有机磷农药对机体免疫功能的影响
作者：洪承皎 田海林 童建 王静
单位：苏州医学院预防医学系，215007
关键词：
卫生毒理学杂志000117 农药对人体影响的研究目前较多集中于农药的一般毒性、神经毒性、“三致”效应，而对免疫系统影响的研究较少[1]。近20年来，随着免疫毒理学的兴起和发展，人们对农药的免疫毒理作用日益重视[2，3]。我们试图用免疫时间毒理学的方法，将时间生物学和免疫毒理学结合起来研究农药和机体免疫节律的相互关系，探讨农药的时间毒性作用。
1 对象与方法
1.1 检测对象及样本处理
1.1.1 检测对象 实验组：苏州市化工农药集团甲胺磷车间及甲基1605车间工人各10人，其中男5人，女15人。年龄27～59岁(平均年龄为43岁)。接触农药时间≥5年。空气中有机磷农药浓度：甲胺磷车间为0.945 mg/m3，甲基1605车间为0.335 mg/m3。对照组：按照实验组的性别年龄构成设立未接触农药的健康人20名。两组被检测者均无口腔疾患及全身系统性疾病，采样期间未接受任何药物治疗。
, 百拇医药
1.2 样本处理 采样时间为5∶00、9∶00、13∶00、17∶00和21∶00，空腹或饭后1h以上，采用吐唾法，收集2～3 ml全唾液。将采集的唾液用pH=6.4磷酸缓冲液作1∶10稀释、标号，冰箱保存待用。
1.3 唾液溶菌酶的测定 采用琼脂平板测定法[4～9]。微球菌由苏州医学院微生物教研室提供。溶菌酶标准品由上海丽珠东风生物技术有限公司提供。
1.4 唾液SIgA的测定 采用放射免疫测定法[10]。放射免疫药盒由上海放射免疫分析技术研究所提供，计数器为国营二六二厂FJ-2008自动γ免疫计数器。
1.5 数据处理 采用t检验，以Y=M+Acos(wt+Φ)拟合时间节律性[2]。
2 结果
, 百拇医药
2.1 溶菌酶含量的变化
2.1.1 两组工人的唾液溶菌酶含量明显高于对照组，甲基1605车间的工人在各时点上与对照组比较差异无显著性，而甲胺磷车间的工人在9∶00、13∶00、17∶00、21∶00差异均存在显著性，尤以13∶00差异最显著。
2.1.2 两组工人间比较，甲胺磷车间工人的唾液溶菌酶含量高于甲基1605车间的工人，且在13∶00差异有显著性。
2.1.3 5个时点溶菌酶含量两两比较，可见甲基1605车间的工人5∶00显著高于9∶00及13∶00，而甲胺磷车间的工人及对照组的溶菌酶含量在各时点差异无显著性。结果见表1。
表1 两组工人及对照组不同时点唾液中溶菌酶的检测结果(
±s mg/ml) 组别
, 百拇医药
5∶00
9∶00
13∶00
17∶00
21∶00±s
对照组
0.32±0.36
0.15±0.10
0.18±0.15
0.22±0.30
0.25±0.33
, http://www.100md.com
0.22±0.44
1605组
0.62±0.55
0.23±0.07
0.23±0.11＃
0.37±0.26
0.42±0.30
0.31±0.34*
甲胺磷组
0.52±0.35
0.51±0.45
, 百拇医药
0.40±0.14**
0.61±0.33*
0.58±0.49
0.56±0.38**
与对照比较，*P<0.05，**P<0.01；两工人组同一时间点比较，#P<0.053 SIgA含量的变化
3.1 甲基1605车间工人的SIgA含量显著低于对照组，在21∶00尤为明显。甲胺磷车间的工人与对照组比较，差异无显著性。溶菌酶含量：log(y)=-4.007+1.5808x，r=0.997，其中y为唾液溶菌酶的浓度(mg/ml)，x为抑菌圈直径(cm) 表2 两工人组及对照组不同时点唾液中SIgA的检测结果(μg/ml)
, 百拇医药
组别
5∶00
9∶00
13∶00
17∶00
21∶00±s
对照组
234.9±127.7
142.9±41.4
167.7±75.3
155.3±72.0
, 百拇医药
164.5±89.0
173.1±91.6
1605组
154.4±242.2
119.6±135.4
142.9±139.4
86.0±139.4
63.8±71.2*
113.3±159.2*
甲胺磷组
145.7±135.0
, 百拇医药
191.0±113.2
142.2±92.9
162.9±131.1
162.6±89.0＃＃
160.5±115.1
与对照比较，*P<0.05；两工人组同一时间点比较，##P<0.01
SIgA含量：logit(y)=1.3027+1.1457log(x)，r=0.988，其中x为唾液SIgA的浓度(μg/ml)，y为结合率.
3.2 两组工人间比较，甲基1605车间工人组在21∶00的IgA含量显著低于甲胺磷车间工人组。
, http://www.100md.com
3.3 5个时点SIgA含量两两比较，各组工人的SIgA含量在各时点差异无显著性，结果见表2。
4 昼夜时间节律
要判断某项指标的昼夜生理节律，免疫时间毒理学上常用余弦即Y=M+Acos(wt+Φ)进行拟合，其中Y为指标某一时间点的测定值，M为24h内检测的平均值即中值，A是振幅，w为角速度，以角度为单位是w=360°/24=15度h,t是检测时间点，常用24h制表示，Φ为初相位。并且对振幅A进行检测，P<0.05时说明该节律是存在的。
由表3可见，对照组的溶菌酶和SIgA均不存在节律性(P>0.05)，而甲基1605车间工人的溶菌酶存在节律性。
表3 两组工人及对照组溶菌酶和SIgA节律性的改变 项目
组别
, http://www.100md.com
M
A
Φ
P值
溶菌酶
对照组
甲基1605组
甲胺磷组
0.247
0.426
0.552
0.114
0.262
, 百拇医药
0.147
-15°
-19°
-357°
>0.05
<0.05
>0.05
SIgA
对照组
甲基1605组
甲胺磷组
184.43
113.92
, http://www.100md.com
164.95
59.08
35.97
20.79
-31°
-100°
-24°
>0.05
>0.05
>0.05
5 讨论
唾液溶菌酶是体液中一种具有非特异性杀菌功能的蛋白水解酶，而SIgA则是体液免疫中的一种特异性抗体。它们共同抵抗微生物和化学物的侵犯以维持机体的稳定[1，5，6]。因此，唾液溶菌酶和SIgA在体内的含量反映着机体的免疫水平[8]。本研究发现，接触有机磷浓药工人的唾液溶菌酶含量明显高于正常人，而SIgA含量显著低于正常人。尤其值得注意的是，空气中有机磷农药浓度较高的甲胺磷车间，工人溶菌酶的含量也高于甲基1605车间工人组：空气中有机磷农药浓度较低的甲基1605车间，工人SIgA的含量显著低于对照组，而甲胺磷车间工人SIgA的含量与对照组无差异。可能揭示：(1)有机磷农药能加强机体的非特异性体液因子，并能抑制机体的体液免疫水平；(2)有机磷农药对作业工人唾液溶菌酶的分泌有刺激作用，且明显强于对唾液分泌SIgA的作用；(3)一定范围内，空气中农药的浓度越高，其对唾液溶菌酶分泌的刺激作用就越大，唾液溶菌酶含量也就越高；(4)甲基1605较甲胺磷农药更易损害机体的特异性免疫系统。
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对溶菌酶和SIgA昼夜生理节律的观察发现，除甲基1605车间工人的溶菌酶存在节律性外，其余各组的溶菌酶和SIgA均不存在节律性，仅呈现有一定的波动规律，溶菌酶和SIgA的分泌峰值都在早晨5∶00，而谷值则在上午9∶00。由于观察的时间比较短，样本例数较少，尚需大量人群长期观察和检测。另外还发现，甲胺磷车间工人，与对照组比较除5∶00外，其余各时点差异均有显著性，尤为13∶00最显著，说明该浓度甲胺磷农药对工人唾液溶菌酶的分泌影响较大，且在13∶00最为敏感；甲基1605车间工人SIgA的分泌明显不同于对照组，且在21∶00更为显著，说明甲基1605对工人SIgA分泌规律影响较大，且在21∶00唾液SIgA对甲基1605最为敏感。因此，中午13∶00可作为评价甲胺磷农药对工人溶菌酶影响的最佳检测时点，而21∶00可作为临床早期检测甲基1605对工人唾液SIgA改变的最佳时机。
各时点间两两比较可见，甲基1605车间工人5∶00的溶菌酶含量显著高于9∶00及13∶00，而对照组及甲胺磷车间工人溶菌酶在各个时点上差异无显著性。这可能由于白天接触农药的水平较高，机体免疫系统受损，而经过一夜的恢复，机体的免疫水平有所提高；也可能由于白天人体分泌的唾液量较多，而清晨分泌的唾液较粘稠。
, http://www.100md.com
参考文献
[1] 姚志麒，主编.环境卫生学.北京：人民卫生出版社，1994.293-295.
[2] 童建.免疫系统的昼夜生理节律.免疫学杂志，1995，11：99-101.
[3] 薛彬，主编.免疫毒理学实验技术.北京：北京医科大学协和医科大学联合出版社，1995.132-134..
[4] 陈德珍.脾肾阴虚证病人啤液溶菌酶和唾液流速测定及分析.江苏中医，1996，17：42-43.
[5] 陆可望.唾液溶菌酶、乳酸脱氢酶活性水平与牙周炎症关系的初步探讨.口腔医学，1984，4：129-130.
[6] 陆可望.唾液溶菌酶.国外医学口腔医学分册，1982，9：138-139.
, http://www.100md.com
[7] Virella G.Measurment of salivary lysozyme.J Dent Res,1987,57.326-329.
[8] 李玲巧，刘玲，邹晓坡，等.小儿呼吸系统疾病唾液溶菌酶活力的改变.临床儿科杂志，1995，13：16-17.
[9] 于晓霞，范小琴，刘乃好，等.唾液溶菌酶的测定分析.现代口腔医学杂志，1995，9：135-136.
[10] 郑武飞，主编.医学免疫学.北京：人民卫生出版社，1989.124-126.
(收稿日期：1998-11-18)
, 百拇医药
单位：苏州医学院预防医学系，215007
关键词：
卫生毒理学杂志000117 农药对人体影响的研究目前较多集中于农药的一般毒性、神经毒性、“三致”效应，而对免疫系统影响的研究较少[1]。近20年来，随着免疫毒理学的兴起和发展，人们对农药的免疫毒理作用日益重视[2，3]。我们试图用免疫时间毒理学的方法，将时间生物学和免疫毒理学结合起来研究农药和机体免疫节律的相互关系，探讨农药的时间毒性作用。
1 对象与方法
1.1 检测对象及样本处理
1.1.1 检测对象 实验组：苏州市化工农药集团甲胺磷车间及甲基1605车间工人各10人，其中男5人，女15人。年龄27～59岁(平均年龄为43岁)。接触农药时间≥5年。空气中有机磷农药浓度：甲胺磷车间为0.945 mg/m3，甲基1605车间为0.335 mg/m3。对照组：按照实验组的性别年龄构成设立未接触农药的健康人20名。两组被检测者均无口腔疾患及全身系统性疾病，采样期间未接受任何药物治疗。
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1.2 样本处理 采样时间为5∶00、9∶00、13∶00、17∶00和21∶00，空腹或饭后1h以上，采用吐唾法，收集2～3 ml全唾液。将采集的唾液用pH=6.4磷酸缓冲液作1∶10稀释、标号，冰箱保存待用。
1.3 唾液溶菌酶的测定 采用琼脂平板测定法[4～9]。微球菌由苏州医学院微生物教研室提供。溶菌酶标准品由上海丽珠东风生物技术有限公司提供。
1.4 唾液SIgA的测定 采用放射免疫测定法[10]。放射免疫药盒由上海放射免疫分析技术研究所提供，计数器为国营二六二厂FJ-2008自动γ免疫计数器。
1.5 数据处理 采用t检验，以Y=M+Acos(wt+Φ)拟合时间节律性[2]。
2 结果
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2.1 溶菌酶含量的变化
2.1.1 两组工人的唾液溶菌酶含量明显高于对照组，甲基1605车间的工人在各时点上与对照组比较差异无显著性，而甲胺磷车间的工人在9∶00、13∶00、17∶00、21∶00差异均存在显著性，尤以13∶00差异最显著。
2.1.2 两组工人间比较，甲胺磷车间工人的唾液溶菌酶含量高于甲基1605车间的工人，且在13∶00差异有显著性。
2.1.3 5个时点溶菌酶含量两两比较，可见甲基1605车间的工人5∶00显著高于9∶00及13∶00，而甲胺磷车间的工人及对照组的溶菌酶含量在各时点差异无显著性。结果见表1。
表1 两组工人及对照组不同时点唾液中溶菌酶的检测结果(
±s mg/ml) 组别, 百拇医药
5∶00
9∶00
13∶00
17∶00
21∶00
±s对照组
0.32±0.36
0.15±0.10
0.18±0.15
0.22±0.30
0.25±0.33
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0.22±0.44
1605组
0.62±0.55
0.23±0.07
0.23±0.11＃
0.37±0.26
0.42±0.30
0.31±0.34*
甲胺磷组
0.52±0.35
0.51±0.45
, 百拇医药
0.40±0.14**
0.61±0.33*
0.58±0.49
0.56±0.38**
与对照比较，*P<0.05，**P<0.01；两工人组同一时间点比较，#P<0.053 SIgA含量的变化
3.1 甲基1605车间工人的SIgA含量显著低于对照组，在21∶00尤为明显。甲胺磷车间的工人与对照组比较，差异无显著性。溶菌酶含量：log(y)=-4.007+1.5808x，r=0.997，其中y为唾液溶菌酶的浓度(mg/ml)，x为抑菌圈直径(cm) 表2 两工人组及对照组不同时点唾液中SIgA的检测结果(μg/ml)
, 百拇医药
组别
5∶00
9∶00
13∶00
17∶00
21∶00
±s对照组
234.9±127.7
142.9±41.4
167.7±75.3
155.3±72.0
, 百拇医药
164.5±89.0
173.1±91.6
1605组
154.4±242.2
119.6±135.4
142.9±139.4
86.0±139.4
63.8±71.2*
113.3±159.2*
甲胺磷组
145.7±135.0
, 百拇医药
191.0±113.2
142.2±92.9
162.9±131.1
162.6±89.0＃＃
160.5±115.1
与对照比较，*P<0.05；两工人组同一时间点比较，##P<0.01
SIgA含量：logit(y)=1.3027+1.1457log(x)，r=0.988，其中x为唾液SIgA的浓度(μg/ml)，y为结合率.
3.2 两组工人间比较，甲基1605车间工人组在21∶00的IgA含量显著低于甲胺磷车间工人组。
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3.3 5个时点SIgA含量两两比较，各组工人的SIgA含量在各时点差异无显著性，结果见表2。
4 昼夜时间节律
要判断某项指标的昼夜生理节律，免疫时间毒理学上常用余弦即Y=M+Acos(wt+Φ)进行拟合，其中Y为指标某一时间点的测定值，M为24h内检测的平均值即中值，A是振幅，w为角速度，以角度为单位是w=360°/24=15度h,t是检测时间点，常用24h制表示，Φ为初相位。并且对振幅A进行检测，P<0.05时说明该节律是存在的。
由表3可见，对照组的溶菌酶和SIgA均不存在节律性(P>0.05)，而甲基1605车间工人的溶菌酶存在节律性。
表3 两组工人及对照组溶菌酶和SIgA节律性的改变 项目
组别
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M
A
Φ
P值
溶菌酶
对照组
甲基1605组
甲胺磷组
0.247
0.426
0.552
0.114
0.262
, 百拇医药
0.147
-15°
-19°
-357°
>0.05
<0.05
>0.05
SIgA
对照组
甲基1605组
甲胺磷组
184.43
113.92
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164.95
59.08
35.97
20.79
-31°
-100°
-24°
>0.05
>0.05
>0.05
5 讨论
唾液溶菌酶是体液中一种具有非特异性杀菌功能的蛋白水解酶，而SIgA则是体液免疫中的一种特异性抗体。它们共同抵抗微生物和化学物的侵犯以维持机体的稳定[1，5，6]。因此，唾液溶菌酶和SIgA在体内的含量反映着机体的免疫水平[8]。本研究发现，接触有机磷浓药工人的唾液溶菌酶含量明显高于正常人，而SIgA含量显著低于正常人。尤其值得注意的是，空气中有机磷农药浓度较高的甲胺磷车间，工人溶菌酶的含量也高于甲基1605车间工人组：空气中有机磷农药浓度较低的甲基1605车间，工人SIgA的含量显著低于对照组，而甲胺磷车间工人SIgA的含量与对照组无差异。可能揭示：(1)有机磷农药能加强机体的非特异性体液因子，并能抑制机体的体液免疫水平；(2)有机磷农药对作业工人唾液溶菌酶的分泌有刺激作用，且明显强于对唾液分泌SIgA的作用；(3)一定范围内，空气中农药的浓度越高，其对唾液溶菌酶分泌的刺激作用就越大，唾液溶菌酶含量也就越高；(4)甲基1605较甲胺磷农药更易损害机体的特异性免疫系统。
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对溶菌酶和SIgA昼夜生理节律的观察发现，除甲基1605车间工人的溶菌酶存在节律性外，其余各组的溶菌酶和SIgA均不存在节律性，仅呈现有一定的波动规律，溶菌酶和SIgA的分泌峰值都在早晨5∶00，而谷值则在上午9∶00。由于观察的时间比较短，样本例数较少，尚需大量人群长期观察和检测。另外还发现，甲胺磷车间工人，与对照组比较除5∶00外，其余各时点差异均有显著性，尤为13∶00最显著，说明该浓度甲胺磷农药对工人唾液溶菌酶的分泌影响较大，且在13∶00最为敏感；甲基1605车间工人SIgA的分泌明显不同于对照组，且在21∶00更为显著，说明甲基1605对工人SIgA分泌规律影响较大，且在21∶00唾液SIgA对甲基1605最为敏感。因此，中午13∶00可作为评价甲胺磷农药对工人溶菌酶影响的最佳检测时点，而21∶00可作为临床早期检测甲基1605对工人唾液SIgA改变的最佳时机。
各时点间两两比较可见，甲基1605车间工人5∶00的溶菌酶含量显著高于9∶00及13∶00，而对照组及甲胺磷车间工人溶菌酶在各个时点上差异无显著性。这可能由于白天接触农药的水平较高，机体免疫系统受损，而经过一夜的恢复，机体的免疫水平有所提高；也可能由于白天人体分泌的唾液量较多，而清晨分泌的唾液较粘稠。
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参考文献
[1] 姚志麒，主编.环境卫生学.北京：人民卫生出版社，1994.293-295.
[2] 童建.免疫系统的昼夜生理节律.免疫学杂志，1995，11：99-101.
[3] 薛彬，主编.免疫毒理学实验技术.北京：北京医科大学协和医科大学联合出版社，1995.132-134..
[4] 陈德珍.脾肾阴虚证病人啤液溶菌酶和唾液流速测定及分析.江苏中医，1996，17：42-43.
[5] 陆可望.唾液溶菌酶、乳酸脱氢酶活性水平与牙周炎症关系的初步探讨.口腔医学，1984，4：129-130.
[6] 陆可望.唾液溶菌酶.国外医学口腔医学分册，1982，9：138-139.
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[7] Virella G.Measurment of salivary lysozyme.J Dent Res,1987,57.326-329.
[8] 李玲巧，刘玲，邹晓坡，等.小儿呼吸系统疾病唾液溶菌酶活力的改变.临床儿科杂志，1995，13：16-17.
[9] 于晓霞，范小琴，刘乃好，等.唾液溶菌酶的测定分析.现代口腔医学杂志，1995，9：135-136.
[10] 郑武飞，主编.医学免疫学.北京：人民卫生出版社，1989.124-126.
(收稿日期：1998-11-18)
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