肌源性肌病患者骨骼肌细胞HLA-DR的表达
作者：张文敏 陈碧芬 慕容慎行 王柠 龚华实
单位：张文敏(福建医科大学病理解剖学教研室,福州 350005); 陈碧芬(福建医科大学病理解剖学教研室,福州 350005); 慕容慎行(福建医科大学附属第一医院神经内科,福州 350005); 王柠(福建医科大学附属第一医院神经内科,福州 350005); 龚华实(福建医科大学病理解剖学教研室,福州 350005)
关键词：人类白细胞-DR抗原；神经肌肉疾病；免疫组织化学
福建医科大学学报000106
摘要:目的 探讨免疫机制在不同肌源性肌病病变过程中的作用。方法 应用免疫组化SP法系统观察75例神经肌肉疾病患者和外科手术无肌病患者的正常骨骼肌细胞人类白细胞抗原DR位点(HLA-DR)的表达。结果 HLA-DR定位于肌细胞膜，18例进行性肌营养不良症(PMD)肌组织中HLA-DR阳性表达4例(22.2%),位于HLA-DR阳性的单核细胞聚集区域，均为弱阳性(+)，15例多发性肌炎(PM)和10例皮肌炎(DM)肌组织中肌细胞HLA-DR阳性表达分别为12例(80%)和6例(60%)(P<0.05)，不仅出现于炎症区域，远离炎症区也可见到，多为中阳性(++)。代谢性肌病、先天性肌病、神经源性肌病和正常对照组肌细胞均未见HLA-DR表达。结论 除PM/DM等自身免疫性疾病有异常的免疫反应，其他类型的肌源性肌病特别是PMD在病变过程中也有免疫因素的参与，可能对病变的进行性发展起一定的作用。
, 百拇医药
中图分类号:R746.03 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)01-0016-02
HLA-DR Expression on Skeletal Myocyte of Myogenic Myopathy
ZHANG Wen-min,CHEN Bi-fen,et al
(Department of Pathology,Fujian Medial University,Fuzhou 350004,China)
MURONG Shen-xing
(Department of Neurology,The Affiliated First Hospital,Fujian Medical University,Fuzhou 350005,China)
, 百拇医药
ABSTRACT:Objective To study immunopathogenetic mechanism in myogenic myopathy.Methods Human leukocyte antigen(HLA)-DR expression on skeletal myocyte in 75 cases of neuromyopathy and normal controls was detected by immunohistochemistry.Results HLA-DR located on the sarcolemma of myocyte.The HLA-DR positive rates of polymyositis(PM),dermatomyositis(DM) and progress muscular dystrophy(PMD) were 80%,60% and 22.2% respectively.HLA-DR expression of MMD,CMD,NMD and normal controls was negative.Conclusion The myocytes in PM,DM and PMD had the HLA-DR expression.It suggested that the aberration of immunity might be involved in pathologic progress in PM,DM and PMD.
, 百拇医药
KEY WORDS:human leukocyte antigen-DR;neuromuscular disease;immunohistochemistry
人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)，近年来已证实与某些遗传性肌病或自身免疫性疾病有关[1]，HLA区的基因群包括ABC和D/DR位点，其中HLA-DR在调节免疫细胞及其亚群细胞的相互作用中起重要作用，其在肌源性肌病患者肌细胞上的表达除肌炎有少数文献报道外[2，3]，其余肌病均未见文献报道。本研究应用高敏感性的免疫组化SP法，系统观察不同肌源性肌病肌组织中HLA-DR的表达。
1 材料和方法
1.1 材料 收集1995～1998年福建医科大学附属第一医院神经内科活检和外科手术的新鲜肌肉标本共75例,取自肱二头肌或股四头肌。(1)肌源性肌病: 包括进行性肌营养不良症(progress muscular dystrophy，PMD)，多发性肌炎(polymyositis，PM)，皮肌炎(dermatomyositis，DM)，代谢性肌病(metabolic muscular disease，MMD)和先天性肌病(congital muscular disease，CMD)，(2)神经源性肌病和外科手术无神经肌病的正常肌肉作为对照组(附表)。各类型神经肌肉疾病患者根据病史、临床表现、血清肌酶、肌电图、活检肌组织病理以及常规电镜等检查结果综合确诊。
, 百拇医药
附表 75例活检肌组织一般临床资料 分 组
n
性 别
年龄(岁)
男
(n=46)
女
(n=29)
范围
正常肌肉
9
4
, 百拇医药
5
32.6±12.4
25～46
肌源性肌病
55
34
21
27.6±22.7
5～63
进行性肌营养
不良症
18
15
, 百拇医药
3
10.6±5.8
5～17
多发性肌炎
15
6
9
41.3±8.7
15～60
皮肌炎
10
6
4
, 百拇医药
35.4±9.5
12～55
代谢性肌病
7
4
3
35.6±9.5
27～53
先天性肌病
5
3
2
13.8±4.2
, 百拇医药
10～19
神经源性肌病
11
8
3
25.8±4.2
17～42
1.2 方法 新鲜肌肉标本经异戊烷-液氮速冻，作5 μm恒冷冰冻切片，丙酮固定后进行免疫组化SP法染色。染色步骤按试剂盒说明进行，DAB显色后苏木素复染，以细胞膜着棕黄色为阳性细胞，正常人扁桃体为阳性对照，PBS代替抗体作阴性对照。每张切片随机取10个高倍视野计数阳性细胞所占的百分比，(-)阳性细胞数为0%～5%，(+)阳性细胞数为5%～30%，(++)阳性细胞数为30%～50%，(+++)阳性细胞数>50%。SPSS软件包进行Fisher精确概率法分析，P<0.05有统计学意义。2 结 果
, 百拇医药
HLA-DR定位于肌细胞膜，18例PMD患者肌组织中HLA-DR阳性表达4例(22.2%),2例为Duchenne型肌营养不良症(DMD)，1例为面肩肱型肌营养不良症(FSHD)，1例为Berker型肌营养不良症(BMD)，多位于HLA-DR阳性的单核细胞聚集区域，且均为弱阳性(+)(图1)。15例PM和10例DM肌组织中肌细胞HLA-DR阳性表达分别为12例(80%)和6例(60%)(P<0.05)，不仅出现于炎症区域，远离炎症区也可见到，多为中阳性(++)，主要在肌膜上呈线性分布(图2),少数肌浆中亦有阳性染色。代谢性肌病、先天性肌病、神经源性肌病和正常肌肉对照组肌细胞HLA-DR均为阴性表达。
图1 DMD骨骼肌细胞膜见HLA-DR弱阳性表达 ×400
, http://www.100md.com 图2 PM肌组织在炎症细胞聚集区见肌细胞HLA-DR表达 ×400)
3 讨 论
肌源性肌病指肌肉本身包括肌膜、肌原纤维及其他细胞器的病变，临床表现为肌无力和肌萎缩，多有遗传性阳性家族史,其发病机制是近年研究的热点。随着电镜、肌酶组化、免疫组化和分子生物学技术的发展，肌病的研究进展十分迅速，近年来HLA与肌病的关系也引起重视。
HLA-DR主要分布在抗原提呈细胞、B淋巴细胞和活化的T淋巴细胞表面，正常人体骨骼肌细胞不表达HLA-DR[4]。本研究发现，代谢性肌病、先天性肌病和神经源性肌病肌细胞上未见HLA-DR表达；18例PMD肌组织中4例肌膜HLA-DR阳性表达，主要定位于HLA-DR+炎症细胞浸润区域，表明PMD尽管是基因缺陷性遗传性肌病,但在病变局部也有异常的免疫反应，肌细胞参与免疫调节，这可能对PMD病变的进行性发展起促进作用。肌膜HLA-DR抗原表达的机制尚未清楚，可能与肌细胞内自身抗原性物质改变和隐性决定簇的释放有关，也可能由肌肉炎症反应局部浸润的活化单核细胞释放的细胞因子诱导所致，有待进一步研究。
, 百拇医药
目前对PM和DM的病因仍不清楚，多数认为与自身免疫性疾病有关[5,6]，本研究发现PM和DM肌细胞HLA-DR阳性率分别为80%和60%(P<0.05)，阳性表达的细胞作为抗原提呈细胞激活CD4+T细胞，诱发抗原特异性的细胞免疫，且HLA-DR阳性的肌细胞分布广泛，不仅出现在炎症区，非炎症区也有表达，进一步证实了PM和DM的原发病因可能与免疫异常特别是特异性抗原介导的细胞免疫有关，其诱发因素还需进一步探讨。
本研究通过对肌源性肌病(包括进行性肌营养不良症、多发性肌炎、皮肌炎、代谢性肌病和先天性肌病)骨骼肌细胞HLA-DR表达的研究，发现除多发性肌炎和皮肌炎等自身免疫性疾病有异常的免疫反应，其他类型的肌源性肌病特别是进行性肌营养不良症在病变过程中也有免疫因素的参与，可能对病变的进行性发展起一定的作用。代谢性肌病和先天性肌病有待积累病例进一步研究。
基金项目:福建省卫生厅青年科研基金资助项目(9828)
, 百拇医药
作者简介:张文敏，女，1968年1月生，讲师，医学硕士.
参考文献:
[1]Hjelmstrom P,Giscombe R,Lefvert AK,et al.Polymorphic amino acid domains of the HLA-DR molecule are associated with disease heterogenity in myasthenia gravis[J].J Neuroimmunol,1996;65:125
[2]Zuk JA,Fletcher,A.Skeletal muscle expression of class Ⅱ histocompatibility antigens(HLA-DR) in polymyositis and other muscle disorders with an inflammatory infiltrate[J].J Clin Pathol,1988;41:410
, 百拇医药
[3]Bartoccioni E,Gallucci S,Scucleri,et al.MHC class Ⅰ,Ⅱ and intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) expression in inflammatory myopathies[J].Clin Exp Immunol,1994;95:166
[4]Dear AS,Foggle JW,Tuig A,et al.The detailed distribution of MHC class Ⅱ antigens in normal human organ[J].Transplantation,1984;38:293
[5]Targoff IN.Humoral immunity in polymyositis/dermatomyositis[J].J Invest Derma,1993;100(Suppl,1):116
[6]Bleecker,Engel AG.Expression of cell adhesion molecule in inflammatory myopathies and Duchenne dystrophy[J].J Neuropathol Exp Neurol,1994;53(4):369
收稿日期:1999-10-09, http://www.100md.com
单位：张文敏(福建医科大学病理解剖学教研室,福州 350005); 陈碧芬(福建医科大学病理解剖学教研室,福州 350005); 慕容慎行(福建医科大学附属第一医院神经内科,福州 350005); 王柠(福建医科大学附属第一医院神经内科,福州 350005); 龚华实(福建医科大学病理解剖学教研室,福州 350005)
关键词：人类白细胞-DR抗原；神经肌肉疾病；免疫组织化学
福建医科大学学报000106
摘要:目的 探讨免疫机制在不同肌源性肌病病变过程中的作用。方法 应用免疫组化SP法系统观察75例神经肌肉疾病患者和外科手术无肌病患者的正常骨骼肌细胞人类白细胞抗原DR位点(HLA-DR)的表达。结果 HLA-DR定位于肌细胞膜，18例进行性肌营养不良症(PMD)肌组织中HLA-DR阳性表达4例(22.2%),位于HLA-DR阳性的单核细胞聚集区域，均为弱阳性(+)，15例多发性肌炎(PM)和10例皮肌炎(DM)肌组织中肌细胞HLA-DR阳性表达分别为12例(80%)和6例(60%)(P<0.05)，不仅出现于炎症区域，远离炎症区也可见到，多为中阳性(++)。代谢性肌病、先天性肌病、神经源性肌病和正常对照组肌细胞均未见HLA-DR表达。结论 除PM/DM等自身免疫性疾病有异常的免疫反应，其他类型的肌源性肌病特别是PMD在病变过程中也有免疫因素的参与，可能对病变的进行性发展起一定的作用。
, 百拇医药
中图分类号:R746.03 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)01-0016-02
HLA-DR Expression on Skeletal Myocyte of Myogenic Myopathy
ZHANG Wen-min,CHEN Bi-fen,et al
(Department of Pathology,Fujian Medial University,Fuzhou 350004,China)
MURONG Shen-xing
(Department of Neurology,The Affiliated First Hospital,Fujian Medical University,Fuzhou 350005,China)
, 百拇医药
ABSTRACT:Objective To study immunopathogenetic mechanism in myogenic myopathy.Methods Human leukocyte antigen(HLA)-DR expression on skeletal myocyte in 75 cases of neuromyopathy and normal controls was detected by immunohistochemistry.Results HLA-DR located on the sarcolemma of myocyte.The HLA-DR positive rates of polymyositis(PM),dermatomyositis(DM) and progress muscular dystrophy(PMD) were 80%,60% and 22.2% respectively.HLA-DR expression of MMD,CMD,NMD and normal controls was negative.Conclusion The myocytes in PM,DM and PMD had the HLA-DR expression.It suggested that the aberration of immunity might be involved in pathologic progress in PM,DM and PMD.
, 百拇医药
KEY WORDS:human leukocyte antigen-DR;neuromuscular disease;immunohistochemistry
人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)，近年来已证实与某些遗传性肌病或自身免疫性疾病有关[1]，HLA区的基因群包括ABC和D/DR位点，其中HLA-DR在调节免疫细胞及其亚群细胞的相互作用中起重要作用，其在肌源性肌病患者肌细胞上的表达除肌炎有少数文献报道外[2，3]，其余肌病均未见文献报道。本研究应用高敏感性的免疫组化SP法，系统观察不同肌源性肌病肌组织中HLA-DR的表达。
1 材料和方法
1.1 材料 收集1995～1998年福建医科大学附属第一医院神经内科活检和外科手术的新鲜肌肉标本共75例,取自肱二头肌或股四头肌。(1)肌源性肌病: 包括进行性肌营养不良症(progress muscular dystrophy，PMD)，多发性肌炎(polymyositis，PM)，皮肌炎(dermatomyositis，DM)，代谢性肌病(metabolic muscular disease，MMD)和先天性肌病(congital muscular disease，CMD)，(2)神经源性肌病和外科手术无神经肌病的正常肌肉作为对照组(附表)。各类型神经肌肉疾病患者根据病史、临床表现、血清肌酶、肌电图、活检肌组织病理以及常规电镜等检查结果综合确诊。
, 百拇医药
附表 75例活检肌组织一般临床资料 分 组
n
性 别
年龄(岁)
男
(n=46)
女
(n=29)
范围
正常肌肉
9
4
, 百拇医药
5
32.6±12.4
25～46
肌源性肌病
55
34
21
27.6±22.7
5～63
进行性肌营养
不良症
18
15
, 百拇医药
3
10.6±5.8
5～17
多发性肌炎
15
6
9
41.3±8.7
15～60
皮肌炎
10
6
4
, 百拇医药
35.4±9.5
12～55
代谢性肌病
7
4
3
35.6±9.5
27～53
先天性肌病
5
3
2
13.8±4.2
, 百拇医药
10～19
神经源性肌病
11
8
3
25.8±4.2
17～42
1.2 方法 新鲜肌肉标本经异戊烷-液氮速冻，作5 μm恒冷冰冻切片，丙酮固定后进行免疫组化SP法染色。染色步骤按试剂盒说明进行，DAB显色后苏木素复染，以细胞膜着棕黄色为阳性细胞，正常人扁桃体为阳性对照，PBS代替抗体作阴性对照。每张切片随机取10个高倍视野计数阳性细胞所占的百分比，(-)阳性细胞数为0%～5%，(+)阳性细胞数为5%～30%，(++)阳性细胞数为30%～50%，(+++)阳性细胞数>50%。SPSS软件包进行Fisher精确概率法分析，P<0.05有统计学意义。2 结 果
, 百拇医药
HLA-DR定位于肌细胞膜，18例PMD患者肌组织中HLA-DR阳性表达4例(22.2%),2例为Duchenne型肌营养不良症(DMD)，1例为面肩肱型肌营养不良症(FSHD)，1例为Berker型肌营养不良症(BMD)，多位于HLA-DR阳性的单核细胞聚集区域，且均为弱阳性(+)(图1)。15例PM和10例DM肌组织中肌细胞HLA-DR阳性表达分别为12例(80%)和6例(60%)(P<0.05)，不仅出现于炎症区域，远离炎症区也可见到，多为中阳性(++)，主要在肌膜上呈线性分布(图2),少数肌浆中亦有阳性染色。代谢性肌病、先天性肌病、神经源性肌病和正常肌肉对照组肌细胞HLA-DR均为阴性表达。
图1 DMD骨骼肌细胞膜见HLA-DR弱阳性表达 ×400
, http://www.100md.com 图2 PM肌组织在炎症细胞聚集区见肌细胞HLA-DR表达 ×400)
3 讨 论
肌源性肌病指肌肉本身包括肌膜、肌原纤维及其他细胞器的病变，临床表现为肌无力和肌萎缩，多有遗传性阳性家族史,其发病机制是近年研究的热点。随着电镜、肌酶组化、免疫组化和分子生物学技术的发展，肌病的研究进展十分迅速，近年来HLA与肌病的关系也引起重视。
HLA-DR主要分布在抗原提呈细胞、B淋巴细胞和活化的T淋巴细胞表面，正常人体骨骼肌细胞不表达HLA-DR[4]。本研究发现，代谢性肌病、先天性肌病和神经源性肌病肌细胞上未见HLA-DR表达；18例PMD肌组织中4例肌膜HLA-DR阳性表达，主要定位于HLA-DR+炎症细胞浸润区域，表明PMD尽管是基因缺陷性遗传性肌病,但在病变局部也有异常的免疫反应，肌细胞参与免疫调节，这可能对PMD病变的进行性发展起促进作用。肌膜HLA-DR抗原表达的机制尚未清楚，可能与肌细胞内自身抗原性物质改变和隐性决定簇的释放有关，也可能由肌肉炎症反应局部浸润的活化单核细胞释放的细胞因子诱导所致，有待进一步研究。
, 百拇医药
目前对PM和DM的病因仍不清楚，多数认为与自身免疫性疾病有关[5,6]，本研究发现PM和DM肌细胞HLA-DR阳性率分别为80%和60%(P<0.05)，阳性表达的细胞作为抗原提呈细胞激活CD4+T细胞，诱发抗原特异性的细胞免疫，且HLA-DR阳性的肌细胞分布广泛，不仅出现在炎症区，非炎症区也有表达，进一步证实了PM和DM的原发病因可能与免疫异常特别是特异性抗原介导的细胞免疫有关，其诱发因素还需进一步探讨。
本研究通过对肌源性肌病(包括进行性肌营养不良症、多发性肌炎、皮肌炎、代谢性肌病和先天性肌病)骨骼肌细胞HLA-DR表达的研究，发现除多发性肌炎和皮肌炎等自身免疫性疾病有异常的免疫反应，其他类型的肌源性肌病特别是进行性肌营养不良症在病变过程中也有免疫因素的参与，可能对病变的进行性发展起一定的作用。代谢性肌病和先天性肌病有待积累病例进一步研究。
基金项目:福建省卫生厅青年科研基金资助项目(9828)
, 百拇医药
作者简介:张文敏，女，1968年1月生，讲师，医学硕士.
参考文献:
[1]Hjelmstrom P,Giscombe R,Lefvert AK,et al.Polymorphic amino acid domains of the HLA-DR molecule are associated with disease heterogenity in myasthenia gravis[J].J Neuroimmunol,1996;65:125
[2]Zuk JA,Fletcher,A.Skeletal muscle expression of class Ⅱ histocompatibility antigens(HLA-DR) in polymyositis and other muscle disorders with an inflammatory infiltrate[J].J Clin Pathol,1988;41:410
, 百拇医药
[3]Bartoccioni E,Gallucci S,Scucleri,et al.MHC class Ⅰ,Ⅱ and intercellular adhesion molecule-1(ICAM-1) expression in inflammatory myopathies[J].Clin Exp Immunol,1994;95:166
[4]Dear AS,Foggle JW,Tuig A,et al.The detailed distribution of MHC class Ⅱ antigens in normal human organ[J].Transplantation,1984;38:293
[5]Targoff IN.Humoral immunity in polymyositis/dermatomyositis[J].J Invest Derma,1993;100(Suppl,1):116
[6]Bleecker,Engel AG.Expression of cell adhesion molecule in inflammatory myopathies and Duchenne dystrophy[J].J Neuropathol Exp Neurol,1994;53(4):369
收稿日期:1999-10-09, http://www.100md.com