肝门阻断后细菌移位和门静脉血中内毒素变化的研究
作者：闫勇 尹致良 田伏洲 李小军 李广阔
单位：闫勇(成都军区总医院普外科， 四川成都610083)；尹致良(成都军区总医院普外科， 四川成都610083)；田伏洲(成都军区总医院普外科， 四川成都610083)；李小军(成都军区总医院普外科， 四川成都610083)；李广阔(成都军区总医院普外科， 四川成都610083)
关键词：内毒素类/血液；集落计数；微生物；细菌移位；门静脉；肠粘膜/病理学
中国普通外科杂志000112 摘 要：目的 研究肝门部血流阻断后肠粘膜损害所致细菌移位及门静脉血中内毒素的变化。方法 采用兔动物模型，在无菌条件下机械性阻断肝十二指肠韧带，观察阻断后15，20，30min和60min时门静脉血中内毒素值和肠系膜淋巴结细菌培养阳性数。结果 实验组肝门阻断后门静脉血内毒素值和细菌培养阳性数明显高于对照组(P<0.01)，且随阻断时间延长加重。结论 缺血、缺氧是肠粘膜屏障损害的直接原因，深入对肠粘膜屏障功能保护的研究将有利于指导临床工作。
, 百拇医药
分类号：R392.11；R322.45 文献标识码：A
文章编号：1005-6947(2000)01-0039-03
Intestinal bacterial translocation and change in endotoxin level of portal vein blood after hepatic porta blocking
YAN Yong YIN Zhi-liang TIAN Fu-zhou LI Xiao-jun LI Guang-kuo
(Department of General Surgery, General Hospital of Chengdu Military Central Hospital, Chengdu 610083, China)
, 百拇医药
Abstract：Objective To study the intestinal bacterial translocation and changs in endotoxin level of portal vein blood after hepatic inflow blocking. Methods Under aseptic condition, mechanically blocking of the hepatoduodenal ligement was adopted in rabbit model, both endotoxin level of the portal blood and positive bacterial cultures in the mensenteric lymph nodes were observed at 15, 20, 30 and 60 min respectively after the blocking. Results Both endotoxin level and positive bacterial cultures increased significantly (P<0.01) in the blocking group, which was time-dependent. Conclusions Ischemia and anoxia are the direct causes of intestinal mucosa barrier damage, and a further study on the protection of the intestinal mucosa barrier could benefilial of clinical care.
, 百拇医药
Key words：ENDOTOXINS/blood；COLONY COUNT，MICROBIAL；BACTERIAL TRANSLOCATION;PORTAL VEIN；INTESTINAL MUCOSA/pathol
CLC number：R392.11；R322.45 Document code： A ▲
细菌移位和内毒素血症是肠粘膜屏障损害的直接后果。本研究以建立机械性阻断肝门血流，造成肠道淤血，缺血、缺氧，肠粘膜屏障损害，以观察阻断时间长短与细菌移位和内毒素变化的关系，报告如下。
1 材料及方法
1.1 主要仪器
①CS202B型电热保温干燥箱(重庆试验设备厂)； ②紫外分光光度计(日本公司)； ③-30℃深低温冰箱(北京公司)；④PCO29OZ二氧化碳培养箱(重庆试验设备厂)。
, 百拇医药
1.2 实验动物分组
1.2.1 实验组 30只大白兔(成都利华制药厂实验动物室提供)体重2000～2500g/只。术前禁食12h，肌肉注射氯胺酮30～50g/kg诱导麻醉，使动物停止燥动，耳缘静脉输液，静脉注射戊巴比妥钠0.03mg/kg全麻。腹部剪毛、消毒、腹正中切口入腹，分离肝十二指肠韧带，取样后用无损伤血管钳阻断肝十二脂肠韧带血流并计时，分别于15min，20min，30min和60min时抽门静脉血和切取肠系膜淋巴结标本。
1.2.2 对照组 10只家兔。开腹后不阻断血流，门静脉抽血及肠系膜淋巴结切取时间同实验组。
1.3 检测项目及方法
1.3.1 血内毒素测定 采用上海伊华临床医学科技公司(原上海市医学化验所)提供的鲎试剂Ⅱ型、按说明制定标准曲线，即将已知内毒素 标准曲线稀释至1.0EU/ml，0.5EU/ml，0.125EU/ml， 0.0625EU/ml，0.03EU/ml。使用紫外分光光度计测各浓度吸光度，订出标准曲线。-20℃保存的血标本置恒温融化后，取血浆0.1ml，加Tris-HCl 0.2ml，加灭热源生理盐水0.2ml混匀，置100℃水浴10min，离心，取上清0.1ml测定其吸光度，从标准曲线中查出相应的内毒素含量。
, 百拇医药
1.3.2 细菌移位检测 将肠道内细菌和肠系膜淋巴结在无菌条件下碾碎，置于培养基中，37℃培养箱3d。光镜下观察细菌生长及类别。
1.4 统计学处理
所得资料均采用方差分析。
2 结 果
2.1 内毒素测定结果
实验组动物入肝血流阻断后，门静脉血中内毒素含量明显高于对照组(P<0.01)，且随时间延长，内毒素值升高越明显(表1)。
表1 肝门阻断前、后门静脉血中内毒素变化(Eu/ml) 组别
阻断前
阻断后
, 百拇医药
15min
20min
30min
60min
实验组
0.432±0.019
1.310±0.041)，2)
2.004±0.161)，2)
2.7±0.081)，2)
4.7±0.211)，2)
, 百拇医药
对照组
0.381±0.05
0.410±0.02
0.439±0.04
0.502±0.02
0.438±0.06
注：1)与阻断前比P<0.01；2)与对照组对应点比P<0.01
2.2 细菌培养结果
实验组动物肝门阻断后肠系膜淋巴结细菌培养阳性数随阻断时间延长而增加，且明显高于对照组(表2)。
表2 肠系膜淋巴结细菌培养结果 组别
, 百拇医药
阻断前
阻断后
15min
20min
30min
60min
实验组
0
1
3
10
21
对照组
, 百拇医药
0
0
0
0
1
注：肠系膜淋巴结细菌培养为梭形杆菌，与肠道内培养的梭形杆菌同类。
3 讨 论
肠粘膜具有丰富的血供和大约10m2的面积[1]，有充足的血液循环以保障肠粘膜的血流灌注，维护正常的屏障功能，吸收营养物质，抵御肠道内大量细菌繁殖和毒素产生的侵袭。由于肠绒毛的氧交换特点，绒毛顶端的氧张力明显低于动脉，一旦发生感染、创伤、休克等多种疾病时，为保证重要器官的血供，空肠、远端回肠和结肠粘膜和粘膜下层血流减少，肠粘膜组织氧合作用减弱，发生上皮细胞损害，肠粘膜屏障功能减低。本实验研究表明，肝门阻断血流15min后，门静脉内毒素值明显高于阻断前和对照组(P<0.01)，细菌移位也随阻断时间延长 而增多，阻断20min时细菌培养阳性10%(3/10)，60min 时阳性70%(21/30)，充分证明肠粘膜血液循环障碍、低灌流量是肠粘膜屏障损害的直接原因。
, http://www.100md.com
细菌移位和内毒素血症不仅由于肠粘膜屏障功能损害所致，而且内毒素激活膜上腺苷环酶，损伤溶酶体膜和线粒体膜，加重粘膜上皮细胞膜损害；激活血管活性物质，影响血管舒缩功能，引起微循环障碍，血压下降，进一步加重肠道血灌流不足，加重肠屏障功能损害，如不即时纠正，内毒素血症与肠粘膜屏障损害形成恶性循环使病情恶化。细菌移位和内毒素血症还可使心、肝、肺、肾等多器官功能发生损害，引起多器官系功能障碍和衰竭。目前的研究证明，肠粘膜屏障损害造成细菌移位和内毒素血症在多器官功能衰竭的发病中起关键作用[2～5]，深入对保护肠粘膜屏障功能的研究实为重要。■
作者简介：闫勇(1961-)，男，安徽亳县人，成都军区总医院主治医师，从事肝胆外科方面研究。
参考文献：
[1]蒋朱明，王秀荣，刘跃武.肠粘膜屏障损害与肠外、肠内营养的改进[J].中华消化杂志.1997，17(4)：231～233
, 百拇医药
[2]Guarner F, John LW, Wallacc KM, et al. Endotoxin induced ascites formation in the rt: partial mediation by platelet-activaing factor[J]. Hcpatoligy, 1989,10(5):788～794
[3]Nolan JP. The rolo of endotoxin in liver injury[J]. Gastroenterology, 1975,69(6):1346～1356
[4] Swank GM, Deitch EA. Rolc of the gut in multiple organ failute: bacterial translocation and permeability changes[J]. Word J Sury, 1996,20(4):411～417
[5]Carrico CJ, Meakins JL, Marshall JC, et al. Multiplcorgan-failure syndromc: the gastrointostinal tract: the “moter" of MOP[J]. Arch Surg, 1986,121(2):196～208
收稿日期：1998-11-10
修改日期：1999-12-20
, 百拇医药
单位：闫勇(成都军区总医院普外科， 四川成都610083)；尹致良(成都军区总医院普外科， 四川成都610083)；田伏洲(成都军区总医院普外科， 四川成都610083)；李小军(成都军区总医院普外科， 四川成都610083)；李广阔(成都军区总医院普外科， 四川成都610083)
关键词：内毒素类/血液；集落计数；微生物；细菌移位；门静脉；肠粘膜/病理学
中国普通外科杂志000112 摘 要：目的 研究肝门部血流阻断后肠粘膜损害所致细菌移位及门静脉血中内毒素的变化。方法 采用兔动物模型，在无菌条件下机械性阻断肝十二指肠韧带，观察阻断后15，20，30min和60min时门静脉血中内毒素值和肠系膜淋巴结细菌培养阳性数。结果 实验组肝门阻断后门静脉血内毒素值和细菌培养阳性数明显高于对照组(P<0.01)，且随阻断时间延长加重。结论 缺血、缺氧是肠粘膜屏障损害的直接原因，深入对肠粘膜屏障功能保护的研究将有利于指导临床工作。
, 百拇医药
分类号：R392.11；R322.45 文献标识码：A
文章编号：1005-6947(2000)01-0039-03
Intestinal bacterial translocation and change in endotoxin level of portal vein blood after hepatic porta blocking
YAN Yong YIN Zhi-liang TIAN Fu-zhou LI Xiao-jun LI Guang-kuo
(Department of General Surgery, General Hospital of Chengdu Military Central Hospital, Chengdu 610083, China)
, 百拇医药
Abstract：Objective To study the intestinal bacterial translocation and changs in endotoxin level of portal vein blood after hepatic inflow blocking. Methods Under aseptic condition, mechanically blocking of the hepatoduodenal ligement was adopted in rabbit model, both endotoxin level of the portal blood and positive bacterial cultures in the mensenteric lymph nodes were observed at 15, 20, 30 and 60 min respectively after the blocking. Results Both endotoxin level and positive bacterial cultures increased significantly (P<0.01) in the blocking group, which was time-dependent. Conclusions Ischemia and anoxia are the direct causes of intestinal mucosa barrier damage, and a further study on the protection of the intestinal mucosa barrier could benefilial of clinical care.
, 百拇医药
Key words：ENDOTOXINS/blood；COLONY COUNT，MICROBIAL；BACTERIAL TRANSLOCATION;PORTAL VEIN；INTESTINAL MUCOSA/pathol
CLC number：R392.11；R322.45 Document code： A ▲
细菌移位和内毒素血症是肠粘膜屏障损害的直接后果。本研究以建立机械性阻断肝门血流，造成肠道淤血，缺血、缺氧，肠粘膜屏障损害，以观察阻断时间长短与细菌移位和内毒素变化的关系，报告如下。
1 材料及方法
1.1 主要仪器
①CS202B型电热保温干燥箱(重庆试验设备厂)； ②紫外分光光度计(日本公司)； ③-30℃深低温冰箱(北京公司)；④PCO29OZ二氧化碳培养箱(重庆试验设备厂)。
, 百拇医药
1.2 实验动物分组
1.2.1 实验组 30只大白兔(成都利华制药厂实验动物室提供)体重2000～2500g/只。术前禁食12h，肌肉注射氯胺酮30～50g/kg诱导麻醉，使动物停止燥动，耳缘静脉输液，静脉注射戊巴比妥钠0.03mg/kg全麻。腹部剪毛、消毒、腹正中切口入腹，分离肝十二指肠韧带，取样后用无损伤血管钳阻断肝十二脂肠韧带血流并计时，分别于15min，20min，30min和60min时抽门静脉血和切取肠系膜淋巴结标本。
1.2.2 对照组 10只家兔。开腹后不阻断血流，门静脉抽血及肠系膜淋巴结切取时间同实验组。
1.3 检测项目及方法
1.3.1 血内毒素测定 采用上海伊华临床医学科技公司(原上海市医学化验所)提供的鲎试剂Ⅱ型、按说明制定标准曲线，即将已知内毒素 标准曲线稀释至1.0EU/ml，0.5EU/ml，0.125EU/ml， 0.0625EU/ml，0.03EU/ml。使用紫外分光光度计测各浓度吸光度，订出标准曲线。-20℃保存的血标本置恒温融化后，取血浆0.1ml，加Tris-HCl 0.2ml，加灭热源生理盐水0.2ml混匀，置100℃水浴10min，离心，取上清0.1ml测定其吸光度，从标准曲线中查出相应的内毒素含量。
, 百拇医药
1.3.2 细菌移位检测 将肠道内细菌和肠系膜淋巴结在无菌条件下碾碎，置于培养基中，37℃培养箱3d。光镜下观察细菌生长及类别。
1.4 统计学处理
所得资料均采用方差分析。
2 结 果
2.1 内毒素测定结果
实验组动物入肝血流阻断后，门静脉血中内毒素含量明显高于对照组(P<0.01)，且随时间延长，内毒素值升高越明显(表1)。
表1 肝门阻断前、后门静脉血中内毒素变化(Eu/ml) 组别
阻断前
阻断后
, 百拇医药
15min
20min
30min
60min
实验组
0.432±0.019
1.310±0.041)，2)
2.004±0.161)，2)
2.7±0.081)，2)
4.7±0.211)，2)
, 百拇医药
对照组
0.381±0.05
0.410±0.02
0.439±0.04
0.502±0.02
0.438±0.06
注：1)与阻断前比P<0.01；2)与对照组对应点比P<0.01
2.2 细菌培养结果
实验组动物肝门阻断后肠系膜淋巴结细菌培养阳性数随阻断时间延长而增加，且明显高于对照组(表2)。
表2 肠系膜淋巴结细菌培养结果 组别
, 百拇医药
阻断前
阻断后
15min
20min
30min
60min
实验组
0
1
3
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21
对照组
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0
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1
注：肠系膜淋巴结细菌培养为梭形杆菌，与肠道内培养的梭形杆菌同类。
3 讨 论
肠粘膜具有丰富的血供和大约10m2的面积[1]，有充足的血液循环以保障肠粘膜的血流灌注，维护正常的屏障功能，吸收营养物质，抵御肠道内大量细菌繁殖和毒素产生的侵袭。由于肠绒毛的氧交换特点，绒毛顶端的氧张力明显低于动脉，一旦发生感染、创伤、休克等多种疾病时，为保证重要器官的血供，空肠、远端回肠和结肠粘膜和粘膜下层血流减少，肠粘膜组织氧合作用减弱，发生上皮细胞损害，肠粘膜屏障功能减低。本实验研究表明，肝门阻断血流15min后，门静脉内毒素值明显高于阻断前和对照组(P<0.01)，细菌移位也随阻断时间延长 而增多，阻断20min时细菌培养阳性10%(3/10)，60min 时阳性70%(21/30)，充分证明肠粘膜血液循环障碍、低灌流量是肠粘膜屏障损害的直接原因。
, http://www.100md.com
细菌移位和内毒素血症不仅由于肠粘膜屏障功能损害所致，而且内毒素激活膜上腺苷环酶，损伤溶酶体膜和线粒体膜，加重粘膜上皮细胞膜损害；激活血管活性物质，影响血管舒缩功能，引起微循环障碍，血压下降，进一步加重肠道血灌流不足，加重肠屏障功能损害，如不即时纠正，内毒素血症与肠粘膜屏障损害形成恶性循环使病情恶化。细菌移位和内毒素血症还可使心、肝、肺、肾等多器官功能发生损害，引起多器官系功能障碍和衰竭。目前的研究证明，肠粘膜屏障损害造成细菌移位和内毒素血症在多器官功能衰竭的发病中起关键作用[2～5]，深入对保护肠粘膜屏障功能的研究实为重要。■
作者简介：闫勇(1961-)，男，安徽亳县人，成都军区总医院主治医师，从事肝胆外科方面研究。
参考文献：
[1]蒋朱明，王秀荣，刘跃武.肠粘膜屏障损害与肠外、肠内营养的改进[J].中华消化杂志.1997，17(4)：231～233
, 百拇医药
[2]Guarner F, John LW, Wallacc KM, et al. Endotoxin induced ascites formation in the rt: partial mediation by platelet-activaing factor[J]. Hcpatoligy, 1989,10(5):788～794
[3]Nolan JP. The rolo of endotoxin in liver injury[J]. Gastroenterology, 1975,69(6):1346～1356
[4] Swank GM, Deitch EA. Rolc of the gut in multiple organ failute: bacterial translocation and permeability changes[J]. Word J Sury, 1996,20(4):411～417
[5]Carrico CJ, Meakins JL, Marshall JC, et al. Multiplcorgan-failure syndromc: the gastrointostinal tract: the “moter" of MOP[J]. Arch Surg, 1986,121(2):196～208
收稿日期：1998-11-10
修改日期：1999-12-20
, 百拇医药