马来酸三甲氧苯丁氨酯镇痛机制的初步研究
作者：马涛 刘玉兰 盛男
单位：马涛(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015); 刘玉兰(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015); 盛男(本校药学系1993级学生)
关键词：马来酸三甲氧苯丁氨酯；镇痛；利血平；纳洛酮；钙
沈阳药科大学学报000118 摘 要：对马来酸三甲氧苯丁氨酯(TM)镇痛作用的机制进行了初步探讨.结果显示，脑室内注射TM40、80 μg/鼠能够显著抑制小鼠扭体反应，表明TM的镇痛作用有中枢参与.利血平、纳洛酮能够减弱TM的镇痛作用，CaCl2和EDTA则分别减弱和增强其镇痛作用.表明TM的镇痛作用可能与阿片系统，中枢单胺类递质及钙离子浓度有关.
分类号：R965
The Analgesic Mechanism of Trimebutine Maleate
, 百拇医药
Ma Tao，Liu Yulan,Sheng Nan
(Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract：The analgesic effect of trimebutine maleate (TM) and its mechanism were studied in this paper.It was found that the writhing response induced by acetic acid was inhibited by TM (40、80 μg/mouse,icv).TM-induced analgesia was significantly reduced by reserpine and naloxone,and its analgesic effect was reduced and inhanced by CaCl2 and EDTA respectively.It was concluded that the analgesic effect of TM was of partical central action and might be related to the opioid receptor,the central monoamine transmitters and the inhibition of calcium influx.
, 百拇医药
Key words：trimebutine maleate；analgesia;reserpine;naloxone;calcium▲
马来酸三甲氧苯丁氨酯(trimebutine maleate,TM)是胃功能调节药，作者〔1〕曾报道了其具有镇痛作用，本文对其作用机制进行了初步探讨.
1 实验材料
TM系我校药剂教研室提供，白色粉末，临用前生理盐水配制成所需浓度.利血平注射液(Res)，上海医科大学红旗制药厂，940403.盐酸纳洛酮注射液(Nal)，北京四环制药厂，960419.
昆明种小鼠，购自沈阳药科大学实验动物中心(合格证号：辽实合字第033号).
2 方法与结果
, http://www.100md.com
2.1 脑室内注射TM对小鼠扭体反应的影响〔2〕
小鼠，乙醚浅麻醉，在头部两耳连线与矢状缝交点的左右前外各2 mm进针，注射容量为10 μL，进针深度为2 mm，注射1%伊文氏蓝后立即处死，解剖后观察伊文氏蓝是否进入脑室，以确定注射部位，以后依照此法注射药物.
小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，随机分组.脑室内注射不同剂量的TM和等容积的NS.各组均于给药后10 min腹腔注射0.6%醋酸10 mL/kg，记录15 min内各鼠扭体次数，并计算扭体反应抑制率，结果见表1.脑室内注射TM 40，80 μg/鼠能够显著抑制小鼠扭体反应，抑制率分别为65.0%，88.3%，而20 μg/鼠剂量组抑制作用不明显，抑制率仅为19.3%.
Tab.1 Analgesic effect of icv TM in mice by the writhing method(
±s) Group
, 百拇医药
n
Dose/μg.mouse-1
Number of writhing
Inhibition rate/%
NS
12
—
58.0±
22.4
—
TM
12
, 百拇医药
20
46.8±
10.1
19.3
12
40
20.3±
12.2**
65.0
12
80
6.8±
8.2**
, http://www.100md.com
88.3
**P<0.01 compared with NS group
2.2 纳洛酮对TM镇痛作用的影响
小鼠，体重18～22 g，雌性，随机分为4组：NS组，TM组，Nal组，Nal+TM组，前3组分别腹腔注射NS(10 mL/kg)，TM(70 mg/kg)和Nal(2 mg/g)，第四组提前5 min腹腔注射Nal(2 mg/kg)，然后腹腔注射TM(70 mg/kg)，各组小鼠均于给药后10、20、30 min采用热板法测定痛阈值.由表2可见，腹腔注射Nal 2 mg/kg对小鼠热板反应无显著的影响，但可显著降低TM对小鼠热板反应痛阈值的提高作用.
2.3 利血平对TM镇痛作用的影响
小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，随机分为4组：NS组，TM组，Res组，Res+TM组，前3组分别腹腔注射NS(10 ml/kg)，TM(30 mg/kg)和Res(1 mg/kg)，第四组提前24 h腹腔注射Res(1 mg/kg)，然后腹腔注射TM(30 mg/kg)，各组均于给药后10 min腹腔注射0.6%醋酸10 mL/kg，记录15 min内各组小鼠扭体次数.由表3可见，提前给予利血平并不影响小鼠的扭体反应，但可显著减弱TM的镇痛作用(P<0.05).
, http://www.100md.com
Tab.2 Effects of Naloxone on analgesia of TM(±s,n=12) Group
Dose
/mg.kg-1
Pain thresholds/s
0 min
10 min
20 min
30 min
NS
, http://www.100md.com
—
18.4±3.5
19.5±6.6
19.3±6.0
17.6±4.9
Nal
2
16.5±3.2
19.0±4.3
16.5±4.3
15.6±3.7
TM
, 百拇医药 70
17.2±3.4
49.0±13.0**
31.7±10.7**
27.3±13.9**
Nal+TM
2+70
17.1±3.0
29.1±13.5*##
19.1±5.7##
18.4±4.3#
, http://www.100md.com
*P<0.05，**P<0.01 compared with NS group,#P<0.05，##P<0.01 compared with TM groupTab.3 Effects of reserpine on analgesia of TM (±s) Group
n
Dose/mg.kg-1
Number of writhing
NS
12
—
30.4±
, 百拇医药
15.9
TM
12
30.0
2.6±
5.0**
Res
12
1.0
32.5±
9.6
TM+Res
12
, 百拇医药
1.0+30.0
17.3±
18.0*#
*P<0.05，**P<0.01 compared with NS group,#P<0.05 compared with TM group
2.4 CaCl2对TM镇痛作用的影响
小鼠，体重18～22 g，雌性，随机分为4组：NS组，TM组，CaCl2组，CaCl2+TM组，前3组分别腹腔注射NS(10 ml/kg)，TM(70 mg/kg)和CaCl2(222 mg/kg)，第四组提前20 min腹空注射CaCl2 222 mg/kg，然后腹腔注射TM(70 mg/kg),各组均于给药后10、20、20 min采用热板法测定痛阈值.由表4可见，腹腔注射CaCl2不影响小鼠热板反应的痛阈值，但能够减弱TM的镇痛作用.
, http://www.100md.com
Tab.4 Effects of CaCl2 on analgesia of TM(±s) Group
n
Dose/mg.kg-1
Pain thresholds/s
0 min
10 min
20 min
30 min
NS
, 百拇医药
10
—
18.9±4.0
17.5±4.6
14.7±5.1
16.3±3.5
CaCl2
10
222
18.0±3.8
16.8±4.5
18.7±6.4
, 百拇医药
18.9±9.8
TM
12
70.0
15.9±3.5
50.1±13.8**
37.7±14.4**
21.4±7.2*
CaCl2+TM
12
222+70.0
, 百拇医药
16.5±3.3
35.5±16.7**#
27.4±8.1**#
20.5±9.0
*P<0.05，**P<0.01 compared with NS group,#P<0.05 compared with TM group2.5 EDTA对TM镇痛作用的影响
小鼠，体重18～22 g，雌性，随机分为4组：NS组，TM组，EDTA组，EDTA+TM组，前3组分别腹腔注射NS(10 ml/kg)，TM(50 mg/kg)和EDTA(223 mg/kg)，第四组提前20 min腹腔注射EDTA(223 mg/kg)，然后腹腔注射TM(50 mg/kg)，各组均于给药后10、20、30 min采用热板法测定痛阈值.由表5可见，腹腔注射Ca2+给合剂EDTA能够加强TM的镇痛作用，并延长其作用时间.
, 百拇医药
Tab.5 Effect of EDTA on analgesia of TM(±s) Group
n
Dose
/mg.kg-1
Pain thresholds/s
0 min
10 min
20 min
30 min
NS
, http://www.100md.com
10
—
15.9±3.1
15.9±6.2
14.9±5.2
14.2±3.8
EDTA
10
223
17.0±5.0
15.2±4.5
13.0±4.6
, 百拇医药 13.9±4.6
TM
12
50
15.7±3.8
29.5±11.1**
23.2±9.8*
18.2±9.1
EDTA+TM
12
223+50
15.2±3.1
, 百拇医药
40.7±12.5**#
29.6±12.0**
22.4±8.4*
*P<0.05，**P<0.01 compared with NS group,#P<0.05 compared with TM group
3 讨论
前文已报道外周给予TM具有镇痛作用〔1〕，为了进一步研究TM的镇痛作用是否有中枢参与，我们观察了脑室内注射TM的镇痛作用，结果表明，较小剂量TM即可抑制醋酸所致的小鼠扭体反应，腹腔给予该剂量的TM不能抑制扭体反应，说明TM的镇痛作用有中枢参与.纳洛酮作为阿片受体拮抗剂可以阻断吗啡类镇痛药与μ、δ、k型阿片受体的结合，从而消除吗啡类药物的镇痛作用〔3〕.本研究表明预先给予纳洛酮并不影响小鼠热板反应的痛阈值，却可减弱TM的镇痛作用，证明TM的镇痛作用部分通过激动阿片受体来实现.利血平能够耗竭中枢及外周神经系统中的单胺类递质，从而对抗吗啡的镇痛作用〔4〕.本文采用扭体法观察了腹腔注射利血平
, 百拇医药
1 mg/kg 24 h后对TM镇痛作用的影响，实验结果表明该剂量利血平不影响小鼠的扭体反应，但该剂量的利血平可使TM的镇痛作用减弱，这一结果表明TM的镇痛作用与单胺类递质有关.
TM的镇痛作用与阿片受体有关，而阿片受体激动剂能够影响Ca2+的摄取，通过降低细胞内的Ca2+浓度，抑制神经冲动的传导而发挥镇痛作用，所以我们进一步考察了TM的镇痛作用与Ca2+的关系，本研究表明，CaCl2和Ca2+络合剂EDTA分别减弱和加强TM的镇痛作用，说明TM的镇痛作用与Ca2+浓度有关.作为痛觉感受器的感觉神经末梢存在着多种痛介质的受体或作用位点，而这些受体或作用位点偶联着Ca2+通道，当痛介质兴奋其相应受体或位点时，Ca2+通道开放，Ca2+流入细胞内，当细胞内Ca2+浓度增高时，兴奋了痛感受器，产生痛感受器电位，形成痛冲动传入中枢产生疼痛〔5〕.由上述实验结果推测TM能够抑制Ca2+内流，减少细胞内Ca2+的浓度，使痛感受器不能兴奋而产生镇痛作用，预先给予CaCl2能够提高细胞外钙离子浓度，促进Ca2+内流，从而减弱TM的镇痛作用；相反，EDTA能够与Ca2+发生络合反应，减少细胞外Ca2+的浓度，抑制Ca2+内流，与TM的作用发生协同效应从而加强TM的镇痛作用.■
, 百拇医药
参考文献：
[1]马涛，刘玉兰，盛男，等.马来酸三甲氧苯丁氨酯的镇痛作用.沈阳药科大学学报，1999，16(3)：185～188
[2]徐叔云.药理实验方法学.第二版.北京：人民卫生出版社，1992.162～163
[3]Tyers MB.A classification of opiate receptors that mediate antinociception in animals.Br J Pharmacol,1980,69:503～513
[4]洪庚辛，韦宝伟，杨敬格，等.利血平与优降宁对动物痛阈和吗啡镇痛作用的影响.药学学报，1986，21(11)：806～809
[5]Del pozo E,Caro G,Baeyens JW.Analgesic effects of several calcium channel blockers in mice.Eur J Pharmacol,1987,137:155～160
收稿日期：1999-01-15, 百拇医药
单位：马涛(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015); 刘玉兰(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015); 盛男(本校药学系1993级学生)
关键词：马来酸三甲氧苯丁氨酯；镇痛；利血平；纳洛酮；钙
沈阳药科大学学报000118 摘 要：对马来酸三甲氧苯丁氨酯(TM)镇痛作用的机制进行了初步探讨.结果显示，脑室内注射TM40、80 μg/鼠能够显著抑制小鼠扭体反应，表明TM的镇痛作用有中枢参与.利血平、纳洛酮能够减弱TM的镇痛作用，CaCl2和EDTA则分别减弱和增强其镇痛作用.表明TM的镇痛作用可能与阿片系统，中枢单胺类递质及钙离子浓度有关.
分类号：R965
The Analgesic Mechanism of Trimebutine Maleate
, 百拇医药
Ma Tao，Liu Yulan,Sheng Nan
(Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract：The analgesic effect of trimebutine maleate (TM) and its mechanism were studied in this paper.It was found that the writhing response induced by acetic acid was inhibited by TM (40、80 μg/mouse,icv).TM-induced analgesia was significantly reduced by reserpine and naloxone,and its analgesic effect was reduced and inhanced by CaCl2 and EDTA respectively.It was concluded that the analgesic effect of TM was of partical central action and might be related to the opioid receptor,the central monoamine transmitters and the inhibition of calcium influx.
, 百拇医药
Key words：trimebutine maleate；analgesia;reserpine;naloxone;calcium▲
马来酸三甲氧苯丁氨酯(trimebutine maleate,TM)是胃功能调节药，作者〔1〕曾报道了其具有镇痛作用，本文对其作用机制进行了初步探讨.
1 实验材料
TM系我校药剂教研室提供，白色粉末，临用前生理盐水配制成所需浓度.利血平注射液(Res)，上海医科大学红旗制药厂，940403.盐酸纳洛酮注射液(Nal)，北京四环制药厂，960419.
昆明种小鼠，购自沈阳药科大学实验动物中心(合格证号：辽实合字第033号).
2 方法与结果
, http://www.100md.com
2.1 脑室内注射TM对小鼠扭体反应的影响〔2〕
小鼠，乙醚浅麻醉，在头部两耳连线与矢状缝交点的左右前外各2 mm进针，注射容量为10 μL，进针深度为2 mm，注射1%伊文氏蓝后立即处死，解剖后观察伊文氏蓝是否进入脑室，以确定注射部位，以后依照此法注射药物.
小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，随机分组.脑室内注射不同剂量的TM和等容积的NS.各组均于给药后10 min腹腔注射0.6%醋酸10 mL/kg，记录15 min内各鼠扭体次数，并计算扭体反应抑制率，结果见表1.脑室内注射TM 40，80 μg/鼠能够显著抑制小鼠扭体反应，抑制率分别为65.0%，88.3%，而20 μg/鼠剂量组抑制作用不明显，抑制率仅为19.3%.
Tab.1 Analgesic effect of icv TM in mice by the writhing method(
±s) Group, 百拇医药
n
Dose/μg.mouse-1
Number of writhing
Inhibition rate/%
NS
12
—
58.0±
22.4
—
TM
12
, 百拇医药
20
46.8±
10.1
19.3
12
40
20.3±
12.2**
65.0
12
80
6.8±
8.2**
, http://www.100md.com
88.3
**P<0.01 compared with NS group
2.2 纳洛酮对TM镇痛作用的影响
小鼠，体重18～22 g，雌性，随机分为4组：NS组，TM组，Nal组，Nal+TM组，前3组分别腹腔注射NS(10 mL/kg)，TM(70 mg/kg)和Nal(2 mg/g)，第四组提前5 min腹腔注射Nal(2 mg/kg)，然后腹腔注射TM(70 mg/kg)，各组小鼠均于给药后10、20、30 min采用热板法测定痛阈值.由表2可见，腹腔注射Nal 2 mg/kg对小鼠热板反应无显著的影响，但可显著降低TM对小鼠热板反应痛阈值的提高作用.
2.3 利血平对TM镇痛作用的影响
小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，随机分为4组：NS组，TM组，Res组，Res+TM组，前3组分别腹腔注射NS(10 ml/kg)，TM(30 mg/kg)和Res(1 mg/kg)，第四组提前24 h腹腔注射Res(1 mg/kg)，然后腹腔注射TM(30 mg/kg)，各组均于给药后10 min腹腔注射0.6%醋酸10 mL/kg，记录15 min内各组小鼠扭体次数.由表3可见，提前给予利血平并不影响小鼠的扭体反应，但可显著减弱TM的镇痛作用(P<0.05).
, http://www.100md.com
Tab.2 Effects of Naloxone on analgesia of TM(
±s,n=12) GroupDose
/mg.kg-1
Pain thresholds/s
0 min
10 min
20 min
30 min
NS
, http://www.100md.com
—
18.4±3.5
19.5±6.6
19.3±6.0
17.6±4.9
Nal
2
16.5±3.2
19.0±4.3
16.5±4.3
15.6±3.7
TM
, 百拇医药 70
17.2±3.4
49.0±13.0**
31.7±10.7**
27.3±13.9**
Nal+TM
2+70
17.1±3.0
29.1±13.5*##
19.1±5.7##
18.4±4.3#
, http://www.100md.com
*P<0.05，**P<0.01 compared with NS group,#P<0.05，##P<0.01 compared with TM groupTab.3 Effects of reserpine on analgesia of TM (
±s) Groupn
Dose/mg.kg-1
Number of writhing
NS
12
—
30.4±
, 百拇医药
15.9
TM
12
30.0
2.6±
5.0**
Res
12
1.0
32.5±
9.6
TM+Res
12
, 百拇医药
1.0+30.0
17.3±
18.0*#
*P<0.05，**P<0.01 compared with NS group,#P<0.05 compared with TM group
2.4 CaCl2对TM镇痛作用的影响
小鼠，体重18～22 g，雌性，随机分为4组：NS组，TM组，CaCl2组，CaCl2+TM组，前3组分别腹腔注射NS(10 ml/kg)，TM(70 mg/kg)和CaCl2(222 mg/kg)，第四组提前20 min腹空注射CaCl2 222 mg/kg，然后腹腔注射TM(70 mg/kg),各组均于给药后10、20、20 min采用热板法测定痛阈值.由表4可见，腹腔注射CaCl2不影响小鼠热板反应的痛阈值，但能够减弱TM的镇痛作用.
, http://www.100md.com
Tab.4 Effects of CaCl2 on analgesia of TM(
±s) Groupn
Dose/mg.kg-1
Pain thresholds/s
0 min
10 min
20 min
30 min
NS
, 百拇医药
10
—
18.9±4.0
17.5±4.6
14.7±5.1
16.3±3.5
CaCl2
10
222
18.0±3.8
16.8±4.5
18.7±6.4
, 百拇医药
18.9±9.8
TM
12
70.0
15.9±3.5
50.1±13.8**
37.7±14.4**
21.4±7.2*
CaCl2+TM
12
222+70.0
, 百拇医药
16.5±3.3
35.5±16.7**#
27.4±8.1**#
20.5±9.0
*P<0.05，**P<0.01 compared with NS group,#P<0.05 compared with TM group2.5 EDTA对TM镇痛作用的影响
小鼠，体重18～22 g，雌性，随机分为4组：NS组，TM组，EDTA组，EDTA+TM组，前3组分别腹腔注射NS(10 ml/kg)，TM(50 mg/kg)和EDTA(223 mg/kg)，第四组提前20 min腹腔注射EDTA(223 mg/kg)，然后腹腔注射TM(50 mg/kg)，各组均于给药后10、20、30 min采用热板法测定痛阈值.由表5可见，腹腔注射Ca2+给合剂EDTA能够加强TM的镇痛作用，并延长其作用时间.
, 百拇医药
Tab.5 Effect of EDTA on analgesia of TM(
±s) Groupn
Dose
/mg.kg-1
Pain thresholds/s
0 min
10 min
20 min
30 min
NS
, http://www.100md.com
10
—
15.9±3.1
15.9±6.2
14.9±5.2
14.2±3.8
EDTA
10
223
17.0±5.0
15.2±4.5
13.0±4.6
, 百拇医药 13.9±4.6
TM
12
50
15.7±3.8
29.5±11.1**
23.2±9.8*
18.2±9.1
EDTA+TM
12
223+50
15.2±3.1
, 百拇医药
40.7±12.5**#
29.6±12.0**
22.4±8.4*
*P<0.05，**P<0.01 compared with NS group,#P<0.05 compared with TM group
3 讨论
前文已报道外周给予TM具有镇痛作用〔1〕，为了进一步研究TM的镇痛作用是否有中枢参与，我们观察了脑室内注射TM的镇痛作用，结果表明，较小剂量TM即可抑制醋酸所致的小鼠扭体反应，腹腔给予该剂量的TM不能抑制扭体反应，说明TM的镇痛作用有中枢参与.纳洛酮作为阿片受体拮抗剂可以阻断吗啡类镇痛药与μ、δ、k型阿片受体的结合，从而消除吗啡类药物的镇痛作用〔3〕.本研究表明预先给予纳洛酮并不影响小鼠热板反应的痛阈值，却可减弱TM的镇痛作用，证明TM的镇痛作用部分通过激动阿片受体来实现.利血平能够耗竭中枢及外周神经系统中的单胺类递质，从而对抗吗啡的镇痛作用〔4〕.本文采用扭体法观察了腹腔注射利血平
, 百拇医药
1 mg/kg 24 h后对TM镇痛作用的影响，实验结果表明该剂量利血平不影响小鼠的扭体反应，但该剂量的利血平可使TM的镇痛作用减弱，这一结果表明TM的镇痛作用与单胺类递质有关.
TM的镇痛作用与阿片受体有关，而阿片受体激动剂能够影响Ca2+的摄取，通过降低细胞内的Ca2+浓度，抑制神经冲动的传导而发挥镇痛作用，所以我们进一步考察了TM的镇痛作用与Ca2+的关系，本研究表明，CaCl2和Ca2+络合剂EDTA分别减弱和加强TM的镇痛作用，说明TM的镇痛作用与Ca2+浓度有关.作为痛觉感受器的感觉神经末梢存在着多种痛介质的受体或作用位点，而这些受体或作用位点偶联着Ca2+通道，当痛介质兴奋其相应受体或位点时，Ca2+通道开放，Ca2+流入细胞内，当细胞内Ca2+浓度增高时，兴奋了痛感受器，产生痛感受器电位，形成痛冲动传入中枢产生疼痛〔5〕.由上述实验结果推测TM能够抑制Ca2+内流，减少细胞内Ca2+的浓度，使痛感受器不能兴奋而产生镇痛作用，预先给予CaCl2能够提高细胞外钙离子浓度，促进Ca2+内流，从而减弱TM的镇痛作用；相反，EDTA能够与Ca2+发生络合反应，减少细胞外Ca2+的浓度，抑制Ca2+内流，与TM的作用发生协同效应从而加强TM的镇痛作用.■
, 百拇医药
参考文献：
[1]马涛，刘玉兰，盛男，等.马来酸三甲氧苯丁氨酯的镇痛作用.沈阳药科大学学报，1999，16(3)：185～188
[2]徐叔云.药理实验方法学.第二版.北京：人民卫生出版社，1992.162～163
[3]Tyers MB.A classification of opiate receptors that mediate antinociception in animals.Br J Pharmacol,1980,69:503～513
[4]洪庚辛，韦宝伟，杨敬格，等.利血平与优降宁对动物痛阈和吗啡镇痛作用的影响.药学学报，1986，21(11)：806～809
[5]Del pozo E,Caro G,Baeyens JW.Analgesic effects of several calcium channel blockers in mice.Eur J Pharmacol,1987,137:155～160
收稿日期：1999-01-15, 百拇医药