槐角丸中槐角的TLC鉴别及黄芩苷含量测定的研究
作者：连云岚 高天爱 张中苏 崔宇红 黄斌
单位：连云岚 高天爱 张中苏(山西省药品检验所 太原 030001)；崔宇红(山西省太原市中医研究所 太原 030001)；黄斌(山西安特制药有限公司 太原 030001)
关键词：
药物分析杂志000123 槐角丸系收载于中国药典1995年版一部的品种，由槐角、黄芩等6味药组成，具清肠疏风、凉血止血之功效[1]。因槐角在处方中是君药，故本文研究了槐角中芦丁的TLC鉴别方法，通过净化处理，使芦丁与其他相近的黄酮类成分得到了较好的分离；黄芩在处方中为佐药，且目前市场上黄芩质量参差不齐，为了严格控制其质量，本文增加了黄芩苷的含量测定，结果证明该方法重复性好，回收率高，有实际意义。
1 仪器与试药
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SP8800高效液相色谱仪；Spectra 200型UV-Vis检测器；SP4400型积分仪。甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为超纯水。芦丁和黄芩苷对照品(供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供。
2 方法与结果
2.1 槐角的定性鉴别 取本品大蜜丸或小蜜丸2 g、水蜜丸1.5 g，蜜丸切碎，加等量硅藻土，研匀，水蜜丸研碎，加石油醚(30～60 ℃)20 mL，浸渍2 h，时时振摇，滤过，弃去石油醚液，挥干残渣，残渣加甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干。残渣加水0.5 mL使溶解，装入一预先装填好的聚酰胺柱(聚酰胺2 g，40目，内径0.8～1.0 cm，干法装柱)上，用50 mL水洗脱，弃去水液，再用50 mL乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干。残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺槐角的阴性对照样品溶液。再取芦丁对照品，加甲醇制成1 mg.mL-1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述供试品溶液及阴性对照样品溶液各10 μL，对照品溶液5 μL，分别点于同一0.5%CMC-Na硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%三氯化铝乙醇溶液，用热风吹至斑点清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点(见图1)。
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图1 槐角丸中芦丁鉴别图谱
1.供试品溶液 2.芦丁对照品溶液 3.阴性对照样品溶液
2.2 黄芩苷的含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：天津奥特公司产C18柱，4.6 mm×250 mm；流动相：甲醇-冰醋酸-水(48∶1∶52)；柱温：室温；流速：1.0 mL.min-1；检测波长：278 nm。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品1 g，剪碎，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，塞紧，称定重量，加热回流1 h，放冷后，密塞，称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2 mL置5 mL量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。
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2.2.3 空白试验 取缺黄芩的阴性对照样品按照供试品溶液制备法制成阴性对照液，在与黄芩苷相应的保留时间出峰处无干扰，见图2。
图2 黄芩苷HPLC色谱图
A.黄芩苷 B.样品 C.阴性样品 D.黄芩对照药材
1.黄芩苷
2.2.4 线性关系考察 取黄芩苷10 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，用50%甲醇制成浓度为0.1 mg.mL-1的溶液，分别精密吸取上述溶液1，2，3，4，5 mL置10 mL量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，摇匀。各进样10 μL，依法测定，以峰面积为纵坐标，浓度为(mg.mL-1)横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：
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Y=5.369×107X-6.048×104 r=0.9996
2.2.5 精密度试验 对同一份样品平行进样5次，结果峰面积平均值为1 555 484.4，RSD为2.1%。
2.2.6 稳定性实验 对同一样品在4 h之内每隔0.5 h进行考察，结果稳定性良好。
2.2.7 重复性试验 对同一批号的5份样品进行平行试验考察重复性，结果含量平均值为7.48 mg.g-1，RSD为1.2%。
2.2.8 回收率测定 精密称取已知含量(5.43 mg.g-1)的样品1 g，精密添加黄芩苷5.4 mg，按加样回收法测定，结果平均回收率为101.4%，RSD为1.6%,n=3。
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2.2.9 样品测定 对3个厂家9个不同批号的样品进行测定，结果见表1。
表1 样品测定结果(n=2) 厂 家
批 号
含量/mg.g-1
大同中药厂
970318
3.74
960115
5.84
太原中药厂
97042220
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5.42
96040101
5.7
970401240
5.32
96110206
8.83
榆社阿胶厂
961107
8.64
970801
7.48
980313
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7.46
3 讨论
曾选用异丙醇-甲醇-3%醋酸(5∶30∶65)[2]、甲醇-0.2mol.L-1磷酸二氢钠(pH 2.7)(45∶55)[3]、甲醇-冰醋酸-水(48∶1∶52)、0.5%磷酸-甲醇-二甲基甲酰胺(13∶12∶1)[4]作为流动相进行平行试验，最后优选出甲醇-冰醋酸-水(48∶1∶52)，黄芩苷主峰与其它峰达到较好的基线分离效果。
本文参考文献[5]，选用278 nm作为测定波长。■
参考文献：
[1]中国药典.1995.一部：626
[2]傅桂兰.HPLC法测定黄芩及复方制剂中黄芩甙的含量.中国中药杂志，1994，19(12)：731
[3]郭平，李章万，蒋学华等.HPLC测定12种中药制剂中黄芩甙含量.药物分析杂志，1995，15(5)：13
[4]成永武，薛杉春，冯中平等.高效液相色谱法测定喉痹冲剂中黄芩甙的含量.中成药，1994，16(9)：51
[5]王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994.226，276，260
收稿日期：1999-02-11, 百拇医药
单位：连云岚 高天爱 张中苏(山西省药品检验所 太原 030001)；崔宇红(山西省太原市中医研究所 太原 030001)；黄斌(山西安特制药有限公司 太原 030001)
关键词：
药物分析杂志000123 槐角丸系收载于中国药典1995年版一部的品种，由槐角、黄芩等6味药组成，具清肠疏风、凉血止血之功效[1]。因槐角在处方中是君药，故本文研究了槐角中芦丁的TLC鉴别方法，通过净化处理，使芦丁与其他相近的黄酮类成分得到了较好的分离；黄芩在处方中为佐药，且目前市场上黄芩质量参差不齐，为了严格控制其质量，本文增加了黄芩苷的含量测定，结果证明该方法重复性好，回收率高，有实际意义。
1 仪器与试药
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SP8800高效液相色谱仪；Spectra 200型UV-Vis检测器；SP4400型积分仪。甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为超纯水。芦丁和黄芩苷对照品(供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供。
2 方法与结果
2.1 槐角的定性鉴别 取本品大蜜丸或小蜜丸2 g、水蜜丸1.5 g，蜜丸切碎，加等量硅藻土，研匀，水蜜丸研碎，加石油醚(30～60 ℃)20 mL，浸渍2 h，时时振摇，滤过，弃去石油醚液，挥干残渣，残渣加甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干。残渣加水0.5 mL使溶解，装入一预先装填好的聚酰胺柱(聚酰胺2 g，40目，内径0.8～1.0 cm，干法装柱)上，用50 mL水洗脱，弃去水液，再用50 mL乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干。残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备缺槐角的阴性对照样品溶液。再取芦丁对照品，加甲醇制成1 mg.mL-1的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典1995年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述供试品溶液及阴性对照样品溶液各10 μL，对照品溶液5 μL，分别点于同一0.5%CMC-Na硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%三氯化铝乙醇溶液，用热风吹至斑点清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点(见图1)。
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图1 槐角丸中芦丁鉴别图谱
1.供试品溶液 2.芦丁对照品溶液 3.阴性对照样品溶液
2.2 黄芩苷的含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：天津奥特公司产C18柱，4.6 mm×250 mm；流动相：甲醇-冰醋酸-水(48∶1∶52)；柱温：室温；流速：1.0 mL.min-1；检测波长：278 nm。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品1 g，剪碎，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，塞紧，称定重量，加热回流1 h，放冷后，密塞，称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2 mL置5 mL量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，滤液作为供试品溶液。
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2.2.3 空白试验 取缺黄芩的阴性对照样品按照供试品溶液制备法制成阴性对照液，在与黄芩苷相应的保留时间出峰处无干扰，见图2。
图2 黄芩苷HPLC色谱图
A.黄芩苷 B.样品 C.阴性样品 D.黄芩对照药材
1.黄芩苷
2.2.4 线性关系考察 取黄芩苷10 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，用50%甲醇制成浓度为0.1 mg.mL-1的溶液，分别精密吸取上述溶液1，2，3，4，5 mL置10 mL量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，摇匀。各进样10 μL，依法测定，以峰面积为纵坐标，浓度为(mg.mL-1)横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：
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Y=5.369×107X-6.048×104 r=0.9996
2.2.5 精密度试验 对同一份样品平行进样5次，结果峰面积平均值为1 555 484.4，RSD为2.1%。
2.2.6 稳定性实验 对同一样品在4 h之内每隔0.5 h进行考察，结果稳定性良好。
2.2.7 重复性试验 对同一批号的5份样品进行平行试验考察重复性，结果含量平均值为7.48 mg.g-1，RSD为1.2%。
2.2.8 回收率测定 精密称取已知含量(5.43 mg.g-1)的样品1 g，精密添加黄芩苷5.4 mg，按加样回收法测定，结果平均回收率为101.4%，RSD为1.6%,n=3。
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2.2.9 样品测定 对3个厂家9个不同批号的样品进行测定，结果见表1。
表1 样品测定结果(n=2) 厂 家
批 号
含量/mg.g-1
大同中药厂
970318
3.74
960115
5.84
太原中药厂
97042220
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5.42
96040101
5.7
970401240
5.32
96110206
8.83
榆社阿胶厂
961107
8.64
970801
7.48
980313
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7.46
3 讨论
曾选用异丙醇-甲醇-3%醋酸(5∶30∶65)[2]、甲醇-0.2mol.L-1磷酸二氢钠(pH 2.7)(45∶55)[3]、甲醇-冰醋酸-水(48∶1∶52)、0.5%磷酸-甲醇-二甲基甲酰胺(13∶12∶1)[4]作为流动相进行平行试验，最后优选出甲醇-冰醋酸-水(48∶1∶52)，黄芩苷主峰与其它峰达到较好的基线分离效果。
本文参考文献[5]，选用278 nm作为测定波长。■
参考文献：
[1]中国药典.1995.一部：626
[2]傅桂兰.HPLC法测定黄芩及复方制剂中黄芩甙的含量.中国中药杂志，1994，19(12)：731
[3]郭平，李章万，蒋学华等.HPLC测定12种中药制剂中黄芩甙含量.药物分析杂志，1995，15(5)：13
[4]成永武，薛杉春，冯中平等.高效液相色谱法测定喉痹冲剂中黄芩甙的含量.中成药，1994，16(9)：51
[5]王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.北京：中国医药科技出版社，1994.226，276，260
收稿日期：1999-02-11, 百拇医药