表达有淋系分化抗原的急性髓性白血病的临床意义
作者：韩为东 王椿 刘秀娥 乔振华 杨林花 杨波
单位：韩为东(解放军总医院血液科研究生，北京 100853；)；王椿(上海市第一人民医院血液科，上海 200088)；刘秀娥 乔振华 杨林花 杨波(山西医科大学第二医院血液科，太原 030001)
关键词：淋系分化抗原；急性髓性白血病；预后；双表型；流式细胞仪
军医进修学院学报000110 摘 要：目的：进一步探索淋系分化抗原在急性髓性白血病(AML)中的表达特征及其对AML患者预后的影响。方法：采用间接免疫荧光法对 84 例初诊AML患者进行了免疫表型检测，并用流式细胞仪对淋、髓两系分化抗原共表者做双标记分析。结果：84 例AML中，30例 (35.72%)有淋系抗原表达(ly+)。对于双表型患者，流式细胞仪分析显示其白血病细胞表型不均一。在同等化疗强度基础上，ly+者较ly-者完全缓解(CR1)率低，获CR1所需时间长，CR1后无病生存期短(DFS期，P值匀<0.05)。多因素分析表明ly+是影响AML患者DFS期的一个主要危险因素(P<0.05)。结论：淋系分化抗原在AML中的表达具有复杂性，ly+的AML属于预后不良的临床亚型，应进一步探索针对性的治疗策略。
, 百拇医药
中图号：R733.7 文献标识码：A
文章编号：1005-1139(2000)01-0029-31
Clinical signifiance of lymphoid-associated cell-surfance antigens
in acute meyloid leukemia
HAN Wei-dong,(Department of Hematology, PLA General Hospital, Beijing100853，China)
WANG Chong,LIU Xiu-er,QIAO Zheng-hua,YANG Ling-hua,YANG Bo
Abstract：Objective：To further explore the expression of lymphoid-associated antigens in acute myloid leukemia (AML) and its impact on clinical pragnosis of patients with AML.Methods：Using indirect immunofluorescence assay, immunophenotyping was performed in 84 patients with de nove AML. Leukemic cells coexpressing lymphoid and myeloid associated antigens were analysed by dual-color flow cytometry.Thirty in 84 patients expressed lymphoid-lineage markers (Ly+ AML, 35.72%). Results from analysis of flow cytometry showed that leukemic cells in biphenotypic patients may be composed of dual-marked cells, or dual-and single-marked cells. On the basis of the same chemotherapic intensity, Ly+AML patients (n=30) had a lower complete remissin (CR) rate (81.48%v60%, P<0.05), longer time to achieve CR1 (Median day: 29v24,P<0.05), short disease-free survival (DFS) time (Median follow-up week: 37,χ2＝4.52，P<0.05) than Ly-patients significantly. Multivariation analysis including age,sex,WBC count,days to achieve CR1 and Ly+/- indicated that expression of lymphoid-associated antigens in AML patients was a significant adverse factor to DFS time (P<0.05). Conclusion：Expression of lymphoid-associated antigens in AML showed complexity. Ly+ AML is a clinical subtype which has a poor prognosis.Therapeutic design direct to it remains to be further explored.
, http://www.100md.com
Key words：lymphoid-associated antigens;AML;prognosis;biphenotype;flow cytometry▲
近年来，越来越多的资料表明系列分化抗原在白血病中交叉表达较多， 20%～50% 的AML患者表达有淋系分化抗原[1，2]，运用流式细胞仪将它们分为“双表型”及“双克隆型”两类。具有该表型患者的临床治疗反应及预后，目前尚无确切定论[3，4]。
我们对 84 例AML患者进行了免疫表型检测，并对 9 例双表型患者做了流式细胞仪双标记分析，观察了淋系分化抗原表达(ly+)与不表达(ly-)组的治疗反应及预后。
1 对象和方法
1.1 对象 84例AML均系山西医科大学第二医院初诊住院患者，所有病例均经FAB标准确诊并分亚型。其中男40例，女44例，年龄范围5～79岁，中位年龄34岁。
, http://www.100md.com
1.2 间接免疫荧光染色 化疗前抽取骨髓，每例样本中原始+幼稚细胞占有核细胞的75%以上。部分单个核细胞(MNC)经2%的多聚甲醛固定后，储存于Hank液中备用。染色采用间接免疫荧光法。Olympus荧光显微镜(Olympus公司，Japan)下观察计数200个以上的细胞，阳性细胞数在20%以上者为阳性诊断标准。所用单抗包括HLA-DR、CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD10、CD19、CD20、CD22、CD13、CD14、CD15、CD33及CD34，共17种，均由中国医学科学院血研所提供。
1.3 流式细胞仪分析 计算上述方法检出的阳性百分率，对同一标本淋系分化抗原表达率加髓系分化抗原表达率大于100%者，一周内取固定后的MNC做流式细胞仪双染分析。所用单抗分别为FITC及PE直接标记，由美国BD公司提供，采用FACS-Calibur型流式细胞仪(BD公司)。每例样本均做未染对照。每份样品至少读取10000个以上的细胞。双标记荧光阳性细胞数>10%为阳性标准。
, 百拇医药
1.4 治疗 诱导治疗采用标准DA，HA方案(M3除外)，CR1后原方案巩固，以后不同方案交替治疗(无大剂量强化治疗)。
1.5 统计方法 非正态分布数值资料用秩和检验，分类资料用χ2检验，DFS期概率比较用Kaplan-Meier法。多参数分析用Cox比例风险模型。所有统计均使作SAS软件。
2 结 果
2.1 淋系分化抗原表达状况 84例AML患者中，30例有淋系抗原表达(占35.72%)，其中17例表达T系相关抗原，10例表达B系抗原，3例呈T、B系分化抗原共表，分别占56.7%、33.3%、10.0%。
2.2 双标记检测 流式细胞仪检测了9例(9/69例)淋髓两系抗原共表的AML患者(附图)。所检白血病细胞依其表面膜抗原表达特征主要分为两种情况：①白血病细胞由两个表型不同的群体组成，即“双标记”与“单标记”群体；②只由“双标记”群体组成。值得注意的是，1例AML-M2患者在初诊时白血病细胞以CD19，CD33双标记群体构成，缓解后6月复发，此时只表达CD19为主的B系分化抗原。经形态与组化资料前后对照，确定白血病发生了系列转化(AML→ALL)。
, http://www.100md.com
附图 流式细胞仪双标记结果
左：未染标本阴性对照；
中：“双标记”细胞；
右：“双标记”与“单标记”细胞共存
2.3 治疗反应 84例患者经诱导治疗，62例获CR1。ly+与ly-组获CR1率以及获CR1所需天数经统计学分析差异显著(P<0.05，表1和表2)
表1 Ly+，Ly-AML患者CR1率比较 组 别
CR1例数
, 百拇医药
未CR1例数
合计
CR1率
χ2
P
Ly+组
18
12
30
60.00%
Ly-组
44
, 百拇医药
10
54
81.48%
4.60
<0.05
总 计
62
22
84
73.81%
表2 Ly+，Ly-AML患者获CR1所需时间比较 组 别
例数
, 百拇医药
获CR1所需天数
P
x
M
范围
Ly+组
Ly-组
18
44
45
33
29
24
, http://www.100md.com
16～180
16～120
<0.05
2.4 DFS期结果分析 以获CR1日期为观察起点，以白血病复发为终结点，对CR1后定期巩固化疗的59例患者进行了随访，中位随访时间为9月。41例ly-AML患者，14例复发，中位DFS期为17月，18例ly+者9例复发，中位DFS期为9月(χ2＝4.52，P<0.05Log-Rank检验)。ly+与ly-组6个月DFS期概率分别为73.33%，93.00%。12个月DFS期概率又分别为36.67%，81.00%，提示ly+患者多在CR1后6～12月内复发。4例B系ly+者CR1后3例在6月时复发。
, http://www.100md.com
2.5 DFS期因素分析CR1后以DFS期为因变量，选初诊时年龄、性别、白细胞数、ly+/-、以及获CR1所需天数为自变量，对上述59例患者进行了Cox比例风险模型分析，入选自变量为ly+及获CR1所需天数(P值分别为0.0380，0.0013)。
3 讨 论
作者对84例初诊AML患者进行了免疫表型检测，30例表达淋系分化抗原(35.72%)，与以往报道比例相近[3]。
ly+的AML患者中，白血病细胞具有双表特征的目前尚不能确切估计，我们观察到9例双表型患者。其白血病细胞既可能由淋髓系抗原“双阳性”及“单阳性”两个亚克隆共同组成，也可能由匀一的双表细胞组成。Tien及Barcena等研究提示在人类造血组织中有稀少的(<1%)具有双表特征的造血细胞，并具有系列分化的能力[5，6]，这就提示“单阳性”细胞可由“双阳性”细胞演化而来。如结果所述，1例M2患者在复发时发生系列转化，并伴有表型改变，这一事实表明白血病细胞中“双阳性”克隆可能存在向“单阳性”克隆演化的趋势。但更重要的表明了两个细胞亚群对化疗药物的敏感性存在差异，针对AML的治疗方案，单纯淋系分化抗原表达的细胞亚群较淋髓分化抗原共表的细胞亚群更具有耐受性。
, 百拇医药
对白血病细胞生物学特征的认识与鉴别，主要的临床意义在于区分AML时的预后危险因素，以设计针对性治疗策略。本组在治疗强度均衡的条件下，对84例患者进行了比较分析，发现ly+的AML患者CR率低，治疗敏感性差，复发率高，DFS期短。多因素分析表明淋系分化抗原的表达与获CR1所需时间是影响DFS期的主要因素。在ly+组内，虽T系ly+与B系ly+者的总体DFS期无们注意到B系ly+者多在半年内复发，提示B系ly+患者对治疗敏感性更差。总之，从我们的观察可以认为ly+的AML患者预后不良，属AML具有高危特征的临床亚型，应进一步探索具有针对性的治疗策略。■
作者简介：韩为东，男，1969年11月14日出生，汉族，山西沁源县人，1998年硕士毕业于山西医科大学，从事白血病诊治的研究；军医进修学院98级博士研究生，导师楼方定教授。电话：(010)66937644
, 百拇医药
参考文献：
[1]Schwarzinger I, Valent P, Koeller et al. Prognostic significance of surfance marker expression on blast of patients with de nove acute myeloblastic leukemia [J]. J Clin Oncol, 1990,8:423-426.
[2]Bradstock K, Matthews J, Benson E et al. Prognostic value of immunophenotyping in acute myeloid leukemia [J]. Blood, 1994,84:1220-1222.
[3]Creutzig U, Harbott J, Sperling C. Clinical significance of surface antigen expression in childhood with acute myeloid leukemia: Results of study AML-BFM-87 [J]. Blood, 1995,86:3097-3099.
, 百拇医药
[4]何志洁，邹正辉，虞 斐等.急性髓细胞白血病细胞的淋系分化抗原表达及其临床意义[J].中华血液学杂志，1993，14：16-18.
[5]Tien HF, Chou CC, Wang CH et al. Putative normal counterparts of leukemic cells from CD7 Positive acute myeloid leukemia can be demonstrated in human haemopoietic tissues[J]. Br J Haematol, 1996,94:501-503.
[6]Bárcena A, Muench MO, Galy AHM et al. Phentypic and functional analysis of T-cell precursors in the human fetal liver and thymus. CD7 expression in the earliest stages of T-and myeloid development [J]. Blood, 1993,82:3401-3403.
收稿日期：1999-07-07
改回日期：1999-08-03, 百拇医药
单位：韩为东(解放军总医院血液科研究生，北京 100853；)；王椿(上海市第一人民医院血液科，上海 200088)；刘秀娥 乔振华 杨林花 杨波(山西医科大学第二医院血液科，太原 030001)
关键词：淋系分化抗原；急性髓性白血病；预后；双表型；流式细胞仪
军医进修学院学报000110 摘 要：目的：进一步探索淋系分化抗原在急性髓性白血病(AML)中的表达特征及其对AML患者预后的影响。方法：采用间接免疫荧光法对 84 例初诊AML患者进行了免疫表型检测，并用流式细胞仪对淋、髓两系分化抗原共表者做双标记分析。结果：84 例AML中，30例 (35.72%)有淋系抗原表达(ly+)。对于双表型患者，流式细胞仪分析显示其白血病细胞表型不均一。在同等化疗强度基础上，ly+者较ly-者完全缓解(CR1)率低，获CR1所需时间长，CR1后无病生存期短(DFS期，P值匀<0.05)。多因素分析表明ly+是影响AML患者DFS期的一个主要危险因素(P<0.05)。结论：淋系分化抗原在AML中的表达具有复杂性，ly+的AML属于预后不良的临床亚型，应进一步探索针对性的治疗策略。
, 百拇医药
中图号：R733.7 文献标识码：A
文章编号：1005-1139(2000)01-0029-31
Clinical signifiance of lymphoid-associated cell-surfance antigens
in acute meyloid leukemia
HAN Wei-dong,(Department of Hematology, PLA General Hospital, Beijing100853，China)
WANG Chong,LIU Xiu-er,QIAO Zheng-hua,YANG Ling-hua,YANG Bo
Abstract：Objective：To further explore the expression of lymphoid-associated antigens in acute myloid leukemia (AML) and its impact on clinical pragnosis of patients with AML.Methods：Using indirect immunofluorescence assay, immunophenotyping was performed in 84 patients with de nove AML. Leukemic cells coexpressing lymphoid and myeloid associated antigens were analysed by dual-color flow cytometry.Thirty in 84 patients expressed lymphoid-lineage markers (Ly+ AML, 35.72%). Results from analysis of flow cytometry showed that leukemic cells in biphenotypic patients may be composed of dual-marked cells, or dual-and single-marked cells. On the basis of the same chemotherapic intensity, Ly+AML patients (n=30) had a lower complete remissin (CR) rate (81.48%v60%, P<0.05), longer time to achieve CR1 (Median day: 29v24,P<0.05), short disease-free survival (DFS) time (Median follow-up week: 37,χ2＝4.52，P<0.05) than Ly-patients significantly. Multivariation analysis including age,sex,WBC count,days to achieve CR1 and Ly+/- indicated that expression of lymphoid-associated antigens in AML patients was a significant adverse factor to DFS time (P<0.05). Conclusion：Expression of lymphoid-associated antigens in AML showed complexity. Ly+ AML is a clinical subtype which has a poor prognosis.Therapeutic design direct to it remains to be further explored.
, http://www.100md.com
Key words：lymphoid-associated antigens;AML;prognosis;biphenotype;flow cytometry▲
近年来，越来越多的资料表明系列分化抗原在白血病中交叉表达较多， 20%～50% 的AML患者表达有淋系分化抗原[1，2]，运用流式细胞仪将它们分为“双表型”及“双克隆型”两类。具有该表型患者的临床治疗反应及预后，目前尚无确切定论[3，4]。
我们对 84 例AML患者进行了免疫表型检测，并对 9 例双表型患者做了流式细胞仪双标记分析，观察了淋系分化抗原表达(ly+)与不表达(ly-)组的治疗反应及预后。
1 对象和方法
1.1 对象 84例AML均系山西医科大学第二医院初诊住院患者，所有病例均经FAB标准确诊并分亚型。其中男40例，女44例，年龄范围5～79岁，中位年龄34岁。
, http://www.100md.com
1.2 间接免疫荧光染色 化疗前抽取骨髓，每例样本中原始+幼稚细胞占有核细胞的75%以上。部分单个核细胞(MNC)经2%的多聚甲醛固定后，储存于Hank液中备用。染色采用间接免疫荧光法。Olympus荧光显微镜(Olympus公司，Japan)下观察计数200个以上的细胞，阳性细胞数在20%以上者为阳性诊断标准。所用单抗包括HLA-DR、CD1、CD2、CD3、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD10、CD19、CD20、CD22、CD13、CD14、CD15、CD33及CD34，共17种，均由中国医学科学院血研所提供。
1.3 流式细胞仪分析 计算上述方法检出的阳性百分率，对同一标本淋系分化抗原表达率加髓系分化抗原表达率大于100%者，一周内取固定后的MNC做流式细胞仪双染分析。所用单抗分别为FITC及PE直接标记，由美国BD公司提供，采用FACS-Calibur型流式细胞仪(BD公司)。每例样本均做未染对照。每份样品至少读取10000个以上的细胞。双标记荧光阳性细胞数>10%为阳性标准。
, 百拇医药
1.4 治疗 诱导治疗采用标准DA，HA方案(M3除外)，CR1后原方案巩固，以后不同方案交替治疗(无大剂量强化治疗)。
1.5 统计方法 非正态分布数值资料用秩和检验，分类资料用χ2检验，DFS期概率比较用Kaplan-Meier法。多参数分析用Cox比例风险模型。所有统计均使作SAS软件。
2 结 果
2.1 淋系分化抗原表达状况 84例AML患者中，30例有淋系抗原表达(占35.72%)，其中17例表达T系相关抗原，10例表达B系抗原，3例呈T、B系分化抗原共表，分别占56.7%、33.3%、10.0%。
2.2 双标记检测 流式细胞仪检测了9例(9/69例)淋髓两系抗原共表的AML患者(附图)。所检白血病细胞依其表面膜抗原表达特征主要分为两种情况：①白血病细胞由两个表型不同的群体组成，即“双标记”与“单标记”群体；②只由“双标记”群体组成。值得注意的是，1例AML-M2患者在初诊时白血病细胞以CD19，CD33双标记群体构成，缓解后6月复发，此时只表达CD19为主的B系分化抗原。经形态与组化资料前后对照，确定白血病发生了系列转化(AML→ALL)。
, http://www.100md.com
附图 流式细胞仪双标记结果
左：未染标本阴性对照；
中：“双标记”细胞；
右：“双标记”与“单标记”细胞共存
2.3 治疗反应 84例患者经诱导治疗，62例获CR1。ly+与ly-组获CR1率以及获CR1所需天数经统计学分析差异显著(P<0.05，表1和表2)
表1 Ly+，Ly-AML患者CR1率比较 组 别
CR1例数
, 百拇医药
未CR1例数
合计
CR1率
χ2
P
Ly+组
18
12
30
60.00%
Ly-组
44
, 百拇医药
10
54
81.48%
4.60
<0.05
总 计
62
22
84
73.81%
表2 Ly+，Ly-AML患者获CR1所需时间比较 组 别
例数
, 百拇医药
获CR1所需天数
P
x
M
范围
Ly+组
Ly-组
18
44
45
33
29
24
, http://www.100md.com
16～180
16～120
<0.05
2.4 DFS期结果分析 以获CR1日期为观察起点，以白血病复发为终结点，对CR1后定期巩固化疗的59例患者进行了随访，中位随访时间为9月。41例ly-AML患者，14例复发，中位DFS期为17月，18例ly+者9例复发，中位DFS期为9月(χ2＝4.52，P<0.05Log-Rank检验)。ly+与ly-组6个月DFS期概率分别为73.33%，93.00%。12个月DFS期概率又分别为36.67%，81.00%，提示ly+患者多在CR1后6～12月内复发。4例B系ly+者CR1后3例在6月时复发。
, http://www.100md.com
2.5 DFS期因素分析CR1后以DFS期为因变量，选初诊时年龄、性别、白细胞数、ly+/-、以及获CR1所需天数为自变量，对上述59例患者进行了Cox比例风险模型分析，入选自变量为ly+及获CR1所需天数(P值分别为0.0380，0.0013)。
3 讨 论
作者对84例初诊AML患者进行了免疫表型检测，30例表达淋系分化抗原(35.72%)，与以往报道比例相近[3]。
ly+的AML患者中，白血病细胞具有双表特征的目前尚不能确切估计，我们观察到9例双表型患者。其白血病细胞既可能由淋髓系抗原“双阳性”及“单阳性”两个亚克隆共同组成，也可能由匀一的双表细胞组成。Tien及Barcena等研究提示在人类造血组织中有稀少的(<1%)具有双表特征的造血细胞，并具有系列分化的能力[5，6]，这就提示“单阳性”细胞可由“双阳性”细胞演化而来。如结果所述，1例M2患者在复发时发生系列转化，并伴有表型改变，这一事实表明白血病细胞中“双阳性”克隆可能存在向“单阳性”克隆演化的趋势。但更重要的表明了两个细胞亚群对化疗药物的敏感性存在差异，针对AML的治疗方案，单纯淋系分化抗原表达的细胞亚群较淋髓分化抗原共表的细胞亚群更具有耐受性。
, 百拇医药
对白血病细胞生物学特征的认识与鉴别，主要的临床意义在于区分AML时的预后危险因素，以设计针对性治疗策略。本组在治疗强度均衡的条件下，对84例患者进行了比较分析，发现ly+的AML患者CR率低，治疗敏感性差，复发率高，DFS期短。多因素分析表明淋系分化抗原的表达与获CR1所需时间是影响DFS期的主要因素。在ly+组内，虽T系ly+与B系ly+者的总体DFS期无们注意到B系ly+者多在半年内复发，提示B系ly+患者对治疗敏感性更差。总之，从我们的观察可以认为ly+的AML患者预后不良，属AML具有高危特征的临床亚型，应进一步探索具有针对性的治疗策略。■
作者简介：韩为东，男，1969年11月14日出生，汉族，山西沁源县人，1998年硕士毕业于山西医科大学，从事白血病诊治的研究；军医进修学院98级博士研究生，导师楼方定教授。电话：(010)66937644
, 百拇医药
参考文献：
[1]Schwarzinger I, Valent P, Koeller et al. Prognostic significance of surfance marker expression on blast of patients with de nove acute myeloblastic leukemia [J]. J Clin Oncol, 1990,8:423-426.
[2]Bradstock K, Matthews J, Benson E et al. Prognostic value of immunophenotyping in acute myeloid leukemia [J]. Blood, 1994,84:1220-1222.
[3]Creutzig U, Harbott J, Sperling C. Clinical significance of surface antigen expression in childhood with acute myeloid leukemia: Results of study AML-BFM-87 [J]. Blood, 1995,86:3097-3099.
, 百拇医药
[4]何志洁，邹正辉，虞 斐等.急性髓细胞白血病细胞的淋系分化抗原表达及其临床意义[J].中华血液学杂志，1993，14：16-18.
[5]Tien HF, Chou CC, Wang CH et al. Putative normal counterparts of leukemic cells from CD7 Positive acute myeloid leukemia can be demonstrated in human haemopoietic tissues[J]. Br J Haematol, 1996,94:501-503.
[6]Bárcena A, Muench MO, Galy AHM et al. Phentypic and functional analysis of T-cell precursors in the human fetal liver and thymus. CD7 expression in the earliest stages of T-and myeloid development [J]. Blood, 1993,82:3401-3403.
收稿日期：1999-07-07
改回日期：1999-08-03, 百拇医药