自体软骨-软骨膜复合移植修复鼓膜
作者：赵云峰 吴展元 潘维忠 陈芝胜
单位：赵云峰 吴展元 潘维忠(广东省湛江中心人民医院耳鼻喉科 524037)；陈芝胜(湖北医科大学附属第一医院耳鼻喉科 430060)
关键词：复合自体移植；软骨-软骨膜；鼓室成形术
广东医学000107
【摘要】 目的 探讨自体软骨-软骨膜复合移植修复鼓膜的组织学转归及其在中耳乳突手术的应用前景。方法 将16只家兔双耳正常鼓膜切除后，用其自体耳廓软骨-软骨膜修复。并对术后不同时期移植物行组织学、扫描电镜、透射电镜观察。结果 术后1个月移植物已开始修，术后3个月移植物细胞形态、组织结构基本恢复正常，术后5个月修复完成，移植物鼓室面及外耳道面分别被覆光滑的单层立方上皮及复层鳞状上皮。结论 自体软骨-软骨膜是一种有前途的中耳乳突手术修复材料，值得进一步研究。
, http://www.100md.com
Experimental study on using composite cartilage-perichondrial autograft for tympanoplasty in rabbits
Zhao Yunfeng Wu Zhanyuan Pan Weizhong et al
(Department of Otolaryngology, Zhanjiang Central Hospital, Zhanjiang 524037)
【Abstract】 Objective To study the histological fate and clinical prospect of composite cartilage-perichondrial autograft (CCPA) in tympanoplasty.Methods Experimental tympanoplasty by using CCPA was carried out in 16 rabbits. Results Grafts were found adherent to the recipient site 1 month after operation.Histological staining with H-E revealed some abnormal chondrocytes within the lacunae, but there were cellular division and epithelization on both surfaces of the grafts. Morphology of chondrocytes and simple epithelium was nearly normal 3 months after operation. By the 5th month, chondrocytes were normal and graft edges healed completely without scar tissue formation. The medial surface was covered with simple cuboidal epithelium and the outer surface covered with squamous epithelium.Conclusion CCPA has a good prospect in tympanoplasty
, 百拇医药
【Key words】 Composite autograft Cartilage-perichondrial Tympanoplasty
鼓室成形术后病人的长期随访研究表明，术后鼓膜回缩、听骨粘连是影响鼓室成形手术远期疗效的重要因素[1～3]。针对这一临床课题，自体软骨-软骨膜复合移植应用于鼓室成形术重新引起人们的关注[1～3]。但软骨-软骨膜复合移植修复鼓膜的实验研究尚鲜见报道。本文即对自体软骨-软骨膜复合移植修复鼓膜的组织学转归、超微结构变化及其在中耳乳突手术的应用前景进行初步探讨。
1 材料与方法
1.1 动物模型制作 16只6个月龄左右、鼓膜正常的日本种大耳白兔，麻醉后双耳手术。先切取约1.5 cm×1 cm一面附软骨膜的耳廓软骨备用。耳后进路，手术显微镜下沿鼓沟切除鼓膜，并作耳道皮瓣。鼓室腔内放置适量明胶海绵。将切取的移植材料修剪成直径约0.5 cm的类圆形嵌于鼓沟内，附软骨膜面朝外耳道，软骨面朝鼓室腔，复位耳道皮瓣并覆盖移植物周边。外耳道用明胶海绵、碘仿纱条填塞。缝合耳后切口并肌注120万u长效青霉素。
, 百拇医药
1.2 观察方法 术后2周取出外耳道碘仿纱条，随后定期用电耳镜观察，并分别于术后1，3，5个月分批处死动物，对移植物行组织学观察，同时对术后5个月移植物行扫描电镜和透射电镜观察。
2 结果
16只动物中有6耳术后1个月内移植物感染坏死。1只动物术后2月余死亡。术后1个月处死一侧耳感染的6只动物，术后3个月处死3只动物，余6只动物术后5个月处死，分别取移植物观察。
2.1 电耳镜观察 未感染的26耳中，1耳移植物脱落，3耳移植物移位。22耳术后2周时移植物苍白，术后1月转为红色，术后3月呈淡红色，术后5个月移植物呈淡红色，表面光滑，无移位及明显增厚。
2.2 组织学观察(HE染色) 术后1个月共观察6耳。1耳移植物移位，5耳移植物鼓室面及外耳道面均有单层上皮移行，上皮呈岛状。软骨细胞有不同程度水肿，染色质边集，甚至细胞核碎裂。软骨细胞分裂像少，胶原纤维松散。移植物周边与骨壁结合处肉芽组织增生，微血管及成纤维细胞丰富。术后3个月共观察6耳，其中2耳由瘢痕组织封闭穿孔，4耳移植物软骨细胞形态正常，软骨基质陷窝内可见同源细胞群和细胞分裂。移植物外耳道面复层鳞状上皮厚薄不均，鼓室面被覆单层上皮。胶原纤维粗大、排列规则。移植物周边与骨壁愈合良好，肉芽组织减少。术后5个月共观察8耳。8耳移植物软骨细胞形态正常，同源细胞群及细胞分裂多见，外耳道面复层鳞状上皮光滑、厚薄均匀。胶原纤维丰富、波纹状成束排列。移植物周边与骨壁愈合好，未见软骨吸收、钙化。Verhoeff染色显示移植物软骨基质内弹性纤维丰富。
, 百拇医药
2.3 扫描电镜和透射电镜观察 术后5个月移植物各取2耳，分别行扫描电镜和透射电镜观察。扫描电镜见移植物鼓室面覆单层立方上皮，软骨基质内弹性纤维丰富，在弹性纤维包绕中有散在的卵圆形软骨细胞。透射电镜见软骨细胞核染色质均匀、核膜清晰，粗面内质网发达、核蛋白体丰富。滑面内质网、高尔基小囊扩张，线粒体较小。
3 讨论
3.1 自体软骨-软骨膜复合移植组织学转归 本组动物实验表明，术后1个月，部分软骨细胞水肿、空泡形成甚至细胞核碎裂。这部分软骨细胞的功能减退或消失，可能与手术损伤有关[4]。软骨基质陷窝内仍存在一定数量的具有正常形态的软骨细胞和细胞分裂，表明移植物成活。术后3个月移植物组织形态、组织结构基本正常，鼓室面单层上皮光滑均匀，耳道面复层鳞状上皮厚薄不均，周边与骨壁连接处肉芽组织减少、纤维化，表明修复过程仍在继续。术后5个月，移植物与耳道骨壁紧密连接，愈合良好，外耳道面复层鳞状上皮、鼓室面单层立方上皮光滑、厚薄均匀，移植物已完成修复。Verfhoeff染色及透射电镜观察反映移植物软骨细胞功能活跃、代谢旺盛、成活好。未发现软骨吸收及钙化现象。
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3.2 在中耳乳突手术中的应用前景 目前，自体软骨-软骨膜复合移植的研究重点已由作为听骨替代物转向了它的抗鼓膜回缩能力。文献报道[5，6]利用自体耳屏软骨-软骨膜复合移植修补鼓膜穿孔，术后听力提高显著、修补成功率高。同时，该材料用于重建外耳道后壁、上鼓室外侧壁及充填乳突腔，既加强了对鼓膜的支撑，又避免了术后乳突因充填的软组织吸收而遗留空腔的问题[2，7]。
自体耳屏软骨-软骨膜取材方便、易于塑形，具有一定的弹性和硬度，移植易成活，是一种有前途的中耳乳突手术修复材料。近年来国外利用自体耳屏软骨-软骨膜行鼓室成形手术的报道有所增加，但尚未形成规范化术式，其临床效果尚待进一步长期观察。
参考文献
1，Buckingham RA. Fascia and perichondrium atrophy in tympanoplasty and recurrent middle ear atelectasis. Ann Otol Rhinol Laryngol, 1992, 101:755
, http://www.100md.com
2，Adkins WY. Composite autograft for tympanoplasty and tympanomastoid surgery. Laryngoscope, 1990, 100:244
3，Poe DS, Gadre AK. Cartilage tympanoplasty for management of retraction pockets and cholesteatoma. Laryngoscope, 1993, 103:614
4，鲍卫汉.幼兔耳软骨移植后增长的研究.中华整形烧伤外科杂志，1991，7：119
5，Moustafa HM. Tympano-cartilage-stapediopexy: a method to improve hearing in open technique tympanoplasty. J Laryngol Otol, 1990, 104:942
6，Duckert LG, Muller J, Makieloski KH, et al. Composite autograft shield reconstruction of remnant tympanic membrare. Am J Otol, 1995, 16(1):21
7，Milewski C. Composite graft tympanoplasty in the treatment of ears with advanced middle ear pathology. Laryngoscope, 1993, 103:1352
(收稿日期：1999-07-23), 百拇医药
单位：赵云峰 吴展元 潘维忠(广东省湛江中心人民医院耳鼻喉科 524037)；陈芝胜(湖北医科大学附属第一医院耳鼻喉科 430060)
关键词：复合自体移植；软骨-软骨膜；鼓室成形术
广东医学000107
【摘要】 目的 探讨自体软骨-软骨膜复合移植修复鼓膜的组织学转归及其在中耳乳突手术的应用前景。方法 将16只家兔双耳正常鼓膜切除后，用其自体耳廓软骨-软骨膜修复。并对术后不同时期移植物行组织学、扫描电镜、透射电镜观察。结果 术后1个月移植物已开始修，术后3个月移植物细胞形态、组织结构基本恢复正常，术后5个月修复完成，移植物鼓室面及外耳道面分别被覆光滑的单层立方上皮及复层鳞状上皮。结论 自体软骨-软骨膜是一种有前途的中耳乳突手术修复材料，值得进一步研究。
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Experimental study on using composite cartilage-perichondrial autograft for tympanoplasty in rabbits
Zhao Yunfeng Wu Zhanyuan Pan Weizhong et al
(Department of Otolaryngology, Zhanjiang Central Hospital, Zhanjiang 524037)
【Abstract】 Objective To study the histological fate and clinical prospect of composite cartilage-perichondrial autograft (CCPA) in tympanoplasty.Methods Experimental tympanoplasty by using CCPA was carried out in 16 rabbits. Results Grafts were found adherent to the recipient site 1 month after operation.Histological staining with H-E revealed some abnormal chondrocytes within the lacunae, but there were cellular division and epithelization on both surfaces of the grafts. Morphology of chondrocytes and simple epithelium was nearly normal 3 months after operation. By the 5th month, chondrocytes were normal and graft edges healed completely without scar tissue formation. The medial surface was covered with simple cuboidal epithelium and the outer surface covered with squamous epithelium.Conclusion CCPA has a good prospect in tympanoplasty
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【Key words】 Composite autograft Cartilage-perichondrial Tympanoplasty
鼓室成形术后病人的长期随访研究表明，术后鼓膜回缩、听骨粘连是影响鼓室成形手术远期疗效的重要因素[1～3]。针对这一临床课题，自体软骨-软骨膜复合移植应用于鼓室成形术重新引起人们的关注[1～3]。但软骨-软骨膜复合移植修复鼓膜的实验研究尚鲜见报道。本文即对自体软骨-软骨膜复合移植修复鼓膜的组织学转归、超微结构变化及其在中耳乳突手术的应用前景进行初步探讨。
1 材料与方法
1.1 动物模型制作 16只6个月龄左右、鼓膜正常的日本种大耳白兔，麻醉后双耳手术。先切取约1.5 cm×1 cm一面附软骨膜的耳廓软骨备用。耳后进路，手术显微镜下沿鼓沟切除鼓膜，并作耳道皮瓣。鼓室腔内放置适量明胶海绵。将切取的移植材料修剪成直径约0.5 cm的类圆形嵌于鼓沟内，附软骨膜面朝外耳道，软骨面朝鼓室腔，复位耳道皮瓣并覆盖移植物周边。外耳道用明胶海绵、碘仿纱条填塞。缝合耳后切口并肌注120万u长效青霉素。
, 百拇医药
1.2 观察方法 术后2周取出外耳道碘仿纱条，随后定期用电耳镜观察，并分别于术后1，3，5个月分批处死动物，对移植物行组织学观察，同时对术后5个月移植物行扫描电镜和透射电镜观察。
2 结果
16只动物中有6耳术后1个月内移植物感染坏死。1只动物术后2月余死亡。术后1个月处死一侧耳感染的6只动物，术后3个月处死3只动物，余6只动物术后5个月处死，分别取移植物观察。
2.1 电耳镜观察 未感染的26耳中，1耳移植物脱落，3耳移植物移位。22耳术后2周时移植物苍白，术后1月转为红色，术后3月呈淡红色，术后5个月移植物呈淡红色，表面光滑，无移位及明显增厚。
2.2 组织学观察(HE染色) 术后1个月共观察6耳。1耳移植物移位，5耳移植物鼓室面及外耳道面均有单层上皮移行，上皮呈岛状。软骨细胞有不同程度水肿，染色质边集，甚至细胞核碎裂。软骨细胞分裂像少，胶原纤维松散。移植物周边与骨壁结合处肉芽组织增生，微血管及成纤维细胞丰富。术后3个月共观察6耳，其中2耳由瘢痕组织封闭穿孔，4耳移植物软骨细胞形态正常，软骨基质陷窝内可见同源细胞群和细胞分裂。移植物外耳道面复层鳞状上皮厚薄不均，鼓室面被覆单层上皮。胶原纤维粗大、排列规则。移植物周边与骨壁愈合良好，肉芽组织减少。术后5个月共观察8耳。8耳移植物软骨细胞形态正常，同源细胞群及细胞分裂多见，外耳道面复层鳞状上皮光滑、厚薄均匀。胶原纤维丰富、波纹状成束排列。移植物周边与骨壁愈合好，未见软骨吸收、钙化。Verhoeff染色显示移植物软骨基质内弹性纤维丰富。
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2.3 扫描电镜和透射电镜观察 术后5个月移植物各取2耳，分别行扫描电镜和透射电镜观察。扫描电镜见移植物鼓室面覆单层立方上皮，软骨基质内弹性纤维丰富，在弹性纤维包绕中有散在的卵圆形软骨细胞。透射电镜见软骨细胞核染色质均匀、核膜清晰，粗面内质网发达、核蛋白体丰富。滑面内质网、高尔基小囊扩张，线粒体较小。
3 讨论
3.1 自体软骨-软骨膜复合移植组织学转归 本组动物实验表明，术后1个月，部分软骨细胞水肿、空泡形成甚至细胞核碎裂。这部分软骨细胞的功能减退或消失，可能与手术损伤有关[4]。软骨基质陷窝内仍存在一定数量的具有正常形态的软骨细胞和细胞分裂，表明移植物成活。术后3个月移植物组织形态、组织结构基本正常，鼓室面单层上皮光滑均匀，耳道面复层鳞状上皮厚薄不均，周边与骨壁连接处肉芽组织减少、纤维化，表明修复过程仍在继续。术后5个月，移植物与耳道骨壁紧密连接，愈合良好，外耳道面复层鳞状上皮、鼓室面单层立方上皮光滑、厚薄均匀，移植物已完成修复。Verfhoeff染色及透射电镜观察反映移植物软骨细胞功能活跃、代谢旺盛、成活好。未发现软骨吸收及钙化现象。
, http://www.100md.com
3.2 在中耳乳突手术中的应用前景 目前，自体软骨-软骨膜复合移植的研究重点已由作为听骨替代物转向了它的抗鼓膜回缩能力。文献报道[5，6]利用自体耳屏软骨-软骨膜复合移植修补鼓膜穿孔，术后听力提高显著、修补成功率高。同时，该材料用于重建外耳道后壁、上鼓室外侧壁及充填乳突腔，既加强了对鼓膜的支撑，又避免了术后乳突因充填的软组织吸收而遗留空腔的问题[2，7]。
自体耳屏软骨-软骨膜取材方便、易于塑形，具有一定的弹性和硬度，移植易成活，是一种有前途的中耳乳突手术修复材料。近年来国外利用自体耳屏软骨-软骨膜行鼓室成形手术的报道有所增加，但尚未形成规范化术式，其临床效果尚待进一步长期观察。
参考文献
1，Buckingham RA. Fascia and perichondrium atrophy in tympanoplasty and recurrent middle ear atelectasis. Ann Otol Rhinol Laryngol, 1992, 101:755
, http://www.100md.com
2，Adkins WY. Composite autograft for tympanoplasty and tympanomastoid surgery. Laryngoscope, 1990, 100:244
3，Poe DS, Gadre AK. Cartilage tympanoplasty for management of retraction pockets and cholesteatoma. Laryngoscope, 1993, 103:614
4，鲍卫汉.幼兔耳软骨移植后增长的研究.中华整形烧伤外科杂志，1991，7：119
5，Moustafa HM. Tympano-cartilage-stapediopexy: a method to improve hearing in open technique tympanoplasty. J Laryngol Otol, 1990, 104:942
6，Duckert LG, Muller J, Makieloski KH, et al. Composite autograft shield reconstruction of remnant tympanic membrare. Am J Otol, 1995, 16(1):21
7，Milewski C. Composite graft tympanoplasty in the treatment of ears with advanced middle ear pathology. Laryngoscope, 1993, 103:1352
(收稿日期：1999-07-23), 百拇医药