5)染色 0.2%考马斯亮蓝R250染色5～10 min。
(6)封片 水洗制成临时片或晾干用中性树胶封片成永久片。
2 结果与体会
显微镜下，可见口腔上皮细胞胞质内有被染成蓝色的网状结构，即为细胞骨架，结构清晰(附图)。
附图 人口腔上皮细胞细胞骨架 ×1000
学生以往实验教学常用洋葱鳞茎内表皮细胞1 cm×1 cm大小制作细胞骨架临时片，但有如下缺点: (1)洋葱内表皮薄，易卷曲重叠，不易展开，操作不便；(2)洋葱表皮的表面含有一种类脂物质，与水的亲和力较低，制作临时装片时容易产生气泡，影响观察效果；(3)洋葱表皮细胞质内含颗粒较多，所制作的细胞骨架网状结构不够清晰，参杂较多颗粒，效果不太理想。
用Hela细胞免疫荧光抗体标识法和人成纤维细胞制成的细胞骨架制片效果好，但这两种细胞都要经过细胞培养等，没有细胞培养设备的实验室不可能制作，且操作方法复杂，不适于学生课堂实验。
笔者用人的口腔上皮细胞制成细胞骨架染色片，主要显示以微丝组成的张力纤维[2](属中等纤维的角蛋白纤维[3])为主的细胞骨架纤维束，方法简单、方便、快捷效果好，实验材料易得，十分适合教学实验课。
作者简介:林颖,女，1969年11月生,助理实验师.
参考文献:
[1]蒋伟宏.细胞与分子生物学基础实验指导[M].上海: 上海医科大学出版社，1997: 22～23
[2]兰州大学细胞及遗传学教研室,细胞生物学研究室.细胞生物学实验[M].北京:高等教育出版社,1986:26～27
[3]谭曾鲁,周柔丽.医学细胞生物学[M].北京:北京医科大学、中国协和医科大学出版社,1992:185
收稿日期:1999-08-27, http://www.100md.com
单位：林颖(福建医科大学 生物学教研室,福州 350004); 刘玉良(福建医科大学 生物学教研室,福州 350004)
关键词：细胞支架；上皮细胞；口腔
福建医科大学学报000138
中图分类号:Q245 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)01-0026-01
在真核细胞的胞质中，存在许多纤维状结构--微管、微丝、中间纤维，它们共同组成细胞骨架。细胞生物学实验中，观察细胞骨架是一项重要内容。学生实验教学中常用洋葱鳞茎内表皮细胞临时装片和用人成纤维细胞或Hela细胞制成的永久片来观察细胞骨架[1]。笔者经过实验，摸索出一种用人口腔上皮细胞制作细胞骨架制片的简便方法，介绍如下。
1 材料和方法
1.1 材料 人口腔上皮细胞
1.2 方法
(1)涂片 用干净牙签刮取人口腔上皮细胞，置于装有生理盐水试管中，洗涤离心1～2次，剩约0.5～1 ml上清液，吸管吹打均匀、涂片、晾干。
(2)漂洗 M缓冲液[1]漂洗3次。
(3)处理 1%Triton X-100-PPS 37℃处理30 min[2]，M缓冲液漂洗3次。
(4)固定 3%戊二醛固定15～20 min，PPS洗数次，滤纸吸干。
(5)染色 0.2%考马斯亮蓝R250染色5～10 min。
(6)封片 水洗制成临时片或晾干用中性树胶封片成永久片。
2 结果与体会
显微镜下，可见口腔上皮细胞胞质内有被染成蓝色的网状结构，即为细胞骨架，结构清晰(附图)。
附图 人口腔上皮细胞细胞骨架 ×1000
学生以往实验教学常用洋葱鳞茎内表皮细胞1 cm×1 cm大小制作细胞骨架临时片，但有如下缺点: (1)洋葱内表皮薄，易卷曲重叠，不易展开，操作不便；(2)洋葱表皮的表面含有一种类脂物质，与水的亲和力较低，制作临时装片时容易产生气泡，影响观察效果；(3)洋葱表皮细胞质内含颗粒较多，所制作的细胞骨架网状结构不够清晰，参杂较多颗粒，效果不太理想。
用Hela细胞免疫荧光抗体标识法和人成纤维细胞制成的细胞骨架制片效果好，但这两种细胞都要经过细胞培养等，没有细胞培养设备的实验室不可能制作，且操作方法复杂，不适于学生课堂实验。
笔者用人的口腔上皮细胞制成细胞骨架染色片，主要显示以微丝组成的张力纤维[2](属中等纤维的角蛋白纤维[3])为主的细胞骨架纤维束，方法简单、方便、快捷效果好，实验材料易得，十分适合教学实验课。
作者简介:林颖,女，1969年11月生,助理实验师.
参考文献:
[1]蒋伟宏.细胞与分子生物学基础实验指导[M].上海: 上海医科大学出版社，1997: 22～23
[2]兰州大学细胞及遗传学教研室,细胞生物学研究室.细胞生物学实验[M].北京:高等教育出版社,1986:26～27
[3]谭曾鲁,周柔丽.医学细胞生物学[M].北京:北京医科大学、中国协和医科大学出版社,1992:185
收稿日期:1999-08-27, http://www.100md.com