膀胱移行细胞癌病人癌组织与尿脱落细胞中9p微卫星不稳定性的分析
作者：范振斌 张建军 白瑾峰 肖泽军 程书钧
单位：(100021 北京，中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所病因室)；肖泽军(肿瘤医院泌尿外科)
关键词：
中华医学杂志000114 膀胱癌的细胞遗传和分子遗传学分析表明，9p的丢失在移行细胞癌早期是最常见的改变[1]。有学者利用检测尿中脱落细胞微卫星改变方法筛查膀胱癌病人，并取得重要进展[2]。我们试图通过分析9p上8个微卫星位点的遗传改变，探讨在中国人膀胱癌早期筛查中应用的可能性。
一、对象与方法
1. 对象：本组26例为本院泌尿科手术治疗的病人，均经病理确诊，均为膀胱原发性移行细胞癌。其中男21例，女5例，年龄34～78岁。26例中血尿22例，吸烟16例。膀胱镜检查：单发癌14例，多发癌12例。分级：原位癌1例；G1期3例；G2期15例；G2～G3期2例；G3期5例。
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2. 方法： 分别收集病人外周血，新鲜癌组织及尿液，分离有核细胞，用苯酚抽提法提取基因组DNA。参照文献[2]方法进行分析。所有引物购自美国Research Genetics 公司。D9S747、D9S157、D9S162、IFNA、D9S1748、D9S171和D9S161位于9p21区域，D9S200位于9p13区域，这些位点在国外膀胱癌9p遗传改变研究中较为常见[3]。
3. 判定标准: 由不同人独立判别, 癌组织或尿脱落细胞扩增产物低于血对照50%以上为杂合性缺失(LOH), 带型发生上下移动为微卫星不稳定性(MSI)[4]。父母双方等位条带(Allele)无明显区分, 为无多态信息，其杂合性缺失不予分析。LOH或MSI均记作“阳性”改变。
二、结果
由表1可见，有73%(19/26)的病人其癌组织及尿脱落细胞中存在MSI。微卫星异常改变主要分布于D9S162、 D9S161 和 IFNA 位点，异常频率分布为：癌组织：D9S161为47%, D9S161为47%，IFNA为30%;尿脱落细胞：D9S162为42%, D9S161为47%, IFNA 为30%。D9S1748位点在癌组织异常率为27%(6/22),在尿脱落细胞为18%(4/22)。D9S171位点在26例病人中仅2例有多态信息(图1)。
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表1 26例膀胱癌病人癌组织中9p微卫星不稳定性分析结果(例数) 位点
LOH+MSI/IN
癌组织
尿脱落细胞
D9S747
5/19(26)
4/19(21)
D9S157
5/20(25)
3/20(15)
D9S162
9/19(47)
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8/19(42)
IFNA
6/20(30)
6/20(30)
D9S1748
6/22(27)
4/22(18)
D9S171
1/2
0/2(0)
D9S161
8/15(47)
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8/15(47)
D9S200
5/24(21)
4/24(17)
合计
19/26(73)
19/26(73)
注：MSI：微卫星不稳定性；LOH：杂合缺失；IN：有多态信息的病例；括号内为阳性率(%)
注：a～g分别代表病例9、12、8、23、18、12及13；B.外周血；T.癌组织；U.尿脱落细胞。病例9和病例12的D9S161位点，及病例8的D9S1748位点癌组织与尿脱落细胞共同发生杂合缺失；病例23的癌组织中D9S1748位点发生杂合缺失；病例18的癌组织中D9S162位点发生杂合缺失，而尿脱落细胞中发生微卫星不稳定性；病例12的尿脱落细胞中D9S162位点发生微卫星不稳定性；病例13的癌组织中IFNA位点发生微卫星不稳定性
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图1 原发性膀胱移行细胞癌9p微卫星不稳定性分析
三、讨论
本组病人具有膀胱癌一般特点[5], 如发病年龄较大, 以中老年男性为主，多数病例出现血尿，吸烟者占多数等。另外，多发癌常见，肿瘤病理分级较广泛，具有一般患病人群的代表性。
本组病人中有多数在癌组织及尿脱落细胞中有9p微卫星不稳定性，表明9p遗传学改变同膀胱癌发病关系密切，可能对膀胱癌的诊断有重要参考价值。癌组织及尿脱落细胞中较高异常位点为D9S162、D9S161和IFNA，而D9S747与D9S200 改变较少。本组资料表明，位于p16基因内的D9S1748位点阳性率明显低于国外报道[3]，提示中国人原发膀胱癌p16基因缺失可能不占主要地位，是否有甲基化或点突变导致p16基因失活，我们正在进一步研究中。本组病人中仅1例有D9S171位点阳性改变，且多态性极少，这不同于国外报道[2，3]，显示出明显的种族差异。由于例数尚少，9p微卫星位点改变与膀胱癌单发或多发，病理学分级、以及与吸烟是否有相关性还难以定论。总之，9 p MSI在中国人膀胱移行细胞癌中较常见，对膀胱癌遗传标志物筛选有一定帮助。■
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基金项目：“九五”国家科技攻关项目[96-906-01-14(A)]
参考文献:
[1]Knowles MA, Elder PA, Williamson M, et al. Allelotype of human bladder cancer. Cancer Res, 1994, 54: 531-538.
[2]Mao L, Schoenberg MP, Scicchitano, et al. Molecular detection of primary bladder cancer by microsatellite analysis. Science ,1996, 271: 659-662.
[3]Baud E, Catilina P, Boiteux JP, et al. Human bladder cancers and normal bladder mucosa present the same hot spot of heterozygous chromosome 9 deletion. Int J Cancer, 1998, 77: 821-824.
[4]Rodriguez-Bigas MA, Boland CR, Hamilton SR, et al. A National Cancer Institute Workshop on HNPCC syndrome: meeting highlights and bethesda guidelines. J Natl Can Inst ,1997, 89: 1758-1762.
[5]谷铣之, 主编. 现代肿瘤学. 临床部分.北京: 北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993.80.
收稿日期：1999-01-11, 百拇医药
单位：(100021 北京，中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所病因室)；肖泽军(肿瘤医院泌尿外科)
关键词：
中华医学杂志000114 膀胱癌的细胞遗传和分子遗传学分析表明，9p的丢失在移行细胞癌早期是最常见的改变[1]。有学者利用检测尿中脱落细胞微卫星改变方法筛查膀胱癌病人，并取得重要进展[2]。我们试图通过分析9p上8个微卫星位点的遗传改变，探讨在中国人膀胱癌早期筛查中应用的可能性。
一、对象与方法
1. 对象：本组26例为本院泌尿科手术治疗的病人，均经病理确诊，均为膀胱原发性移行细胞癌。其中男21例，女5例，年龄34～78岁。26例中血尿22例，吸烟16例。膀胱镜检查：单发癌14例，多发癌12例。分级：原位癌1例；G1期3例；G2期15例；G2～G3期2例；G3期5例。
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2. 方法： 分别收集病人外周血，新鲜癌组织及尿液，分离有核细胞，用苯酚抽提法提取基因组DNA。参照文献[2]方法进行分析。所有引物购自美国Research Genetics 公司。D9S747、D9S157、D9S162、IFNA、D9S1748、D9S171和D9S161位于9p21区域，D9S200位于9p13区域，这些位点在国外膀胱癌9p遗传改变研究中较为常见[3]。
3. 判定标准: 由不同人独立判别, 癌组织或尿脱落细胞扩增产物低于血对照50%以上为杂合性缺失(LOH), 带型发生上下移动为微卫星不稳定性(MSI)[4]。父母双方等位条带(Allele)无明显区分, 为无多态信息，其杂合性缺失不予分析。LOH或MSI均记作“阳性”改变。
二、结果
由表1可见，有73%(19/26)的病人其癌组织及尿脱落细胞中存在MSI。微卫星异常改变主要分布于D9S162、 D9S161 和 IFNA 位点，异常频率分布为：癌组织：D9S161为47%, D9S161为47%，IFNA为30%;尿脱落细胞：D9S162为42%, D9S161为47%, IFNA 为30%。D9S1748位点在癌组织异常率为27%(6/22),在尿脱落细胞为18%(4/22)。D9S171位点在26例病人中仅2例有多态信息(图1)。
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表1 26例膀胱癌病人癌组织中9p微卫星不稳定性分析结果(例数) 位点
LOH+MSI/IN
癌组织
尿脱落细胞
D9S747
5/19(26)
4/19(21)
D9S157
5/20(25)
3/20(15)
D9S162
9/19(47)
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8/19(42)
IFNA
6/20(30)
6/20(30)
D9S1748
6/22(27)
4/22(18)
D9S171
1/2
0/2(0)
D9S161
8/15(47)
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8/15(47)
D9S200
5/24(21)
4/24(17)
合计
19/26(73)
19/26(73)
注：MSI：微卫星不稳定性；LOH：杂合缺失；IN：有多态信息的病例；括号内为阳性率(%)
注：a～g分别代表病例9、12、8、23、18、12及13；B.外周血；T.癌组织；U.尿脱落细胞。病例9和病例12的D9S161位点，及病例8的D9S1748位点癌组织与尿脱落细胞共同发生杂合缺失；病例23的癌组织中D9S1748位点发生杂合缺失；病例18的癌组织中D9S162位点发生杂合缺失，而尿脱落细胞中发生微卫星不稳定性；病例12的尿脱落细胞中D9S162位点发生微卫星不稳定性；病例13的癌组织中IFNA位点发生微卫星不稳定性
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图1 原发性膀胱移行细胞癌9p微卫星不稳定性分析
三、讨论
本组病人具有膀胱癌一般特点[5], 如发病年龄较大, 以中老年男性为主，多数病例出现血尿，吸烟者占多数等。另外，多发癌常见，肿瘤病理分级较广泛，具有一般患病人群的代表性。
本组病人中有多数在癌组织及尿脱落细胞中有9p微卫星不稳定性，表明9p遗传学改变同膀胱癌发病关系密切，可能对膀胱癌的诊断有重要参考价值。癌组织及尿脱落细胞中较高异常位点为D9S162、D9S161和IFNA，而D9S747与D9S200 改变较少。本组资料表明，位于p16基因内的D9S1748位点阳性率明显低于国外报道[3]，提示中国人原发膀胱癌p16基因缺失可能不占主要地位，是否有甲基化或点突变导致p16基因失活，我们正在进一步研究中。本组病人中仅1例有D9S171位点阳性改变，且多态性极少，这不同于国外报道[2，3]，显示出明显的种族差异。由于例数尚少，9p微卫星位点改变与膀胱癌单发或多发，病理学分级、以及与吸烟是否有相关性还难以定论。总之，9 p MSI在中国人膀胱移行细胞癌中较常见，对膀胱癌遗传标志物筛选有一定帮助。■
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基金项目：“九五”国家科技攻关项目[96-906-01-14(A)]
参考文献:
[1]Knowles MA, Elder PA, Williamson M, et al. Allelotype of human bladder cancer. Cancer Res, 1994, 54: 531-538.
[2]Mao L, Schoenberg MP, Scicchitano, et al. Molecular detection of primary bladder cancer by microsatellite analysis. Science ,1996, 271: 659-662.
[3]Baud E, Catilina P, Boiteux JP, et al. Human bladder cancers and normal bladder mucosa present the same hot spot of heterozygous chromosome 9 deletion. Int J Cancer, 1998, 77: 821-824.
[4]Rodriguez-Bigas MA, Boland CR, Hamilton SR, et al. A National Cancer Institute Workshop on HNPCC syndrome: meeting highlights and bethesda guidelines. J Natl Can Inst ,1997, 89: 1758-1762.
[5]谷铣之, 主编. 现代肿瘤学. 临床部分.北京: 北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1993.80.
收稿日期：1999-01-11, 百拇医药