黄芩苷在大鼠胃、离体小肠的吸收动力学研究
作者：王弘 陈济民 张清民
单位：王弘(现工作在中国人民解放军总医院药物研究室); 陈济民(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015); 张清民(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015)
关键词：高效液相色谱法；黄芩苷；吸收动力学
沈阳药科大学学报000102 摘 要：通过高效液相色谱法研究了黄芩苷在大鼠胃、离体小肠的吸收情况，采用NUCLeosil-C18(5 μm)4 mm×250 mm色谱柱，以甲醇-水-乙酸(60∶39∶1)为流动相，检测波长276 nm,柱温：室温，本实验对大鼠胃和离体小肠在不同pH条件下的吸收动力学进行了研究，实验结果：大鼠胃的吸收率与黄芩苷的油/水分配系数之间相关方程为：吸收率=0.030 571 g(油/水分配系数)-2.126(r=0.9731)；大鼠离体小肠的吸收率与黄芩苷的油/水分配系数之间相关方程为：吸收率=0.084 1×1 g(油/水分配系数)-3.254(r=0.996 2).
, 百拇医药
分类号：R912
A Study on the Absorption Kinetics of Baicalin in Rats′ Stomachs and Small Intestines in vitro
Wang Hong，Chen Jimin，Zhang Qingmin
(Department of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract：A high-performance liquid chromatographic method for the quantitative determination of baicalin was presented in rats′ stomachs and small intestines in vitro.The method was carried out by using the NUCLeosil-C18 column and methanol-water-acetic acid as the mobile phase.The absorption kinetics experiment showed that the relevance equation between absorption percentage in rats′stomachs and the oil/water distribution factor of baicalin was absorption percentage=0.030 571 g(oil/water distribution factor)-2.126(r=0.973 1)and that the relevance equation between absorption percentage of small intestines in vitro and the oil/water distribution factor of baicalin was absorption percentage=0.0841×1 g(oil/water distribution factor)-3.254(r=0.996 2).These results provided experimental evidence for understanding its absorption and a suggestion about rational administration.
, 百拇医药
Key words：high-performance liquid chromatography;baicalin；absorption kinetics
The author received the Master′s degree in 1993 and is a Post Doctor research fellowship in Institute of Radiation Medicine,Beijing▲
关于黄芩苷体内吸收、分布、代谢、排泄虽有报道，但仅从尿药数据了解黄芩苷在体内吸收、排除情况，测定方法只限于用紫外分光光度法〔1，2，4〕，有关黄芩苷体外实验报道尚少，本研究为进一步了解其吸收动力学提供了实验依据.
1 pH值对黄芩苷在大鼠胃吸收的影响
1.1 试药与仪器
, http://www.100md.com
黄芩苷：(深圳南方制药厂提供)，黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所)，呋喃苯胺酸(沈阳第一制药厂提供)；动物：Wistar大鼠为本院动物室提供.
0.1 mol/L HCl(其中黄苓苷浓度为200 μg/mL)；0.15 mol/L NaCl(其中黄芩苷浓度为200 μg/mL)；0.15 mol/L NaHCO3(其中黄芩苷浓度为200 μg/mL)；甲醇、乙酸均为分析醇.635型高效液相色谱仪，检测器：200-10型紫外可见分光光度计.
1.2 黄芩苷的测定
用高效液相色谱法.色谱柱：NUCLeosil-C18(5μm)4 mm×250 mm，流动相：甲醇-水-乙酸(60∶39∶1)，检测温度为室温，检测波长：276 nm，流动相流速：0.9 ml/min.
1.3 对照溶液及内标溶液的配置
, 百拇医药
分别精密称取黄芩苷对照品甲醇溶液(10.0 mg→100 mL)，0.25、0.5、0.75、1、1.25、1.50、1.75、2.00、2.25、2.75、3 mL，置于5 mL刻度试管，加甲醇液至刻度，配成5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60 μg/mL系列对照溶液.精取内标呋喃苯胺酸(250 mg→25 mL)贮备液适量，加甲醇得到0.125 μg/μL内标溶液.
1.4 标准曲线绘制
用甲醇配制黄芩苷系列标准液，精密加内标80 μL(0.125 μg/mL)，混匀振荡10 min，放置0.5 h，HPLC测定峰高，以黄芩苷与呋喃苯胺酸峰高比为横坐标，以黄芩苷进样浓度为纵坐标，绘制标准曲线.回归方程为C=0.015 28 A-3.333×10-3(r=0.999 0，n=10).结果表明：黄芩苷在5～60 μg/mL范围内呈线性关系.
, 百拇医药
1.5 方法与结果
取体重180～220 g Wistar大鼠，饥饿20 h，只给饮水，用戊巴比妥钠30～40 mg/kg腹腔注射麻醉后，切开腹部，暴露胃，将贲门结扎，用一有塞塑料管插入幽门结扎之，用生理盐水将胃腔洗净.注射器内吸取一种药液10 mL，注4 mL到胃内，然后又抽回到注射器重复几次，使混合均匀，最后全部抽入注射器中.将4～5 mL上述混合均匀的药液注入胃内，并塞紧塑管塞子.注射器内留下的药液浓度为药物初始浓度，1小时后从胃抽出药液的浓度为药物终浓度.根据黄芩苷初始浓度和终浓度之差计算其吸收率〔3〕.
将3种不同pH条件黄芩苷液依次实验，进行HPLC测定，结果见表1；吸收与油/水分配系数关系见表2.
Tab.1 Absorption data in rats′ stomachs in different pH conditions
, http://www.100md.com
Concentration condition
C0/μg.mL-1
C1/μg.mL-1
ΔC/μg.mL-1
Percentage of absorption/%
0.1 mol.L-1 HCl
150.0
29.7
, 百拇医药 120.3
80.20
0.15 mol.L-1 NaCl
128.0
95.4
32.6
25.50
0.15 mol.L-1 NaHCO3
139.6
113.4
26.2
, 百拇医药
18.78
Tab.2 Oil/water distribution factor of baicalin and absorption data in rats′ stomachs
Condition
0.1 mol.L-1 HCl
0.15 mol.L-1 NaCl
0.15 mol.L-1 NaHO3
Oil/water distribution factor
, http://www.100md.com
1.725 00
0.083 72
0.018 59
Lg(oil/water distributipn factor)
0.236 8
-1.077 0
-1.731 0
Percentage of absorption/%
80.20
25.50
18.78
, 百拇医药
将数据回归后得相关方程为：lg(油/水分配系数)=32.71×吸收率+69.53(r=0.973 1).由上式整理得：吸收率=0.030 571 g(油/水分配系数)-2.126.
结果表明，胃的吸收率与黄芩苷的油/水分配系数之间具有良好的半对数关系，说明黄芩苷主要经分子型吸收的过程.
2 pH值对黄芩苷液在离体大鼠小肠吸收的影响
2.1 材料与试液
保养液成分及pH值，成分为145 mmol/L NaCl,4.56 mmol/L KCl，1.25 mmol/L CaCl2，1.33 mmol/L Na2HPO4，0.33 mmol/L NaH2PO4.(1)用0.1 mol/L HCl、0.15 mol/L NaCl、0.15 mol/L NaHCO3调pH至4.3.(2)NaCl调至5.0.(3)NaHCO3调至7.8.仪器与色谱条件同前.标准曲线同前.
, http://www.100md.com
2.2 方法与结果
将体重200克Wistar大鼠，取空肠一段，去除系膜.用玻璃棒轻柔地将肠管翻转使粘膜面朝外.结扎一端,另一端绑扎于玻璃管一端.用注射器平头针向肠内注入Krebs-Riner试液.然后将其放入80 mL的试管中，而内管液面高于肠外液面1 cm.由一毛细管进气(95%O2及5%CO2)，另一毛细管出气.全管放入37℃恒温水浴中，待稳定后，向粘膜侧保养液中加入黄芩苷8 mL(1 mg/mL)，分别取静置0，0.25，0.5，0.75，1，1.25 h的保养液进行黄芩苷HPLC测定.各时间剩余药量取对数，结果见表3.
Tab.3 Logarithm value of surplus baicalin at different time
Condition
, 百拇医药 t/h
0
0.25
0.5
0.75
1
lg(surplus baicalin)
0.1 mol.L-1 HCl
1.993
1.926
1.848
1.753
, http://www.100md.com
1.629
0.15 mol.L-1 NaCl
1.984
1.947
1.907
1.861
1.808
0.15 mol.L-1 NaHCO3
1.986
1.958
1.920
, 百拇医药
1.896
1.850
将3种不同溶液的实验数据处理后，得1 h吸收率，一级吸收速度常数K，以及吸收半衰期t1/2，见表4.
Tab.4 Absorption data in different solutions
Absorption index under different conditions
Equation
r
K
t1/2/h
, http://www.100md.com
Percentage of absorption/%
0.1 mol.L-1 HCl
y=2.035 5-0.394 4t
-0.9945
0.9083
0.763
41.9
0.15 mol.L-1 NaCl
y=1.997-0.185 2t
-0.9980
, 百拇医药
0.4265
1.625
24.7
0.15 mol.L-1 NaHCO3
y=1.993-0.139 2t
-0.9934
0.3206
2.162
18.9
2.3 体外相关性分析
将实验得到离体小肠吸收数据与黄芩苷油/水分配系数之间关系列表，见表5.
, http://www.100md.com
Tab.5 Absorption data of small intestine in vitro and oil/water distribution factors of Baicalin
Solution
0.1 mol.L-1 HCl
0.15 mol.L-1 NaCl
0.15 mol.L-1 NaHCO3
Oil/water distribution factor
1.725 0
, 百拇医药
0.083 7
0.018 6
Lg(oil/water distribution factor)
0.236 8
-1.077
-1.731
Percentage of absorption/%
41.9
24.7
18.9
以上数据经线性回归得体外相关性方程为：1 g(油/水分配系数)=38.60+11.89×吸收率(r=0.996 2).
, 百拇医药
由上式整理得方程：吸收率=0.084 1×1 g(油/水分配系数)-3.254.
3 结果与讨论
a.黄芩苷为弱酸性药物，在酸性下显分子状态，pH越小，黄芩苷的油/水分配系数值越高.绝大部分呈分子型存在.
b.离体胃的吸收实验表明：在酸性下吸收百分率最大.原因是黄芩苷为弱酸性药物，在酸性环境中，药物的非离子态增多，是吸收多的结果.离体小肠吸收实验表明：黄芩苷在大鼠离体小肠吸收速率，常数随pH增大而减少；吸收半衰期亦随之延长，一小时吸收率降低.进而说明小肠在腔内碱性增强的环境下，随着黄芩苷离子态增多，吸收减少.
c.不同条件下大鼠的胃吸收，离体小肠吸收试验结果表明黄芩苷在0.1mol/L HCl条件下吸收最佳，pH值减少能显著影响其吸收.由此表明胃、小肠消化管上皮细胞具有脂质膜功能，以脂溶性(油/水分配系数)大的分子型易被胃、肠管粘膜吸收.说明食物成分不显著影响黄芩苷的吸收因素.
, 百拇医药
d.黄芩苷胃吸收率，小肠吸收率与油/水分配系数之间有良好的半对数关系.证实了黄芩苷主要以非解离型吸收，由此说明黄芩苷在胃、小肠内吸收符合pH分配学说.
e.对于黄芩苷在大鼠胃和离体小肠的吸收方面预以研究，对于研究其构效关系，借以合成高效衍生物，改变理化性质，探索合理给药途径和给药方案，提供了依据.■
参考文献：
[1]江苏新医学院.中药大辞典.上海：上海人民出版社，1977.4145～4147
[2]毛凤斐，屠锡德，朱家璧，等.黄芩苷人体内吸收研究.中成药研究，1981，(12)：6～9
[3]徐叔云.药理学实验方法.北京：人民卫生出版社，1982.448～449
[4]毛凤斐，朱家璧，屠锡德，等.黄芩苷在人体内吸收的研究.南京药学院报，1983，21(1)：61～66
收稿日期：1998-07-17, 百拇医药
单位：王弘(现工作在中国人民解放军总医院药物研究室); 陈济民(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015); 张清民(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015)
关键词：高效液相色谱法；黄芩苷；吸收动力学
沈阳药科大学学报000102 摘 要：通过高效液相色谱法研究了黄芩苷在大鼠胃、离体小肠的吸收情况，采用NUCLeosil-C18(5 μm)4 mm×250 mm色谱柱，以甲醇-水-乙酸(60∶39∶1)为流动相，检测波长276 nm,柱温：室温，本实验对大鼠胃和离体小肠在不同pH条件下的吸收动力学进行了研究，实验结果：大鼠胃的吸收率与黄芩苷的油/水分配系数之间相关方程为：吸收率=0.030 571 g(油/水分配系数)-2.126(r=0.9731)；大鼠离体小肠的吸收率与黄芩苷的油/水分配系数之间相关方程为：吸收率=0.084 1×1 g(油/水分配系数)-3.254(r=0.996 2).
, 百拇医药
分类号：R912
A Study on the Absorption Kinetics of Baicalin in Rats′ Stomachs and Small Intestines in vitro
Wang Hong，Chen Jimin，Zhang Qingmin
(Department of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract：A high-performance liquid chromatographic method for the quantitative determination of baicalin was presented in rats′ stomachs and small intestines in vitro.The method was carried out by using the NUCLeosil-C18 column and methanol-water-acetic acid as the mobile phase.The absorption kinetics experiment showed that the relevance equation between absorption percentage in rats′stomachs and the oil/water distribution factor of baicalin was absorption percentage=0.030 571 g(oil/water distribution factor)-2.126(r=0.973 1)and that the relevance equation between absorption percentage of small intestines in vitro and the oil/water distribution factor of baicalin was absorption percentage=0.0841×1 g(oil/water distribution factor)-3.254(r=0.996 2).These results provided experimental evidence for understanding its absorption and a suggestion about rational administration.
, 百拇医药
Key words：high-performance liquid chromatography;baicalin；absorption kinetics
The author received the Master′s degree in 1993 and is a Post Doctor research fellowship in Institute of Radiation Medicine,Beijing▲
关于黄芩苷体内吸收、分布、代谢、排泄虽有报道，但仅从尿药数据了解黄芩苷在体内吸收、排除情况，测定方法只限于用紫外分光光度法〔1，2，4〕，有关黄芩苷体外实验报道尚少，本研究为进一步了解其吸收动力学提供了实验依据.
1 pH值对黄芩苷在大鼠胃吸收的影响
1.1 试药与仪器
, http://www.100md.com
黄芩苷：(深圳南方制药厂提供)，黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所)，呋喃苯胺酸(沈阳第一制药厂提供)；动物：Wistar大鼠为本院动物室提供.
0.1 mol/L HCl(其中黄苓苷浓度为200 μg/mL)；0.15 mol/L NaCl(其中黄芩苷浓度为200 μg/mL)；0.15 mol/L NaHCO3(其中黄芩苷浓度为200 μg/mL)；甲醇、乙酸均为分析醇.635型高效液相色谱仪，检测器：200-10型紫外可见分光光度计.
1.2 黄芩苷的测定
用高效液相色谱法.色谱柱：NUCLeosil-C18(5μm)4 mm×250 mm，流动相：甲醇-水-乙酸(60∶39∶1)，检测温度为室温，检测波长：276 nm，流动相流速：0.9 ml/min.
1.3 对照溶液及内标溶液的配置
, 百拇医药
分别精密称取黄芩苷对照品甲醇溶液(10.0 mg→100 mL)，0.25、0.5、0.75、1、1.25、1.50、1.75、2.00、2.25、2.75、3 mL，置于5 mL刻度试管，加甲醇液至刻度，配成5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60 μg/mL系列对照溶液.精取内标呋喃苯胺酸(250 mg→25 mL)贮备液适量，加甲醇得到0.125 μg/μL内标溶液.
1.4 标准曲线绘制
用甲醇配制黄芩苷系列标准液，精密加内标80 μL(0.125 μg/mL)，混匀振荡10 min，放置0.5 h，HPLC测定峰高，以黄芩苷与呋喃苯胺酸峰高比为横坐标，以黄芩苷进样浓度为纵坐标，绘制标准曲线.回归方程为C=0.015 28 A-3.333×10-3(r=0.999 0，n=10).结果表明：黄芩苷在5～60 μg/mL范围内呈线性关系.
, 百拇医药
1.5 方法与结果
取体重180～220 g Wistar大鼠，饥饿20 h，只给饮水，用戊巴比妥钠30～40 mg/kg腹腔注射麻醉后，切开腹部，暴露胃，将贲门结扎，用一有塞塑料管插入幽门结扎之，用生理盐水将胃腔洗净.注射器内吸取一种药液10 mL，注4 mL到胃内，然后又抽回到注射器重复几次，使混合均匀，最后全部抽入注射器中.将4～5 mL上述混合均匀的药液注入胃内，并塞紧塑管塞子.注射器内留下的药液浓度为药物初始浓度，1小时后从胃抽出药液的浓度为药物终浓度.根据黄芩苷初始浓度和终浓度之差计算其吸收率〔3〕.
将3种不同pH条件黄芩苷液依次实验，进行HPLC测定，结果见表1；吸收与油/水分配系数关系见表2.
Tab.1 Absorption data in rats′ stomachs in different pH conditions
, http://www.100md.com
Concentration condition
C0/μg.mL-1
C1/μg.mL-1
ΔC/μg.mL-1
Percentage of absorption/%
0.1 mol.L-1 HCl
150.0
29.7
, 百拇医药 120.3
80.20
0.15 mol.L-1 NaCl
128.0
95.4
32.6
25.50
0.15 mol.L-1 NaHCO3
139.6
113.4
26.2
, 百拇医药
18.78
Tab.2 Oil/water distribution factor of baicalin and absorption data in rats′ stomachs
Condition
0.1 mol.L-1 HCl
0.15 mol.L-1 NaCl
0.15 mol.L-1 NaHO3
Oil/water distribution factor
, http://www.100md.com
1.725 00
0.083 72
0.018 59
Lg(oil/water distributipn factor)
0.236 8
-1.077 0
-1.731 0
Percentage of absorption/%
80.20
25.50
18.78
, 百拇医药
将数据回归后得相关方程为：lg(油/水分配系数)=32.71×吸收率+69.53(r=0.973 1).由上式整理得：吸收率=0.030 571 g(油/水分配系数)-2.126.
结果表明，胃的吸收率与黄芩苷的油/水分配系数之间具有良好的半对数关系，说明黄芩苷主要经分子型吸收的过程.
2 pH值对黄芩苷液在离体大鼠小肠吸收的影响
2.1 材料与试液
保养液成分及pH值，成分为145 mmol/L NaCl,4.56 mmol/L KCl，1.25 mmol/L CaCl2，1.33 mmol/L Na2HPO4，0.33 mmol/L NaH2PO4.(1)用0.1 mol/L HCl、0.15 mol/L NaCl、0.15 mol/L NaHCO3调pH至4.3.(2)NaCl调至5.0.(3)NaHCO3调至7.8.仪器与色谱条件同前.标准曲线同前.
, http://www.100md.com
2.2 方法与结果
将体重200克Wistar大鼠，取空肠一段，去除系膜.用玻璃棒轻柔地将肠管翻转使粘膜面朝外.结扎一端,另一端绑扎于玻璃管一端.用注射器平头针向肠内注入Krebs-Riner试液.然后将其放入80 mL的试管中，而内管液面高于肠外液面1 cm.由一毛细管进气(95%O2及5%CO2)，另一毛细管出气.全管放入37℃恒温水浴中，待稳定后，向粘膜侧保养液中加入黄芩苷8 mL(1 mg/mL)，分别取静置0，0.25，0.5，0.75，1，1.25 h的保养液进行黄芩苷HPLC测定.各时间剩余药量取对数，结果见表3.
Tab.3 Logarithm value of surplus baicalin at different time
Condition
, 百拇医药 t/h
0
0.25
0.5
0.75
1
lg(surplus baicalin)
0.1 mol.L-1 HCl
1.993
1.926
1.848
1.753
, http://www.100md.com
1.629
0.15 mol.L-1 NaCl
1.984
1.947
1.907
1.861
1.808
0.15 mol.L-1 NaHCO3
1.986
1.958
1.920
, 百拇医药
1.896
1.850
将3种不同溶液的实验数据处理后，得1 h吸收率，一级吸收速度常数K，以及吸收半衰期t1/2，见表4.
Tab.4 Absorption data in different solutions
Absorption index under different conditions
Equation
r
K
t1/2/h
, http://www.100md.com
Percentage of absorption/%
0.1 mol.L-1 HCl
y=2.035 5-0.394 4t
-0.9945
0.9083
0.763
41.9
0.15 mol.L-1 NaCl
y=1.997-0.185 2t
-0.9980
, 百拇医药
0.4265
1.625
24.7
0.15 mol.L-1 NaHCO3
y=1.993-0.139 2t
-0.9934
0.3206
2.162
18.9
2.3 体外相关性分析
将实验得到离体小肠吸收数据与黄芩苷油/水分配系数之间关系列表，见表5.
, http://www.100md.com
Tab.5 Absorption data of small intestine in vitro and oil/water distribution factors of Baicalin
Solution
0.1 mol.L-1 HCl
0.15 mol.L-1 NaCl
0.15 mol.L-1 NaHCO3
Oil/water distribution factor
1.725 0
, 百拇医药
0.083 7
0.018 6
Lg(oil/water distribution factor)
0.236 8
-1.077
-1.731
Percentage of absorption/%
41.9
24.7
18.9
以上数据经线性回归得体外相关性方程为：1 g(油/水分配系数)=38.60+11.89×吸收率(r=0.996 2).
, 百拇医药
由上式整理得方程：吸收率=0.084 1×1 g(油/水分配系数)-3.254.
3 结果与讨论
a.黄芩苷为弱酸性药物，在酸性下显分子状态，pH越小，黄芩苷的油/水分配系数值越高.绝大部分呈分子型存在.
b.离体胃的吸收实验表明：在酸性下吸收百分率最大.原因是黄芩苷为弱酸性药物，在酸性环境中，药物的非离子态增多，是吸收多的结果.离体小肠吸收实验表明：黄芩苷在大鼠离体小肠吸收速率，常数随pH增大而减少；吸收半衰期亦随之延长，一小时吸收率降低.进而说明小肠在腔内碱性增强的环境下，随着黄芩苷离子态增多，吸收减少.
c.不同条件下大鼠的胃吸收，离体小肠吸收试验结果表明黄芩苷在0.1mol/L HCl条件下吸收最佳，pH值减少能显著影响其吸收.由此表明胃、小肠消化管上皮细胞具有脂质膜功能，以脂溶性(油/水分配系数)大的分子型易被胃、肠管粘膜吸收.说明食物成分不显著影响黄芩苷的吸收因素.
, 百拇医药
d.黄芩苷胃吸收率，小肠吸收率与油/水分配系数之间有良好的半对数关系.证实了黄芩苷主要以非解离型吸收，由此说明黄芩苷在胃、小肠内吸收符合pH分配学说.
e.对于黄芩苷在大鼠胃和离体小肠的吸收方面预以研究，对于研究其构效关系，借以合成高效衍生物，改变理化性质，探索合理给药途径和给药方案，提供了依据.■
参考文献：
[1]江苏新医学院.中药大辞典.上海：上海人民出版社，1977.4145～4147
[2]毛凤斐，屠锡德，朱家璧，等.黄芩苷人体内吸收研究.中成药研究，1981，(12)：6～9
[3]徐叔云.药理学实验方法.北京：人民卫生出版社，1982.448～449
[4]毛凤斐，朱家璧，屠锡德，等.黄芩苷在人体内吸收的研究.南京药学院报，1983，21(1)：61～66
收稿日期：1998-07-17, 百拇医药