甲苯磺酸舒他西林分散片人体生物利用度实验研究
作者：张逸凡 杜宗敏 钟大放 陈仁弟
单位：张逸凡(沈阳药科大学药物代谢与药物动力学实验室，沈阳 110015); 杜宗敏(沈阳药科大学药物代谢与药物动力学实验室，沈阳 110015); 钟大放(沈阳药科大学药物代谢与药物动力学实验室，沈阳 110015); 陈仁弟(沈阳药科大学药物代谢与药物动力学实验室，沈阳 110015)
关键词：甲苯磺酸舒他西林；药物动力学；生物利用度；高效液相色谱法
沈阳药科大学学报000105 摘 要：建立了测定人血浆中氨苄西林和舒巴坦浓度的高效液相色谱-紫外检测法，采用此方法测定10名健康男性志愿者单剂量交叉口服750 mg甲苯磺酸舒他西林分散片(受试制剂)和优立新片(参比制剂)后血浆中氨苄西林和舒巴坦的浓度，发现受试者服用优立新后，血浆中氨苄西林和舒巴坦的Cmax分别为(10.32±2.94)和(10.16±3.13)μg/mL，摩尔比为0.68∶1.同时考察氨苄西林和舒巴坦的药物动力学特性，进行生物等效性评价.结果为受试制剂中氨苄西林的相对生物利用度为(110.3±20.6)%；舒巴坦为(108.0±20.1)%.对受试制剂和参比制剂的主要药物动力学参数进行统计学分析，结果表明2种制剂生物等效.
, 百拇医药
分类号：R94
A Study on Bioavailability of the Sultamicillin Dissoluble Tablets
Zhang Yifan,Du Zongmin,Zhong Dafang,Chen Rendi
(Laboratory of Drug Metabolism and Pharmacokinetics,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract：A sensitive and reliable HPLC-UV method was established and validated for determination of ampicillin and sulbactam in human plasma respectively.Plasma levels of both substances in 10 healthy volunteers were determined by the method after administration of 750 mg single dose of sultamicillin dissoluble tablets (test formulation) and Unasyn(reference formulation) in an open randomized cross-over trial.It was found that Cmax of ampicillin and sulbactam were (10.32±2.94) and (10.16±3.13)μg/mL respectively(molar ratio,0.68∶1).The pharmacokinetics and bioavailability of ampicillin and sulbactam were also studied.The relative bioavailability of ampicillin was (110.3±20.6)%,and that of sulbactam was (108.0±20.1)%.The statistical analysis results showed that there was no apparent difference between the test formulation and reference formulation.The two formulations were bioequivalent.
, 百拇医药
Key words：sultamicillin,pharmacokinetics;bioavailability;HPLC▲
舒他西林(sultamicillin,见图1)为等摩尔氨苄西林与舒巴坦以酯键共价结合形成的前体药物，制剂上多制成其甲苯磺酸盐.该药口服吸收后被体内非特异性酯酶分解为氨苄西林和舒巴坦，血浆中几乎检测不到舒他西林.血浆中氨苄西林和舒巴坦的测定方法，有微生物法，高效液相色谱法和气相色谱法等〔1〕.本实验旨在建立测定氨苄西林和舒巴坦的灵敏、可靠、简便的高效液相色谱方法，研究甲苯磺酸舒他西林分散片的生物利用度，并进行制剂的生物等效性评价.
Fig.1 Structural formula of sultamicillin,showing its relationship to
, 百拇医药
ampicillin and sulbactam
1 实验材料
1.1 药品与试剂
甲苯磺酸舒他西林分散片，125 mg/片，沈阳津昌制药有限公司研制，批号：980503；优立新片，375 mg/片，辉瑞制药株式会社生产，批号：739621 A；氨苄西林三水合物对照品(含氨苄西林85.6%)、舒巴坦对照品(含舒巴坦99.8%)和头孢拉定，中国药品生物制品检定所提供；吡嗪酰胺，沈阳药科大学药剂教研室提供；乙腈为色谱纯；磷酸二氢铵为分析纯.
1.2 仪器
高效液相色谱仪(包括LC-10 AT泵，SPD-10 A紫外检测器，C-R6A积分仪)日本岛津公司；测定氨苄西林的色谱柱为Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，粒径5 μm)，天津凯德公司；测定舒巴坦的色谱柱为Hypersil C18(200 mm×4.6 mm，粒径5 μm)，大连依利特公司.
, 百拇医药
2 实验方法
2.1 受试者与给药方案
选择10名健康男性志愿者，年龄21～24岁，体重53～65 kg，签署知情同意书，经心电图、肝、肾功能检查，均属正常.将受试者随机分为2组，采用双周期交叉实验设计，禁食12 h后空腹一次口服甲苯磺酸舒他西林750 mg.2次实验间隔1星期，实验期间禁服其他药物.临床实验在辽宁省人民医院进行.
2.2 样品采集与处理
于口服各药前和服药后0.1、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0 h取静脉血4 mL，置肝素抗凝试管，分离血浆后，于-20℃冰箱中保存待测.
2.3 氨苄西林和舒巴坦的血药浓度检测
, 百拇医药 作者在文献报道的测定氨苄西林和舒巴坦的HPLC方法基础上〔2～4〕，进行了部分改进，分别测定了10名受试者血浆中氨苄西林和舒巴坦的浓度.
2.3.1 色谱条件的建立
氨苄西林：流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸缓冲液(9∶91，V/V)，流速为1.0 ml/min，检测波长为UV 225 nm，柱温为室温；舒巴坦：流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸缓冲液(2∶98，V/V)，其余同“氨苄西林”.
2.3.2 血浆样品的处理
氨苄西林：取血浆0.5 mL，加100 μL内标溶液(80 μg/mL头孢拉定水溶液)，再加0.5 mol/L的高氯酸0.5 mL，混匀，离心10 min，取上清液，20 μL进样；舒巴坦：取血浆0.5 mL，加50 μL水，100 μL内标溶液(15 μg/mL吡嗪酰胺水溶液)，混匀，加1.0 mol/L的盐酸0.2 mL，再加3 mL乙醚萃取，分离有机相，50℃氮气吹干，残留物加200 μL流动相-磷酸溶液(1∶1，V/V)溶解，50 μL进样.
, 百拇医药
2.3.3 标准曲线的制备
氨苄西林：取空白血浆0.5 mL，分别配成浓度为0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0 μg/mL的氨苄西林标准血浆溶液，按“2.3.2”项下氨苄西林的血浆处理方法操作，以待测浓度为横坐标，待测物与内标物的峰高比值为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归〔5〕，典型的回归方程为Y=
-0.011 79+0.064 15 X,r=0.997 2，最低定量限为0.5 μg/mL；舒巴坦：取空白血浆0.5 mL，分别配成浓度为0.2、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL的舒巴坦标准血浆溶液，按“2.3.2”项下舒巴坦的血浆样品处理方法操作，典型的回归方程为Y=-0.039 66+0.029 64X，r=0.997 3，最低定量限为0.2 μg/mL.
2.3.4 精密度与准确度的考察
, 百拇医药
氨苄西林：取空白血浆0.5 mL，分别配制1.0、5.0、10.0 μg/mL的氨苄西林质量控制(QC)样品，6样本，连续测定3天，与标准曲线同时进行，计算样品的测得浓度，求算本法的精密度与准确度，结果见表1；舒巴坦：取空白血浆0.5 mL，分别配制0.2、5.0、10.0 μg/mL的舒巴坦QC样品.其余同“氨苄西林”.其精密度与准确度结果见表1.
Tab.1 The precision and accuracy of the HPLC method to determine ampicillin and sulbactam in plasma
Drug
Concentration/
μg.mL-1
, 百拇医药 n
Mean/
μg.mL-
1
s
μg.mL-
1
RE/
%
With-day
CV/%
Between-day
, 百拇医药
CV/%
Ampicillin
1.00
18
1.00
0.05
0.6
4.4
6.6
5.00
18
4.85
0.20
, http://www.100md.com
-3.0
4.2
3.8
10.00
18
10.31
0.37
3.1
3.4
4.3
Sulbactam
0.20
18
, 百拇医药
0.20
0.02
-1.1
9.5
4.8
5.00
18
5.06
0.28
1.2
5.6
5.6
10.00
, 百拇医药
18
9.89
0.60
-1.1
6.2
4.8
血浆样品测定时随行标准曲线，把待测物和内标物的峰高之比代入当天的标准曲线计算出未知样品的浓度，以QC样品是否合格决定该批样品测定结果的取舍.
2.4 数据处理
将测得的数据输入计算机，采用梯形法计算AUC值(AUC0→∞和AUC0→t,t为最后一个采血时间点)，F=AUC受试制剂/AUC参比制剂×100%(若AUCt→∞/AUC0→∞>20%，则用AUC0→t计算相对生物利用度).以半对数作图法，由消除相末端的浓度点计算t1/2，Tmax、Cmax采用实测值.对主要药物动力学参数进行对数转换，采用方差分析进行统计学处理，并进行双单侧检验和(1-2α)置信区间检验，评价2种制剂中氨苄西林和舒巴坦的生物等效性〔6〕.
, 百拇医药
3 实验结果
3.1 血药浓度测定方法评价
氨苄西林的色谱图见图2，氨苄西林的保留时间为6.6 min，内标物头孢拉定的保留时间为9.9 min；舒巴坦的色谱图见图3，舒巴坦的保留时间为6.6 min，内标物吡嗪酰胺的保留时间为7.8 min.结果表明血浆中内源性物质不干扰氨苄西林和舒巴坦的测定，分析方法的精密度和准确度等参数符合有关规范要求〔6〕.
Fig.2 Chromatograms of ampicillin and internal standard(cefradine)
A—Blank plasma;B—Blank plasma spiked with ampicillin (10 μg.mL-1,peak 1)and cefradine(peak 2);C—Plasma sample of volunteers,1 h after oral administration of the test formulation
, 百拇医药
Fig.3 Chromatograms of sulbactam and internal standard(pyrazinamide)
A—Blank plasna;B—Blank plasma spiked with sulbactam (2 μg.mL-1,peak 1)and pyrazinamide (peak 2);C—Plasma sample of volunteers,2 h after oral administration of the test formulation
3.2 血药浓度测定结果及药物动力学特性
单剂量一次口服甲苯磺酸舒他西林受试制剂和参比制剂750 mg后，10名受试者血浆中氨苄西林和舒巴坦的平均血药浓度-时间曲线(各时间点血药浓度的平均值对时间作图)见图4、图5.
, http://www.100md.com
Fig.4 Mean plasma concentration-time curves of ampicillin in tests and reference formulations(n=10)
Fig.5 Mean plasma concentration-time curves of sulbactam in tests and reference formulations(n=10)
Tab.2 The pharmacokinetic parameters of ampicillin and sulbactam(
±s,n=10)
, 百拇医药
Drug
Ke/h-1
t1/2/h
Tmax/h
Cmax/μg.mL-1
AUC0→t/μg.mL-1.h
F/%
Ampicillin(test)
0.67±0.18
, 百拇医药
1.12±0.34
1.25±0.75
9.48±4.51
17.28±2.68
109.9±18.2
Ampicillin(reference)
0.84±0.34
0.95±0.41
0.90±0.36
10.32±2.94
16.05±3.10
, http://www.100md.com
Sulbactam(test)
0.65±0.12
1.10±0.24
1.28±0.73
9.05±4.33
18.12±2.96
107.3±20.1
Sulbactam(reference)
0.66±0.07
1.06±0.12
0.95±0.35
, 百拇医药
10.16±3.13
17.15±2.48
主要药物动力学参数(各受试者药物动力学参数的平均值)如见2，2种制剂中氨苄西林与舒巴坦均具有相似的药时曲线和药物动力学特性.
3.3 相对生物利用度及生物等效性评价
受试制剂与参比制剂中氨苄西林的AUC0→t分别为(17.28±2.68)和(16.05±3.10)μg/
mL.h，受试制剂氨苄西林的F为(110.3±20.6)%；舒巴坦的AUC0→t分别为(18.12±2.96)和(17.15±2.48)(μg/mL).h，舒巴坦的F为(108.0±20.1)%.将氨苄西林和舒巴坦的主要药物动力学参数对数转换后方差分析结果显示两药无显著性差异(见表3、4)，对AUC0→t进行双单侧检验和(1-2α)置信区间检验法分析，受试制剂中氨苄西林的AUC0→t的90%可信限为参比制剂的97.1%～118.9%；受试制剂中舒巴坦的AUC0→t的90%可信限为参比制剂的94.7%～119.7%.可认为两制剂在体内生物作用等效. Tab.3 ANOVA for ampicillin of sultamcillin dissoluble tablets
, 百拇医药
Parameters
F
Formulation
Period
Subject
lnAUC0→t
2.94
2.26
5.13*
lnCmax
1.35
0.61
, 百拇医药
2.91
Tmax
4.08
2.08
3.53*
F0.05(1，8)=5.32；F0.05(9，8)=3.40；*P<0.05 Tab.4 ANOVA for sulbactam of sultamcillin dissoluble tablets
Parametrs
F
Formulation
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Periold
Subject
lnAUC0→t
0.71
1.15
1.28
ln Cmax
1.45
0.16
2.57
Tmax
2.58
, http://www.100md.com
2.58
1.60
F0.05(1，8)=5.32；F0.05(9，8)=3.40
4 讨论
舒他西林本身无抗菌活性，它经肠壁吸收后，由非特异性酯酶迅速水解，以等摩尔比例释放出氨苄西林和舒巴坦2种活性成分.其中氨苄西林为实际上的抗菌有效物质，舒巴坦本身无临床抗菌作用，但可与细菌产生的β-内酰胺酶形成稳定的结合物，不可逆地抑制该酶的活性.这种经化学改造制成的前体药物，大大提高了2种有效成分的生物利用度〔1〕.
本实验建立了测定氨苄西林和舒巴坦的高效液相色谱-紫外检测法.由于选用了合适的内标物，方法更为可靠.这对于舒巴坦很重要，因为舒巴坦的血浆样品经多次提取，若用外标法，准确度较差.氨苄西林的水溶性较强，一般不宜采用液-液萃取法.在实验中发现，若采用甲醇或乙腈作为沉淀剂，色谱峰响应小，而用高氯酸处理血浆样品，可满足测试要求.在舒巴坦的提取过程中，由于舒巴坦的水溶性较强，用乙醚提取时，应充分振荡，否则提取率不稳定.
, http://www.100md.com
实验结果发现，受试者口服舒他西林后，血浆中氨苄西林和舒巴坦的药物动力学特性相似，参比制剂氨苄西林和舒巴坦Cmax分别为(10.32±2.94)和(10.16±3.13)μg/mL，摩尔比为0.68∶1.该实验结果与Rogers等人〔7〕采用HPLC测定的实验结果一致.然而国内有报道，同样采用HPLC法(外标法)〔3〕，测得氨苄西林和舒巴坦的血药浓度摩尔比为1.02∶1；国外也曾报道，采用生物分析方法测定氨苄西林，GC/MS测定舒巴坦，血浆中氨苄西林与舒巴坦的血药浓度摩尔比为1.02∶1〔1〕，产生这一差异的原因，有待进一步研究.
比较受试制剂和参比制剂的主要药物动力学参数，发现受试制剂的Cmax比参比制剂低，没有体现分散片的特点，是否为制剂的原因，需进一步考察.■
参考文献：
, 百拇医药 [1]Friedel HA,Campoli-Richards DM,Goa KL.Sultamicillin:A review of its antibacterial activity,pharmacokinetic properties.and therapeutic efficacy.Drugs,1989,37:491～522
[2]Schumacher I,Margalit R.Liposome-encapsulated ampicillin:Physiochemical and antibacterial properties.J Pham Sci,1997,86(5):635～641
[3]魏敏吉，张莉，吕缓，等.国产舒他西林片剂人体生物利用度研究.中国临床药理学杂志，1997，13(2)：88～93
[4]钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题.药物分析杂志，1996，16：306～312
, 百拇医药
[5]Guillaume Y,Peyrin E,Guinchard C.Rapid determination of subactam and tazobactam in human serum by high-performance liquid chromatography.J Chromatogr B,1995,665:363～371
[6]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典2000年版二部-凡例与附录(草案).北京：卫生部药典委员会，1998.71～75
[7]Rogers HJ,Bradbrook ID,Morrison PJ,et al.Phamacokinetics and bioavailability of sultamicillin estimated by high perfomance liquid chromatography.J Antimicrobl Chemother,1983,11:435～445
收稿日期：1999-04-21, 百拇医药
单位：张逸凡(沈阳药科大学药物代谢与药物动力学实验室，沈阳 110015); 杜宗敏(沈阳药科大学药物代谢与药物动力学实验室，沈阳 110015); 钟大放(沈阳药科大学药物代谢与药物动力学实验室，沈阳 110015); 陈仁弟(沈阳药科大学药物代谢与药物动力学实验室，沈阳 110015)
关键词：甲苯磺酸舒他西林；药物动力学；生物利用度；高效液相色谱法
沈阳药科大学学报000105 摘 要：建立了测定人血浆中氨苄西林和舒巴坦浓度的高效液相色谱-紫外检测法，采用此方法测定10名健康男性志愿者单剂量交叉口服750 mg甲苯磺酸舒他西林分散片(受试制剂)和优立新片(参比制剂)后血浆中氨苄西林和舒巴坦的浓度，发现受试者服用优立新后，血浆中氨苄西林和舒巴坦的Cmax分别为(10.32±2.94)和(10.16±3.13)μg/mL，摩尔比为0.68∶1.同时考察氨苄西林和舒巴坦的药物动力学特性，进行生物等效性评价.结果为受试制剂中氨苄西林的相对生物利用度为(110.3±20.6)%；舒巴坦为(108.0±20.1)%.对受试制剂和参比制剂的主要药物动力学参数进行统计学分析，结果表明2种制剂生物等效.
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分类号：R94
A Study on Bioavailability of the Sultamicillin Dissoluble Tablets
Zhang Yifan,Du Zongmin,Zhong Dafang,Chen Rendi
(Laboratory of Drug Metabolism and Pharmacokinetics,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract：A sensitive and reliable HPLC-UV method was established and validated for determination of ampicillin and sulbactam in human plasma respectively.Plasma levels of both substances in 10 healthy volunteers were determined by the method after administration of 750 mg single dose of sultamicillin dissoluble tablets (test formulation) and Unasyn(reference formulation) in an open randomized cross-over trial.It was found that Cmax of ampicillin and sulbactam were (10.32±2.94) and (10.16±3.13)μg/mL respectively(molar ratio,0.68∶1).The pharmacokinetics and bioavailability of ampicillin and sulbactam were also studied.The relative bioavailability of ampicillin was (110.3±20.6)%,and that of sulbactam was (108.0±20.1)%.The statistical analysis results showed that there was no apparent difference between the test formulation and reference formulation.The two formulations were bioequivalent.
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Key words：sultamicillin,pharmacokinetics;bioavailability;HPLC▲
舒他西林(sultamicillin,见图1)为等摩尔氨苄西林与舒巴坦以酯键共价结合形成的前体药物，制剂上多制成其甲苯磺酸盐.该药口服吸收后被体内非特异性酯酶分解为氨苄西林和舒巴坦，血浆中几乎检测不到舒他西林.血浆中氨苄西林和舒巴坦的测定方法，有微生物法，高效液相色谱法和气相色谱法等〔1〕.本实验旨在建立测定氨苄西林和舒巴坦的灵敏、可靠、简便的高效液相色谱方法，研究甲苯磺酸舒他西林分散片的生物利用度，并进行制剂的生物等效性评价.
Fig.1 Structural formula of sultamicillin,showing its relationship to
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ampicillin and sulbactam
1 实验材料
1.1 药品与试剂
甲苯磺酸舒他西林分散片，125 mg/片，沈阳津昌制药有限公司研制，批号：980503；优立新片，375 mg/片，辉瑞制药株式会社生产，批号：739621 A；氨苄西林三水合物对照品(含氨苄西林85.6%)、舒巴坦对照品(含舒巴坦99.8%)和头孢拉定，中国药品生物制品检定所提供；吡嗪酰胺，沈阳药科大学药剂教研室提供；乙腈为色谱纯；磷酸二氢铵为分析纯.
1.2 仪器
高效液相色谱仪(包括LC-10 AT泵，SPD-10 A紫外检测器，C-R6A积分仪)日本岛津公司；测定氨苄西林的色谱柱为Kromasil C18(150 mm×4.6 mm，粒径5 μm)，天津凯德公司；测定舒巴坦的色谱柱为Hypersil C18(200 mm×4.6 mm，粒径5 μm)，大连依利特公司.
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2 实验方法
2.1 受试者与给药方案
选择10名健康男性志愿者，年龄21～24岁，体重53～65 kg，签署知情同意书，经心电图、肝、肾功能检查，均属正常.将受试者随机分为2组，采用双周期交叉实验设计，禁食12 h后空腹一次口服甲苯磺酸舒他西林750 mg.2次实验间隔1星期，实验期间禁服其他药物.临床实验在辽宁省人民医院进行.
2.2 样品采集与处理
于口服各药前和服药后0.1、0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0 h取静脉血4 mL，置肝素抗凝试管，分离血浆后，于-20℃冰箱中保存待测.
2.3 氨苄西林和舒巴坦的血药浓度检测
, 百拇医药 作者在文献报道的测定氨苄西林和舒巴坦的HPLC方法基础上〔2～4〕，进行了部分改进，分别测定了10名受试者血浆中氨苄西林和舒巴坦的浓度.
2.3.1 色谱条件的建立
氨苄西林：流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸缓冲液(9∶91，V/V)，流速为1.0 ml/min，检测波长为UV 225 nm，柱温为室温；舒巴坦：流动相为乙腈-0.05 mol/L磷酸缓冲液(2∶98，V/V)，其余同“氨苄西林”.
2.3.2 血浆样品的处理
氨苄西林：取血浆0.5 mL，加100 μL内标溶液(80 μg/mL头孢拉定水溶液)，再加0.5 mol/L的高氯酸0.5 mL，混匀，离心10 min，取上清液，20 μL进样；舒巴坦：取血浆0.5 mL，加50 μL水，100 μL内标溶液(15 μg/mL吡嗪酰胺水溶液)，混匀，加1.0 mol/L的盐酸0.2 mL，再加3 mL乙醚萃取，分离有机相，50℃氮气吹干，残留物加200 μL流动相-磷酸溶液(1∶1，V/V)溶解，50 μL进样.
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2.3.3 标准曲线的制备
氨苄西林：取空白血浆0.5 mL，分别配成浓度为0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、20.0 μg/mL的氨苄西林标准血浆溶液，按“2.3.2”项下氨苄西林的血浆处理方法操作，以待测浓度为横坐标，待测物与内标物的峰高比值为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归〔5〕，典型的回归方程为Y=
-0.011 79+0.064 15 X,r=0.997 2，最低定量限为0.5 μg/mL；舒巴坦：取空白血浆0.5 mL，分别配成浓度为0.2、1.0、2.0、5.0、10.0 μg/mL的舒巴坦标准血浆溶液，按“2.3.2”项下舒巴坦的血浆样品处理方法操作，典型的回归方程为Y=-0.039 66+0.029 64X，r=0.997 3，最低定量限为0.2 μg/mL.
2.3.4 精密度与准确度的考察
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氨苄西林：取空白血浆0.5 mL，分别配制1.0、5.0、10.0 μg/mL的氨苄西林质量控制(QC)样品，6样本，连续测定3天，与标准曲线同时进行，计算样品的测得浓度，求算本法的精密度与准确度，结果见表1；舒巴坦：取空白血浆0.5 mL，分别配制0.2、5.0、10.0 μg/mL的舒巴坦QC样品.其余同“氨苄西林”.其精密度与准确度结果见表1.
Tab.1 The precision and accuracy of the HPLC method to determine ampicillin and sulbactam in plasma
Drug
Concentration/
μg.mL-1
, 百拇医药 n
Mean/
μg.mL-
1
s
μg.mL-
1
RE/
%
With-day
CV/%
Between-day
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CV/%
Ampicillin
1.00
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6.6
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0.20
, http://www.100md.com
-3.0
4.2
3.8
10.00
18
10.31
0.37
3.1
3.4
4.3
Sulbactam
0.20
18
, 百拇医药
0.20
0.02
-1.1
9.5
4.8
5.00
18
5.06
0.28
1.2
5.6
5.6
10.00
, 百拇医药
18
9.89
0.60
-1.1
6.2
4.8
血浆样品测定时随行标准曲线，把待测物和内标物的峰高之比代入当天的标准曲线计算出未知样品的浓度，以QC样品是否合格决定该批样品测定结果的取舍.
2.4 数据处理
将测得的数据输入计算机，采用梯形法计算AUC值(AUC0→∞和AUC0→t,t为最后一个采血时间点)，F=AUC受试制剂/AUC参比制剂×100%(若AUCt→∞/AUC0→∞>20%，则用AUC0→t计算相对生物利用度).以半对数作图法，由消除相末端的浓度点计算t1/2，Tmax、Cmax采用实测值.对主要药物动力学参数进行对数转换，采用方差分析进行统计学处理，并进行双单侧检验和(1-2α)置信区间检验，评价2种制剂中氨苄西林和舒巴坦的生物等效性〔6〕.
, 百拇医药
3 实验结果
3.1 血药浓度测定方法评价
氨苄西林的色谱图见图2，氨苄西林的保留时间为6.6 min，内标物头孢拉定的保留时间为9.9 min；舒巴坦的色谱图见图3，舒巴坦的保留时间为6.6 min，内标物吡嗪酰胺的保留时间为7.8 min.结果表明血浆中内源性物质不干扰氨苄西林和舒巴坦的测定，分析方法的精密度和准确度等参数符合有关规范要求〔6〕.
Fig.2 Chromatograms of ampicillin and internal standard(cefradine)
A—Blank plasma;B—Blank plasma spiked with ampicillin (10 μg.mL-1,peak 1)and cefradine(peak 2);C—Plasma sample of volunteers,1 h after oral administration of the test formulation
, 百拇医药
Fig.3 Chromatograms of sulbactam and internal standard(pyrazinamide)
A—Blank plasna;B—Blank plasma spiked with sulbactam (2 μg.mL-1,peak 1)and pyrazinamide (peak 2);C—Plasma sample of volunteers,2 h after oral administration of the test formulation
3.2 血药浓度测定结果及药物动力学特性
单剂量一次口服甲苯磺酸舒他西林受试制剂和参比制剂750 mg后，10名受试者血浆中氨苄西林和舒巴坦的平均血药浓度-时间曲线(各时间点血药浓度的平均值对时间作图)见图4、图5.
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Fig.4 Mean plasma concentration-time curves of ampicillin in tests and reference formulations(n=10)
Fig.5 Mean plasma concentration-time curves of sulbactam in tests and reference formulations(n=10)
Tab.2 The pharmacokinetic parameters of ampicillin and sulbactam(
±s,n=10), 百拇医药
Drug
Ke/h-1
t1/2/h
Tmax/h
Cmax/μg.mL-1
AUC0→t/μg.mL-1.h
F/%
Ampicillin(test)
0.67±0.18
, 百拇医药
1.12±0.34
1.25±0.75
9.48±4.51
17.28±2.68
109.9±18.2
Ampicillin(reference)
0.84±0.34
0.95±0.41
0.90±0.36
10.32±2.94
16.05±3.10
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Sulbactam(test)
0.65±0.12
1.10±0.24
1.28±0.73
9.05±4.33
18.12±2.96
107.3±20.1
Sulbactam(reference)
0.66±0.07
1.06±0.12
0.95±0.35
, 百拇医药
10.16±3.13
17.15±2.48
主要药物动力学参数(各受试者药物动力学参数的平均值)如见2，2种制剂中氨苄西林与舒巴坦均具有相似的药时曲线和药物动力学特性.
3.3 相对生物利用度及生物等效性评价
受试制剂与参比制剂中氨苄西林的AUC0→t分别为(17.28±2.68)和(16.05±3.10)μg/
mL.h，受试制剂氨苄西林的F为(110.3±20.6)%；舒巴坦的AUC0→t分别为(18.12±2.96)和(17.15±2.48)(μg/mL).h，舒巴坦的F为(108.0±20.1)%.将氨苄西林和舒巴坦的主要药物动力学参数对数转换后方差分析结果显示两药无显著性差异(见表3、4)，对AUC0→t进行双单侧检验和(1-2α)置信区间检验法分析，受试制剂中氨苄西林的AUC0→t的90%可信限为参比制剂的97.1%～118.9%；受试制剂中舒巴坦的AUC0→t的90%可信限为参比制剂的94.7%～119.7%.可认为两制剂在体内生物作用等效. Tab.3 ANOVA for ampicillin of sultamcillin dissoluble tablets
, 百拇医药
Parameters
F
Formulation
Period
Subject
lnAUC0→t
2.94
2.26
5.13*
lnCmax
1.35
0.61
, 百拇医药
2.91
Tmax
4.08
2.08
3.53*
F0.05(1，8)=5.32；F0.05(9，8)=3.40；*P<0.05 Tab.4 ANOVA for sulbactam of sultamcillin dissoluble tablets
Parametrs
F
Formulation
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Periold
Subject
lnAUC0→t
0.71
1.15
1.28
ln Cmax
1.45
0.16
2.57
Tmax
2.58
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2.58
1.60
F0.05(1，8)=5.32；F0.05(9，8)=3.40
4 讨论
舒他西林本身无抗菌活性，它经肠壁吸收后，由非特异性酯酶迅速水解，以等摩尔比例释放出氨苄西林和舒巴坦2种活性成分.其中氨苄西林为实际上的抗菌有效物质，舒巴坦本身无临床抗菌作用，但可与细菌产生的β-内酰胺酶形成稳定的结合物，不可逆地抑制该酶的活性.这种经化学改造制成的前体药物，大大提高了2种有效成分的生物利用度〔1〕.
本实验建立了测定氨苄西林和舒巴坦的高效液相色谱-紫外检测法.由于选用了合适的内标物，方法更为可靠.这对于舒巴坦很重要，因为舒巴坦的血浆样品经多次提取，若用外标法，准确度较差.氨苄西林的水溶性较强，一般不宜采用液-液萃取法.在实验中发现，若采用甲醇或乙腈作为沉淀剂，色谱峰响应小，而用高氯酸处理血浆样品，可满足测试要求.在舒巴坦的提取过程中，由于舒巴坦的水溶性较强，用乙醚提取时，应充分振荡，否则提取率不稳定.
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实验结果发现，受试者口服舒他西林后，血浆中氨苄西林和舒巴坦的药物动力学特性相似，参比制剂氨苄西林和舒巴坦Cmax分别为(10.32±2.94)和(10.16±3.13)μg/mL，摩尔比为0.68∶1.该实验结果与Rogers等人〔7〕采用HPLC测定的实验结果一致.然而国内有报道，同样采用HPLC法(外标法)〔3〕，测得氨苄西林和舒巴坦的血药浓度摩尔比为1.02∶1；国外也曾报道，采用生物分析方法测定氨苄西林，GC/MS测定舒巴坦，血浆中氨苄西林与舒巴坦的血药浓度摩尔比为1.02∶1〔1〕，产生这一差异的原因，有待进一步研究.
比较受试制剂和参比制剂的主要药物动力学参数，发现受试制剂的Cmax比参比制剂低，没有体现分散片的特点，是否为制剂的原因，需进一步考察.■
参考文献：
, 百拇医药 [1]Friedel HA,Campoli-Richards DM,Goa KL.Sultamicillin:A review of its antibacterial activity,pharmacokinetic properties.and therapeutic efficacy.Drugs,1989,37:491～522
[2]Schumacher I,Margalit R.Liposome-encapsulated ampicillin:Physiochemical and antibacterial properties.J Pham Sci,1997,86(5):635～641
[3]魏敏吉，张莉，吕缓，等.国产舒他西林片剂人体生物利用度研究.中国临床药理学杂志，1997，13(2)：88～93
[4]钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题.药物分析杂志，1996，16：306～312
, 百拇医药
[5]Guillaume Y,Peyrin E,Guinchard C.Rapid determination of subactam and tazobactam in human serum by high-performance liquid chromatography.J Chromatogr B,1995,665:363～371
[6]中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典2000年版二部-凡例与附录(草案).北京：卫生部药典委员会，1998.71～75
[7]Rogers HJ,Bradbrook ID,Morrison PJ,et al.Phamacokinetics and bioavailability of sultamicillin estimated by high perfomance liquid chromatography.J Antimicrobl Chemother,1983,11:435～445
收稿日期：1999-04-21, 百拇医药