烫伤大鼠糖皮质激素受体减少与全身炎症反应综合征的关系
作者：王志红 肖素芳 林海
单位：王志红(福建医科大学 生理学教研室,福州 350004); 肖素芳(解放军福州医学专科学校,福州 350003); 林海(解放军福州医学专科学校,福州 350003)
关键词：受体,糖皮质激素；炎症；综合征；烧伤；大鼠
福建医科大学学报000114
摘要:目的 阐明实验大鼠烫伤后糖皮质激素受体(GR)减少与烫伤后全身炎症反应综合征(SIRS)的关系。方法 以SD大鼠制成烫伤模型，肌注GR的竞争性拮抗剂RU 38486阻断烫伤大鼠体内的GR，观察GR阻断对严重烫伤大鼠血浆磷脂酶A2(PLA2)活性、肿瘤坏死因子(TNFα)含量、脂质过氧化代谢产物—丙二醛(MDA)含量以及脏器组织匀浆中TNFα、MDA含量变化的影响。结果 烫伤8 h后，大鼠血浆PLA2活性、TNFα和MDA的含量以及肺、肝、肾组织匀浆中PLA2活性、MDA含量各是对照组的4.5～12.5倍(P<0.01)，复合GR阻断者以上变化更明显(与单纯烫伤组比较,P<0.01或0.05)。结论 GR在烫伤中具有明显的抗炎作用，烫伤后GR减少可导致体内抗炎作用减弱，引发全身性的过度炎症反应。
, 百拇医药
中图分类号:R364.5;R977.1 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)01-0039-03
Diminution of Glucocorticoids Receptors and Inflammatory Response Syndrome in Rats after Severe Scald
WANG Zhi-hong
(Department of Physiology,Fujian Medical University,Fuzhou 350004,China)
XIAO Su-fang,LIN Hai
(Medical School of Fuzhou Millitary Region,PLA,Fuzhou 350003,China)
, 百拇医药
ABSTRACT:Objective To further elaborate the effect of glucocorticoid receptor(GR) decrease on level of inflammatory mediator in rats after critical scald.Methods The changes of the activity of phospholipase A2(PLA2) and concentration of tumor necrosis factor(TNFα) and malondialdehyde(MDA),the product of metabolism of lipid peroxidation,in plasma and tissue homogenate were measured in scalded rats with or without GR blockade by RU 38486.Results The activity of PLA2 and the concentration of TNFα and MDA in plasma and homogenate of pulmonary and renal tissue in scalded rats were significantly higher than those in the controls(P<0.01) and further increased in scalded rats with GR blockade(P<0.01 or 0.05).Conclusion Blockade of GR might aggravate the increase of inflammatory mediator caused by scalding.It suggested that GR might potentiate antiinflammation in scalding.
, 百拇医药
KEY WORDS:receptor,glucocorticoid;inflammation;syndrome;burn;rat
笔者过去的研究[1,2]发现，糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)阻断可明显加重烫伤后大鼠肺、肾血管壁通透性的升高，提示烫伤后GR的减少可能参与了烫伤后全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)的发生，为了进一步证实烫伤后GR减少的这种意义，获取相应的证据，本实验观察GR阻断对烫伤大鼠血浆磷脂酶A2(PLA2)活性、肿瘤坏死因子(TNFα)含量、脂质过氧化代谢产物--丙二醛(MDA)含量及脏器组织匀浆中TNFα、MDA含量变化的影响。
1 材料和方法
1.1 主要试剂 RU 38486(法国Roussel-Uclaf公司)，以麻油配成10 g/L；TNFα测定试剂盒(军事医学科学院北京邦定生物医学公司)；MDA测定试剂盒(暨南大学医学院病理生理学教研室提供)。
, 百拇医药
1.2 动物分组 SD大鼠26只(上海西普尔-必凯实验动物有限公司)，因RU 38486是孕激素受体阻断剂，实验全部选用雄性动物，体重220～280 g。随机分为4组:(1)对照组(n=6):肌注麻油2 ml/kg，1h后行假烫伤(背部浸于37℃水中10 s)；(2)单纯阻断组(n=6):按20 mg/kg肌注RU 38486，GR阻断率80%[3]，1 h后假烫伤，方法同对照组；(3)单纯烫伤组(n=7):肌注麻油2 ml/kg，1 h后背部浸于95℃水中10 s，造成30%全身体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤(经组织切片证实)；(4)复合组(n=7):按20 mg/kg体重肌注RU 38486，1 h 后烫伤，方法同单纯烫伤组。
1.3 实验方法 各组动物，均饲养8 h，氨基甲酸乙酯麻醉下颈动脉插管，取血、分离血浆，随后开胸、开腹，留取肺、肝、肾等组织。(1)PLA2测定:参照文献[4]方法，以37℃条件下每min、每ml血浆或组织匀浆上清液反应消耗1 nmol盐酸为一个PLA2活性单位(即:1 U=1 nmol.ml-1.min-1)。(2)血液及组织匀浆MDA含量测定:取肺、肝、肾组织各0.5 g加入PBS 5 ml匀浆,离心(4000 r/min×10 min)，留取上清液；血浆和组织匀浆MDA含量用改良硫代巴比妥酸微量法测定，按试剂盒说明书操作。(3)血浆TNFα含量用ELISA法测定，按试剂盒说明书操作。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 所有实验结果以
表示，并用华西医科大学医学统计学软件包(PEMS)做组间差异的显著性检验。
2 结 果
2.1 GR阻断对烫伤大鼠血浆及组织匀浆中PLA2活性的影响(表1) 烫伤大鼠血浆及肺、肝、肾组织中PLA2活性分别是对照组的6.7,7.7,3.2,3.4倍(P<0.01)，复合GR阻断者更为明显。
表1 各组大鼠血浆和组织匀浆中PLA2活性(U)
组 织 匀 浆
血 浆
肺
, 百拇医药
肝
肾
对照组
48.75±5.11
17.78±4.77
24.31±2.79
10.34±2.03
单纯阻断组
47.93±5.25
18.21±5.34
25.07±4.04
11.2±2.74
, 百拇医药
单纯烫伤组
325.95±22.99
136.32±26.10
77.79±12.59
35.63±6.99
复合组
400.78±49.58*
231.59±60.38**
132.34±32.74**
48.52±6.12*
, 百拇医药
PLA2:血浆磷脂酶A2.与单纯烫伤组比较，*:P<0.05，**:P<0.01(表2同).
2.2 GR阻断对烫伤大鼠血浆及组织匀浆中MDA含量的影响(表2) 烫伤大鼠血浆以及肺、肝、肾组织匀浆中MDA含量分别是对照组的4.0,3.3,2.9,2.8倍(P<0.01)，复合GR阻断者更为明显。
表2 各组大鼠血浆和组织匀浆中MDA含量(nmol/L)
血 浆
组 织 匀 浆
肺
肝
肾
对照组
, 百拇医药
5.01±0.36
4.95±0.38
4.13±0.42
3.22±0.51
单纯阻断组
5.11±0.33
5.19±0.53
4.28±0.50
3.33±0.45
单纯烫伤组
20.10±2.34
16.39±1.86
, http://www.100md.com
11.98±1.83
9.06±1.25
复合组
29.81±4.95**
23.29±2.85**
14.28±1.61*
11.83±2.30*
MDA:丙二醛.
2.3 GR阻断对烫伤大鼠血浆TNFα含量的影响 烫伤大鼠血浆TNFα含量(μg/L)为12.67±3.23，是对照组(1.02±0.28)的12.5倍(P<0.01)，复合GR阻断者明显升高到18.83±2.58(P<0.05)，但单纯GR阻断并无作用(单纯GR阻断组1.07±0.29，与对照组比P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨 论
早期研究表明，非致死性烫伤即可致大鼠体内GR减少[5]，其意义不清。徐仁宝[6]提出，糖皮质激素(glucocorticoid,GC)与其受体GR的复合物是机体内部最重要的抗炎机制，GR减少是体内抗炎机制减弱的主要原因，它与SIRS的发生密切相关。笔者实验室以前的研究[1,2]也发现，阻断GR明显加重大鼠烫伤后肺、肾血管壁通透性的升高，也表明GR可能参与了烫伤后SIRS的发生。本实验的结果进一步发现，GR阻断可明显加重烫伤后大鼠血浆PLA2活性、TNFα和MDA含量以及脏器组织匀浆中PLA2活性、MDA含量的升高，证明烫伤后GR减少确实可以引发某些细胞因子和炎症介质的失控性释放，也表明烫伤后GR减少确实参与了以细胞因子和炎症介质失控性释放为特征[7]的SIRS这一病理生理过程的发生。
大量资料证实[8],GC具有以下抗炎作用:(1)诱导脂皮素(lipocortin)合成，抑制磷脂酶A2活性，从而减少脂质介质(如前列腺素、白三烯、血小板活化因子)的生成；(2)减少氧自由基释放；(3)抑制TNFα等细胞因子的释放。GC的以上作用均已被证实至少部分经过GR介导。因此，严重烫伤时GR减少势必引起机体内源性GC抗炎作用的减弱，从而导致SIRS的发生，本实验证实了这个推测。
, 百拇医药
作者简介:王志红,女，1966年10月生，讲师.
参考文献:
[1]林 海，龚肖崎，钟纪根，等.糖皮质激素受体阻断对烫伤大鼠肺、肾血管壁通透性变化的影响[J].中华整形烧伤外科杂志，1995;11:103
[2]林 海，肖素芳，龚肖崎，等.糖皮质激素受体阻断对烫伤大鼠肺、肾功能及其血管壁通透性的影响[J].中华创伤杂志，1997;13:153
[3]范 杰，徐仁宝.糖皮质激素受体阻断动物模型的建立和研究[J].第二军医大学学报，1993;14:5
[4]陈思锋，吴中立.体液和组织磷脂酶简便快速测定法[J].第二军医大学学报，1989;10:254
[5]徐仁宝，谭金兴.致死性和非致死性烫伤大鼠胞液和胞核糖皮质激素受体的研究[J].中国科学B辑，1985;11:1009
, 百拇医药
[6]徐仁宝.体内的抗炎机制及其意义[J].生理科学进展，1994;25:305
[7]Beal AL,Cerra FB.Multiple organ failure syndrome in the 1990s.Systemic inflammatory response and organ dysfunction[J].JAMA,1994;271:226
[8]William TJ,Yarwood H.Effect of glucocorticosteroid on microvascular permeability[J].Am Rev Respir Dis,1990;141(Suppl):
收稿日期:1999-09-24, http://www.100md.com
单位：王志红(福建医科大学 生理学教研室,福州 350004); 肖素芳(解放军福州医学专科学校,福州 350003); 林海(解放军福州医学专科学校,福州 350003)
关键词：受体,糖皮质激素；炎症；综合征；烧伤；大鼠
福建医科大学学报000114
摘要:目的 阐明实验大鼠烫伤后糖皮质激素受体(GR)减少与烫伤后全身炎症反应综合征(SIRS)的关系。方法 以SD大鼠制成烫伤模型，肌注GR的竞争性拮抗剂RU 38486阻断烫伤大鼠体内的GR，观察GR阻断对严重烫伤大鼠血浆磷脂酶A2(PLA2)活性、肿瘤坏死因子(TNFα)含量、脂质过氧化代谢产物—丙二醛(MDA)含量以及脏器组织匀浆中TNFα、MDA含量变化的影响。结果 烫伤8 h后，大鼠血浆PLA2活性、TNFα和MDA的含量以及肺、肝、肾组织匀浆中PLA2活性、MDA含量各是对照组的4.5～12.5倍(P<0.01)，复合GR阻断者以上变化更明显(与单纯烫伤组比较,P<0.01或0.05)。结论 GR在烫伤中具有明显的抗炎作用，烫伤后GR减少可导致体内抗炎作用减弱，引发全身性的过度炎症反应。
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中图分类号:R364.5;R977.1 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)01-0039-03
Diminution of Glucocorticoids Receptors and Inflammatory Response Syndrome in Rats after Severe Scald
WANG Zhi-hong
(Department of Physiology,Fujian Medical University,Fuzhou 350004,China)
XIAO Su-fang,LIN Hai
(Medical School of Fuzhou Millitary Region,PLA,Fuzhou 350003,China)
, 百拇医药
ABSTRACT:Objective To further elaborate the effect of glucocorticoid receptor(GR) decrease on level of inflammatory mediator in rats after critical scald.Methods The changes of the activity of phospholipase A2(PLA2) and concentration of tumor necrosis factor(TNFα) and malondialdehyde(MDA),the product of metabolism of lipid peroxidation,in plasma and tissue homogenate were measured in scalded rats with or without GR blockade by RU 38486.Results The activity of PLA2 and the concentration of TNFα and MDA in plasma and homogenate of pulmonary and renal tissue in scalded rats were significantly higher than those in the controls(P<0.01) and further increased in scalded rats with GR blockade(P<0.01 or 0.05).Conclusion Blockade of GR might aggravate the increase of inflammatory mediator caused by scalding.It suggested that GR might potentiate antiinflammation in scalding.
, 百拇医药
KEY WORDS:receptor,glucocorticoid;inflammation;syndrome;burn;rat
笔者过去的研究[1,2]发现，糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)阻断可明显加重烫伤后大鼠肺、肾血管壁通透性的升高，提示烫伤后GR的减少可能参与了烫伤后全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)的发生，为了进一步证实烫伤后GR减少的这种意义，获取相应的证据，本实验观察GR阻断对烫伤大鼠血浆磷脂酶A2(PLA2)活性、肿瘤坏死因子(TNFα)含量、脂质过氧化代谢产物--丙二醛(MDA)含量及脏器组织匀浆中TNFα、MDA含量变化的影响。
1 材料和方法
1.1 主要试剂 RU 38486(法国Roussel-Uclaf公司)，以麻油配成10 g/L；TNFα测定试剂盒(军事医学科学院北京邦定生物医学公司)；MDA测定试剂盒(暨南大学医学院病理生理学教研室提供)。
, 百拇医药
1.2 动物分组 SD大鼠26只(上海西普尔-必凯实验动物有限公司)，因RU 38486是孕激素受体阻断剂，实验全部选用雄性动物，体重220～280 g。随机分为4组:(1)对照组(n=6):肌注麻油2 ml/kg，1h后行假烫伤(背部浸于37℃水中10 s)；(2)单纯阻断组(n=6):按20 mg/kg肌注RU 38486，GR阻断率80%[3]，1 h后假烫伤，方法同对照组；(3)单纯烫伤组(n=7):肌注麻油2 ml/kg，1 h后背部浸于95℃水中10 s，造成30%全身体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤(经组织切片证实)；(4)复合组(n=7):按20 mg/kg体重肌注RU 38486，1 h 后烫伤，方法同单纯烫伤组。
1.3 实验方法 各组动物，均饲养8 h，氨基甲酸乙酯麻醉下颈动脉插管，取血、分离血浆，随后开胸、开腹，留取肺、肝、肾等组织。(1)PLA2测定:参照文献[4]方法，以37℃条件下每min、每ml血浆或组织匀浆上清液反应消耗1 nmol盐酸为一个PLA2活性单位(即:1 U=1 nmol.ml-1.min-1)。(2)血液及组织匀浆MDA含量测定:取肺、肝、肾组织各0.5 g加入PBS 5 ml匀浆,离心(4000 r/min×10 min)，留取上清液；血浆和组织匀浆MDA含量用改良硫代巴比妥酸微量法测定，按试剂盒说明书操作。(3)血浆TNFα含量用ELISA法测定，按试剂盒说明书操作。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 所有实验结果以
表示，并用华西医科大学医学统计学软件包(PEMS)做组间差异的显著性检验。2 结 果
2.1 GR阻断对烫伤大鼠血浆及组织匀浆中PLA2活性的影响(表1) 烫伤大鼠血浆及肺、肝、肾组织中PLA2活性分别是对照组的6.7,7.7,3.2,3.4倍(P<0.01)，复合GR阻断者更为明显。
表1 各组大鼠血浆和组织匀浆中PLA2活性(U)
组 织 匀 浆
血 浆
肺
, 百拇医药
肝
肾
对照组
48.75±5.11
17.78±4.77
24.31±2.79
10.34±2.03
单纯阻断组
47.93±5.25
18.21±5.34
25.07±4.04
11.2±2.74
, 百拇医药
单纯烫伤组
325.95±22.99
136.32±26.10
77.79±12.59
35.63±6.99
复合组
400.78±49.58*
231.59±60.38**
132.34±32.74**
48.52±6.12*
, 百拇医药
PLA2:血浆磷脂酶A2.与单纯烫伤组比较，*:P<0.05，**:P<0.01(表2同).
2.2 GR阻断对烫伤大鼠血浆及组织匀浆中MDA含量的影响(表2) 烫伤大鼠血浆以及肺、肝、肾组织匀浆中MDA含量分别是对照组的4.0,3.3,2.9,2.8倍(P<0.01)，复合GR阻断者更为明显。
表2 各组大鼠血浆和组织匀浆中MDA含量(nmol/L)
血 浆
组 织 匀 浆
肺
肝
肾
对照组
, 百拇医药
5.01±0.36
4.95±0.38
4.13±0.42
3.22±0.51
单纯阻断组
5.11±0.33
5.19±0.53
4.28±0.50
3.33±0.45
单纯烫伤组
20.10±2.34
16.39±1.86
, http://www.100md.com
11.98±1.83
9.06±1.25
复合组
29.81±4.95**
23.29±2.85**
14.28±1.61*
11.83±2.30*
MDA:丙二醛.
2.3 GR阻断对烫伤大鼠血浆TNFα含量的影响 烫伤大鼠血浆TNFα含量(μg/L)为12.67±3.23，是对照组(1.02±0.28)的12.5倍(P<0.01)，复合GR阻断者明显升高到18.83±2.58(P<0.05)，但单纯GR阻断并无作用(单纯GR阻断组1.07±0.29，与对照组比P>0.05)。
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3 讨 论
早期研究表明，非致死性烫伤即可致大鼠体内GR减少[5]，其意义不清。徐仁宝[6]提出，糖皮质激素(glucocorticoid,GC)与其受体GR的复合物是机体内部最重要的抗炎机制，GR减少是体内抗炎机制减弱的主要原因，它与SIRS的发生密切相关。笔者实验室以前的研究[1,2]也发现，阻断GR明显加重大鼠烫伤后肺、肾血管壁通透性的升高，也表明GR可能参与了烫伤后SIRS的发生。本实验的结果进一步发现，GR阻断可明显加重烫伤后大鼠血浆PLA2活性、TNFα和MDA含量以及脏器组织匀浆中PLA2活性、MDA含量的升高，证明烫伤后GR减少确实可以引发某些细胞因子和炎症介质的失控性释放，也表明烫伤后GR减少确实参与了以细胞因子和炎症介质失控性释放为特征[7]的SIRS这一病理生理过程的发生。
大量资料证实[8],GC具有以下抗炎作用:(1)诱导脂皮素(lipocortin)合成，抑制磷脂酶A2活性，从而减少脂质介质(如前列腺素、白三烯、血小板活化因子)的生成；(2)减少氧自由基释放；(3)抑制TNFα等细胞因子的释放。GC的以上作用均已被证实至少部分经过GR介导。因此，严重烫伤时GR减少势必引起机体内源性GC抗炎作用的减弱，从而导致SIRS的发生，本实验证实了这个推测。
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作者简介:王志红,女，1966年10月生，讲师.
参考文献:
[1]林 海，龚肖崎，钟纪根，等.糖皮质激素受体阻断对烫伤大鼠肺、肾血管壁通透性变化的影响[J].中华整形烧伤外科杂志，1995;11:103
[2]林 海，肖素芳，龚肖崎，等.糖皮质激素受体阻断对烫伤大鼠肺、肾功能及其血管壁通透性的影响[J].中华创伤杂志，1997;13:153
[3]范 杰，徐仁宝.糖皮质激素受体阻断动物模型的建立和研究[J].第二军医大学学报，1993;14:5
[4]陈思锋，吴中立.体液和组织磷脂酶简便快速测定法[J].第二军医大学学报，1989;10:254
[5]徐仁宝，谭金兴.致死性和非致死性烫伤大鼠胞液和胞核糖皮质激素受体的研究[J].中国科学B辑，1985;11:1009
, 百拇医药
[6]徐仁宝.体内的抗炎机制及其意义[J].生理科学进展，1994;25:305
[7]Beal AL,Cerra FB.Multiple organ failure syndrome in the 1990s.Systemic inflammatory response and organ dysfunction[J].JAMA,1994;271:226
[8]William TJ,Yarwood H.Effect of glucocorticosteroid on microvascular permeability[J].Am Rev Respir Dis,1990;141(Suppl):
收稿日期:1999-09-24, http://www.100md.com