支气管哮喘发作与血浆内皮素-1和一氧化氮含量的研究
作者：陈复辉 韩守信 邵玉霞
单位：陈复辉(哈尔滨医科大学附属第二医院 呼吸内科，黑龙江 哈尔滨 150086)； 韩守信(哈尔滨医科大学附属第二医院 呼吸内科，黑龙江 哈尔滨 150086)； 邵玉霞(哈尔滨医科大学附属第二医院 呼吸内科，黑龙江 哈尔滨 150086)
关键词：支气管哮喘；一氧化氮；内皮素
哈尔滨医科大学学报000111 摘 要：目的 探讨一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)在支气管哮喘发病中的作用。方法 采用放射免疫法和比色法测定42例支气管哮喘患者和30例健康对照者血浆ET-1和硝酸根离子/亚硝酸根离子(NO-2/NO-3)含量。结果 轻度支气管哮喘组：血浆NO-2/NO-3含量明显高于健康对照组；ET-1含量与健康对照组相比无明显差异。中度支气管哮喘组：血浆NO-2/NO-3和ET-1含量均显著高于健康对照组(P<0.05)。重度支气管哮喘组：血浆NO-2/NO-3和ET-1亦显著高于健康对照组(P<0.01)。结论 ET-1和NO参与支气管哮喘发病的病理生理过程，血浆ET-1和NO-2/NO-3水平可作为判定支气管哮喘病情的重要指标。
, http://www.100md.com
分类号：R562.2+5 文献标识码：A
文章编号：1000-1905(2000)01-0026-03
Study on levels of plasma endothelin-1 and nitric oxide of patients
with bronchial asthma in attacked stage
CHEN Fu-hui HAN Shou-xin SHAO Yu-xia
(Department of Respiratory Medicine,The Second Affiliated Hospital,Harbin Medical University,Harbin 150086,China)
, 百拇医药
Abstract：Objective To study the roles of nitric oxide (NO) and endothelin-1(ET-1) in pathogenesis of bronchial asthma.Methods Plasma ET-1 and NO-2/NO-3 in 42 patients with bronchial asthma and 30 healthy subjects were measured by radioimmunoassay and colorimetry.Results Group of gentle asthma:the plasma NO-2/NO-3 levels in the patients with bronchial asthma were higher than healthy subjects and there was no marked difference of the plasma ET-1 between the patients and healthy people.Group of moderate grade asthma:the plasma NO-2/NO-3 and ET-1 levels of the patients with bronchial asthma were higher than healthy people significantly(P<0.05).Group of severe grade asthma:the plasma NO-2/NO-3 and ET-1 levels of the patients with bronchial asthma were higher than healthy people very significantly(P<0.01).Conclusion ET-1 and NO played important roles in pathology of bronchial asthma.The plasma levels of ET-1 and NO-2/NO-3 were reference marks to judge the status of bronchial asthma.
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Key words：bronchial asthma;nitric oxide;endothelin-1▲
内皮素-1(ET-1)是目前发现的最强的支气管收缩活性物质[1]，一氧化氮(NO)是人类和动物的非肾上腺素能非胆碱能神经(NANC)的主要递质，NANC是人类气道扩张的唯一神经机制[2]。ET-1和NO由肺脏血管内皮细胞、支气管上皮细胞产生和释放，二者共同维持气道的正常张力。而支气管痉挛收缩是支气管哮喘的病理特征之一，故推测ET-1和NO在支气管哮喘的发病中起重要作用，NO的代谢产物主要为NO-2/NO-3，可间接反映NO的含量。本文观察42例支气管哮喘患者和30例健康受试者血浆ET-1和NO-2/NO-3含量，探讨ET-1和NO在支气管哮喘发病中的作用。
, 百拇医药
1 临床资料与方法
1.1 对象
支气管哮喘病人均来自我院住院病人，其诊断和分级标准符合1998年《中华结核和呼吸杂志》第4期公布的《支气管哮喘防治指南》的标准。患者分为3组。①轻度支气管哮喘组：12例，男6例，女6例。年龄20～50岁，平均年龄34.5岁。②中度支气管哮喘组：15例，男7例，女8例。年龄32～60岁，平均年龄41.6岁。③重度支气管哮喘组：15例，男6例，女9例。年龄28～60岁，平均年龄34.2岁。④对照组：30例，男15例，女15例。年龄24～58岁，平均年龄37.2岁。经体检及有关检查排除心、肺、脑、肾、肝及内分泌等有关疾病。
1.2 方法
标本留取：患者于入院后未经治疗前取肘静脉血4ml，其中2ml置含有乙二胺四乙酸二钠30μl和抑肽酶40μl的预冷试管中，另2ml注入含有肝素的抗凝试管中，均混匀，4℃，3 000r/min离心10min，分离出血浆，-40℃保存待测。测定前将冰冻血浆置于室温下复融，再次4℃，3 000r/min离心5min，取上清测定。ET-1测定：采用非平衡法测定ET-1。放免药盒由北京东亚免疫技术研究所提供。操作方法按说明书进行测定，以125I-ET做标记。NO的测定：用比色法测定NO-2/NO-3含量间接测定NO含量。试剂盒由中国军事科学院医学药研所提供，按说明书所述步骤进行测定。统计学处理：结果以
±s表示，组间比较采用方差分析后进行q检验。
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2 结果
各组血浆ET-1及NO-2/NO-3含量见附表。由表中可见各组支气管哮喘血浆NO-2/NO-3均高于对照组，中、重度支气管哮喘患者血浆ET-1含量亦高于健康组。
附表 42例支气管哮喘血浆ET-1、NO-2/NO-3含量(±s) 组 别
例数
ET-1(ng。L-1)
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NO-2/NO-3(μmol。L-1)
轻度支气管哮喘组
12
12.66±4.34*
46.21±11.69**
中度支气管哮喘组
15
25.47±3.03**
48.89±15.47**
, 百拇医药
重度支气管哮喘组
15
35.57±4.49***
59.63±17.76***
对照组
30
21.64±3.56
27.87±7.18
与对照组相比*P>0.05 **P<0.05 ***P<0.01
3 讨论
在正常生理条件下，基础型NO合成酶(cNOS)被激活，产生少量NO，可松弛气道平滑肌，对支气管哮喘患者可能是有益的。本研究发现不论支气管哮喘病情程度的轻重，其血浆中NO-2/NO-3均显著高于正常对照组。Kharitonov[3]研究亦发现支气管哮喘呼出气NO含量较正常人高3～4倍，与本研究的结果相似。这可能是由于支气管哮喘患者cNOS存在功能上缺陷[4]。而且，支气管哮喘是一种多种炎性细胞参与的慢性变态反应性炎症，在炎性细胞、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)和内毒素等诱导刺激下，气道上皮细胞、巨噬细胞中的诱导型NO合成酶(iNOS)被激活，产生大量NO[5]。NO过度生成可导致毛细血管后微静脉渗出增加、DNA脱氨基、支气管上皮脱落和功能变性，使炎症反应加重，气道反应性增高，支气管哮喘症状加重[6]。我们还发现支气管哮喘重度发作其血浆NO-2/NO-3水平非常高，可能与合并严重感染有关。
, 百拇医药
ET-1是目前发现的最强的支气管收缩活性物质。ET-1还能刺激花生四烯酸及其代谢产物的合成[7]，诱使15-脂肪酶、前列环素、血小板活化因子、血栓素A2及氧自由基等形成增加，损伤肺泡上皮细胞，进而使炎性细胞聚集，分泌多种介质[8]。ET-1还可以促进平滑肌细胞的增殖[9]，诱发和加重哮喘。我们发现中、重度发作组ET-1含量明显高于对照组，这是由于一些诱发支气管哮喘的因素和抗原、内毒素、IL-1、TNF-α等因素可促使ET-1的合成和释放增加。本研究还发现轻度发作时血浆ET-1水平与对照组相比无明显差别，其原因有：①轻度发作ET-1生成较少。②肺脏能及时清除过多的ET-1。③支气管哮喘的病变可逆程度较强，随着病情的好转，支气管平滑肌痉挛的解除和炎症的消失，ET-1代谢又恢复到正常水平。而中、重度发作时不仅与氧、二氧化碳潴留促使全身血管的内皮细胞生成大量ET-1有关，而大量ET-1又有强烈的收缩血管、气管、支气管的效应，导致支气管哮喘病情恶化。
总之，支气管哮喘不论病情轻重，血浆NO-2/NO-3含量均升高，中、重度支气管哮喘血浆ET-1含量亦升高，且支气管哮喘的病情程度与血浆ET-1、NO-2/NO-3含量密切相关。因此，血浆NO-2/NO-3、ET-1水平可作为判定支气管哮喘病情的指标，iNOS抑制剂、ET-1拮抗剂有可能成为治疗支气管哮喘的新药。■
, 百拇医药
作者简介：陈复辉(1968-)，女，主治医师，硕士
参考文献：
[1]Uchida Y,Ninomiya H,Saotome M,et al.Endothelin,a novel vasoconstrictor peptide,as potent bronchoconstrictor[J].Eur Pharm,1988,154:227.
[2]Belvisi MG,Stretton CD,Yacoub M,et al.Nitric oxide is the endogenous neurotransmitter of bronchodilator nerves in human[J].Eur J Pharmacol,1992,210:221.
[3]Kharitonov SA,Yate D,Robbins Sa,et al.Increased intric oxide in exhaled air of asthmatic patients[J].Lancet,1994,343:133.
, 百拇医药
[4]Barnes PJ.Nitric oxide and airways[J].Eur Respir J,1993,6:163.
[5]Gaston B,Drazen JM,Jansen A,et al.Relaxation of human airway in vitro by S-nitro sothiols[J].Am Rev REspir Dis,1992,145:383.
[6]杜捷夫，崔得健，田东华.一氧化碳在哮喘病机制中的作用[J].中华结核和呼吸杂志，1997，3(20)：153.
[7]Wu T,J,Mullol R,D,Rieves C,et al.Endothelin-1 stimulates eicosanoid production in cultured human nassal mucosa[J].Am J Respir.Cell.Mol Biol,1992,6:168.
, http://www.100md.com
[8]Mattoli S,Soloperto M,Marini M,et al.Levels of endothelin in the bronchoalveolar lavage fluid of patients with symptomatic asthma and reversible airflow obstruction[J].Allergy Clin Immunol,1991,3:376.
[9]Stwart DJ,Levy RD,Cernacek P,et al.Increased plasma endothelin-1 in pulmonary hypertension:Marker or mediator of disease[J].Ann Inter Med,1991,114:464.
收稿日期：1999-04-29
修改日期：1999-11-03, 百拇医药
单位：陈复辉(哈尔滨医科大学附属第二医院 呼吸内科，黑龙江 哈尔滨 150086)； 韩守信(哈尔滨医科大学附属第二医院 呼吸内科，黑龙江 哈尔滨 150086)； 邵玉霞(哈尔滨医科大学附属第二医院 呼吸内科，黑龙江 哈尔滨 150086)
关键词：支气管哮喘；一氧化氮；内皮素
哈尔滨医科大学学报000111 摘 要：目的 探讨一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)在支气管哮喘发病中的作用。方法 采用放射免疫法和比色法测定42例支气管哮喘患者和30例健康对照者血浆ET-1和硝酸根离子/亚硝酸根离子(NO-2/NO-3)含量。结果 轻度支气管哮喘组：血浆NO-2/NO-3含量明显高于健康对照组；ET-1含量与健康对照组相比无明显差异。中度支气管哮喘组：血浆NO-2/NO-3和ET-1含量均显著高于健康对照组(P<0.05)。重度支气管哮喘组：血浆NO-2/NO-3和ET-1亦显著高于健康对照组(P<0.01)。结论 ET-1和NO参与支气管哮喘发病的病理生理过程，血浆ET-1和NO-2/NO-3水平可作为判定支气管哮喘病情的重要指标。
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分类号：R562.2+5 文献标识码：A
文章编号：1000-1905(2000)01-0026-03
Study on levels of plasma endothelin-1 and nitric oxide of patients
with bronchial asthma in attacked stage
CHEN Fu-hui HAN Shou-xin SHAO Yu-xia
(Department of Respiratory Medicine,The Second Affiliated Hospital,Harbin Medical University,Harbin 150086,China)
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Abstract：Objective To study the roles of nitric oxide (NO) and endothelin-1(ET-1) in pathogenesis of bronchial asthma.Methods Plasma ET-1 and NO-2/NO-3 in 42 patients with bronchial asthma and 30 healthy subjects were measured by radioimmunoassay and colorimetry.Results Group of gentle asthma:the plasma NO-2/NO-3 levels in the patients with bronchial asthma were higher than healthy subjects and there was no marked difference of the plasma ET-1 between the patients and healthy people.Group of moderate grade asthma:the plasma NO-2/NO-3 and ET-1 levels of the patients with bronchial asthma were higher than healthy people significantly(P<0.05).Group of severe grade asthma:the plasma NO-2/NO-3 and ET-1 levels of the patients with bronchial asthma were higher than healthy people very significantly(P<0.01).Conclusion ET-1 and NO played important roles in pathology of bronchial asthma.The plasma levels of ET-1 and NO-2/NO-3 were reference marks to judge the status of bronchial asthma.
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Key words：bronchial asthma;nitric oxide;endothelin-1▲
内皮素-1(ET-1)是目前发现的最强的支气管收缩活性物质[1]，一氧化氮(NO)是人类和动物的非肾上腺素能非胆碱能神经(NANC)的主要递质，NANC是人类气道扩张的唯一神经机制[2]。ET-1和NO由肺脏血管内皮细胞、支气管上皮细胞产生和释放，二者共同维持气道的正常张力。而支气管痉挛收缩是支气管哮喘的病理特征之一，故推测ET-1和NO在支气管哮喘的发病中起重要作用，NO的代谢产物主要为NO-2/NO-3，可间接反映NO的含量。本文观察42例支气管哮喘患者和30例健康受试者血浆ET-1和NO-2/NO-3含量，探讨ET-1和NO在支气管哮喘发病中的作用。
, 百拇医药
1 临床资料与方法
1.1 对象
支气管哮喘病人均来自我院住院病人，其诊断和分级标准符合1998年《中华结核和呼吸杂志》第4期公布的《支气管哮喘防治指南》的标准。患者分为3组。①轻度支气管哮喘组：12例，男6例，女6例。年龄20～50岁，平均年龄34.5岁。②中度支气管哮喘组：15例，男7例，女8例。年龄32～60岁，平均年龄41.6岁。③重度支气管哮喘组：15例，男6例，女9例。年龄28～60岁，平均年龄34.2岁。④对照组：30例，男15例，女15例。年龄24～58岁，平均年龄37.2岁。经体检及有关检查排除心、肺、脑、肾、肝及内分泌等有关疾病。
1.2 方法
标本留取：患者于入院后未经治疗前取肘静脉血4ml，其中2ml置含有乙二胺四乙酸二钠30μl和抑肽酶40μl的预冷试管中，另2ml注入含有肝素的抗凝试管中，均混匀，4℃，3 000r/min离心10min，分离出血浆，-40℃保存待测。测定前将冰冻血浆置于室温下复融，再次4℃，3 000r/min离心5min，取上清测定。ET-1测定：采用非平衡法测定ET-1。放免药盒由北京东亚免疫技术研究所提供。操作方法按说明书进行测定，以125I-ET做标记。NO的测定：用比色法测定NO-2/NO-3含量间接测定NO含量。试剂盒由中国军事科学院医学药研所提供，按说明书所述步骤进行测定。统计学处理：结果以
±s表示，组间比较采用方差分析后进行q检验。, http://www.100md.com
2 结果
各组血浆ET-1及NO-2/NO-3含量见附表。由表中可见各组支气管哮喘血浆NO-2/NO-3均高于对照组，中、重度支气管哮喘患者血浆ET-1含量亦高于健康组。
附表 42例支气管哮喘血浆ET-1、NO-2/NO-3含量(
±s) 组 别例数
ET-1(ng。L-1)
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NO-2/NO-3(μmol。L-1)
轻度支气管哮喘组
12
12.66±4.34*
46.21±11.69**
中度支气管哮喘组
15
25.47±3.03**
48.89±15.47**
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重度支气管哮喘组
15
35.57±4.49***
59.63±17.76***
对照组
30
21.64±3.56
27.87±7.18
与对照组相比*P>0.05 **P<0.05 ***P<0.01
3 讨论
在正常生理条件下，基础型NO合成酶(cNOS)被激活，产生少量NO，可松弛气道平滑肌，对支气管哮喘患者可能是有益的。本研究发现不论支气管哮喘病情程度的轻重，其血浆中NO-2/NO-3均显著高于正常对照组。Kharitonov[3]研究亦发现支气管哮喘呼出气NO含量较正常人高3～4倍，与本研究的结果相似。这可能是由于支气管哮喘患者cNOS存在功能上缺陷[4]。而且，支气管哮喘是一种多种炎性细胞参与的慢性变态反应性炎症，在炎性细胞、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)和内毒素等诱导刺激下，气道上皮细胞、巨噬细胞中的诱导型NO合成酶(iNOS)被激活，产生大量NO[5]。NO过度生成可导致毛细血管后微静脉渗出增加、DNA脱氨基、支气管上皮脱落和功能变性，使炎症反应加重，气道反应性增高，支气管哮喘症状加重[6]。我们还发现支气管哮喘重度发作其血浆NO-2/NO-3水平非常高，可能与合并严重感染有关。
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ET-1是目前发现的最强的支气管收缩活性物质。ET-1还能刺激花生四烯酸及其代谢产物的合成[7]，诱使15-脂肪酶、前列环素、血小板活化因子、血栓素A2及氧自由基等形成增加，损伤肺泡上皮细胞，进而使炎性细胞聚集，分泌多种介质[8]。ET-1还可以促进平滑肌细胞的增殖[9]，诱发和加重哮喘。我们发现中、重度发作组ET-1含量明显高于对照组，这是由于一些诱发支气管哮喘的因素和抗原、内毒素、IL-1、TNF-α等因素可促使ET-1的合成和释放增加。本研究还发现轻度发作时血浆ET-1水平与对照组相比无明显差别，其原因有：①轻度发作ET-1生成较少。②肺脏能及时清除过多的ET-1。③支气管哮喘的病变可逆程度较强，随着病情的好转，支气管平滑肌痉挛的解除和炎症的消失，ET-1代谢又恢复到正常水平。而中、重度发作时不仅与氧、二氧化碳潴留促使全身血管的内皮细胞生成大量ET-1有关，而大量ET-1又有强烈的收缩血管、气管、支气管的效应，导致支气管哮喘病情恶化。
总之，支气管哮喘不论病情轻重，血浆NO-2/NO-3含量均升高，中、重度支气管哮喘血浆ET-1含量亦升高，且支气管哮喘的病情程度与血浆ET-1、NO-2/NO-3含量密切相关。因此，血浆NO-2/NO-3、ET-1水平可作为判定支气管哮喘病情的指标，iNOS抑制剂、ET-1拮抗剂有可能成为治疗支气管哮喘的新药。■
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作者简介：陈复辉(1968-)，女，主治医师，硕士
参考文献：
[1]Uchida Y,Ninomiya H,Saotome M,et al.Endothelin,a novel vasoconstrictor peptide,as potent bronchoconstrictor[J].Eur Pharm,1988,154:227.
[2]Belvisi MG,Stretton CD,Yacoub M,et al.Nitric oxide is the endogenous neurotransmitter of bronchodilator nerves in human[J].Eur J Pharmacol,1992,210:221.
[3]Kharitonov SA,Yate D,Robbins Sa,et al.Increased intric oxide in exhaled air of asthmatic patients[J].Lancet,1994,343:133.
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[4]Barnes PJ.Nitric oxide and airways[J].Eur Respir J,1993,6:163.
[5]Gaston B,Drazen JM,Jansen A,et al.Relaxation of human airway in vitro by S-nitro sothiols[J].Am Rev REspir Dis,1992,145:383.
[6]杜捷夫，崔得健，田东华.一氧化碳在哮喘病机制中的作用[J].中华结核和呼吸杂志，1997，3(20)：153.
[7]Wu T,J,Mullol R,D,Rieves C,et al.Endothelin-1 stimulates eicosanoid production in cultured human nassal mucosa[J].Am J Respir.Cell.Mol Biol,1992,6:168.
, http://www.100md.com
[8]Mattoli S,Soloperto M,Marini M,et al.Levels of endothelin in the bronchoalveolar lavage fluid of patients with symptomatic asthma and reversible airflow obstruction[J].Allergy Clin Immunol,1991,3:376.
[9]Stwart DJ,Levy RD,Cernacek P,et al.Increased plasma endothelin-1 in pulmonary hypertension:Marker or mediator of disease[J].Ann Inter Med,1991,114:464.
收稿日期：1999-04-29
修改日期：1999-11-03, 百拇医药