PCR检测卵巢恶性肿瘤外周血GSTμ基因的研究
作者：温放 何秀琴 孙贵范 皮静波
单位：温放(公共卫生学院劳动卫生教研室)；何秀琴(公共卫生学院劳动卫生教研室)；温放(中国医科大学第一临床学院妇科，沈阳 110001)；何秀琴(中国医科大学第一临床学院妇科，沈阳 110001)；孙贵范(中国医科大学第一临床学院妇科，沈阳 110001)
关键词：卵巢；肿瘤；谷胱甘肽转移酶；多聚酶链反应
中国医科大学学报000129 卵巢恶性肿瘤是严重危害妇女健康和生命的疾病。由于自由基是诸多化学、酶和生物学反应过程中活泼的中间体，而且在生物大分子和机体损伤过程中大量存在，机体内对自由基酶清除有一完整的抗氧化防御系统，谷胱甘肽转移酶μ(glutatine-s-transferase, GSTμ)在此系统中占有重要位置[1]。本文应用PCR方法对卵巢良、恶性肿瘤及健康女性进行了外周血GSTμ基因检测，以期了解卵巢恶性肿瘤与外周血GSTμ基因缺失之间的关系
, 百拇医药
1 对象与方法
1.1 研究对象
1994年3月～1997年6月我科住院卵巢肿瘤患者137例，其中卵巢良性肿瘤50例，恶性肿瘤87例(表1)。健康女性采用本校癌症预防中心同期普查正常女性78例。实验组于术前、健康女性于普查时采取静脉血2 ml，由专人做GSTμ基因检测。
表1 卵巢良、恶性肿瘤病理分类
Table 1 The patholo gical classification of ovarian
carcinoma and benign neoplasm 肿瘤性质
n
上皮类
, 百拇医药
生殖细胞类
特异性性腺间质类
转移
良性
恶性
50
87
24
70
20
5
6
7
, http://www.100md.com —
5
1.2 方法
1.2.1 DNA模板制备：取50 μl全血与0.5 μl TE缓冲液混合，离心去上清，重复2～3次。在沉淀中加入100 μl钾缓冲液，悬浮沉淀。56℃保温45 min消化细胞，95℃ 10 min灭活蛋白酶K后离心5 min，取上清10～20 μl用于PCR检测。
1.2.2 PCR条件：在100 μl反应体系中进行PCR由DNA合成仪合成(Techne公司产)，DNA聚合酶为日本和光钝药工业株式会社生产。
1.2.3 电泳及造像：扩增后的基因产物做琼脂平板电泳，电流80 A，电压240 V，pH 8.12内加溴化乙啶染色液。电泳后于300 μm紫外线透射仪上观察、摄片。在1.6%琼脂上，250 bp处清楚显示一条GSTμ基因扩增物，有荧光者为GSTμ基因携带，无荧光者为缺失。
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 卵巢恶性肿瘤组、卵巢良性肿瘤组及健康女性组外周血GSTμ基因检测结果见表2。
表2 3组外周血GSTμ基因缺失率比较
Table 2 The deletion proportion comparison of GSTμ
gene in the peripheral blood of the 3 groups 分 组
n
GSTμ基因缺失
恶性肿瘤
良性肿瘤
, 百拇医药 健康女性
87
50
78
63(71.4)*
29(58.0)
41(52.6)
( )内为百分率；* 与健康女性组比较 P<0.05
2.2 卵巢恶性肿瘤患者中已绝经者，未绝经者与健康女性组外周血GSTμ基因检测结果比较见表3。
表3 绝经前后两组外周血GSTμ基因缺失率比较
, http://www.100md.com
Table 3 The deletion proportion comparison of GSTμ in
the peripheral blood of the 2 groups (premeno-
pause and postmenopause) 分组
n
GSTμ基因缺失
卵巢恶性肿瘤
绝经前
35
20(57.1)
绝经后
, http://www.100md.com
52
42(80.8)*＃
健康女性
绝经前
50
29(58.0)
绝经后
28
12(42.9)
( ) 内为百分率；* 与本组绝经前比较P<0.05；＃ 与健康组绝经后比较 P<0.01
2.3 卵巢恶性肿瘤患者中，能准确进行临床分期62例，本文仅就62例做一比较，见表4。
, http://www.100md.com
表4 不同临床分期卵巢恶性肿瘤外周血GSTμ基因
检测结果比较
Table 4 The comparison of the GSTμ detection in the
peripheral blood of ovarian carcinoma of diffe-
rent clinical stages 临床分期
n
GSTμ基因缺失
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
, 百拇医药
8
2
52
6(75.0)
1(50.0)
30(57.7)
Ⅱ期患者例数过少，本文仅就Ⅰ期与Ⅲ期进行比较，两者之间差异没有显著意义(P>0.05)。
2.4 卵巢恶性肿瘤分化程度与外周血GSTμ基因缺失率的关系
卵巢恶性肿瘤标本中，能准确进行肿瘤细胞分化程度判定44例，比较结果见表5。表5 不同分化程度卵巢恶性肿瘤外周血GSTμ基因
检测结果比较(例，%)
, http://www.100md.com
Table 5 The comparison of GSTμ detection in the
peripheral blood of different differentiation
of ovarian carcinoma 分化程度
n
GSTμ基因缺失
低分化
中分化
高分化
19
18
7
, http://www.100md.com
9(47.4)
11(61.1)
4(57.1)
卵巢恶性肿瘤患者3种分化程度间GSTμ基因缺失率的差异没有显著意义(P>0.05)。
3 讨论
GSTμ是一种可溶性二聚体同功酶，在代谢多环芳烃致癌物质中特异性最强、活性最高。Seidegard等[2]证实，GSTμ的合成受基因控制，携有该基因者能合成GSTμ。应用PCR技术检测GSTμ基因是判定机体能否合成GSTμ的最可靠方法之一。本研究健康女性GSTμ基因缺失率为52.6%，与文献报道中群体调查结果一致。90年代以来，人们广泛注意到GSTμ基因缺失与恶性肿瘤之间的关系，陆续出现GSTμ基因缺失率与肺癌、膀胱癌、胃癌之间的关系的报道[3～7]。有关卵巢恶性肿瘤的研究报道极少。本文87例卵巢恶性肿瘤患者外周血GSTμ基因缺失率为71.4%，与健康女性组之间差异显著(P<0.05)，与上述结果一致。本研究绝经前与绝经后的卵巢恶性肿瘤患者外周血GSTμ基因缺失率之间的差异显著(P<0.05)，而绝经后健康女性与卵巢恶性肿瘤患者之间的差异非常显著(P<0.01)。绝经后患者外周血GSTμ基因缺失率明显升高的意义目前尚未得到完满解释。我们认为这种变化可能是因为绝经后妇女免疫功能减退，加之抗氧化防御系统的重大缺陷，即GSTμ缺失，在体内外环境改变等不良因素刺激下使卵巢恶性肿瘤易于发生。本组卵巢恶性肿瘤不同临床期别和不同分化程度之间GSTμ基因缺失的差异均不显著(P>0.05)，可能与病例数目偏少有关。
, http://www.100md.com
作者单位:皮静波(中国医科大学第一临床学院妇科，沈阳 110001)
参考文献
1，Chasseud LF. The role of glutathione and glutathione S-tranferases in the metabolism if chemical carcinogens and other electrophic agents. Adv Cancr Res, 1979,29(1):175—177
2，Seidegard J, Vorachek WR, Pero RW, et al. Hereditary difference in the expression of the human glutathione transferase active on transtibene oxide are due to agene deletion. Pro Natl Acad Sci USA, 1988,85(19):7293—7297
, 百拇医药
3，Brockmoller, Ker R, Drakoulis N, et al. Genotype and phenotype of glutathione S transferaseclass u isoenzyme in lung cancer and controls. Cancer Res, 1993,53(3):1004—1011
4，孙贵范，皮静波，郑全美，等.谷胱甘肽转移酶μ基因缺失与肺癌发病的相关性研究.中华结核及呼吸杂志，1995，18(3)：167～169
5，Laeuebte A, Pajol F, Carreter P, et al. Human glutathione S-transferaseamu (GSTμ) deficiency as a marker for the susceptibility to bladder and larynx cancer among smokers. Cancer Letter, 1993,68(1):49—51
, http://www.100md.com
6，Hard S, Misawa S, Nakamura, T, et al. Detection of GST1 gene deletion by the polymerase chain reaction and its possible correlation with stomach cancer in Japanese. Human Genetics, 1992,90(1):62—67
7，Seidegard J, Pero RW, Markowitz MM, et al. Isoenzyme(S) of glutathione transferase (class Mu) as a marker for the susceptibility to lung cancer: a follow up study. Carcinogenesis, 1990,33(11):162—163
收稿1998-11-17, 百拇医药
单位：温放(公共卫生学院劳动卫生教研室)；何秀琴(公共卫生学院劳动卫生教研室)；温放(中国医科大学第一临床学院妇科，沈阳 110001)；何秀琴(中国医科大学第一临床学院妇科，沈阳 110001)；孙贵范(中国医科大学第一临床学院妇科，沈阳 110001)
关键词：卵巢；肿瘤；谷胱甘肽转移酶；多聚酶链反应
中国医科大学学报000129 卵巢恶性肿瘤是严重危害妇女健康和生命的疾病。由于自由基是诸多化学、酶和生物学反应过程中活泼的中间体，而且在生物大分子和机体损伤过程中大量存在，机体内对自由基酶清除有一完整的抗氧化防御系统，谷胱甘肽转移酶μ(glutatine-s-transferase, GSTμ)在此系统中占有重要位置[1]。本文应用PCR方法对卵巢良、恶性肿瘤及健康女性进行了外周血GSTμ基因检测，以期了解卵巢恶性肿瘤与外周血GSTμ基因缺失之间的关系
, 百拇医药
1 对象与方法
1.1 研究对象
1994年3月～1997年6月我科住院卵巢肿瘤患者137例，其中卵巢良性肿瘤50例，恶性肿瘤87例(表1)。健康女性采用本校癌症预防中心同期普查正常女性78例。实验组于术前、健康女性于普查时采取静脉血2 ml，由专人做GSTμ基因检测。
表1 卵巢良、恶性肿瘤病理分类
Table 1 The patholo gical classification of ovarian
carcinoma and benign neoplasm 肿瘤性质
n
上皮类
, 百拇医药
生殖细胞类
特异性性腺间质类
转移
良性
恶性
50
87
24
70
20
5
6
7
, http://www.100md.com —
5
1.2 方法
1.2.1 DNA模板制备：取50 μl全血与0.5 μl TE缓冲液混合，离心去上清，重复2～3次。在沉淀中加入100 μl钾缓冲液，悬浮沉淀。56℃保温45 min消化细胞，95℃ 10 min灭活蛋白酶K后离心5 min，取上清10～20 μl用于PCR检测。
1.2.2 PCR条件：在100 μl反应体系中进行PCR由DNA合成仪合成(Techne公司产)，DNA聚合酶为日本和光钝药工业株式会社生产。
1.2.3 电泳及造像：扩增后的基因产物做琼脂平板电泳，电流80 A，电压240 V，pH 8.12内加溴化乙啶染色液。电泳后于300 μm紫外线透射仪上观察、摄片。在1.6%琼脂上，250 bp处清楚显示一条GSTμ基因扩增物，有荧光者为GSTμ基因携带，无荧光者为缺失。
, http://www.100md.com
2 结果
2.1 卵巢恶性肿瘤组、卵巢良性肿瘤组及健康女性组外周血GSTμ基因检测结果见表2。
表2 3组外周血GSTμ基因缺失率比较
Table 2 The deletion proportion comparison of GSTμ
gene in the peripheral blood of the 3 groups 分 组
n
GSTμ基因缺失
恶性肿瘤
良性肿瘤
, 百拇医药 健康女性
87
50
78
63(71.4)*
29(58.0)
41(52.6)
( )内为百分率；* 与健康女性组比较 P<0.05
2.2 卵巢恶性肿瘤患者中已绝经者，未绝经者与健康女性组外周血GSTμ基因检测结果比较见表3。
表3 绝经前后两组外周血GSTμ基因缺失率比较
, http://www.100md.com
Table 3 The deletion proportion comparison of GSTμ in
the peripheral blood of the 2 groups (premeno-
pause and postmenopause) 分组
n
GSTμ基因缺失
卵巢恶性肿瘤
绝经前
35
20(57.1)
绝经后
, http://www.100md.com
52
42(80.8)*＃
健康女性
绝经前
50
29(58.0)
绝经后
28
12(42.9)
( ) 内为百分率；* 与本组绝经前比较P<0.05；＃ 与健康组绝经后比较 P<0.01
2.3 卵巢恶性肿瘤患者中，能准确进行临床分期62例，本文仅就62例做一比较，见表4。
, http://www.100md.com
表4 不同临床分期卵巢恶性肿瘤外周血GSTμ基因
检测结果比较
Table 4 The comparison of the GSTμ detection in the
peripheral blood of ovarian carcinoma of diffe-
rent clinical stages 临床分期
n
GSTμ基因缺失
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
, 百拇医药
8
2
52
6(75.0)
1(50.0)
30(57.7)
Ⅱ期患者例数过少，本文仅就Ⅰ期与Ⅲ期进行比较，两者之间差异没有显著意义(P>0.05)。
2.4 卵巢恶性肿瘤分化程度与外周血GSTμ基因缺失率的关系
卵巢恶性肿瘤标本中，能准确进行肿瘤细胞分化程度判定44例，比较结果见表5。表5 不同分化程度卵巢恶性肿瘤外周血GSTμ基因
检测结果比较(例，%)
, http://www.100md.com
Table 5 The comparison of GSTμ detection in the
peripheral blood of different differentiation
of ovarian carcinoma 分化程度
n
GSTμ基因缺失
低分化
中分化
高分化
19
18
7
, http://www.100md.com
9(47.4)
11(61.1)
4(57.1)
卵巢恶性肿瘤患者3种分化程度间GSTμ基因缺失率的差异没有显著意义(P>0.05)。
3 讨论
GSTμ是一种可溶性二聚体同功酶，在代谢多环芳烃致癌物质中特异性最强、活性最高。Seidegard等[2]证实，GSTμ的合成受基因控制，携有该基因者能合成GSTμ。应用PCR技术检测GSTμ基因是判定机体能否合成GSTμ的最可靠方法之一。本研究健康女性GSTμ基因缺失率为52.6%，与文献报道中群体调查结果一致。90年代以来，人们广泛注意到GSTμ基因缺失与恶性肿瘤之间的关系，陆续出现GSTμ基因缺失率与肺癌、膀胱癌、胃癌之间的关系的报道[3～7]。有关卵巢恶性肿瘤的研究报道极少。本文87例卵巢恶性肿瘤患者外周血GSTμ基因缺失率为71.4%，与健康女性组之间差异显著(P<0.05)，与上述结果一致。本研究绝经前与绝经后的卵巢恶性肿瘤患者外周血GSTμ基因缺失率之间的差异显著(P<0.05)，而绝经后健康女性与卵巢恶性肿瘤患者之间的差异非常显著(P<0.01)。绝经后患者外周血GSTμ基因缺失率明显升高的意义目前尚未得到完满解释。我们认为这种变化可能是因为绝经后妇女免疫功能减退，加之抗氧化防御系统的重大缺陷，即GSTμ缺失，在体内外环境改变等不良因素刺激下使卵巢恶性肿瘤易于发生。本组卵巢恶性肿瘤不同临床期别和不同分化程度之间GSTμ基因缺失的差异均不显著(P>0.05)，可能与病例数目偏少有关。
, http://www.100md.com
作者单位:皮静波(中国医科大学第一临床学院妇科，沈阳 110001)
参考文献
1，Chasseud LF. The role of glutathione and glutathione S-tranferases in the metabolism if chemical carcinogens and other electrophic agents. Adv Cancr Res, 1979,29(1):175—177
2，Seidegard J, Vorachek WR, Pero RW, et al. Hereditary difference in the expression of the human glutathione transferase active on transtibene oxide are due to agene deletion. Pro Natl Acad Sci USA, 1988,85(19):7293—7297
, 百拇医药
3，Brockmoller, Ker R, Drakoulis N, et al. Genotype and phenotype of glutathione S transferaseclass u isoenzyme in lung cancer and controls. Cancer Res, 1993,53(3):1004—1011
4，孙贵范，皮静波，郑全美，等.谷胱甘肽转移酶μ基因缺失与肺癌发病的相关性研究.中华结核及呼吸杂志，1995，18(3)：167～169
5，Laeuebte A, Pajol F, Carreter P, et al. Human glutathione S-transferaseamu (GSTμ) deficiency as a marker for the susceptibility to bladder and larynx cancer among smokers. Cancer Letter, 1993,68(1):49—51
, http://www.100md.com
6，Hard S, Misawa S, Nakamura, T, et al. Detection of GST1 gene deletion by the polymerase chain reaction and its possible correlation with stomach cancer in Japanese. Human Genetics, 1992,90(1):62—67
7，Seidegard J, Pero RW, Markowitz MM, et al. Isoenzyme(S) of glutathione transferase (class Mu) as a marker for the susceptibility to lung cancer: a follow up study. Carcinogenesis, 1990,33(11):162—163
收稿1998-11-17, 百拇医药