大鼠严重烧伤后核黄素早期使用对肠源性感染的影响
作者：荣新洲 肖光夏 张雅萍 周一平 李志清
单位：荣新洲(第一军医大学南方医院烧伤科，广东 广州 510515)；肖光夏(第三军医大学西南医院烧伤研究所，重庆 400038)；张雅萍(第三军医大学西南医院烧伤研究所，重庆 400038)；周一平(第一军医大学南方医院烧伤科，广东 广州 510515)；李志清(第一军医大学南方医院烧伤科，广东 广州 510515)
关键词：烧伤；感染；核黄素
第一军医大学学报000106 摘要：目的 观察早期使用核黄素对烧伤后肠源性感染发生、发展的影响。方法 采用大鼠30% Ⅲ度烧伤模型并通过胃肠道管饲产灵菌红素的粘质沙雷氏菌示踪，检测血浆内毒素含量和肠道示踪菌的播散情况，比较核黄素腹腔治疗与单纯烧伤之间的差异。结果 治疗组伤后12 h血浆内毒素含量显著低于烧伤对照组(P<0.01)，伤后24 h治疗组肠道示踪菌较对照组在血液、痂下、肾、肺的阳性检出率明显降低(P<0.05)；肺、肾、痂下等组织的示踪菌定量也明显降低(P<0.05)。结论 核黄素的早期使用可降低严重烧伤大鼠肠源性内毒素的吸收入血量，减轻肠道细菌的全身播散发生率及其程度。
, 百拇医药
中图分类号：R644 文献标识码：A 文章编号：1000-2588(2000)01-0019-03
An experimental study on the effect of early use of riboflavin on enterogenous infection after thermal injury in rats
RONG Xin-zhou, ZHOU Yi-ping, LI Zhi-qing
(Department of Burn, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
XIAO Guang-xia, ZHANG Ya-ping
, 百拇医药
(Institute of Burn Research, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China)
Abstract: Objective To observe the effect of early use of riboflavin on the enterogenous infection following severe burns in rats. Methods Sixty Wistar rats were divided into 3 groups: treated group (20 rats), control group (20 rats), and normal group (20 rats). A model of 30% TBSA full thickness scald was created on the back of rats in the treated and control group, and Serratia macescens producing prodigiosin were simulatneously introduced into the gastrointestinal tract in the 3 groups. Scalded rats were treated with riboflavin via intraperitoneal injection in treated group and the same volume of saline in control group. The concentration of endotoxin in plasma and the tracing bacteria migrating to varied tissues were determined. Results In treated group, the level of endotoxin in plasma decreased significantly 12 h post-burn(P<0.01) and the positive rate of tracing bacteria migrating into blood, subeschar tissue, kindneys and lungs was reduced as well(P<0.05), and the quantity of above microbe in kidneys, lungs and subeschar tissue was lowered(P<0.05)compared with that of control group. Conclusion The early use of riboflavin after burns could improve the condition of endotoxemia and alleviate the extensive migration of gut flora.
, 百拇医药
Key words: burn; infection; riboflavin
肠源性感染系指各种病理情况下肠道微生物穿过肠粘膜屏障侵入血流和淋巴，继而在脏器组织中繁殖引起感染的全过程，国外称之为肠道菌移位(microbial translocation from gut)[1],其积极有效的防治方法也正处在探索之中。我们既往的研究已显示出核黄素的早期使用可减轻严重烧伤后应激和脂质过氧化损害,亦可保护肠粘膜屏障的相对完整性[2，3]，且临床上可多种途径使用[4]，故严重烧伤后早期使用核黄素是否能减轻肠源性内毒素血症和细菌播散，是一个值得探讨的问题。
1 材料与方法
1.1 动物模型与分组
本实验采用Wistar 大鼠60只，体质量(200±20)g，制成30%TBSA Ⅲ°背部烫伤，创面以磺胺密啶银涂抹，然后将动物随机分为两组：(1)治疗组即烫伤+肠道给菌+核黄素治疗组。(2)对照组即烫伤+肠道给菌+生理盐水治疗组。另再设置正常对照组。3组动物分别单笼喂养。
, http://www.100md.com
1.2 示踪菌及制备
选用粘质沙雷氏菌(产灵菌红素，四川医学检验中心提供)，制成浓度为1012 CFU/L的菌悬液，4 ℃保存，备用。
1.3 给菌方法
全部动物禁食12 h后，以硅胶管胃饲1.5% NaHCO3，剂量为0.5 ml/100 g b.w.；1 min 后再饲示踪菌液1 ml/100 g b.w.。
1.4 治疗过程
烫伤后治疗组在抗休克液(4 ml/100 g b.w.等渗盐水)中加核黄素注射液(60 g/ml)，对照组仅补充等渗盐水，正常组动物自由饮水。
1.5 取材与检测
, http://www.100md.com
伤后12 h在乙醚麻醉下分别取正常组、对照组、治疗组动物腔静脉血1～2 ml作血浆内毒素含量测定，方法采用鲎试剂基质显色法。伤后24 h活杀动物取血液及肝、肾、肺、痂下组织作示踪细菌定性和定量培养。
1.6 统计学处理
本实验数据根据不同情况，分别作χ2、t检验，并以
±s表示。
2 结果
2.1 血浆内毒素的变化
实验结果显示，烧伤对照组动物血浆内毒素水平明显高于正常水平，经核黄素治疗的动物血浆内毒素含量明显低于对照组(P<0.01，表1)。
表1 伤后12 h血浆内毒素水平(ng/L)
, 百拇医药
Tab.1 The level of endotoxin in plasma 12 h postburn (ng/L) Group
n
endotoxin
Normal
10
2 9.516±4.708
Control
10
58.020±27.529
Treated
, 百拇医药 10
29.836±6.709**
** P<0.01 vs control group
2.2 被检组织器官肠道示踪菌的阳性检出率
伤后24 h治疗组血液、肺、肝、肾及痂下示踪菌阳性检出率均低于对照组，其中以血、肾、痂下更为明显(P<0.05，表2)。
表2 伤后24 h各器官(组织)示踪菌阳性检出率(%)
Tab.2 The positive rate of tracing bacteria in varied tissues 24 h postburn (%) Group
n
, 百拇医药
Blood
Lungs
Liver
Kidneys
Subeschar
Normal
10
0
0
0
0
0
Control
, 百拇医药
10
80
70
60
70
70
Treated
10
20*
20
20
10*
10*
, 百拇医药 * P<0.01 vs control group
2.3 被检组织器官肠道示踪菌定量培养结果
总体而言，治疗组被检标本的示踪菌量均低于对照组，但在肺、肾、痂下等组织则表现得更为显著(P<0.05，图1)。
3 讨论
肠源性感染在危重病人中是较普遍的临床现象，而在严重烧伤患者则更具特殊的意义。大面积烧伤后，强烈的
图1 伤后24 h组织脏器沙雷氏菌定量检测结果(log CFU/g)
Fig.1 The quantitative result of the tracing bacteria in varied tissues 24 h postburn (log CFU /g)* P<0.05
, 百拇医药
应激反应使肠粘膜完整性受到损害，肠道细菌及内毒素也随之大量移位，进入血流和全身。最近我们的研究还发现，无论来自临床标本或是实验动物标本，肠道细菌可移位于烧伤痂下水肿液之中，且移位发生时间早、繁殖快，对患者生命构成严重威胁[5，6]。因此，烧伤后肠源性感染的防治亟待解决。
肠粘膜屏障在阻止肠道微生物及内毒素移位中起主导作用[7],而核黄素能有效地防止烧伤后肠粘膜的损害[3],推测核黄素可能对肠源性感染的预防有积极效果。本研究显示，大鼠严重烧伤后早期腹腔注射核黄素，血浆内毒素水平与正常对照组比仅有轻度增加，而与烧伤对照组比则仅为其1/2水平(P<0.01)；肠道示踪菌在血液、肾、痂下组织阳性检出率较烧伤对照组显著降低，肺、肾、痂下组织的示踪菌定量培养也较烧伤对照组明显降低(P<0.05)，表明核黄素早期应用既能降低血浆内毒素水平，又能减轻肠道细菌向全身播散的广泛程度以及细菌移位的数量。
, http://www.100md.com 由于核黄素是一个有效的氧化还原复合体(redox)，总是在机体受到伤害时将反应向有利于机体的方向逆转，过去我们观察到严重烧伤后早期使用核黄素能降低应激反应程度，减轻脂质过氧化损害[2，3]，正是这一特性的体现。它对肠源性感染的防治机理，也是通过减轻应激和脂质过氧化损害，从而维持肠粘膜屏障功能来实现的。
全军重点科研基金资助项目
参考文献
[1]Alexander JW. The process of microbial translocation[J]. Ann Surg, 1990, 212(4): 496～510.
[2]荣新洲，肖光夏，黎 鳌等. 核黄素对烧伤后早期损害的防治作用[J]. 第三军医大学学报，1996, 18(5):387～9.
, http://www.100md.com
[3]荣新洲，肖光夏，黎 鳌等. 核黄素对大鼠烧伤早期肠粘膜损害的防治效果[J]. 第一军医大学学报，1999, 19(6): 494～7.
[4]荣新洲，肖光夏，李志清等. 烧伤早期核黄素不同补充方式对其尿中含量的影响[J]. 第一军医大学学报，1998, 18(4):274～5.
[5]荣新洲，周一平，吴永恒等. 烧伤患者痂下水肿液感染源的初步分析[J]. 第一军医大学学报，1999, 19(3):245～6.
[6]荣新洲，陈惠英，肖光夏等. 严重烧伤后肠道细菌移位于痂下水肿液的实验研究[J]. 第一军医大学学报，1999, 19(9):399～401.
[7]Deith EA. Bacterial translocation of the gut fiora[J]. J Trauma, 1990, 30:5184～7.
1999-03-21, http://www.100md.com
单位：荣新洲(第一军医大学南方医院烧伤科，广东 广州 510515)；肖光夏(第三军医大学西南医院烧伤研究所，重庆 400038)；张雅萍(第三军医大学西南医院烧伤研究所，重庆 400038)；周一平(第一军医大学南方医院烧伤科，广东 广州 510515)；李志清(第一军医大学南方医院烧伤科，广东 广州 510515)
关键词：烧伤；感染；核黄素
第一军医大学学报000106 摘要：目的 观察早期使用核黄素对烧伤后肠源性感染发生、发展的影响。方法 采用大鼠30% Ⅲ度烧伤模型并通过胃肠道管饲产灵菌红素的粘质沙雷氏菌示踪，检测血浆内毒素含量和肠道示踪菌的播散情况，比较核黄素腹腔治疗与单纯烧伤之间的差异。结果 治疗组伤后12 h血浆内毒素含量显著低于烧伤对照组(P<0.01)，伤后24 h治疗组肠道示踪菌较对照组在血液、痂下、肾、肺的阳性检出率明显降低(P<0.05)；肺、肾、痂下等组织的示踪菌定量也明显降低(P<0.05)。结论 核黄素的早期使用可降低严重烧伤大鼠肠源性内毒素的吸收入血量，减轻肠道细菌的全身播散发生率及其程度。
, 百拇医药
中图分类号：R644 文献标识码：A 文章编号：1000-2588(2000)01-0019-03
An experimental study on the effect of early use of riboflavin on enterogenous infection after thermal injury in rats
RONG Xin-zhou, ZHOU Yi-ping, LI Zhi-qing
(Department of Burn, Nanfang Hospital, First Military Medical University, Guangzhou 510515, China)
XIAO Guang-xia, ZHANG Ya-ping
, 百拇医药
(Institute of Burn Research, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China)
Abstract: Objective To observe the effect of early use of riboflavin on the enterogenous infection following severe burns in rats. Methods Sixty Wistar rats were divided into 3 groups: treated group (20 rats), control group (20 rats), and normal group (20 rats). A model of 30% TBSA full thickness scald was created on the back of rats in the treated and control group, and Serratia macescens producing prodigiosin were simulatneously introduced into the gastrointestinal tract in the 3 groups. Scalded rats were treated with riboflavin via intraperitoneal injection in treated group and the same volume of saline in control group. The concentration of endotoxin in plasma and the tracing bacteria migrating to varied tissues were determined. Results In treated group, the level of endotoxin in plasma decreased significantly 12 h post-burn(P<0.01) and the positive rate of tracing bacteria migrating into blood, subeschar tissue, kindneys and lungs was reduced as well(P<0.05), and the quantity of above microbe in kidneys, lungs and subeschar tissue was lowered(P<0.05)compared with that of control group. Conclusion The early use of riboflavin after burns could improve the condition of endotoxemia and alleviate the extensive migration of gut flora.
, 百拇医药
Key words: burn; infection; riboflavin
肠源性感染系指各种病理情况下肠道微生物穿过肠粘膜屏障侵入血流和淋巴，继而在脏器组织中繁殖引起感染的全过程，国外称之为肠道菌移位(microbial translocation from gut)[1],其积极有效的防治方法也正处在探索之中。我们既往的研究已显示出核黄素的早期使用可减轻严重烧伤后应激和脂质过氧化损害,亦可保护肠粘膜屏障的相对完整性[2，3]，且临床上可多种途径使用[4]，故严重烧伤后早期使用核黄素是否能减轻肠源性内毒素血症和细菌播散，是一个值得探讨的问题。
1 材料与方法
1.1 动物模型与分组
本实验采用Wistar 大鼠60只，体质量(200±20)g，制成30%TBSA Ⅲ°背部烫伤，创面以磺胺密啶银涂抹，然后将动物随机分为两组：(1)治疗组即烫伤+肠道给菌+核黄素治疗组。(2)对照组即烫伤+肠道给菌+生理盐水治疗组。另再设置正常对照组。3组动物分别单笼喂养。
, http://www.100md.com
1.2 示踪菌及制备
选用粘质沙雷氏菌(产灵菌红素，四川医学检验中心提供)，制成浓度为1012 CFU/L的菌悬液，4 ℃保存，备用。
1.3 给菌方法
全部动物禁食12 h后，以硅胶管胃饲1.5% NaHCO3，剂量为0.5 ml/100 g b.w.；1 min 后再饲示踪菌液1 ml/100 g b.w.。
1.4 治疗过程
烫伤后治疗组在抗休克液(4 ml/100 g b.w.等渗盐水)中加核黄素注射液(60 g/ml)，对照组仅补充等渗盐水，正常组动物自由饮水。
1.5 取材与检测
, http://www.100md.com
伤后12 h在乙醚麻醉下分别取正常组、对照组、治疗组动物腔静脉血1～2 ml作血浆内毒素含量测定，方法采用鲎试剂基质显色法。伤后24 h活杀动物取血液及肝、肾、肺、痂下组织作示踪细菌定性和定量培养。
1.6 统计学处理
本实验数据根据不同情况，分别作χ2、t检验，并以
±s表示。2 结果
2.1 血浆内毒素的变化
实验结果显示，烧伤对照组动物血浆内毒素水平明显高于正常水平，经核黄素治疗的动物血浆内毒素含量明显低于对照组(P<0.01，表1)。
表1 伤后12 h血浆内毒素水平(ng/L)
, 百拇医药
Tab.1 The level of endotoxin in plasma 12 h postburn (ng/L) Group
n
endotoxin
Normal
10
2 9.516±4.708
Control
10
58.020±27.529
Treated
, 百拇医药 10
29.836±6.709**
** P<0.01 vs control group
2.2 被检组织器官肠道示踪菌的阳性检出率
伤后24 h治疗组血液、肺、肝、肾及痂下示踪菌阳性检出率均低于对照组，其中以血、肾、痂下更为明显(P<0.05，表2)。
表2 伤后24 h各器官(组织)示踪菌阳性检出率(%)
Tab.2 The positive rate of tracing bacteria in varied tissues 24 h postburn (%) Group
n
, 百拇医药
Blood
Lungs
Liver
Kidneys
Subeschar
Normal
10
0
0
0
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0
Control
, 百拇医药
10
80
70
60
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Treated
10
20*
20
20
10*
10*
, 百拇医药 * P<0.01 vs control group
2.3 被检组织器官肠道示踪菌定量培养结果
总体而言，治疗组被检标本的示踪菌量均低于对照组，但在肺、肾、痂下等组织则表现得更为显著(P<0.05，图1)。
3 讨论
肠源性感染在危重病人中是较普遍的临床现象，而在严重烧伤患者则更具特殊的意义。大面积烧伤后，强烈的
图1 伤后24 h组织脏器沙雷氏菌定量检测结果(log CFU/g)Fig.1 The quantitative result of the tracing bacteria in varied tissues 24 h postburn (log CFU /g)* P<0.05
, 百拇医药
应激反应使肠粘膜完整性受到损害，肠道细菌及内毒素也随之大量移位，进入血流和全身。最近我们的研究还发现，无论来自临床标本或是实验动物标本，肠道细菌可移位于烧伤痂下水肿液之中，且移位发生时间早、繁殖快，对患者生命构成严重威胁[5，6]。因此，烧伤后肠源性感染的防治亟待解决。
肠粘膜屏障在阻止肠道微生物及内毒素移位中起主导作用[7],而核黄素能有效地防止烧伤后肠粘膜的损害[3],推测核黄素可能对肠源性感染的预防有积极效果。本研究显示，大鼠严重烧伤后早期腹腔注射核黄素，血浆内毒素水平与正常对照组比仅有轻度增加，而与烧伤对照组比则仅为其1/2水平(P<0.01)；肠道示踪菌在血液、肾、痂下组织阳性检出率较烧伤对照组显著降低，肺、肾、痂下组织的示踪菌定量培养也较烧伤对照组明显降低(P<0.05)，表明核黄素早期应用既能降低血浆内毒素水平，又能减轻肠道细菌向全身播散的广泛程度以及细菌移位的数量。
, http://www.100md.com 由于核黄素是一个有效的氧化还原复合体(redox)，总是在机体受到伤害时将反应向有利于机体的方向逆转，过去我们观察到严重烧伤后早期使用核黄素能降低应激反应程度，减轻脂质过氧化损害[2，3]，正是这一特性的体现。它对肠源性感染的防治机理，也是通过减轻应激和脂质过氧化损害，从而维持肠粘膜屏障功能来实现的。
全军重点科研基金资助项目
参考文献
[1]Alexander JW. The process of microbial translocation[J]. Ann Surg, 1990, 212(4): 496～510.
[2]荣新洲，肖光夏，黎 鳌等. 核黄素对烧伤后早期损害的防治作用[J]. 第三军医大学学报，1996, 18(5):387～9.
, http://www.100md.com
[3]荣新洲，肖光夏，黎 鳌等. 核黄素对大鼠烧伤早期肠粘膜损害的防治效果[J]. 第一军医大学学报，1999, 19(6): 494～7.
[4]荣新洲，肖光夏，李志清等. 烧伤早期核黄素不同补充方式对其尿中含量的影响[J]. 第一军医大学学报，1998, 18(4):274～5.
[5]荣新洲，周一平，吴永恒等. 烧伤患者痂下水肿液感染源的初步分析[J]. 第一军医大学学报，1999, 19(3):245～6.
[6]荣新洲，陈惠英，肖光夏等. 严重烧伤后肠道细菌移位于痂下水肿液的实验研究[J]. 第一军医大学学报，1999, 19(9):399～401.
[7]Deith EA. Bacterial translocation of the gut fiora[J]. J Trauma, 1990, 30:5184～7.
1999-03-21, http://www.100md.com