免疫组织化学法在淋巴管研究中的应用
作者：张云芳 周贵生 黄淇
单位：张云芳(哈尔滨医科大学 解剖学教研室) ； 周贵生(免疫学教研室)； 黄淇(病理学教研室，黑龙江 哈尔滨 150086)
关键词：免疫组织化学法；小肠；器官内淋巴管
哈尔滨医科大学学报000135 摘 要：目的 用免疫组织化学法区别人小肠组织的血管和淋巴管。方法 先用未标记的特异性抗体与标本中相应抗原反应，再用抗特异性抗体的酶标记抗体与结合在抗原上的抗体反应来鉴别淋巴管和血管的分布。结果 光镜下血管和淋巴管对纤维连接蛋白都呈阳性反应，使血管壁和淋巴管壁呈棕色。而对Ⅳ型胶原蛋白的反应血管呈阳性，血管壁呈现连续的深褐色；淋巴管却反应弱或无，不显示褐色，只显示复染后的颜色，即细胞核呈蓝色，内皮细胞质呈淡灰色。结论 此法可以客观地鉴别血管和淋巴管。
分类号：R392-33 文献标识码：A
, http://www.100md.com
文章编号：1000-1905(2000)01-0074-01▲
免疫组织化学法是组织特殊染色和组织化学的一种具有特异性高和灵敏度强的技术方法，近年来免疫组化技术在形态学研究中的应用日渐增多，但用此法研究人小肠淋巴管国内尚未见有类似的研究报道。本文先用未标记的特异抗体(一抗)与标本中相应抗原反应，再用酶标记的抗特异性抗体的抗体与结合在抗原上抗体(一抗)反应，以此来鉴别淋巴管和血管的分布情况。
1 材料与方法
1.1 主要试剂 羊血清、纤维连接蛋白、Ⅳ型胶原蛋白、生物素标记抗兔和鼠IgG、辣根过氧化物酶标记链霉卵白素(即用型)、DAB，均为北京中山生物技术有限公司生产。
1.2 实验材料和组织切片制备 人小肠组织及手术切除的正常新鲜部分小肠组织，常规石蜡包埋，连续切片，切片厚6μm，常规石蜡脱水，甲醇溶液阻断20min，消除内源性过氧化物酶的活性，PBS洗。滴加封闭用羊血清工作液，室温10min，倾出血清，分两组；一组滴加纤维连接蛋白(Fibronction)，另一组滴加Ⅳ型胶原蛋白(Type Ⅳ collagen)，室温孵育1h，PBS洗。滴加生物素标记的二抗，37℃孵育30min，PBS洗。滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液，37℃孵育30min，PBS洗。显示剂DAB显色，显微镜下控制，自来水充分冲洗后，HE复染，封片。
, 百拇医药
2 结果和讨论
在以Fibronection为一抗的切片上，光镜下可见血管和淋巴管均呈阳性反应，管壁呈现棕色。而以Type Ⅳ collagen为一抗的切片上只见血管呈现强阳性反应，管壁呈现连续的深褐色；淋巴管反应弱或无，不显示褐色，只显示复染后的颜色，即内皮细胞核呈蓝色，细胞质呈淡灰色，光镜下可明显鉴别血管和淋巴管。从形态上看，浅染的淋巴管形态不规则，管壁较薄，有时出现较多皱褶，管腔常常较大，略扁。而深褐色的血管形状较规则，管壁较厚，很少见皱褶，腔较小，其内含有数量不等的血细胞。
免疫组化法也叫免疫细胞化学，是用抗原—抗体反应而显示结果。1983年Barsky[1]将Ⅳ型胶原蛋白和粘蛋白(Laminin)应用于含毛细血管及毛细淋巴管丰富的组织层，以区别血管和淋巴管获得成功。1990年Otsuke[2]报道Ⅳ型胶原蛋白免疫反应证明在血管见到很强的连续线状的内皮下染色带，而淋巴管石蜡切片直接免疫过氧化物酶技术显示免疫反应很弱或无，在所有的管外组织间隙和淋巴管、血管都见到Fibronection阳性反应。本文将人小肠组织连续石蜡切片，分为2组，一组以Fibronection为一抗只显示血管，结果在Fibronection染色的切片上显示了血管和淋巴管，与之相邻的切片只作了collagen免疫染色，相应部位未显色的即为淋巴管。如此可以客观地鉴别血管和淋巴管。此法继赵玲辉等酶组化法之后的又一鉴别血管与淋巴管的客观、可靠、实用的方法。■
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作者简介：张云芳(1964-)，女，副教授，硕士
参考文献：
[1]Barsky,use of anti-basement membrane antibodies to distinguish blood ressel capillaries from lymphatic capillaries[J].Am J Surgi Pathol,1983,7(7):667-677.
[2]Otsuki,Immunohistoohemical differentiation between lymphatic vessels and blood vessels-use of anti-basement membrane antibodies and anti-Faetor Ⅷ-related antigen[J].Arch Histol,Cytol,1990,53:95-106.
收稿日期：1999-09-14, 百拇医药
单位：张云芳(哈尔滨医科大学 解剖学教研室) ； 周贵生(免疫学教研室)； 黄淇(病理学教研室，黑龙江 哈尔滨 150086)
关键词：免疫组织化学法；小肠；器官内淋巴管
哈尔滨医科大学学报000135 摘 要：目的 用免疫组织化学法区别人小肠组织的血管和淋巴管。方法 先用未标记的特异性抗体与标本中相应抗原反应，再用抗特异性抗体的酶标记抗体与结合在抗原上的抗体反应来鉴别淋巴管和血管的分布。结果 光镜下血管和淋巴管对纤维连接蛋白都呈阳性反应，使血管壁和淋巴管壁呈棕色。而对Ⅳ型胶原蛋白的反应血管呈阳性，血管壁呈现连续的深褐色；淋巴管却反应弱或无，不显示褐色，只显示复染后的颜色，即细胞核呈蓝色，内皮细胞质呈淡灰色。结论 此法可以客观地鉴别血管和淋巴管。
分类号：R392-33 文献标识码：A
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文章编号：1000-1905(2000)01-0074-01▲
免疫组织化学法是组织特殊染色和组织化学的一种具有特异性高和灵敏度强的技术方法，近年来免疫组化技术在形态学研究中的应用日渐增多，但用此法研究人小肠淋巴管国内尚未见有类似的研究报道。本文先用未标记的特异抗体(一抗)与标本中相应抗原反应，再用酶标记的抗特异性抗体的抗体与结合在抗原上抗体(一抗)反应，以此来鉴别淋巴管和血管的分布情况。
1 材料与方法
1.1 主要试剂 羊血清、纤维连接蛋白、Ⅳ型胶原蛋白、生物素标记抗兔和鼠IgG、辣根过氧化物酶标记链霉卵白素(即用型)、DAB，均为北京中山生物技术有限公司生产。
1.2 实验材料和组织切片制备 人小肠组织及手术切除的正常新鲜部分小肠组织，常规石蜡包埋，连续切片，切片厚6μm，常规石蜡脱水，甲醇溶液阻断20min，消除内源性过氧化物酶的活性，PBS洗。滴加封闭用羊血清工作液，室温10min，倾出血清，分两组；一组滴加纤维连接蛋白(Fibronction)，另一组滴加Ⅳ型胶原蛋白(Type Ⅳ collagen)，室温孵育1h，PBS洗。滴加生物素标记的二抗，37℃孵育30min，PBS洗。滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液，37℃孵育30min，PBS洗。显示剂DAB显色，显微镜下控制，自来水充分冲洗后，HE复染，封片。
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2 结果和讨论
在以Fibronection为一抗的切片上，光镜下可见血管和淋巴管均呈阳性反应，管壁呈现棕色。而以Type Ⅳ collagen为一抗的切片上只见血管呈现强阳性反应，管壁呈现连续的深褐色；淋巴管反应弱或无，不显示褐色，只显示复染后的颜色，即内皮细胞核呈蓝色，细胞质呈淡灰色，光镜下可明显鉴别血管和淋巴管。从形态上看，浅染的淋巴管形态不规则，管壁较薄，有时出现较多皱褶，管腔常常较大，略扁。而深褐色的血管形状较规则，管壁较厚，很少见皱褶，腔较小，其内含有数量不等的血细胞。
免疫组化法也叫免疫细胞化学，是用抗原—抗体反应而显示结果。1983年Barsky[1]将Ⅳ型胶原蛋白和粘蛋白(Laminin)应用于含毛细血管及毛细淋巴管丰富的组织层，以区别血管和淋巴管获得成功。1990年Otsuke[2]报道Ⅳ型胶原蛋白免疫反应证明在血管见到很强的连续线状的内皮下染色带，而淋巴管石蜡切片直接免疫过氧化物酶技术显示免疫反应很弱或无，在所有的管外组织间隙和淋巴管、血管都见到Fibronection阳性反应。本文将人小肠组织连续石蜡切片，分为2组，一组以Fibronection为一抗只显示血管，结果在Fibronection染色的切片上显示了血管和淋巴管，与之相邻的切片只作了collagen免疫染色，相应部位未显色的即为淋巴管。如此可以客观地鉴别血管和淋巴管。此法继赵玲辉等酶组化法之后的又一鉴别血管与淋巴管的客观、可靠、实用的方法。■
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作者简介：张云芳(1964-)，女，副教授，硕士
参考文献：
[1]Barsky,use of anti-basement membrane antibodies to distinguish blood ressel capillaries from lymphatic capillaries[J].Am J Surgi Pathol,1983,7(7):667-677.
[2]Otsuki,Immunohistoohemical differentiation between lymphatic vessels and blood vessels-use of anti-basement membrane antibodies and anti-Faetor Ⅷ-related antigen[J].Arch Histol,Cytol,1990,53:95-106.
收稿日期：1999-09-14, 百拇医药