增殖细胞核抗原与胃癌的关系
作者：刘连新 曲欣 朱安龙 姜洪池
单位：刘连新(哈尔滨医科大学附属第一医院 普通外科，黑龙江 哈尔滨 150001)； 曲欣(哈尔滨医科大学附属第一医院 普通外科，黑龙江 哈尔滨 150001)； 朱安龙(哈尔滨医科大学附属第一医院 普通外科，黑龙江 哈尔滨 150001)； 姜洪池(哈尔滨医科大学附属第一医院 普通外科，黑龙江 哈尔滨 150001)
关键词：胃癌；增殖细胞核抗原；免疫组织化学
哈尔滨医科大学学报000109 摘 要：目的 研究胃癌组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达意义。方法 应用免疫组织化学方法检测PCNA在98例胃癌标本中的表达。结果 在98例胃癌标本中，PCNA标记指数(PCNA LI)在15.85%～82.12%之间，平均为52.17%±11.46%。PCNA LI在低分化胃癌(直径>5cm，有淋巴结和其他脏器转移)中的表达远高于高分化胃癌(直径<5cm，无淋巴转移)。以50%为界限，PCNA LI>50%者生存期短，5年生存率低。结论 PCNA对胃癌的诊断、分期、预后及治疗有重要价值。
, 百拇医药
分类号：R735.2 文献标识码：A
文章编号：1000-1905(2000)01-0021-03
Relationship between proliferating cell nuclear antigen and gastric cancer
LIU Lian-xin QU Xin,ZHU An-long et al
(Department of General Surgery,The First Affiliated Hospital,Harbin Medical University,Harbin 150001,China)
Abstract：Objective To study the clinical significance of expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in gastric carcinoma tissues.Methods The expression of 98 gastric carcinoma was studied by means of immunohistochemical technique.Results The proliferating cell nuclear antigen labeling index (PCNA LI) was between 15.85% and 82.12% in 98 cases of gastric carcinoma.The PCNA LI was significantly higher in the cases of poorly differentiated(diameter≥5 centimeters,with lymph node and other organs metastases) than those well (differentiated,diameter<5 centimeters,without lymph node metastases).Patients with PCNA LI> 50% correlated to a decreased survival.Conclusion The determination of PCNA may be useful for diagnosis,clinical staging,prognosis and treatment of gastric carcinoma.
, 百拇医药
Key words：gastric cancer;proliferating cell nuclear antigen;immunohistochemistry▲
增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)是一种36KD的酸性蛋白，是DNA多聚酶δ的一种辅助蛋白，与细胞周期的S期增殖有关，对DNA复制调节起重要作用。PCNA作为一种肿瘤细胞的增殖指标，近年来广泛应用于各种良恶性肿瘤的鉴别与肿瘤病理组织学分级关系的研究。本研究应用免疫组织化学方法检测福尔马林固定、石蜡包埋的98例胃癌切片的PCNA表达情况，并探讨其与组织学类型、肿瘤大小、浸润深度，淋巴结转移情况和预后的关系。
1 材料与方法
1.1 标本
选择1982～1992年手术切除资料保存完整且有完整随访记录的胃癌标本98例，其中男性62例(63.3%)，女性36例(36.7%)，年龄29～78岁，平均54.75岁。
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1.2 标本处理及免疫组织化学染色
全部标本均经福尔马林固定，石蜡包埋，4μm切片，常规HE染色，确定病理类型。PCNA免疫组织化学染色采用链霉素亲生物素-过氧化物酶法(简称S-P法)。PCNA(PC10)单克隆抗体购自福州迈新公司(MAB-0145)为即用型抗体，检测试剂盒(KIT-9210)购自福州迈新公司，DAB显色，PBS代替一抗作为阴性对照，阳性对照片(PCS-0145)作为阳性对照。染色步骤按说明书进行，在加入一抗之前应用微波修复。
1.3 结果制定
以细胞核被染成棕黄色者为阳性细胞，用高倍镜计数1 000个肿瘤细胞计算阳性细胞百分率，称为PCNA标记指数(PCNA labeling index,PCNA LI)，以对胃癌的生物行为和增殖活性进行判断。
1.4 统计处理
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应用SAS(6.04)软件包进行统计分析。
2 结果
2.1 PCNA与胃癌组织学的关系
对98例胃癌进行组织学分类，其中乳头状腺癌13例，管状腺癌39例，低分化腺癌20例，未分化癌9例，印戎细胞癌8例，粘液腺癌9例。结果表明PCNA LI在15.85%～82.12%之间，平均为52.17%±11.46%，PCNA LI与胃癌的组织学类型无关，但与其分化程度有关。
2.2 PCNA与肿瘤大小的关系
在98例胃癌患者中，肿瘤直径>5cm者，PCNA LI在47.21%～82.12%之间，平均62.07%±6.02%，肿瘤直径<5cm者，PCNA LI在15.85%～60.89%之间，平均为41.39%±3.26%，两者之间的差异有显著性。
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表1 PCNA LI与胃癌病理指标的关系(
±s)% 病理指标
例数
PCNA LI
胃癌组织
乳头状腺癌
13
21.00±4.24
管状腺癌
39
33.16±6.17
高分化
, 百拇医药
12
22.27±3.21
中分化
27
39.68±2.15
低分化腺癌
20
62.14±10.11
未分化癌
9
67.93±14.19*
印戎腺癌
, 百拇医药
8
34.27±8.13
粘液腺癌
9
37.62±8.77
肿瘤大小
>5cm
51
62.07±6.02*
<5cm
47
41.39±3.26
, http://www.100md.com
浸润深度
粘膜及粘膜下层
19
23.13±7.28
肌层
44
37.39±10.69*
浆膜层
35
60.78±9.11**
淋巴结转移
阳性
, http://www.100md.com
47
56.57±5.99**
阴性
51
29.35±7.87
*P<0.05 **P<0.012.3 PCNA与浸润深度的关系
将胃癌的浸润深度分为3类，即浸润至粘膜及粘膜下层，浸润至肌层，浸润至浆膜层或突破浆膜层3类，PCNA LI在3类之间差异有显著性。
2.4 PCNA与淋巴结转移与远处转移的关系
将无淋巴结转移者与有淋巴结转移及其他器官转移者分为二组，分别计数两组的PCNA LI，其差异有显著性。
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2.5 PCNA与胃癌预后的关系
以PCNA LI>50%为界限进行比较，PCNA LI≥50%的患者术后生存期及5年生存率明显低于PCNA LI<50%者，两者之间差异有显著性。
表2 PCNA LI与肿瘤预后关系 存活期(年)
例数
PCNA LI
<50%
≥50%
≤1
24
9
15
, 百拇医药
≤3
25
9
16
≤5
28
17
11
>5
21
16*
5*
总计
, 百拇医药
98
54
44
*P<0.05
3 讨论
PCNA是存在于细胞核内的一种蛋白质，它对细胞由G1期向S期过渡起着重要的调节作用[1]。处于增殖状态的细胞和肿瘤细胞的PCNA表达明显增强。因此PCNA被认为是研究细胞增殖动力学的良好标记物，越来越多地应用于肿瘤的病理和临床研究。
人的PCNA基因定位于第20号染色体上[1]，其基因序列已被克隆，是一个长度7.0kb的基因，有6个外显子和5个内含子，在内含子之间及内含子与外显子之间存在大量的重复序列，在5′端和3′端存在着广泛的侧翼序列，这些侧翼序列参与细胞内的某些调控，并受控于其他基因和细胞因子，其编码的蛋白质为由261个氨基酸组成36KD的酸性蛋白[3]。Bravo证实了PCNA是DNA聚合酶的附属蛋白[1]。
, 百拇医药
随着人们对肿瘤研究地深入，常规的病理诊断已远远不能满足人们的需要，单纯依据肿瘤的分化程度常难以预测患者的预后，因其不仅与组织学类型和分化程度有关，同时还与许多因素有关，如肿瘤大小、浸润深度，有无淋巴结转移、远处转移等。因此对肿瘤预后研究及对治疗进行指导，迫切需要有新的指标，PCNA是反映细胞增殖情况的指标，恰可以满足需要。
本研究结果与Inada等人的研究结果相似[4]，均认为PCNA LI与肿瘤的病理类型无明显关系，但与肿瘤的分化程度有一定的相关性。分比程度越低的肿瘤其PCNA LI越高，说明其生长迅速，倍增时间短。同时本研究还发现PCNA LI与肿瘤的大小和浸润深度有相关性。肿瘤越大，浸润深度越深，其PCNA LI越高，说明肿瘤组织增殖越旺盛，同时有淋巴结转移者其PCNA LI越高，说明细胞增长速度快，目前的大量资料均支持PCNA LI与肿瘤的浸润及转移密切相关[5]。
PCNA与胃癌预后的关系是人们关注的热点。Kakeji和Mori的研究均认为高PCNA LI组的5年生存率明显低于低PCNA LI组，且低PCNA LI的复发率明显低于高PCNA LI组。这主要因为高PCNA LI的肿瘤倍增时间短，生长迅速；同时高PCNA LI组肿瘤体积较大，浸润较深，伴淋巴结和脏器转移[6，7]。
, 百拇医药
PCNA作为一个细胞增殖的标记物，与胃癌组织的分化程度、浸润深度、肿瘤大小、转移和预后有密切关系，其可作为一种胃癌监测指标用以指导胃癌的治疗和判断预后[8]。■
作者简介：刘连新(1970-)，男，博士研究生
参考文献：
[1]Bravo R,Frank R,Blundell PA,et al.Cyclin/PCNA is the auxillary protein of DNA polymerase-S[J].Nature,1987,328(6):515-519.
[2]Maeda K,Chung YS,Omada N,et al.Proliferating cell nuclear antigen labeling index of preoperative biopsy specimens in gastric carcinoma with special reference to prognosis[J].Cancer,1994,73(3):528-533.
, http://www.100md.com
[3]Travali S,Ku DH,Rizzo MG,et al.Structure of the human gene for the proliferating cell nuclear antigen[J].J Biol Cher,1989,264(13):7466-7472.
[4]Inada T,Imural Ichikawat,et al.Proliferative activity of gastric cancer assessed by immunostaining for proliferating nuclear cell antigen[J].J Surgical Oncology,1993,54:146-152.
[5]Lipponen PK,Ekelinen MJ.Cell proliferation of transitional cell Bladder tumor's determined by PCNA/cyclin immunostaining and its prognostic value[J].Br J Cancer,1992,66:171-179.
, http://www.100md.com
[6]Kakeji Y,Machara Y,Adachi Y,et al.Proliferative activity as a prognostic factor in Borrnan type 4 gastric carcinoma[J].Br J Cancer,1994,69(4):749-753.
[7]Mori M,Kakeji Y,Adachi Y,et al.The prognostic significance of proliferating cell nuclear in clinical gastric cancer[J].Surgery,1993,113(6):683-690.
[8]Molykutty J,Rajalekshmy TN,Balaranan NM,et al.Proliferating cell nuclear antigen(PCNA) expression in gestational trophoblastic disease(GTD)[J].Neoplasm,1998,45(5):301-304.
收稿日期：1999-04-28
修改日期：1999-12-08, 百拇医药
单位：刘连新(哈尔滨医科大学附属第一医院 普通外科，黑龙江 哈尔滨 150001)； 曲欣(哈尔滨医科大学附属第一医院 普通外科，黑龙江 哈尔滨 150001)； 朱安龙(哈尔滨医科大学附属第一医院 普通外科，黑龙江 哈尔滨 150001)； 姜洪池(哈尔滨医科大学附属第一医院 普通外科，黑龙江 哈尔滨 150001)
关键词：胃癌；增殖细胞核抗原；免疫组织化学
哈尔滨医科大学学报000109 摘 要：目的 研究胃癌组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达意义。方法 应用免疫组织化学方法检测PCNA在98例胃癌标本中的表达。结果 在98例胃癌标本中，PCNA标记指数(PCNA LI)在15.85%～82.12%之间，平均为52.17%±11.46%。PCNA LI在低分化胃癌(直径>5cm，有淋巴结和其他脏器转移)中的表达远高于高分化胃癌(直径<5cm，无淋巴转移)。以50%为界限，PCNA LI>50%者生存期短，5年生存率低。结论 PCNA对胃癌的诊断、分期、预后及治疗有重要价值。
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分类号：R735.2 文献标识码：A
文章编号：1000-1905(2000)01-0021-03
Relationship between proliferating cell nuclear antigen and gastric cancer
LIU Lian-xin QU Xin,ZHU An-long et al
(Department of General Surgery,The First Affiliated Hospital,Harbin Medical University,Harbin 150001,China)
Abstract：Objective To study the clinical significance of expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in gastric carcinoma tissues.Methods The expression of 98 gastric carcinoma was studied by means of immunohistochemical technique.Results The proliferating cell nuclear antigen labeling index (PCNA LI) was between 15.85% and 82.12% in 98 cases of gastric carcinoma.The PCNA LI was significantly higher in the cases of poorly differentiated(diameter≥5 centimeters,with lymph node and other organs metastases) than those well (differentiated,diameter<5 centimeters,without lymph node metastases).Patients with PCNA LI> 50% correlated to a decreased survival.Conclusion The determination of PCNA may be useful for diagnosis,clinical staging,prognosis and treatment of gastric carcinoma.
, 百拇医药
Key words：gastric cancer;proliferating cell nuclear antigen;immunohistochemistry▲
增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)是一种36KD的酸性蛋白，是DNA多聚酶δ的一种辅助蛋白，与细胞周期的S期增殖有关，对DNA复制调节起重要作用。PCNA作为一种肿瘤细胞的增殖指标，近年来广泛应用于各种良恶性肿瘤的鉴别与肿瘤病理组织学分级关系的研究。本研究应用免疫组织化学方法检测福尔马林固定、石蜡包埋的98例胃癌切片的PCNA表达情况，并探讨其与组织学类型、肿瘤大小、浸润深度，淋巴结转移情况和预后的关系。
1 材料与方法
1.1 标本
选择1982～1992年手术切除资料保存完整且有完整随访记录的胃癌标本98例，其中男性62例(63.3%)，女性36例(36.7%)，年龄29～78岁，平均54.75岁。
, http://www.100md.com
1.2 标本处理及免疫组织化学染色
全部标本均经福尔马林固定，石蜡包埋，4μm切片，常规HE染色，确定病理类型。PCNA免疫组织化学染色采用链霉素亲生物素-过氧化物酶法(简称S-P法)。PCNA(PC10)单克隆抗体购自福州迈新公司(MAB-0145)为即用型抗体，检测试剂盒(KIT-9210)购自福州迈新公司，DAB显色，PBS代替一抗作为阴性对照，阳性对照片(PCS-0145)作为阳性对照。染色步骤按说明书进行，在加入一抗之前应用微波修复。
1.3 结果制定
以细胞核被染成棕黄色者为阳性细胞，用高倍镜计数1 000个肿瘤细胞计算阳性细胞百分率，称为PCNA标记指数(PCNA labeling index,PCNA LI)，以对胃癌的生物行为和增殖活性进行判断。
1.4 统计处理
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应用SAS(6.04)软件包进行统计分析。
2 结果
2.1 PCNA与胃癌组织学的关系
对98例胃癌进行组织学分类，其中乳头状腺癌13例，管状腺癌39例，低分化腺癌20例，未分化癌9例，印戎细胞癌8例，粘液腺癌9例。结果表明PCNA LI在15.85%～82.12%之间，平均为52.17%±11.46%，PCNA LI与胃癌的组织学类型无关，但与其分化程度有关。
2.2 PCNA与肿瘤大小的关系
在98例胃癌患者中，肿瘤直径>5cm者，PCNA LI在47.21%～82.12%之间，平均62.07%±6.02%，肿瘤直径<5cm者，PCNA LI在15.85%～60.89%之间，平均为41.39%±3.26%，两者之间的差异有显著性。
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表1 PCNA LI与胃癌病理指标的关系(
±s)% 病理指标例数
PCNA LI
胃癌组织
乳头状腺癌
13
21.00±4.24
管状腺癌
39
33.16±6.17
高分化
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12
22.27±3.21
中分化
27
39.68±2.15
低分化腺癌
20
62.14±10.11
未分化癌
9
67.93±14.19*
印戎腺癌
, 百拇医药
8
34.27±8.13
粘液腺癌
9
37.62±8.77
肿瘤大小
>5cm
51
62.07±6.02*
<5cm
47
41.39±3.26
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浸润深度
粘膜及粘膜下层
19
23.13±7.28
肌层
44
37.39±10.69*
浆膜层
35
60.78±9.11**
淋巴结转移
阳性
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47
56.57±5.99**
阴性
51
29.35±7.87
*P<0.05 **P<0.012.3 PCNA与浸润深度的关系
将胃癌的浸润深度分为3类，即浸润至粘膜及粘膜下层，浸润至肌层，浸润至浆膜层或突破浆膜层3类，PCNA LI在3类之间差异有显著性。
2.4 PCNA与淋巴结转移与远处转移的关系
将无淋巴结转移者与有淋巴结转移及其他器官转移者分为二组，分别计数两组的PCNA LI，其差异有显著性。
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2.5 PCNA与胃癌预后的关系
以PCNA LI>50%为界限进行比较，PCNA LI≥50%的患者术后生存期及5年生存率明显低于PCNA LI<50%者，两者之间差异有显著性。
表2 PCNA LI与肿瘤预后关系 存活期(年)
例数
PCNA LI
<50%
≥50%
≤1
24
9
15
, 百拇医药
≤3
25
9
16
≤5
28
17
11
>5
21
16*
5*
总计
, 百拇医药
98
54
44
*P<0.05
3 讨论
PCNA是存在于细胞核内的一种蛋白质，它对细胞由G1期向S期过渡起着重要的调节作用[1]。处于增殖状态的细胞和肿瘤细胞的PCNA表达明显增强。因此PCNA被认为是研究细胞增殖动力学的良好标记物，越来越多地应用于肿瘤的病理和临床研究。
人的PCNA基因定位于第20号染色体上[1]，其基因序列已被克隆，是一个长度7.0kb的基因，有6个外显子和5个内含子，在内含子之间及内含子与外显子之间存在大量的重复序列，在5′端和3′端存在着广泛的侧翼序列，这些侧翼序列参与细胞内的某些调控，并受控于其他基因和细胞因子，其编码的蛋白质为由261个氨基酸组成36KD的酸性蛋白[3]。Bravo证实了PCNA是DNA聚合酶的附属蛋白[1]。
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随着人们对肿瘤研究地深入，常规的病理诊断已远远不能满足人们的需要，单纯依据肿瘤的分化程度常难以预测患者的预后，因其不仅与组织学类型和分化程度有关，同时还与许多因素有关，如肿瘤大小、浸润深度，有无淋巴结转移、远处转移等。因此对肿瘤预后研究及对治疗进行指导，迫切需要有新的指标，PCNA是反映细胞增殖情况的指标，恰可以满足需要。
本研究结果与Inada等人的研究结果相似[4]，均认为PCNA LI与肿瘤的病理类型无明显关系，但与肿瘤的分化程度有一定的相关性。分比程度越低的肿瘤其PCNA LI越高，说明其生长迅速，倍增时间短。同时本研究还发现PCNA LI与肿瘤的大小和浸润深度有相关性。肿瘤越大，浸润深度越深，其PCNA LI越高，说明肿瘤组织增殖越旺盛，同时有淋巴结转移者其PCNA LI越高，说明细胞增长速度快，目前的大量资料均支持PCNA LI与肿瘤的浸润及转移密切相关[5]。
PCNA与胃癌预后的关系是人们关注的热点。Kakeji和Mori的研究均认为高PCNA LI组的5年生存率明显低于低PCNA LI组，且低PCNA LI的复发率明显低于高PCNA LI组。这主要因为高PCNA LI的肿瘤倍增时间短，生长迅速；同时高PCNA LI组肿瘤体积较大，浸润较深，伴淋巴结和脏器转移[6，7]。
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PCNA作为一个细胞增殖的标记物，与胃癌组织的分化程度、浸润深度、肿瘤大小、转移和预后有密切关系，其可作为一种胃癌监测指标用以指导胃癌的治疗和判断预后[8]。■
作者简介：刘连新(1970-)，男，博士研究生
参考文献：
[1]Bravo R,Frank R,Blundell PA,et al.Cyclin/PCNA is the auxillary protein of DNA polymerase-S[J].Nature,1987,328(6):515-519.
[2]Maeda K,Chung YS,Omada N,et al.Proliferating cell nuclear antigen labeling index of preoperative biopsy specimens in gastric carcinoma with special reference to prognosis[J].Cancer,1994,73(3):528-533.
, http://www.100md.com
[3]Travali S,Ku DH,Rizzo MG,et al.Structure of the human gene for the proliferating cell nuclear antigen[J].J Biol Cher,1989,264(13):7466-7472.
[4]Inada T,Imural Ichikawat,et al.Proliferative activity of gastric cancer assessed by immunostaining for proliferating nuclear cell antigen[J].J Surgical Oncology,1993,54:146-152.
[5]Lipponen PK,Ekelinen MJ.Cell proliferation of transitional cell Bladder tumor's determined by PCNA/cyclin immunostaining and its prognostic value[J].Br J Cancer,1992,66:171-179.
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[6]Kakeji Y,Machara Y,Adachi Y,et al.Proliferative activity as a prognostic factor in Borrnan type 4 gastric carcinoma[J].Br J Cancer,1994,69(4):749-753.
[7]Mori M,Kakeji Y,Adachi Y,et al.The prognostic significance of proliferating cell nuclear in clinical gastric cancer[J].Surgery,1993,113(6):683-690.
[8]Molykutty J,Rajalekshmy TN,Balaranan NM,et al.Proliferating cell nuclear antigen(PCNA) expression in gestational trophoblastic disease(GTD)[J].Neoplasm,1998,45(5):301-304.
收稿日期：1999-04-28
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