地塞米松对体外培养鼠视网膜神经细胞生长的影响
作者：刘瑶 张会保
单位：(南京铁道医学院 解剖教研室，江苏 南京 210009)
关键词：神经细胞；细胞培养；地塞米松；药理作用
铁道医学000105 [摘要]目的 探讨玻璃体内注射地塞米松(DX)对视网膜神经细胞的影响。方法 以兔视网膜胶质细胞作基质，培养鼠视网膜神经细胞，根据临床常用剂量分别在培养液内加入不同剂量的DX，记录神经细胞一级突起的发育情况并与空白对照组相比较。结果 高剂量、常规剂量及低剂量DX均可以造成神经细胞一级突起的减少，与空白对照组相比较，差异有极显著意义(P<0.01)。结论 DX玻璃体内注射可以产生一定程度的毒副作用。
[中图分类号]R977.1+1； Q954.67+1 [文献标识码]A
, http://www.100md.com
[文章编号]1001-0912(2000)-0012-02
Influence of dexamethasone on the developing and functions of the cultured mice retinal neurons in vitro
LIU Yao,ZHANG Hui-bao
(Department of Ophthalmology,the Affiliated Hospital of Nanjing Railway Medical College,Nanjing 210009,China)
Abstract：Objective To evaluate the influence and toxic effect of dexamethasone on the developing and functions of the cultured mice retinal neurons. Methods The rabbit retinal glial cell was cultured first. The mice retinal fragments was planted on them.When the neurons are growing, different dosage of dexamethasone was administered into the culture medium, then the primary cell branch was observed and recorded.Results The HDG,MDG and LDG dexamethasone have negative functions on the mice retinal neurons, which reduce the branch of the neurons. Conclusion The results shows an injection of dexamethasone into vitreous can bring about negative effect to some degree.
, 百拇医药
Key words：neurons；cell culture；dexamethasone；pharmacology
地塞米松(DX)对细菌毒素引起的毒性作用具有一定的抑制作用，能够减轻内眼组织的炎症反应，临床上常与其他药物联合作玻璃体内注射。已有作者从形态学方面评价了DX对视网膜组织的毒性作用，但尚无其对视网膜神经细胞生长发育及功能方面毒性作用的报道。为此，作者观察了DX对体外培养鼠视网膜神经细胞生长发育的影响。
1 材料和方法
1.1 细胞培养
采取作者先期报道的方法培养视网膜神经细胞[1，2]，即取新西兰大耳白兔一只，空气栓塞处死后，无菌条件下取出眼球，于角巩缘后1 mm处环形切开眼球去除前部组织和玻璃体，小心剥离视网膜组织，取其不含血管及髓放线的部分，剪切成2 mm×2 mm大小，而后移入10 ml离心管中，800 r.min-1离心5 min后去上清，加入含10%小牛血清的DMEM营养液(Sigma公司)，让组织块重新悬浮后接种入25 cm2培养皿中，于37 ℃，含5%CO2、95%空气的湿润条件下培养，每周换液2次，此法培养的细胞经实验证实为兔视网膜胶质细胞，待细胞生长4周后传代，传代细胞接种于24孔培养板，培养约10 d后可用于培养鼠视网膜神经细胞。此时，取足月孕小白鼠一只，乙醚吸入麻醉后打开腹腔取出胎鼠，断颈处死后，培养皿内加入5 ml HANK液，立即取出眼球，解剖显微镜下取出视网膜组织，剪切成2 mm×2 mm大小，而后移入10 ml离心管中，800 r.min-1离心5 min后去上清，加入含0.5%胰蛋白酶的消化液2 ml，消化约5 min，800 r.min-1离心5 min后去上清，加入含10%小牛血清的DMEM营养液，让组织块重新悬浮后接种入生长有兔视网膜胶质细胞培养板，每周换液2次。第二次接种培养的细胞经实验证实为鼠视网膜神经细胞。
, 百拇医药
1.2 药物作用观察
接种鼠视网膜组织块后，24孔培养板均分为4组，其中一组为空白对照组，临床常规剂量组的剂量来自玻璃体内地塞米松的常用注射量[3]350 μg除以玻璃体体积约5.0 ml(即350 μg÷5.0 ml)，高剂量组和低剂量组则以此为基础作倍增或倍减。
药物作用后5周，倒置显微镜下观察神经细胞生长的情况，随机记录某剂量组某视野象限内神经细胞一级细胞突起的数量。
1.3 统计学处理
组间比较采用t检验。
2 结 果
见表1。
表1 对照组与各剂量组间结果比较表 组 别
, 百拇医药
细胞数/个
分枝数/支
平均支数
t值
P值
±s
对照组
126
355
2.82±0.44
高剂量组
122
313
, 百拇医药
2.57±0.43
9.963
<0.01
常剂量组
126
328
2.60±0.42
10.51
<0.01
低剂量组
133
344
2.59±0.43
, 百拇医药
9.664
<0.01
药物作用5周后，在显微镜下观察空白对照组有较多的神经细胞生长(图1)，检测10个视野126个神经细胞其细胞一级突起共355支，平均为2.82支；高剂量组细胞生长较为稀少(图2)，检测10个视野122个神经细胞其细胞一级突起共313支，平均为2.57支；常剂量组显微镜下检测10个视野126个神经细胞，其细胞一级突起共328支，平均为2.60支，低剂量组显微镜下检测10个视野133个神经细胞，其细胞一级突起共344支，平均为2.59支，经统计学处理，对照组与各实验剂量组之间差异均具有极显著意义(P<0.01)。
图1 对照组神经细胞一级突起发育良好，箭头显示多量的一级突起 光镜×250
, http://www.100md.com
图2 高剂量神经细胞突起受到较强抑制，箭头显示较少量的一级突起光×250
3 讨 论
地塞米松是近年来常用的玻璃体内注射用药物之一，具有抑制炎症反应,减少内眼组织水肿和渗出的功效，一般与其他有效抗生素联合注射，临床上取得了一定的效果。有作者[4，5]利用免疫组织化学及电镜技术观察后认为，当前常规使用剂量的DX玻璃体内注射不对视网膜造成形态学损害。
本研究结果显示，常规剂量注射地塞米松可以造成神经细胞一级突起的减少，其倍增及倍减剂量均可造成对视网膜神经细胞发育的损害，表明机体对于激素——这一自体成分的接受程度是极其有限的，外源性地塞米松将造成神经细胞的损害。而地塞米松与抗生素的联合应用无疑将相互加重其各自的毒副作用，提醒我们在进行该药物的玻璃体内注射时，必须严格掌握该种药物的使用剂量，以尽可能的减少其对视功能的损害。
, http://www.100md.com
作者简介：刘瑶(1964年生)，男，安徽阜阳人，南京铁道医学院附属医院主治医师，眼科学博士。
参考文献：
[1]刘瑶，曾水清，魏厚仁，等.人视网膜Müller细胞培养及超微结构免疫组织化学观察[J].中华眼底病杂志，1995，11(3)：178-80.
[2]刘瑶，陈钦元，若仓雅登，等.鼠视网膜神经细胞原代培养[J].中华眼底病杂志，1997，13(2)：116-7.
[3]郭希让.现代视网膜玻璃体手术学[M].深圳：海天出版社，1997.158-60.
[4]Coats M L，Peyman G A.Intravitreal corticosteroids in the treatment of exogenous fungal endophthalmitis[J].Retina，1992,12(1):46-51.
[5]姚亦群.眼内注射头孢拉啶与地塞米松治疗蜡样芽胞杆菌全眼球炎实验观察[J].眼科研究，1991，9(3)：163-6.
收稿日期：1999-08-01, 百拇医药
单位：(南京铁道医学院 解剖教研室，江苏 南京 210009)
关键词：神经细胞；细胞培养；地塞米松；药理作用
铁道医学000105 [摘要]目的 探讨玻璃体内注射地塞米松(DX)对视网膜神经细胞的影响。方法 以兔视网膜胶质细胞作基质，培养鼠视网膜神经细胞，根据临床常用剂量分别在培养液内加入不同剂量的DX，记录神经细胞一级突起的发育情况并与空白对照组相比较。结果 高剂量、常规剂量及低剂量DX均可以造成神经细胞一级突起的减少，与空白对照组相比较，差异有极显著意义(P<0.01)。结论 DX玻璃体内注射可以产生一定程度的毒副作用。
[中图分类号]R977.1+1； Q954.67+1 [文献标识码]A
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[文章编号]1001-0912(2000)-0012-02
Influence of dexamethasone on the developing and functions of the cultured mice retinal neurons in vitro
LIU Yao,ZHANG Hui-bao
(Department of Ophthalmology,the Affiliated Hospital of Nanjing Railway Medical College,Nanjing 210009,China)
Abstract：Objective To evaluate the influence and toxic effect of dexamethasone on the developing and functions of the cultured mice retinal neurons. Methods The rabbit retinal glial cell was cultured first. The mice retinal fragments was planted on them.When the neurons are growing, different dosage of dexamethasone was administered into the culture medium, then the primary cell branch was observed and recorded.Results The HDG,MDG and LDG dexamethasone have negative functions on the mice retinal neurons, which reduce the branch of the neurons. Conclusion The results shows an injection of dexamethasone into vitreous can bring about negative effect to some degree.
, 百拇医药
Key words：neurons；cell culture；dexamethasone；pharmacology
地塞米松(DX)对细菌毒素引起的毒性作用具有一定的抑制作用，能够减轻内眼组织的炎症反应，临床上常与其他药物联合作玻璃体内注射。已有作者从形态学方面评价了DX对视网膜组织的毒性作用，但尚无其对视网膜神经细胞生长发育及功能方面毒性作用的报道。为此，作者观察了DX对体外培养鼠视网膜神经细胞生长发育的影响。
1 材料和方法
1.1 细胞培养
采取作者先期报道的方法培养视网膜神经细胞[1，2]，即取新西兰大耳白兔一只，空气栓塞处死后，无菌条件下取出眼球，于角巩缘后1 mm处环形切开眼球去除前部组织和玻璃体，小心剥离视网膜组织，取其不含血管及髓放线的部分，剪切成2 mm×2 mm大小，而后移入10 ml离心管中，800 r.min-1离心5 min后去上清，加入含10%小牛血清的DMEM营养液(Sigma公司)，让组织块重新悬浮后接种入25 cm2培养皿中，于37 ℃，含5%CO2、95%空气的湿润条件下培养，每周换液2次，此法培养的细胞经实验证实为兔视网膜胶质细胞，待细胞生长4周后传代，传代细胞接种于24孔培养板，培养约10 d后可用于培养鼠视网膜神经细胞。此时，取足月孕小白鼠一只，乙醚吸入麻醉后打开腹腔取出胎鼠，断颈处死后，培养皿内加入5 ml HANK液，立即取出眼球，解剖显微镜下取出视网膜组织，剪切成2 mm×2 mm大小，而后移入10 ml离心管中，800 r.min-1离心5 min后去上清，加入含0.5%胰蛋白酶的消化液2 ml，消化约5 min，800 r.min-1离心5 min后去上清，加入含10%小牛血清的DMEM营养液，让组织块重新悬浮后接种入生长有兔视网膜胶质细胞培养板，每周换液2次。第二次接种培养的细胞经实验证实为鼠视网膜神经细胞。
, 百拇医药
1.2 药物作用观察
接种鼠视网膜组织块后，24孔培养板均分为4组，其中一组为空白对照组，临床常规剂量组的剂量来自玻璃体内地塞米松的常用注射量[3]350 μg除以玻璃体体积约5.0 ml(即350 μg÷5.0 ml)，高剂量组和低剂量组则以此为基础作倍增或倍减。
药物作用后5周，倒置显微镜下观察神经细胞生长的情况，随机记录某剂量组某视野象限内神经细胞一级细胞突起的数量。
1.3 统计学处理
组间比较采用t检验。
2 结 果
见表1。
表1 对照组与各剂量组间结果比较表 组 别
, 百拇医药
细胞数/个
分枝数/支
平均支数
t值
P值
±s对照组
126
355
2.82±0.44
高剂量组
122
313
, 百拇医药
2.57±0.43
9.963
<0.01
常剂量组
126
328
2.60±0.42
10.51
<0.01
低剂量组
133
344
2.59±0.43
, 百拇医药
9.664
<0.01
药物作用5周后，在显微镜下观察空白对照组有较多的神经细胞生长(图1)，检测10个视野126个神经细胞其细胞一级突起共355支，平均为2.82支；高剂量组细胞生长较为稀少(图2)，检测10个视野122个神经细胞其细胞一级突起共313支，平均为2.57支；常剂量组显微镜下检测10个视野126个神经细胞，其细胞一级突起共328支，平均为2.60支，低剂量组显微镜下检测10个视野133个神经细胞，其细胞一级突起共344支，平均为2.59支，经统计学处理，对照组与各实验剂量组之间差异均具有极显著意义(P<0.01)。
图1 对照组神经细胞一级突起发育良好，箭头显示多量的一级突起 光镜×250
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图2 高剂量神经细胞突起受到较强抑制，箭头显示较少量的一级突起光×250
3 讨 论
地塞米松是近年来常用的玻璃体内注射用药物之一，具有抑制炎症反应,减少内眼组织水肿和渗出的功效，一般与其他有效抗生素联合注射，临床上取得了一定的效果。有作者[4，5]利用免疫组织化学及电镜技术观察后认为，当前常规使用剂量的DX玻璃体内注射不对视网膜造成形态学损害。
本研究结果显示，常规剂量注射地塞米松可以造成神经细胞一级突起的减少，其倍增及倍减剂量均可造成对视网膜神经细胞发育的损害，表明机体对于激素——这一自体成分的接受程度是极其有限的，外源性地塞米松将造成神经细胞的损害。而地塞米松与抗生素的联合应用无疑将相互加重其各自的毒副作用，提醒我们在进行该药物的玻璃体内注射时，必须严格掌握该种药物的使用剂量，以尽可能的减少其对视功能的损害。
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作者简介：刘瑶(1964年生)，男，安徽阜阳人，南京铁道医学院附属医院主治医师，眼科学博士。
参考文献：
[1]刘瑶，曾水清，魏厚仁，等.人视网膜Müller细胞培养及超微结构免疫组织化学观察[J].中华眼底病杂志，1995，11(3)：178-80.
[2]刘瑶，陈钦元，若仓雅登，等.鼠视网膜神经细胞原代培养[J].中华眼底病杂志，1997，13(2)：116-7.
[3]郭希让.现代视网膜玻璃体手术学[M].深圳：海天出版社，1997.158-60.
[4]Coats M L，Peyman G A.Intravitreal corticosteroids in the treatment of exogenous fungal endophthalmitis[J].Retina，1992,12(1):46-51.
[5]姚亦群.眼内注射头孢拉啶与地塞米松治疗蜡样芽胞杆菌全眼球炎实验观察[J].眼科研究，1991，9(3)：163-6.
收稿日期：1999-08-01, 百拇医药