苏子油乳剂小肠吸收动力学研究
作者：王淑丽 陈济民
单位：王淑丽(山东新华制药厂研究院 山东淄博张店区，255005); 陈济民(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015)
关键词：α-亚麻酸；苏子油；乳剂；小肠吸收
沈阳药科大学学报000101 摘 要：以测定α-亚麻酸(α-LNA)含量为指标，采用大鼠在体、离体小肠吸收实验方法，对苏子油乳剂小肠吸收动力学进行了研究.实验表明:苏子油乳剂小肠吸收较好，6小时吸收率为86%，胆管结扎与不结扎对吸收率无明显影响；实验浓度下苏子油乳剂在小肠上、中、下段的吸收速率常数无显著差异；其吸收机制为被动扩散.
分类号：R963
Studies on the Absorptive Kinetics of the Perilla Oil Emulsion
, 百拇医药
in Rats′Small Intestines
Wang Shuli，Chen Jimin
(Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract：Improved intestinal absorption experiments of rats(in situ,in vitro)were used to study the absorption of the perilla oil emulsion.It was found that there was a rapid intestinal absorption for the emulsion and no marked difference of the absorptive rate between rats with and without ligated bile duct.Observation results showed that the transport mechanism of this emulsion at three concentrations was passive diffusion.There were no marked differences among the absorptive rate constants of the emulsion in the different parts of rats′small intestines (upper,middle,lower).
, 百拇医药
Key words：α-linolenic acid;perilla oil；emulsion;small intestinal absorption▲
小肠是消化道吸收药物的主要部位.据报道，脂溶性药物制成乳剂后，在小肠吸收效果较好〔1〕，且生物利用度明显提高〔2〕.目前，关于苏子油〔3〕乳剂小肠吸收的研究未见报道，本文参考有关文献〔1〕，以测定苏子油乳剂主要成分α-LNA含量为指标，对苏子油乳剂的大鼠在体小肠、在体小肠不同肠段、离体小肠的吸收分别进行了考察.
1 仪器与材料
日本岛津GC-9A气相色谱仪：玻璃柱(2 m×5mm ID)，固定相15% DEGS，担体Shimalite AW 60～80目，载体氮气，流速40ml/min，空气流速50ml/min，氢气流速45 ml/min，检测器FID，柱温180℃，气体室温度250℃，检测器量程范围102；YKH-Ⅱ型液体快速混合器；LDB-M电子蠕动泵；WFZ800-D紫外、可见分光光度计；CS501型超级恒温器；气体流量计；α-亚麻酸标准品(色谱纯，Serva公司)；苯甲酸苯酯(色谱纯，英国产)；精制苏子油(自制，α-LNA含量为601.1 mg/mL)；酚红、异丙醇等所用其它试剂均为分析纯；雄性大白鼠(180～230 g)，沈阳药科大学动物中心提供.
, 百拇医药
2 实验方法
2.1 苏子油静脉乳剂的制备
参考文献〔4〕中的处方及工艺，以1%豆磷脂为乳化剂，先后用胶体磨和乳匀机制成O/W型乳剂，镜检油滴小于4μm，灌封于安瓶中，100℃流通水蒸气灭菌30min.该乳剂外观乳白色，pH值4.6～4.7，α-LNA含量45.7mg/mL，在4℃冰箱中放置10个月是稳定的.
2.2 肠循环液中α-LNA的含量测定
2.2.1 肠循环液样品的预处理
取1.0 mL肠循环液样品，置具塞试管中，加入约0.2 g无水硫酸钠于沸水浴中破乳后，用6mL乙醚分3次萃取，乙醚液转移至10 mL容量瓶中，室温下氮气挥散乙醚，残渣中加入0.5mol/L氢氧化钾-甲醇溶液0.4 mL，于(60±1)℃恒温水浴中皂化15 min后放冷，加入三氟化硼-乙醚液0.2 mL，甲醇0.5 mL，于(60±1)℃水浴中甲酯化3 min，冷却，加入1mL石油醚剧烈振荡1min，静置至分层，取上层石油醚液0.5mL，氮气吹干，残留物中加入25μg/mL内标物溶液0.5mL，摇匀后进样3μL，记录气相色谱图.
, 百拇医药
2.2.2 肠循环液中α-LNA标准曲线制备
分别于用生物盐水制备的空白肠循环液1.0 mL中加入α-LNA标准品5、10、20、40、60、100、200 μg，充分混匀，按“2.2.1”项方法进行样品预处理，将色谱图中α-LNA与内标物峰面积比值Y对相应的α-LNA浓度X(μg/mL)进行回归处理，回归方程Y=0.014X-0.043 3，r=0.999 6(n=5).
2.2.3 方法回收率和精密度测定
分别于1.0 mL空白肠循环液中加入α-LNA标准品20、40、80、100 μg，充分混匀，按“2.2.1”项方法进行样品预处理，用标准曲线计算α-LNA含量.
2.3 肠循环液中酚红(PR)的含量测定
按大鼠小肠吸收常规实验方法〔5〕，在肠循环液中加入定量酚红.酚红不被小肠吸收，可用来测定水被小肠吸收的量，以准确计算小肠吸收的药物量.
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2.3.1 测定条件的选择
取含酚红、不含酚红苏子油乳剂和只含酚红的供试液各0.5 mL，加入1 mL(1 mol/L)NaOH和3.5 mL混合溶媒异丙醇∶乙醚∶水=4∶1∶1(V∶V)混匀，样品均变为澄清，各样品的可见紫外扫描结果见图1.可见，用混合溶媒处理的含乳剂的肠循环液对酚红测定无干扰，测定波长选为564 nm.
Fig.1 The UV spectra of the sample
1—phenol red; 2—perilla oil emulsion;
3—phenol red+perilla oil emulsion
, 百拇医药
2.3.2 酚红标准曲线制备
取用Kreb-Ringer′s(简称K-R)营养液(在体小肠吸收营养液〔6〕，离体小肠吸收营养液〔7〕含酚红10、20、40、60、80 μg/mL标准溶液各0.5 mL，加入1 mL(1 mol/L)NaOH和3.5 mL混合溶媒后，在波长564 nm处测吸收度，空白溶液为1 mol/L NaOH溶液，以酚红浓度C(μg/mL)与吸收度E进行回归处理，得回归方程C=53.888 8E-1.251 2，r=0.999 8(n=5).
2.4 大鼠在体小肠吸收实验法
2.4.1 结扎胆管的大鼠在体小肠吸收实验法
选实验前禁食一夜(自由饮水)的大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠(40 mg/kg)麻醉后，沿腹中线打开腹腔，结扎胆管.自12指肠上部及回肠下部各插入直径约0.5 cm的玻璃插管，扎紧，用37℃生理盐水冲洗净肠内容物，按文献〔1〕装好循环装置.
, 百拇医药
取50 mL用K-R营养液配制的供试药液(含酚红20 μg/mL，含α-LNA约400 μg/mL)，以4 ml/min快速循环10 min，取样1.5 mL后，补加2 mL用K-R营养液配制的酚红溶液(20 μg/mL)，此时记为0时.将流速调至2.5 mL/min，每隔30 min取样1.5 mL(1 mL用于α-LNA含量测定，0.5 mL用于酚红含量测定)，同时补加酚红溶液，取样至6 h.
2.4.2 不结扎胆管的大鼠在体小肠实验法
按以上方法测定乳剂在不结扎胆管大鼠的在体小肠吸收.
2.4.3 大鼠在体小肠不同肠段吸收实验法
选禁食后的大鼠15只，随机分为3组，按“2.4.1”项方法操作，不结扎胆管，分别考察小肠上段(自12指肠上部及往下12 cm处各插一管)、中段(于小肠中部空肠段取12 cm长，两端插管)、下段(回肠下部及往上12 cm处各插管)3个不同肠段对苏子油乳剂吸收的差异，取样时间为6 h.
, 百拇医药
2.5 大鼠离体小肠吸收实验法
2.5.1 实验装置
按文献〔5〕中实验装置进行安装.
2.5.2 实验方法
禁食一夜的大鼠，乙醚麻醉后打开腹腔，自12指肠上端及回肠下端分别插管，固定后用37℃生理盐水冲净肠内容物，将离体小肠，用37℃生理盐水冲洗其表面残血，迅速联入循环装置中，打开蠕动泵，调节流速为25 ml/min，循环5 min后，取样1.5 mL，并补加2 mL酚红溶液(20 μg/mL)，此时间记为0时，其后每隔20 min取样1.5 mL，并补加2 mL酚红溶液，取样至2 h.将此段肠管用10%福尔马林固定，HE染色，制作病理切片，检查小肠的损伤程度，并以正常小肠作对照.
2.6 苏子油乳剂吸收机制的研究
, http://www.100md.com
用3个不同浓度的供试药液，分别进行离体小肠吸收实验，研究乳剂的小肠吸收机制.
2.7 药物在肠循环液中稳定性考察
取50 mL供试液在实验相同条件下，放置2 h，测定α-LNA浓度的变化.
2.8 大鼠体内胃肠道吸收实验法
采用体内法，给结扎和不结扎胆管的大鼠灌胃苏子油，考察胆汁对苏子油吸收的影响.给5只已插好颈静脉导管〔8〕禁食12 h以上的大鼠灌服苏子油(5 ml/kg)，分别于给药后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、14、24 h从颈静脉取血0.25 mL，离心取血浆0.1 mL，测定α-LNA浓度.1周后，将以上大鼠结扎胆管并缝合，1 h后按同上方法灌药并取血，测定血浆α-LNA浓度.
3 实验结果
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3.1 在体小肠吸收
大鼠在体小肠循环灌流6 h后，以剩余药量的对数值对取样时间作图，求得吸收速率常数Ka和6 h内药物吸收百分率PA.表1、2分别为胆管结扎和不结扎大鼠的实验结果.
Tab.1 Pharmacokinetic parameters of the perilla oil emulsion of the
rats′ small intestine in situ with the bile duct ligated after
perfusing 6 hours(n=5)
No
1
2
, 百拇医药
3
4
5
x±s
Dose/mg
23.2
24.3
21.5
20.2
21.8
Ka/h-1
0.28
0.37
, 百拇医药
0.35
0.28
0.22
0.30±0.06
PA/%
82.0
90.3
88.2
80.9
76.3
83.5±5.7
Tab.2 Pharmacokinetic parameters of the perilla oil emulsion of the
, 百拇医药
rats′small intestines in situ with the bile duct ligated after
perfusing 6 hours(n=5)
No
1
2
3
4
5
x±s
Dose/mg
21.4
, 百拇医药 19.8
21.7
22.0
23.6
Ka/h-1
0.266
0.372
0.325
0.289
0.405
0.331±0.057
PA/%
, http://www.100md.com 81.4
88.9
86.3
83.2
91.2
86.2±4.03
由表1可见，苏子油乳剂在大鼠小肠吸收较好，6 h内平均吸收率为86.2%.对表1、表2中的吸收率(PA)进行方差分析，结果表明：胆管结扎与不结扎对乳剂的小肠吸收无显著影响(P>0.01).
3.2 在体小肠不同肠段吸收
实验数据按“3.1”项方法处理，求出不同肠段药物吸收百分率及吸收速率常数，结果见表3. Tab.3 Pharmacokinetic parameters of the perilla oil emulsion in different parts of the rats′small intestines in situ after perfusing 6 hours(n=5)
, http://www.100md.com
No
Upper
Middle
Lower
Dose/mg
PA/%
Ka/h-1
Dose/mg
PA/%
Ka/h-1
Dose/mg
PA/%
, 百拇医药
Ka/h-1
1
14.8
76.96
0.243
22.3
77.94
0.264
24.8
73.76
0.226
2
17.4
, 百拇医药
46.35
0.100
20.2
61.98
0.190
7.8
77.12
0.249
3
14.5
67.83
0.180
9.7
, http://www.100md.com
58.39
0.226
10.6
32.38
0.028
4
10.1
54.1
0.145
10.9
57.32
0.145
10.9
, 百拇医药
50.38
0.111
5
12.4
60.81
0.173
16.3
64.34
0.197
14.0
59.24
0.158
x±s
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61.21±13.70
0.168±0.06
69.92±9.56
0.205±0.044
58.61±21.04
0.154±0.103
对表3中3组吸收速率常数进行方差分析，结果表明：苏子油乳剂在小肠不同肠段的吸收速率常数无显著差异(P>0.01).
3.3 乳剂的小肠吸收机制研究
大鼠离体小肠吸收实验中，分别灌流3个不同浓度苏子油乳剂供试液，实验数据按“3.1”项方法处理，分别计算它们的吸收速率常数，结果见表4.
, 百拇医药
Tab.4 The absorption rate constants of the perilla oil emulsion of
the rat′s small intestines in vitro with three different substrate
amounts(n=5)
Dose/mg
10.4
20.8
40.8
0.610
0.623
0.650
, 百拇医药
0.531
0.574
0.427
Ka/h-1
0.584
0.411
0.579
0.519
0.536
0.542
0.432
0.598
, http://www.100md.com 0.441
x±s
0.535±0.068
0.548±0.083
0.527±0.094
将表4中3组数据进行方差分析，结果表明：3个不同浓度苏子油乳剂吸收速率常数间没有显著性差异(P>0.01).根据Fick定律，认为在实验浓度范围内，苏子油乳剂的小肠吸收过程属于被动扩散.
药物在肠循环液中稳定性实验结果表明：在实验条件下，α-LNA的含量没有明显变化，故可排除药物稳定性因素对实验结果的影响.病理切片结果表明，离体循环2 h后的小肠和正常大鼠小肠相比，仍处于活体状态，肠壁粘膜层、粘膜下层、肌层及浆膜层均无异常改变，粘膜层肠绒毛的表层有轻微脱落.
, 百拇医药
3.4 体内胃肠道吸收实验
将结扎和不结扎胆管大鼠灌胃苏子油后的血药浓度时间数据，用3p87药代动力学程序分别计算AUC值，结果见表5. Tab.5 The AUC values after oral administration of the perilla oil to rats with or without ligated bile duct(n=5)
AUC0～∞/μg.mL-1
±s
Ligated bile duct
, http://www.100md.com 292.4
812.7
100.5
1040.5
490.2
658.9±332.8
Unilgated bile duct
7794.7
5094.5
6980.7
3129.7
5943.5
, http://www.100md.com
5788±1804
对表5结果进行t-检验，表明：两组间AUC值有显著性差异(P<0.05)，结扎胆管使苏子油口服后的吸收量显著降低.
4 讨论
a.研究药物小肠吸收的实验方法主要有在体法、离体法〔9〕和体内实验.本文采用在体法和离体法，直接测定药物在肠循环液中消失的量，并结合体内实验〔10〕综合评价苏子油乳剂的小肠吸收.
b.离体、在体小肠吸收实验测得的吸收速率常数均值分别0.535、0.331 h-1，可见，在体法与体内法(0.399 h-1)〔10〕结果相近，离体法所得结果比在体法高，可能由于离体小肠排除了体内法中多种生理因素的影响，同时，为了保证小肠供氧，循环液流速较高，可能增加了药物吸收率.
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c.在体法实验表明，苏子油乳剂小肠吸收较好，结扎胆管与否，对其吸收率无明显影响；苏子油乳剂灌胃后绝对生物利用度与相对生物利用度均较高〔10〕，进一步说明其在小肠吸收较完全；苏子油吸收受胆汁影响很大(体内实验)，这与文献报道结果相吻合〔11〕.胆汁(主要是胆盐)的重要生理作用是将脂肪乳化到分子大小，使其易扩散到细胞内；胆盐还与脂肪结合，形成水溶性复合物，促进脂肪吸收〔12〕.故苏子油在无胆汁存在下，吸收受阻，而其乳剂则不受影响.可见，乳剂是脂肪性药物的良好口服剂型之一.
d.对脂肪类物质小肠吸收部位及机制的研究，不同学者的结果各有差异，有些结论也不肯定〔11〕.许多实验表明，小肠对颗粒状脂肪乳的吸收有可能存在易化扩散和胞饮作用〔12〕，这可能会导致吸收过程中饱和、竞争现象的发生.本实验表明，在实验浓度范围内，上、中、下段小肠的吸收速率常数之间无显著性差异，小肠吸收脂肪乳滴属被动扩散.这可能是供试液浓度较低，3段肠管对乳剂摄取不存在饱和竞争现象的缘故.■
, 百拇医药
参考文献：
[1]储晓岩，陈济民.γ-亚麻酸甲酯乳剂小肠吸收动力学研究.沈阳药学院学报，1994，11(1)：5～11
[2]Wagner JG,Gerad E,Kaiser DG.The effect of the dosage from on serum levels of indoxole.Clin Pharmacol Ther,1966，7：610～615
[3]王淑丽，陈济民.苏子油与α-亚麻酸.沈阳药科大学学报，1995，12(3)：228～233
[4]姚崇舜，张汝华，尹克敏.鸦胆子油静脉乳剂的研究.沈阳药学院学报，1979，总11期：1～6
[5]沈阳药学院药剂学教研室.药剂学实验讲义，1990.36～41
, 百拇医药
[6]毛凤斐，屠锡德，朱家壁，等.黄苓甙大鼠小肠吸收研究.南京药学院学报，1984，15(1)：61～69
[7]Curry SH,Dmello A,Mould GP.Destruction of chlorpromazine durinig absorption.Br J Pharmacol,1971，42：403～407
[8]孟娟如.大白鼠颈静脉及肝门静脉持久性导管术及其应用.药学学报，1987，22(5)：326～329
[9]蒋雪涛.生物药剂学.北京：解放军出版社，1985.472～508
[10]王淑丽，陈济民.苏子油乳剂中α-亚麻酸的药物动力学与生物利用度研究.沈阳药科大学学报，1998，15(3)：160～166
[11]Wilsion TH著.王复周等译.小肠的吸收.北京：科学出版社，1973.176～183
[12]徐丰彦，张镜如.人体生理学.第二版.北京：人民卫生出版社，1989.1571～1573
收稿日期：1999-03-29, http://www.100md.com
单位：王淑丽(山东新华制药厂研究院 山东淄博张店区，255005); 陈济民(沈阳药科大学药学系，沈阳 110015)
关键词：α-亚麻酸；苏子油；乳剂；小肠吸收
沈阳药科大学学报000101 摘 要：以测定α-亚麻酸(α-LNA)含量为指标，采用大鼠在体、离体小肠吸收实验方法，对苏子油乳剂小肠吸收动力学进行了研究.实验表明:苏子油乳剂小肠吸收较好，6小时吸收率为86%，胆管结扎与不结扎对吸收率无明显影响；实验浓度下苏子油乳剂在小肠上、中、下段的吸收速率常数无显著差异；其吸收机制为被动扩散.
分类号：R963
Studies on the Absorptive Kinetics of the Perilla Oil Emulsion
, 百拇医药
in Rats′Small Intestines
Wang Shuli，Chen Jimin
(Department of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110015)
Abstract：Improved intestinal absorption experiments of rats(in situ,in vitro)were used to study the absorption of the perilla oil emulsion.It was found that there was a rapid intestinal absorption for the emulsion and no marked difference of the absorptive rate between rats with and without ligated bile duct.Observation results showed that the transport mechanism of this emulsion at three concentrations was passive diffusion.There were no marked differences among the absorptive rate constants of the emulsion in the different parts of rats′small intestines (upper,middle,lower).
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Key words：α-linolenic acid;perilla oil；emulsion;small intestinal absorption▲
小肠是消化道吸收药物的主要部位.据报道，脂溶性药物制成乳剂后，在小肠吸收效果较好〔1〕，且生物利用度明显提高〔2〕.目前，关于苏子油〔3〕乳剂小肠吸收的研究未见报道，本文参考有关文献〔1〕，以测定苏子油乳剂主要成分α-LNA含量为指标，对苏子油乳剂的大鼠在体小肠、在体小肠不同肠段、离体小肠的吸收分别进行了考察.
1 仪器与材料
日本岛津GC-9A气相色谱仪：玻璃柱(2 m×5mm ID)，固定相15% DEGS，担体Shimalite AW 60～80目，载体氮气，流速40ml/min，空气流速50ml/min，氢气流速45 ml/min，检测器FID，柱温180℃，气体室温度250℃，检测器量程范围102；YKH-Ⅱ型液体快速混合器；LDB-M电子蠕动泵；WFZ800-D紫外、可见分光光度计；CS501型超级恒温器；气体流量计；α-亚麻酸标准品(色谱纯，Serva公司)；苯甲酸苯酯(色谱纯，英国产)；精制苏子油(自制，α-LNA含量为601.1 mg/mL)；酚红、异丙醇等所用其它试剂均为分析纯；雄性大白鼠(180～230 g)，沈阳药科大学动物中心提供.
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2 实验方法
2.1 苏子油静脉乳剂的制备
参考文献〔4〕中的处方及工艺，以1%豆磷脂为乳化剂，先后用胶体磨和乳匀机制成O/W型乳剂，镜检油滴小于4μm，灌封于安瓶中，100℃流通水蒸气灭菌30min.该乳剂外观乳白色，pH值4.6～4.7，α-LNA含量45.7mg/mL，在4℃冰箱中放置10个月是稳定的.
2.2 肠循环液中α-LNA的含量测定
2.2.1 肠循环液样品的预处理
取1.0 mL肠循环液样品，置具塞试管中，加入约0.2 g无水硫酸钠于沸水浴中破乳后，用6mL乙醚分3次萃取，乙醚液转移至10 mL容量瓶中，室温下氮气挥散乙醚，残渣中加入0.5mol/L氢氧化钾-甲醇溶液0.4 mL，于(60±1)℃恒温水浴中皂化15 min后放冷，加入三氟化硼-乙醚液0.2 mL，甲醇0.5 mL，于(60±1)℃水浴中甲酯化3 min，冷却，加入1mL石油醚剧烈振荡1min，静置至分层，取上层石油醚液0.5mL，氮气吹干，残留物中加入25μg/mL内标物溶液0.5mL，摇匀后进样3μL，记录气相色谱图.
, 百拇医药
2.2.2 肠循环液中α-LNA标准曲线制备
分别于用生物盐水制备的空白肠循环液1.0 mL中加入α-LNA标准品5、10、20、40、60、100、200 μg，充分混匀，按“2.2.1”项方法进行样品预处理，将色谱图中α-LNA与内标物峰面积比值Y对相应的α-LNA浓度X(μg/mL)进行回归处理，回归方程Y=0.014X-0.043 3，r=0.999 6(n=5).
2.2.3 方法回收率和精密度测定
分别于1.0 mL空白肠循环液中加入α-LNA标准品20、40、80、100 μg，充分混匀，按“2.2.1”项方法进行样品预处理，用标准曲线计算α-LNA含量.
2.3 肠循环液中酚红(PR)的含量测定
按大鼠小肠吸收常规实验方法〔5〕，在肠循环液中加入定量酚红.酚红不被小肠吸收，可用来测定水被小肠吸收的量，以准确计算小肠吸收的药物量.
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2.3.1 测定条件的选择
取含酚红、不含酚红苏子油乳剂和只含酚红的供试液各0.5 mL，加入1 mL(1 mol/L)NaOH和3.5 mL混合溶媒异丙醇∶乙醚∶水=4∶1∶1(V∶V)混匀，样品均变为澄清，各样品的可见紫外扫描结果见图1.可见，用混合溶媒处理的含乳剂的肠循环液对酚红测定无干扰，测定波长选为564 nm.
Fig.1 The UV spectra of the sample
1—phenol red; 2—perilla oil emulsion;
3—phenol red+perilla oil emulsion
, 百拇医药
2.3.2 酚红标准曲线制备
取用Kreb-Ringer′s(简称K-R)营养液(在体小肠吸收营养液〔6〕，离体小肠吸收营养液〔7〕含酚红10、20、40、60、80 μg/mL标准溶液各0.5 mL，加入1 mL(1 mol/L)NaOH和3.5 mL混合溶媒后，在波长564 nm处测吸收度，空白溶液为1 mol/L NaOH溶液，以酚红浓度C(μg/mL)与吸收度E进行回归处理，得回归方程C=53.888 8E-1.251 2，r=0.999 8(n=5).
2.4 大鼠在体小肠吸收实验法
2.4.1 结扎胆管的大鼠在体小肠吸收实验法
选实验前禁食一夜(自由饮水)的大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠(40 mg/kg)麻醉后，沿腹中线打开腹腔，结扎胆管.自12指肠上部及回肠下部各插入直径约0.5 cm的玻璃插管，扎紧，用37℃生理盐水冲洗净肠内容物，按文献〔1〕装好循环装置.
, 百拇医药
取50 mL用K-R营养液配制的供试药液(含酚红20 μg/mL，含α-LNA约400 μg/mL)，以4 ml/min快速循环10 min，取样1.5 mL后，补加2 mL用K-R营养液配制的酚红溶液(20 μg/mL)，此时记为0时.将流速调至2.5 mL/min，每隔30 min取样1.5 mL(1 mL用于α-LNA含量测定，0.5 mL用于酚红含量测定)，同时补加酚红溶液，取样至6 h.
2.4.2 不结扎胆管的大鼠在体小肠实验法
按以上方法测定乳剂在不结扎胆管大鼠的在体小肠吸收.
2.4.3 大鼠在体小肠不同肠段吸收实验法
选禁食后的大鼠15只，随机分为3组，按“2.4.1”项方法操作，不结扎胆管，分别考察小肠上段(自12指肠上部及往下12 cm处各插一管)、中段(于小肠中部空肠段取12 cm长，两端插管)、下段(回肠下部及往上12 cm处各插管)3个不同肠段对苏子油乳剂吸收的差异，取样时间为6 h.
, 百拇医药
2.5 大鼠离体小肠吸收实验法
2.5.1 实验装置
按文献〔5〕中实验装置进行安装.
2.5.2 实验方法
禁食一夜的大鼠，乙醚麻醉后打开腹腔，自12指肠上端及回肠下端分别插管，固定后用37℃生理盐水冲净肠内容物，将离体小肠，用37℃生理盐水冲洗其表面残血，迅速联入循环装置中，打开蠕动泵，调节流速为25 ml/min，循环5 min后，取样1.5 mL，并补加2 mL酚红溶液(20 μg/mL)，此时间记为0时，其后每隔20 min取样1.5 mL，并补加2 mL酚红溶液，取样至2 h.将此段肠管用10%福尔马林固定，HE染色，制作病理切片，检查小肠的损伤程度，并以正常小肠作对照.
2.6 苏子油乳剂吸收机制的研究
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用3个不同浓度的供试药液，分别进行离体小肠吸收实验，研究乳剂的小肠吸收机制.
2.7 药物在肠循环液中稳定性考察
取50 mL供试液在实验相同条件下，放置2 h，测定α-LNA浓度的变化.
2.8 大鼠体内胃肠道吸收实验法
采用体内法，给结扎和不结扎胆管的大鼠灌胃苏子油，考察胆汁对苏子油吸收的影响.给5只已插好颈静脉导管〔8〕禁食12 h以上的大鼠灌服苏子油(5 ml/kg)，分别于给药后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、14、24 h从颈静脉取血0.25 mL，离心取血浆0.1 mL，测定α-LNA浓度.1周后，将以上大鼠结扎胆管并缝合，1 h后按同上方法灌药并取血，测定血浆α-LNA浓度.
3 实验结果
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3.1 在体小肠吸收
大鼠在体小肠循环灌流6 h后，以剩余药量的对数值对取样时间作图，求得吸收速率常数Ka和6 h内药物吸收百分率PA.表1、2分别为胆管结扎和不结扎大鼠的实验结果.
Tab.1 Pharmacokinetic parameters of the perilla oil emulsion of the
rats′ small intestine in situ with the bile duct ligated after
perfusing 6 hours(n=5)
No
1
2
, 百拇医药
3
4
5
x±s
Dose/mg
23.2
24.3
21.5
20.2
21.8
Ka/h-1
0.28
0.37
, 百拇医药
0.35
0.28
0.22
0.30±0.06
PA/%
82.0
90.3
88.2
80.9
76.3
83.5±5.7
Tab.2 Pharmacokinetic parameters of the perilla oil emulsion of the
, 百拇医药
rats′small intestines in situ with the bile duct ligated after
perfusing 6 hours(n=5)
No
1
2
3
4
5
x±s
Dose/mg
21.4
, 百拇医药 19.8
21.7
22.0
23.6
Ka/h-1
0.266
0.372
0.325
0.289
0.405
0.331±0.057
PA/%
, http://www.100md.com 81.4
88.9
86.3
83.2
91.2
86.2±4.03
由表1可见，苏子油乳剂在大鼠小肠吸收较好，6 h内平均吸收率为86.2%.对表1、表2中的吸收率(PA)进行方差分析，结果表明：胆管结扎与不结扎对乳剂的小肠吸收无显著影响(P>0.01).
3.2 在体小肠不同肠段吸收
实验数据按“3.1”项方法处理，求出不同肠段药物吸收百分率及吸收速率常数，结果见表3. Tab.3 Pharmacokinetic parameters of the perilla oil emulsion in different parts of the rats′small intestines in situ after perfusing 6 hours(n=5)
, http://www.100md.com
No
Upper
Middle
Lower
Dose/mg
PA/%
Ka/h-1
Dose/mg
PA/%
Ka/h-1
Dose/mg
PA/%
, 百拇医药
Ka/h-1
1
14.8
76.96
0.243
22.3
77.94
0.264
24.8
73.76
0.226
2
17.4
, 百拇医药
46.35
0.100
20.2
61.98
0.190
7.8
77.12
0.249
3
14.5
67.83
0.180
9.7
, http://www.100md.com
58.39
0.226
10.6
32.38
0.028
4
10.1
54.1
0.145
10.9
57.32
0.145
10.9
, 百拇医药
50.38
0.111
5
12.4
60.81
0.173
16.3
64.34
0.197
14.0
59.24
0.158
x±s
, http://www.100md.com
61.21±13.70
0.168±0.06
69.92±9.56
0.205±0.044
58.61±21.04
0.154±0.103
对表3中3组吸收速率常数进行方差分析，结果表明：苏子油乳剂在小肠不同肠段的吸收速率常数无显著差异(P>0.01).
3.3 乳剂的小肠吸收机制研究
大鼠离体小肠吸收实验中，分别灌流3个不同浓度苏子油乳剂供试液，实验数据按“3.1”项方法处理，分别计算它们的吸收速率常数，结果见表4.
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Tab.4 The absorption rate constants of the perilla oil emulsion of
the rat′s small intestines in vitro with three different substrate
amounts(n=5)
Dose/mg
10.4
20.8
40.8
0.610
0.623
0.650
, 百拇医药
0.531
0.574
0.427
Ka/h-1
0.584
0.411
0.579
0.519
0.536
0.542
0.432
0.598
, http://www.100md.com 0.441
x±s
0.535±0.068
0.548±0.083
0.527±0.094
将表4中3组数据进行方差分析，结果表明：3个不同浓度苏子油乳剂吸收速率常数间没有显著性差异(P>0.01).根据Fick定律，认为在实验浓度范围内，苏子油乳剂的小肠吸收过程属于被动扩散.
药物在肠循环液中稳定性实验结果表明：在实验条件下，α-LNA的含量没有明显变化，故可排除药物稳定性因素对实验结果的影响.病理切片结果表明，离体循环2 h后的小肠和正常大鼠小肠相比，仍处于活体状态，肠壁粘膜层、粘膜下层、肌层及浆膜层均无异常改变，粘膜层肠绒毛的表层有轻微脱落.
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3.4 体内胃肠道吸收实验
将结扎和不结扎胆管大鼠灌胃苏子油后的血药浓度时间数据，用3p87药代动力学程序分别计算AUC值，结果见表5. Tab.5 The AUC values after oral administration of the perilla oil to rats with or without ligated bile duct(n=5)
AUC0～∞/μg.mL-1
±sLigated bile duct
, http://www.100md.com 292.4
812.7
100.5
1040.5
490.2
658.9±332.8
Unilgated bile duct
7794.7
5094.5
6980.7
3129.7
5943.5
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5788±1804
对表5结果进行t-检验，表明：两组间AUC值有显著性差异(P<0.05)，结扎胆管使苏子油口服后的吸收量显著降低.
4 讨论
a.研究药物小肠吸收的实验方法主要有在体法、离体法〔9〕和体内实验.本文采用在体法和离体法，直接测定药物在肠循环液中消失的量，并结合体内实验〔10〕综合评价苏子油乳剂的小肠吸收.
b.离体、在体小肠吸收实验测得的吸收速率常数均值分别0.535、0.331 h-1，可见，在体法与体内法(0.399 h-1)〔10〕结果相近，离体法所得结果比在体法高，可能由于离体小肠排除了体内法中多种生理因素的影响，同时，为了保证小肠供氧，循环液流速较高，可能增加了药物吸收率.
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c.在体法实验表明，苏子油乳剂小肠吸收较好，结扎胆管与否，对其吸收率无明显影响；苏子油乳剂灌胃后绝对生物利用度与相对生物利用度均较高〔10〕，进一步说明其在小肠吸收较完全；苏子油吸收受胆汁影响很大(体内实验)，这与文献报道结果相吻合〔11〕.胆汁(主要是胆盐)的重要生理作用是将脂肪乳化到分子大小，使其易扩散到细胞内；胆盐还与脂肪结合，形成水溶性复合物，促进脂肪吸收〔12〕.故苏子油在无胆汁存在下，吸收受阻，而其乳剂则不受影响.可见，乳剂是脂肪性药物的良好口服剂型之一.
d.对脂肪类物质小肠吸收部位及机制的研究，不同学者的结果各有差异，有些结论也不肯定〔11〕.许多实验表明，小肠对颗粒状脂肪乳的吸收有可能存在易化扩散和胞饮作用〔12〕，这可能会导致吸收过程中饱和、竞争现象的发生.本实验表明，在实验浓度范围内，上、中、下段小肠的吸收速率常数之间无显著性差异，小肠吸收脂肪乳滴属被动扩散.这可能是供试液浓度较低，3段肠管对乳剂摄取不存在饱和竞争现象的缘故.■
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收稿日期：1999-03-29, http://www.100md.com