RP-HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量*
作者：徐长根 冯建斌 孙文基
单位：徐长根(陕西省药品检验所 西安 710061)；冯建斌(汉中药检所)；孙文基(西北大学)
关键词：
药物分析杂志000122 杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)有降低血压，补肾安胎的功效，主要成分为杜仲胶、氯原酸、桃叶珊瑚苷等。Charles从中国产杜仲中分离得到了松脂醇二葡萄糖苷(pinoresind diglucoside)，并确证了其为杜仲降压的有效成分[1]，同时向多个国家申请了专利。唯一明确的松脂醇二葡萄糖苷的含量测定法有正相高效液相色谱法[2]，我们在药典标准制订过程中，采用了反相高效液相法测定其含量，流动相为甲醇-水(25∶75)，方法简便，松脂醇二葡萄糖苷能得到较好的分离。
1 仪器与试药
, http://www.100md.com
SP8810型高效液相色谱仪；Spectra 200型检测器；SP4400积分仪。
松脂醇二葡萄糖苷对照品为按文献[3]方法制得的白色块晶，mp 226～227 ℃，[α]25D-26.3°(C，1.50，H2O)，最大紫外吸收波长为276.5 nm，226.5 nm；其IR及酶解后乙醚提取所得苷元之NMR特征，均与文献[1，3]中松脂醇二葡萄糖苷及其苷元结构相一致。归一化法测得纯度为99.4%。杜仲药材为药典制定标准的样品。其它试剂均为分析纯。
2 色谱条件
色谱柱：RP C18，4.6 mm×220 mm 10 μm，大连化物所；流动相：甲醇-水(25∶75)；流速：1.0 mL.min-1；检测波长：277 nm；纸速：0.25 cm.min-1；松脂醇二葡萄糖苷峰保留时间约为8 min。
, 百拇医药
3 测定方法
3.1 对照品溶液的制备 精密称取松脂醇二葡萄糖苷对照品适量，配制成0.5 mg.mL-1的甲醇溶液。
3.2 供试品溶液的制备 按文献[2]方法制备，即得。
3.3 测定方法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，用外标法计算含量。
4 结果
4.1 线性范围 精密吸取0.549 mg.mL-1的对照品溶液2，4，6，8，10 μL进样，测定峰面积，以峰面积Y对进样量X(μg)回归得方程：
Y=117 313.7X-8 439.4 r=0.999 7
, 百拇医药
结果表明，松脂醇二葡萄糖苷在1.0～5.0 μg间呈良好的线性关系。
4.2 精密度和重现性试验 精密吸取0.549 mg.mL-1的对照品溶液10 μL进样，连续测定5次，峰面积分别为627 988，626 117，619 482，630 821，623 261，RSD为0.7%。称取陕西城固产杜仲5份，按样品测定方法操作测得平均含量为0.258%，RSD为0.6%。
4.3 回收率测定 精密称取已测知含量的陕西城固产杜仲1 g共6份，分别加入对照品1和2 mg，按样品测定方法制备溶液，进样10 μL，计算得平均回收率(n=3)分别为98.4%(RSD=1.5%)，99.2%(RSD=1.1%)。
4.4 样品测定 取不同产地产的杜仲样品，照拟定测定方法测定含量，结果贵州、云南、陕西城固、陕西西乡、陕西勉县样品中松脂醇二葡萄糖苷平均含量分别为0.043%，0.146%，0.255%，0.344%，0.506%，RSD分别为3.3%，0.48%，2.8%，1.8%，1.7%，n=3。色谱图见图1。
, 百拇医药
图1 样品色谱图
1.松脂醇二葡萄糖苷
5 讨论
5.1 松脂醇二葡萄糖苷在甲醇中有较好的溶解度，经试验选用甲醇-水(2∶8)出峰较为合适。在流动相中，松脂醇二葡萄糖苷的UV λmax(lgε)为277 nm(3.70)、227 nm(4.28)。选用277 nm为测定波长，系统稳定快，干扰小。
5.2 用氯仿除去样品中橡胶，再用甲醇回流提取，效果较好。
5.3 不同产地产的杜仲中糖苷含量有一定的差异，陕西产杜仲中糖苷含量较高。■
* 本文为药典会标准科研资助项目
** 汉中药检所
, 百拇医药
*** 西北大学
*本文为药典会标准科研资助项目
参考文献：
[1]Charles J Sih,Ravikumar P, Huang Fuchin,et al. Separation and Synthesis of pinoresinol diglucoside moides olive. J Am Chem Soc,1976,17:5412
[2]沙振方，孙文基.杜仲中松脂醇二葡萄糖甙的含量测定.药学学报，1986，21(9)：708
[3]Charles J.Glycosides of 2,6-Bis(Hydroxy-phenyl)-3,7-Dioxabicycld[3,3,0]Octane.United States Patent，1976.688,275
收稿日期：1999-01-19, 百拇医药
单位：徐长根(陕西省药品检验所 西安 710061)；冯建斌(汉中药检所)；孙文基(西北大学)
关键词：
药物分析杂志000122 杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)有降低血压，补肾安胎的功效，主要成分为杜仲胶、氯原酸、桃叶珊瑚苷等。Charles从中国产杜仲中分离得到了松脂醇二葡萄糖苷(pinoresind diglucoside)，并确证了其为杜仲降压的有效成分[1]，同时向多个国家申请了专利。唯一明确的松脂醇二葡萄糖苷的含量测定法有正相高效液相色谱法[2]，我们在药典标准制订过程中，采用了反相高效液相法测定其含量，流动相为甲醇-水(25∶75)，方法简便，松脂醇二葡萄糖苷能得到较好的分离。
1 仪器与试药
, http://www.100md.com
SP8810型高效液相色谱仪；Spectra 200型检测器；SP4400积分仪。
松脂醇二葡萄糖苷对照品为按文献[3]方法制得的白色块晶，mp 226～227 ℃，[α]25D-26.3°(C，1.50，H2O)，最大紫外吸收波长为276.5 nm，226.5 nm；其IR及酶解后乙醚提取所得苷元之NMR特征，均与文献[1，3]中松脂醇二葡萄糖苷及其苷元结构相一致。归一化法测得纯度为99.4%。杜仲药材为药典制定标准的样品。其它试剂均为分析纯。
2 色谱条件
色谱柱：RP C18，4.6 mm×220 mm 10 μm，大连化物所；流动相：甲醇-水(25∶75)；流速：1.0 mL.min-1；检测波长：277 nm；纸速：0.25 cm.min-1；松脂醇二葡萄糖苷峰保留时间约为8 min。
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3 测定方法
3.1 对照品溶液的制备 精密称取松脂醇二葡萄糖苷对照品适量，配制成0.5 mg.mL-1的甲醇溶液。
3.2 供试品溶液的制备 按文献[2]方法制备，即得。
3.3 测定方法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，用外标法计算含量。
4 结果
4.1 线性范围 精密吸取0.549 mg.mL-1的对照品溶液2，4，6，8，10 μL进样，测定峰面积，以峰面积Y对进样量X(μg)回归得方程：
Y=117 313.7X-8 439.4 r=0.999 7
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结果表明，松脂醇二葡萄糖苷在1.0～5.0 μg间呈良好的线性关系。
4.2 精密度和重现性试验 精密吸取0.549 mg.mL-1的对照品溶液10 μL进样，连续测定5次，峰面积分别为627 988，626 117，619 482，630 821，623 261，RSD为0.7%。称取陕西城固产杜仲5份，按样品测定方法操作测得平均含量为0.258%，RSD为0.6%。
4.3 回收率测定 精密称取已测知含量的陕西城固产杜仲1 g共6份，分别加入对照品1和2 mg，按样品测定方法制备溶液，进样10 μL，计算得平均回收率(n=3)分别为98.4%(RSD=1.5%)，99.2%(RSD=1.1%)。
4.4 样品测定 取不同产地产的杜仲样品，照拟定测定方法测定含量，结果贵州、云南、陕西城固、陕西西乡、陕西勉县样品中松脂醇二葡萄糖苷平均含量分别为0.043%，0.146%，0.255%，0.344%，0.506%，RSD分别为3.3%，0.48%，2.8%，1.8%，1.7%，n=3。色谱图见图1。
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图1 样品色谱图
1.松脂醇二葡萄糖苷
5 讨论
5.1 松脂醇二葡萄糖苷在甲醇中有较好的溶解度，经试验选用甲醇-水(2∶8)出峰较为合适。在流动相中，松脂醇二葡萄糖苷的UV λmax(lgε)为277 nm(3.70)、227 nm(4.28)。选用277 nm为测定波长，系统稳定快，干扰小。
5.2 用氯仿除去样品中橡胶，再用甲醇回流提取，效果较好。
5.3 不同产地产的杜仲中糖苷含量有一定的差异，陕西产杜仲中糖苷含量较高。■
* 本文为药典会标准科研资助项目
** 汉中药检所
, 百拇医药
*** 西北大学
*本文为药典会标准科研资助项目
参考文献：
[1]Charles J Sih,Ravikumar P, Huang Fuchin,et al. Separation and Synthesis of pinoresinol diglucoside moides olive. J Am Chem Soc,1976,17:5412
[2]沙振方，孙文基.杜仲中松脂醇二葡萄糖甙的含量测定.药学学报，1986，21(9)：708
[3]Charles J.Glycosides of 2,6-Bis(Hydroxy-phenyl)-3,7-Dioxabicycld[3,3,0]Octane.United States Patent，1976.688,275
收稿日期：1999-01-19, 百拇医药