高效液相色谱法测定复方愈肝胶囊中獐牙菜苦苷的含量
作者：陈家春 胡军林
单位：陈家春(湖北中医学院药学系 武汉 430061)；胡军林(湖北省药品检验所)
关键词：
药物分析杂志000119 复方愈肝胶囊是在民间验方的基础上研制出的新的中药制剂，主要用于治疗慢性乙型肝炎，适合于中医湿热中阻，肝郁脾虚型病证。主要由紫红獐牙菜、鸡内金等药物组成。紫红獐牙菜系方中君药，来源于龙胆科植物Swertia punicea Hems L.的干燥全草，以紫红獐牙菜之名收载于湖北省中药材质量标准[鄂卫药政(1994)28号]，獐牙菜苦苷(Swertiamarin)为其主要有效成分。为了有效地控制制剂质量，本文参照文献[1]，采用反相高效液相色谱法，测定了本品中獐牙菜苦苷的含量，并进行了方法学考察。
1 仪器与试药
, http://www.100md.com 高效液相色谱仪：岛津LC-5A；检测器：岛津SPD-2A；数据处理机：岛津C-R2A(X)。
水：新鲜去离子双蒸水，其余试剂均为分析纯。
对照品：獐牙菜苦苷(Swertiamarin)购于中国药品生物制品检定所，用归一化法测得纯度>98%。
2 色谱条件
色谱柱：Spherisorb C18(5μm)，柱前加保护柱；流动相：甲醇-水(1∶4)；流速：0.8 mL.min-1；检测波长：235 nm；纸速2.5 mm.min-1；灵敏度：0.08。
3 选择性试验
按处方比例及生产制备方法，制备不含獐牙菜苦苷药材的阴性样品，按照样品测定项下供试品溶液制备法制备阴性对照溶液，吸取4 μL进样，另取獐牙菜苦苷对照品溶液4 μL进样，阴性溶液和对照品溶液色谱图见图1，结果表明，对照品与阴性溶液没有峰重叠。
, 百拇医药
图1 色谱图
A.阴性样品 B.对照品 C.样品
1.獐牙菜苦苷
4 线性关系
精密称取獐牙菜苦苷约5 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别取对照品溶液1，2，3，4，5 μL注入高效液相色谱仪，进行分析测定，由数据处理机给出峰面积。以对照品的进样量(μL)为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得直线。回归方程：
Y=5 377X-128 r=0.999 9
线性范围为0.53～2.63 μg。
5 重现性试验
, http://www.100md.com 取同一批样品5份，各约0.3g，精密称定，按样品测定方法进行测定。含量的RSD为1.8%，n=5。
6 加样回收试验
取已知含量(3.12%)的胶囊内容物6份，各约0.12 g，精密称定，置25 mL量瓶中，分别加入獐牙菜苦苷对照品约4.0 mg，按样品测定法进行测定，计算回收率。平均回收率为99.6%，RSD为2.2%，n=6。
7 精密度试验
取对照品溶液2 μL连续进样6次，分别测其峰面积，结果RSD为1.0%，n=6。
8 稳定性试验
取同一份供试品溶液，于24 h内不同时间进样检测。结果表明稳定性良好，RSD为1.4%,n=10。
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9 样品测定
取本品10粒，去除囊壳，内容物混匀，取内容物约0.3 g，精密称定，置25 mL量瓶中，精密加入甲醇25 mL，精密称定，超声处理(功率250 W，频率33 kHz) 25 min，取出，放冷至室温，精密称定，加入甲醇补足失重，摇匀，用微孔滤膜(0.5 μm)滤过，即得供试品溶液。对照品溶液按“4”项下方法制备。
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各4 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，色谱图见图1，以外标法计算样品中獐牙菜苦苷的含量，结果见表1。
表1 样品中獐牙菜苦苷含量测定结果(n=3) 批号
取样量/g
含量/%
931121
, http://www.100md.com
0.2451
3.65
940225
0.2029
4.25
940522
0.2835
3.86
980314
0.2328
3.12
10 讨论
经测定，獐牙菜苦苷的紫外吸收波长范围为220～260 nm。最大吸收波长为235 nm。本试验选择235 nm为检测波长，较好地保证了检出的灵敏度。
, http://www.100md.com
供试品溶液的制备试验中，我们参照文献[1]选用了超声波提取的方法，并取同一批样品5份，分别超声提取15，25，35，45 min，测定其獐牙菜苦苷的含量，结果表明采用25 min，足以将该药中所含獐牙菜苦苷提取完全。
本文对以紫红獐牙菜为君药的复方制剂中獐牙菜苦苷进行了含量测定。实验证明本法能很好地将獐牙菜苦苷同其他各组分分离，与最邻近峰的分离度约为1.7，且紫红獐牙菜的阴性对照无干扰。经方法学研究，表明本法在测定本品中獐牙菜苦苷的含量方面具有快捷、方便、稳定、准确的特点。■
参考文献：
[1]张建生，田子新，楼之岑.九种龙胆中五种裂环环烯醚萜苷苦味成分的高效液相色谱定量分析.药学学报，1991，26(11)：864
收稿日期：1999-07-01, http://www.100md.com
单位：陈家春(湖北中医学院药学系 武汉 430061)；胡军林(湖北省药品检验所)
关键词：
药物分析杂志000119 复方愈肝胶囊是在民间验方的基础上研制出的新的中药制剂，主要用于治疗慢性乙型肝炎，适合于中医湿热中阻，肝郁脾虚型病证。主要由紫红獐牙菜、鸡内金等药物组成。紫红獐牙菜系方中君药，来源于龙胆科植物Swertia punicea Hems L.的干燥全草，以紫红獐牙菜之名收载于湖北省中药材质量标准[鄂卫药政(1994)28号]，獐牙菜苦苷(Swertiamarin)为其主要有效成分。为了有效地控制制剂质量，本文参照文献[1]，采用反相高效液相色谱法，测定了本品中獐牙菜苦苷的含量，并进行了方法学考察。
1 仪器与试药
, http://www.100md.com 高效液相色谱仪：岛津LC-5A；检测器：岛津SPD-2A；数据处理机：岛津C-R2A(X)。
水：新鲜去离子双蒸水，其余试剂均为分析纯。
对照品：獐牙菜苦苷(Swertiamarin)购于中国药品生物制品检定所，用归一化法测得纯度>98%。
2 色谱条件
色谱柱：Spherisorb C18(5μm)，柱前加保护柱；流动相：甲醇-水(1∶4)；流速：0.8 mL.min-1；检测波长：235 nm；纸速2.5 mm.min-1；灵敏度：0.08。
3 选择性试验
按处方比例及生产制备方法，制备不含獐牙菜苦苷药材的阴性样品，按照样品测定项下供试品溶液制备法制备阴性对照溶液，吸取4 μL进样，另取獐牙菜苦苷对照品溶液4 μL进样，阴性溶液和对照品溶液色谱图见图1，结果表明，对照品与阴性溶液没有峰重叠。
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图1 色谱图
A.阴性样品 B.对照品 C.样品
1.獐牙菜苦苷
4 线性关系
精密称取獐牙菜苦苷约5 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别取对照品溶液1，2，3，4，5 μL注入高效液相色谱仪，进行分析测定，由数据处理机给出峰面积。以对照品的进样量(μL)为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得直线。回归方程：
Y=5 377X-128 r=0.999 9
线性范围为0.53～2.63 μg。
5 重现性试验
, http://www.100md.com 取同一批样品5份，各约0.3g，精密称定，按样品测定方法进行测定。含量的RSD为1.8%，n=5。
6 加样回收试验
取已知含量(3.12%)的胶囊内容物6份，各约0.12 g，精密称定，置25 mL量瓶中，分别加入獐牙菜苦苷对照品约4.0 mg，按样品测定法进行测定，计算回收率。平均回收率为99.6%，RSD为2.2%，n=6。
7 精密度试验
取对照品溶液2 μL连续进样6次，分别测其峰面积，结果RSD为1.0%，n=6。
8 稳定性试验
取同一份供试品溶液，于24 h内不同时间进样检测。结果表明稳定性良好，RSD为1.4%,n=10。
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9 样品测定
取本品10粒，去除囊壳，内容物混匀，取内容物约0.3 g，精密称定，置25 mL量瓶中，精密加入甲醇25 mL，精密称定，超声处理(功率250 W，频率33 kHz) 25 min，取出，放冷至室温，精密称定，加入甲醇补足失重，摇匀，用微孔滤膜(0.5 μm)滤过，即得供试品溶液。对照品溶液按“4”项下方法制备。
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各4 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，色谱图见图1，以外标法计算样品中獐牙菜苦苷的含量，结果见表1。
表1 样品中獐牙菜苦苷含量测定结果(n=3) 批号
取样量/g
含量/%
931121
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0.2451
3.65
940225
0.2029
4.25
940522
0.2835
3.86
980314
0.2328
3.12
10 讨论
经测定，獐牙菜苦苷的紫外吸收波长范围为220～260 nm。最大吸收波长为235 nm。本试验选择235 nm为检测波长，较好地保证了检出的灵敏度。
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供试品溶液的制备试验中，我们参照文献[1]选用了超声波提取的方法，并取同一批样品5份，分别超声提取15，25，35，45 min，测定其獐牙菜苦苷的含量，结果表明采用25 min，足以将该药中所含獐牙菜苦苷提取完全。
本文对以紫红獐牙菜为君药的复方制剂中獐牙菜苦苷进行了含量测定。实验证明本法能很好地将獐牙菜苦苷同其他各组分分离，与最邻近峰的分离度约为1.7，且紫红獐牙菜的阴性对照无干扰。经方法学研究，表明本法在测定本品中獐牙菜苦苷的含量方面具有快捷、方便、稳定、准确的特点。■
参考文献：
[1]张建生，田子新，楼之岑.九种龙胆中五种裂环环烯醚萜苷苦味成分的高效液相色谱定量分析.药学学报，1991，26(11)：864
收稿日期：1999-07-01, http://www.100md.com