HSS的研究进展
作者：陈茂伟 周桂英
单位：广西医科大学第一附属医院 南宁530021
关键词：
广西预防医学000119
中图分类号：R152.6文献标识码：A文章编号：1007-158X(2000)01-0048-03
肝细胞刺激物质(HepaticStimulatorySubstance,HSS)是目前唯一能特异性地促肝细胞生长的小分子蛋白，由于其特异性地促肝细胞生长的活性[1]，参与肝细胞再生的调控等，故一直是肝炎治疗、肝细胞调控的研究热点。HSS的分子量约为12～18KD，耐热，在PH2～9的环境中仍能保持其生物学活性；不溶于乙醇，对蛋白酶敏感，但核糖核酸酶不影响其活性，其二硫键、三级结构的破坏不影响其活性。HSS存在乳肝组织或再生肝组织的肝细胞胞浆中，在非肝细胞中未发现HSS。HSS是由肝细胞合成的，是肝细胞的基因表达产物，肝细胞膜上有相应的受体。目前已能从猪、牛、鼠等多种动物的乳肝组织及人胎肝组织提取出HSS，但尚不能通过基因重组的方法获得。本文对HSS的研究现状作一综述。
, 百拇医药
1HSS的生物学活性
HSS除具有促进肝细胞增殖活性及参与肝细胞调控外，尚有保肝抗纤维化等功能，其生物学活性如下。
1.1促进肝源性细胞DNA合成及增殖 这是HSS的特征性生物学活性，国内外学者在这方面已取得了大量的实验证据。最近TheocharisSF等[2]在经镉预处理的肝部分切除术大鼠动物模型中，发现HSS能恢复被镉抑制的肝细胞再生能力。JiangB[3]等发现HSS能促进脾内移植肝细胞的增殖及延长其存活期，进一步证实了HSS能促进肝细胞DNA合成、增殖，且拓展了HSS的临床应用。
1.2参与肝细胞再生的调控 肝细胞再生可分为三个阶段：(1)启动阶段：Go期进入G1期；(2)进展阶段：G1期进入S期；(3)终止期；体内存在多种细胞因子参与肝细胞再生调控，如EGF、I、G、HGF等，它们在肝细胞再生的不同阶段相互协调共同参与肝细胞再生的调控，其中在启动阶段起调控作用的因子与早期反应基因(c_fos,c_myc,c_Jun基因)关系密切。目前的研究表明HSS可能在肝细胞再生发展阶段中起作用。至于如何起作用及与其它因子的相互关系如何?尚待进一步研究。
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1.3保肝作用 国内外学者在四氯化碳、D-半乳糖胺诱发的肝衰竭、肝损伤的模型中发现HSS能有效地保护肝脏免受进一步损伤。张宜俊等总结了HSS用于重肝、慢肝的疗效，发现HSS能明显降低重肝的死亡率，加速慢肝黄疸及转氨酶的消退。目前认为HSS的保肝作用可能通过：(1)促进肝细胞DNA合成、再生和保护肝细胞膜；(2)改善枯否氏细胞功能，消除内毒素血症，降低肿瘤坏死因子的活性；(3)保护肝细胞内钙、钾离子的稳态；(4)调节血浆NO水平[4]；(5)抗氧化作用及加强肝细胞抗氧化能力。
1.4对肝癌细胞的作用 由于体外实验证明HSS对肝癌细胞株DNA合成也有促进作用，因而HSS治疗能否致癌变，一直是人们关心的问题。1996年李楠等[5]观察了长期应用HSS的慢肝患者的肝细胞倍体情况，发现增生的肝细胞DNA倍体与正常细胞基本相同，未见异倍体细胞。邹刚等[6]观察了HSS对甲胎蛋白(AFP)的影响，在用药后的18个月随访中没有发现AFP持续升高或大于400mg/L。说明HSS不会引起肝细胞异常增生。李茹冰等[7]最近的研究表明，HSS的某些组份在体外尚可抑制肝癌细胞的增殖活性。可见HSS无致畸作用，且可诱导某些肿瘤细胞的凋亡。
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1.5抗肝纤维化及抗病毒作用 肝纤维化与重型肝炎不同，它不是以大量肝细胞坏死为主的病变，HSS对其作用需进一步研究。叶红军等[8]，发现HSS可通过抑制Ⅰ型胶原的合成及沉积，降低血Ⅲ型胶原前肽(PcⅢ)，N-乙酰葡萄糖胺(NAG)、羟脯氨酸(HYP)；使Ⅰ、Ⅲ型胶原增生程度降低，抑制成纤维细胞；改善肝细胞膜脂质流动性，保护Na+-K+ATP酶活性等途径发挥抗纤维化作用。pHGF(猪源性HSS)应用于临床治疗肝纤维化表明，可降低血清IV胶原、层粘蛋白(LN)、透明质酸(HA)的浓度防止肝硬化的发生[9]。HSS的抗病毒作用研究甚少，陈国风等[10]在感染鸭乙型肝炎病毒的北京鸭模型中观察到HSS有一定的抗病毒作用。但尚需进一步研究。
2HSS的基因克隆研究
贺福初等构建了表达型人胎肝组织λgt-11-cDNA文库，观察了大鼠肝再生过程中HSS及其mRNA的动态变化，为HSS基因克隆工作奠定了基础，但由于该蛋白质含量低，纯化难度大，目前尚未能纯化到同质，加之蛋白质氨基端封闭，其氨基酸序列一直未能确定，致使HSS的基因克隆工作一直进展缓慢。1994年Hagiya.M[11]首先分离到肝再生增强因子(ALR，augmentorofliverregeneration)并完成了其基因克隆，提出ALR与HSS可能是同一物质。国内学者杨晓明等[12]也对ALR进行了一系列的研究，探讨了ALR与HSS的关系。对ALR的研究表明ALR与HSS存在密切的关系：(1)都具有热稳定性，特异地促进肝细胞增殖活性，分子量为12～18KD；(2)ALRmRNA及HSSmRNA在部份肝切除后的变化一致；(3)体外均能促进HTC肝癌细胞DNA合成；(4)具有保肝作用[13]；(5)肝病患者中的血清浓度均高于正常人。这些共同点表明ALR极可能与HSS为同一物质，但ALRmRNA分布缺乏肝特异性[14]，且HSS的氨基酸序列，基因序列尚未确定，因而两者间的关系尚需进一步研究。
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3HSS的临床检测及应用
武建国等[15]用ELISA法对抗肝细胞刺激物质抗体(HSSAb)、肝细胞刺激物质特异性免疫复合物(HSS-IC)及HSS进行了一系列的检测，发现在肝病患者中HSS水平均较正常人高，且不同程度的检测到HSS-Ab和HSS-IC；并提出HSS含量可作为观察肝病病情的指标。单晓阳等[16]提出HBV-DNA复制活跃可能是HSS升高的机制之一。以上研究表明，肝病及某些非肝病患者HSS含量高于正常人；逸入血流的HSS及外源性HSS均可刺激机体产生相应的HSS-Ab及HSS-IC，其在肝病患者及肝外疾病中的意义尚缺乏研究。国内学者在LaBrecque研究HSS的基础上，分别从多种动物肝脏中提取出HSS应用于临床；多年的临床实践证明HSS对肝病的治疗有确切的疗效，且对HSS的使用剂量、时机、合并用药等积累了丰富的临床经验。目前已成为重肝的常规用药之一。最近已研制出HSS的口服颗粒剂(促肝康)并正式投入市场供临床应用，它将进一步推动HSS的临床应用和研究。
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作者简介：陈茂伟(1971-)，男(瑶族)，广西恭城县人，医师，医学硕士，主要从事病毒性肝炎的临床研究工作。
参考文献
1，Labrecque DR, Pesch LA.Preparation and par-tial characterization of hepatic regenerative sti-mulatory substance(ss) from rat liver [J]. J Physiol,1975,248:273
2，Theocharis SE, Margeli AP, Spiliopeulou G, et al.Hepatic stimutatory substance administra-tion enhances regenerative capacity of hepato-cytes in cadmium-pretreated partially hepatec-tomized rats[J].Dig Dis Sci,1996,41(7):1475
, 百拇医药
3，Jiang B,Sawa M,Yamamoto T,et al.Enhancem-ent of proliferation of intrasplenically transplan-ted hepatocytes in cirrhotic rats by hepatic stimulatory substance[J].Transplantation,1997, 63(1):131
4，刘树人，李灼亮，余宙耀，等.促肝细胞生长素对急性肝损伤小鼠NO和脂蛋白(a)的影响[J].当代医师，1998，3(6)：5
5，李楠，王雪明，陈菊梅，等.肝细胞刺激物质长期使用与肝脏细胞动力学变化[J].临床肝胆病杂志，1996，12(1)：11
6，邹刚，李仁全，张玉红,等.促肝细胞生长素治疗重型肝炎血清甲胎蛋白的变化[J].医学理论与实践,1997，10(5)：199
, 百拇医药
7，李茹冰，孔祥平，邹雁清，等.肝细胞提取物组分S4对肿瘤细胞体外增殖的影响[J].中华消化杂志，1998，6(7)：591
8，叶红军，陈东，张丽，等.促肝细胞生长素及细胞因子对成纤维细胞增殖的作用[J].中国免疫学杂志，1998，12(5)：283
9，郝淑兰.促肝细胞生长素对肝炎后肝硬化的近期疗效[J].药物流行病学杂志，1998，7(增刊)：38
10，陈国凤，陈菊梅，刘冬平，等.肝细胞刺激物质对感染鸭乙型肝炎病毒的雏鸭体内抗病毒作用的实验研究[J].中华实验和临床病毒学杂志，1997，11(4)：329
11，Hagiys M, Francavilla A, Polimeno L， etal. Cloning and sequence analysis of the rat aug-menter of liver regeneration(ALR) gene: Ex-pression of biologically active recombinant ALR and demonstration of tissue distribution[J]. Proc Natl Acad Sci,1994,91:8142
, 百拇医药
12，杨晓明，贺福初，谢玲等.新型人肝再生增强因子的分子克隆及其性能研究[J].新消化病学杂志，1997，5(5)：355
13，Francavilla A,Vujanovic NC,Polimeno L,et al. The in vivo effect of hepatotropic factors,aug-menter of liver regeneration, hepatocyte gro-wth factor,an insulin like growth factorⅡ on liver natural killer cell functions[J] .Hepato-logy,1997,25(2):411
14，Giorda R, Hagiya M,Seki T ,et al.Analysis of the structure and expression of ALR gene[J]. Mol Med,1996,2(1):97
15，邓蕾，虞伟，武建国.肝细胞刺激物质及自身抗体与特异性免疫复合物的测定与研究[J].天津医药，1996，24(12)：733
16，单晓阳，刘革，周桂英,等.乙肝患者血清肝刺激物质水平与HBVDNA关系的研究.当代医师，1997，2(12)：9
(1999-03-29收稿。1999-05-08修回。), 百拇医药
单位：广西医科大学第一附属医院 南宁530021
关键词：
广西预防医学000119
中图分类号：R152.6文献标识码：A文章编号：1007-158X(2000)01-0048-03
肝细胞刺激物质(HepaticStimulatorySubstance,HSS)是目前唯一能特异性地促肝细胞生长的小分子蛋白，由于其特异性地促肝细胞生长的活性[1]，参与肝细胞再生的调控等，故一直是肝炎治疗、肝细胞调控的研究热点。HSS的分子量约为12～18KD，耐热，在PH2～9的环境中仍能保持其生物学活性；不溶于乙醇，对蛋白酶敏感，但核糖核酸酶不影响其活性，其二硫键、三级结构的破坏不影响其活性。HSS存在乳肝组织或再生肝组织的肝细胞胞浆中，在非肝细胞中未发现HSS。HSS是由肝细胞合成的，是肝细胞的基因表达产物，肝细胞膜上有相应的受体。目前已能从猪、牛、鼠等多种动物的乳肝组织及人胎肝组织提取出HSS，但尚不能通过基因重组的方法获得。本文对HSS的研究现状作一综述。
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1HSS的生物学活性
HSS除具有促进肝细胞增殖活性及参与肝细胞调控外，尚有保肝抗纤维化等功能，其生物学活性如下。
1.1促进肝源性细胞DNA合成及增殖 这是HSS的特征性生物学活性，国内外学者在这方面已取得了大量的实验证据。最近TheocharisSF等[2]在经镉预处理的肝部分切除术大鼠动物模型中，发现HSS能恢复被镉抑制的肝细胞再生能力。JiangB[3]等发现HSS能促进脾内移植肝细胞的增殖及延长其存活期，进一步证实了HSS能促进肝细胞DNA合成、增殖，且拓展了HSS的临床应用。
1.2参与肝细胞再生的调控 肝细胞再生可分为三个阶段：(1)启动阶段：Go期进入G1期；(2)进展阶段：G1期进入S期；(3)终止期；体内存在多种细胞因子参与肝细胞再生调控，如EGF、I、G、HGF等，它们在肝细胞再生的不同阶段相互协调共同参与肝细胞再生的调控，其中在启动阶段起调控作用的因子与早期反应基因(c_fos,c_myc,c_Jun基因)关系密切。目前的研究表明HSS可能在肝细胞再生发展阶段中起作用。至于如何起作用及与其它因子的相互关系如何?尚待进一步研究。
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1.3保肝作用 国内外学者在四氯化碳、D-半乳糖胺诱发的肝衰竭、肝损伤的模型中发现HSS能有效地保护肝脏免受进一步损伤。张宜俊等总结了HSS用于重肝、慢肝的疗效，发现HSS能明显降低重肝的死亡率，加速慢肝黄疸及转氨酶的消退。目前认为HSS的保肝作用可能通过：(1)促进肝细胞DNA合成、再生和保护肝细胞膜；(2)改善枯否氏细胞功能，消除内毒素血症，降低肿瘤坏死因子的活性；(3)保护肝细胞内钙、钾离子的稳态；(4)调节血浆NO水平[4]；(5)抗氧化作用及加强肝细胞抗氧化能力。
1.4对肝癌细胞的作用 由于体外实验证明HSS对肝癌细胞株DNA合成也有促进作用，因而HSS治疗能否致癌变，一直是人们关心的问题。1996年李楠等[5]观察了长期应用HSS的慢肝患者的肝细胞倍体情况，发现增生的肝细胞DNA倍体与正常细胞基本相同，未见异倍体细胞。邹刚等[6]观察了HSS对甲胎蛋白(AFP)的影响，在用药后的18个月随访中没有发现AFP持续升高或大于400mg/L。说明HSS不会引起肝细胞异常增生。李茹冰等[7]最近的研究表明，HSS的某些组份在体外尚可抑制肝癌细胞的增殖活性。可见HSS无致畸作用，且可诱导某些肿瘤细胞的凋亡。
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1.5抗肝纤维化及抗病毒作用 肝纤维化与重型肝炎不同，它不是以大量肝细胞坏死为主的病变，HSS对其作用需进一步研究。叶红军等[8]，发现HSS可通过抑制Ⅰ型胶原的合成及沉积，降低血Ⅲ型胶原前肽(PcⅢ)，N-乙酰葡萄糖胺(NAG)、羟脯氨酸(HYP)；使Ⅰ、Ⅲ型胶原增生程度降低，抑制成纤维细胞；改善肝细胞膜脂质流动性，保护Na+-K+ATP酶活性等途径发挥抗纤维化作用。pHGF(猪源性HSS)应用于临床治疗肝纤维化表明，可降低血清IV胶原、层粘蛋白(LN)、透明质酸(HA)的浓度防止肝硬化的发生[9]。HSS的抗病毒作用研究甚少，陈国风等[10]在感染鸭乙型肝炎病毒的北京鸭模型中观察到HSS有一定的抗病毒作用。但尚需进一步研究。
2HSS的基因克隆研究
贺福初等构建了表达型人胎肝组织λgt-11-cDNA文库，观察了大鼠肝再生过程中HSS及其mRNA的动态变化，为HSS基因克隆工作奠定了基础，但由于该蛋白质含量低，纯化难度大，目前尚未能纯化到同质，加之蛋白质氨基端封闭，其氨基酸序列一直未能确定，致使HSS的基因克隆工作一直进展缓慢。1994年Hagiya.M[11]首先分离到肝再生增强因子(ALR，augmentorofliverregeneration)并完成了其基因克隆，提出ALR与HSS可能是同一物质。国内学者杨晓明等[12]也对ALR进行了一系列的研究，探讨了ALR与HSS的关系。对ALR的研究表明ALR与HSS存在密切的关系：(1)都具有热稳定性，特异地促进肝细胞增殖活性，分子量为12～18KD；(2)ALRmRNA及HSSmRNA在部份肝切除后的变化一致；(3)体外均能促进HTC肝癌细胞DNA合成；(4)具有保肝作用[13]；(5)肝病患者中的血清浓度均高于正常人。这些共同点表明ALR极可能与HSS为同一物质，但ALRmRNA分布缺乏肝特异性[14]，且HSS的氨基酸序列，基因序列尚未确定，因而两者间的关系尚需进一步研究。
, 百拇医药
3HSS的临床检测及应用
武建国等[15]用ELISA法对抗肝细胞刺激物质抗体(HSSAb)、肝细胞刺激物质特异性免疫复合物(HSS-IC)及HSS进行了一系列的检测，发现在肝病患者中HSS水平均较正常人高，且不同程度的检测到HSS-Ab和HSS-IC；并提出HSS含量可作为观察肝病病情的指标。单晓阳等[16]提出HBV-DNA复制活跃可能是HSS升高的机制之一。以上研究表明，肝病及某些非肝病患者HSS含量高于正常人；逸入血流的HSS及外源性HSS均可刺激机体产生相应的HSS-Ab及HSS-IC，其在肝病患者及肝外疾病中的意义尚缺乏研究。国内学者在LaBrecque研究HSS的基础上，分别从多种动物肝脏中提取出HSS应用于临床；多年的临床实践证明HSS对肝病的治疗有确切的疗效，且对HSS的使用剂量、时机、合并用药等积累了丰富的临床经验。目前已成为重肝的常规用药之一。最近已研制出HSS的口服颗粒剂(促肝康)并正式投入市场供临床应用，它将进一步推动HSS的临床应用和研究。
, 百拇医药
作者简介：陈茂伟(1971-)，男(瑶族)，广西恭城县人，医师，医学硕士，主要从事病毒性肝炎的临床研究工作。
参考文献
1，Labrecque DR, Pesch LA.Preparation and par-tial characterization of hepatic regenerative sti-mulatory substance(ss) from rat liver [J]. J Physiol,1975,248:273
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, 百拇医药
3，Jiang B,Sawa M,Yamamoto T,et al.Enhancem-ent of proliferation of intrasplenically transplan-ted hepatocytes in cirrhotic rats by hepatic stimulatory substance[J].Transplantation,1997, 63(1):131
4，刘树人，李灼亮，余宙耀，等.促肝细胞生长素对急性肝损伤小鼠NO和脂蛋白(a)的影响[J].当代医师，1998，3(6)：5
5，李楠，王雪明，陈菊梅，等.肝细胞刺激物质长期使用与肝脏细胞动力学变化[J].临床肝胆病杂志，1996，12(1)：11
6，邹刚，李仁全，张玉红,等.促肝细胞生长素治疗重型肝炎血清甲胎蛋白的变化[J].医学理论与实践,1997，10(5)：199
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7，李茹冰，孔祥平，邹雁清，等.肝细胞提取物组分S4对肿瘤细胞体外增殖的影响[J].中华消化杂志，1998，6(7)：591
8，叶红军，陈东，张丽，等.促肝细胞生长素及细胞因子对成纤维细胞增殖的作用[J].中国免疫学杂志，1998，12(5)：283
9，郝淑兰.促肝细胞生长素对肝炎后肝硬化的近期疗效[J].药物流行病学杂志，1998，7(增刊)：38
10，陈国凤，陈菊梅，刘冬平，等.肝细胞刺激物质对感染鸭乙型肝炎病毒的雏鸭体内抗病毒作用的实验研究[J].中华实验和临床病毒学杂志，1997，11(4)：329
11，Hagiys M, Francavilla A, Polimeno L， etal. Cloning and sequence analysis of the rat aug-menter of liver regeneration(ALR) gene: Ex-pression of biologically active recombinant ALR and demonstration of tissue distribution[J]. Proc Natl Acad Sci,1994,91:8142
, 百拇医药
12，杨晓明，贺福初，谢玲等.新型人肝再生增强因子的分子克隆及其性能研究[J].新消化病学杂志，1997，5(5)：355
13，Francavilla A,Vujanovic NC,Polimeno L,et al. The in vivo effect of hepatotropic factors,aug-menter of liver regeneration, hepatocyte gro-wth factor,an insulin like growth factorⅡ on liver natural killer cell functions[J] .Hepato-logy,1997,25(2):411
14，Giorda R, Hagiya M,Seki T ,et al.Analysis of the structure and expression of ALR gene[J]. Mol Med,1996,2(1):97
15，邓蕾，虞伟，武建国.肝细胞刺激物质及自身抗体与特异性免疫复合物的测定与研究[J].天津医药，1996，24(12)：733
16，单晓阳，刘革，周桂英,等.乙肝患者血清肝刺激物质水平与HBVDNA关系的研究.当代医师，1997，2(12)：9
(1999-03-29收稿。1999-05-08修回。), 百拇医药