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编号:10230209
益骨宁颗粒剂中淫羊藿提取工艺研究
http://www.100md.com 《时珍国医国药》 2000年第1期
     作者:姜 鸿 王树实 邹桂欣

    单位:

    姜 鸿(辽宁省中医研究院,辽宁 沈阳 110034);王树实(辽宁省中医研究院,辽宁 沈阳 110034);邹桂欣(辽宁省中医研究院,辽宁 沈阳 110034)

    关键词:正交试验;淫羊藿;总黄酮

    时珍国医国药000113 提 要:为了提高益骨宁颗粒剂的质量,改进了益骨宁颗 粒剂中淫羊藿的原提取工艺。采用正交试验方法,以淫羊藿总黄酮收率为指标,优选出益骨宁颗粒剂最佳提取工艺。结果表明:用70%乙醇回流提取,第1次加10倍量醇提取1 h,第2次加8倍量醇提取0.5 h,为最佳提取工艺。

    中图分类号:R284.2 文献标识码:A

    文章编号:1008-0805(2000)01-0017-01
, 百拇医药
    Study on Extraction Process for Epimedium of Yiguning Granule

    JIANG Hong, WANG Shu-shi, ZOU Gui-xin

    (Liaoning Academy of TCM, Shengyang 110034, China)

    Abstract:To raise the quality of Yiguning Granule, the old extraction process for epimedium of granule was improved. With the content of total flavones of epimedium as index, orthogonal test was used to select the best extraction process.The result showed that:70% ethanol was used to extract, the firstly, adding 10 times ethanol to extract for 1 hour, the secondly, adding 8 times ethanol to extract for half an hour. This way is the best extraction procss for Yiguning Granule.
, 百拇医药
    Key words:Orthogonal test; Epimedium; Total flavones▲

    益骨宁颗粒剂为我院制剂,具有补肾壮骨,益气活血之功效。经长期临床应用,对原发性与继发性骨质疏松症、腰背痛、膝关节酸痛、神疲乏力有较好疗效,可加速骨折愈合。该冲剂由淫羊藿、黄芪、生地等8味中药配伍组成。君药为淫羊藿 Epimedium brevicornum Maxin,属小檗科植物,其有效活性成分为淫羊藿总黄酮(Total Flavones of Epimedium, TFE)。在实际工作中,我们发现原提取工艺制得成药中淫羊藿总黄酮含量很低。因此,为了提高药效,我们根据有关资料和预实验改进了淫羊藿药材的提取工艺,采用醇提。通过正交试验,系统地考察了提取时间、乙醇浓度、乙醇用量等因素,并进行了显著性检验,找出了重要因素的最好水平。

    1 材料与仪器

    实验用药材均由本院中药局提供;淫羊藿甙对照品由中国药品生物制品检定所提供;所用试剂均为分析纯。
, 百拇医药
    日本岛津UV-260型紫外分光光度计;分析天平(DT-100 1/10000型,北京光学仪器厂);架盘药物天平(感量1/10 g,上海医疗器械八厂)。

    2 方法与结果

    2.1 淫羊藿药材总黄酮含量测定

    2.1.1 供试品溶液制备:根据《中国药典》(1995年版1部)淫羊藿项下含量测定方法,取淫羊藿叶片粗粉,于80℃干燥4 h,精密称取1 g,置圆底烧瓶中,加入70%乙醇40 ml,称重,水浴回流1 h,放冷,称重,用70%乙醇补足减失重量,摇匀,过滤,弃去初滤液,收集续滤液。精密吸取续滤液1.6 ml,挥去乙醇,残渣加水溶解,上于已处理好的聚酰胺柱(3 g,30~60目聚酰胺,湿法装柱)上,用90 ml 60%乙醇洗脱,洗脱液定容在100 ml容量瓶内,作为供试品溶液。

    2.1.2 标准曲线制备:精密称定105℃干燥至恒重的淫羊藿甙对照品5 mg,加甲醇溶解并定容于250 ml量瓶中,精密吸取上述溶液0.0,1.0,2.0,3.0,5.0,7.0,9.0 ml于25 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。照分光光度法(《中国药典》1995年版1部,附录Ⅴ),在270 nm波长处测定吸收度,以吸收度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。结果在20.22~202.2 μg/ml浓度范围内成线性,回归方程为C=211.42 A+4.080 3,γ=0.999 8。
, 百拇医药
    2.1.3 测定方法:取供试品溶液在270 nm波长处测定吸收度,代入回归方程,并计算。得到淫羊藿药材总黄酮含量为2.4%(n=3, RSD=1.79%)。

    2.2 正交设计与结果:根据现有资料和预试验,选择乙醇浓度、乙醇用量、提取时间3个因素,每个因素选3水平,因素水平表见表1。

    表1 因素水平表 水

    平

    因 素

    乙醇浓度A(%)

    乙醇用量倍数B

    提取时间C/h

    1

, http://www.100md.com     50

    10(6;4)

    1.5(1;0.5)

    2

    70

    14(8;6)

    2.5(1.5;1)

    3

    95

    18(10;8)

    3.5(2;1.5)

    按L9(3)4正交表,以淫羊藿总黄酮收率作为考察指标进行正交试验。称取淫羊藿叶片粗粉10 g/次,按正交试验表(表2)进行提取后吸取药液2 ml作为测试液。测试液处理和测定方法同2.1.1和2.1.3项,并根据淫羊藿药材总黄酮含量计算出总黄酮收率,结果填入表2。对结果作直观分析,得到各因素对结果的影响顺序依次为A>B>C。见表2。表2 正交试验表及结果 试
, 百拇医药
    验

    号

    1

    2

    3

    4

    总黄酮收率(%)

    yi

    A

    B

    C

    D

    1

, 百拇医药     1

    1

    1

    1

    72.10

    2

    1

    2

    2

    2

    84.33

    3

    1

    3
, 百拇医药
    3

    3

    85.43

    4

    2

    1

    2

    3

    88.06

    5

    2

    2

    3

    1
, http://www.100md.com
    90.17

    6

    2

    3

    1

    2

    91.84

    7

    3

    1

    3

    2

    60.50

    8
, 百拇医药
    3

    2

    1

    3

    65.17

    9

    3

    3

    2

    1

    71.90

    Ⅰj

    241.86
, 百拇医药
    220.66

    229.11

    234.17

    Ⅱj

    270.07

    239.67

    244.29

    236.67

    Ⅲj

    197.57

    249.16
, 百拇医药
    236.10

    238.66

    R

    72.5

    28.5

    15.18

    4.49

    S

    890.41

    138.83

    38.49
, 百拇医药
    3.37

    2.3 结果分析:表3的方差分析结果表明,乙醇浓度对淫羊藿总黄酮收率影响具有极显著性意义,其次是乙醇用量,而提取时间影响较小,为配合大生产,提取时间选择最短的。因此,认为益骨宁颗粒剂中淫羊藿的最佳提取工艺为A2B3C1,即乙醇浓度为70%,第1次加10倍量提取1 h,第2次加8倍量提取0.5 h。表3 方差分析表 方差来源

    离差平方和

    自由度

    方差

    F值

    显著性

    A

, 百拇医药     890.41

    2

    445.21

    263.44

    P<0.01

    B

    138.83

    2

    69.42

    41.08

    P<0.05

    C

    39.49
, http://www.100md.com
    2

    19.25

    11.39

    SSe

    3.37

    2

    1.69

    F0.01(2,2)=99.00 F0.05(2,2)=19.00

    3 小结与讨论

    3.1 把淫羊藿药材量扩大到10倍,按最佳提取工艺作验证实验,结果得到淫羊藿总黄酮平均收率为91.58%( n=3, RSD=1.96%)。实验重复性很好,总黄酮收率与正交试验中最佳工艺下的收率接近,说明最佳工艺条件是可信的。
, http://www.100md.com
    3.2 实验结果表明,改进工艺后益骨宁颗粒剂中主要有效活性成分淫羊藿总黄酮含量明显增加。且临床疗效好于原颗粒剂。新工艺费用增加很少,且工期比原工艺缩短,所以,有改进的意义。■

    作者简介:姜 鸿(1975-),男(汉族),辽宁人,现任辽宁省中医研究院研究实习员.

    参考文献:

    [1] 张 艺,肖崇厚,孟宪丽,等.8种川产商品淫羊藿总黄酮的含量测定及资源利用[J].中国中药杂志,1995,20(4)∶201

    [2] 邓远辉,杨 柳.正交试验法优选补肾益骨膏工艺[J].中成药,1998,20(2)∶4

    收稿日期:1999-06-14;

    修订日期:1999-09-29;, http://www.100md.com