慢性重型肝炎患者血小板活化因子水平变化的意义
作者：何云 顾长海 王宇明 郝飞
单位：何云(550009 贵阳，解放军第44医院)；顾长海 王宇明 郝飞(第三军医大学西南医院)
关键词：
中华传染病杂志000116 血小板活化因子(PAF)是一生物活性很强的脂质介质，与内毒素有着密切的关系，后者对肝脏的损害较为明确。PAF参与了缺血再灌流肝损伤和内毒素性肝损伤，且有中心放大作用[1]。但关于PAF在病毒性肝炎中的作用报道甚少。我们对48例慢性重型肝炎(重肝)患者血中PAF水平进行观察，并探讨其与发病机制的关系。
材料与方法
一、病例选择
对照组20例，男15例，女5例，平均年龄41岁，均为健康献血员。48例慢性重型肝炎患者均 为西南医院住院患者，男34例，女14例，年龄23～67岁，平均(45.2±12.8)岁。诊断符 合199 5年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案诊断标准[2]，8例 有肝组织病理检查依据。其中，慢性重肝早期14例，慢性重肝中期18例，慢性重肝晚期16例 。
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二、检查方法
(一) PAF的测定[3] 将洗涤好的兔血小板悬液、消炎痛10～5 mol/L、磷酸肌酸 激 酶(4.68mg/ml)/磷酸肌酸钠盐(360 u/ml)及样品或标准品加入测定管，在T YXN-91型智能血液凝集仪上测定血小板聚集率标准曲线，计算出样品中PAF含量。每次检测 均另取1份加入特异性PAF受体拮抗剂WFB2170(德国Zimmer博士惠赠)，作为阴性对照。
(二) 内毒素测定 将与内毒素测定有关的器材经常规处理后，用60Co放射线照 射24 h除去致热原，按基质显色法测定，药盒由上海医药化验所提供。
(三) 内皮素(Endothelin, ET)测定 采用放射免疫分析法，试剂盒购自解放军总医院， 按试剂盒说明操作。
(四) 肿瘤坏死因子(TNF)测定 采用双抗夹心法，试剂盒由北京邦定生物学公司提供。
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三、统计分析
研究结果以平均数±标准差(
±s)表示，组间两两比较采用t检验。
结果
一、慢性重肝患者血中PAF、ET、TNF、总胆红素(TB)水平及其内毒素血症的发生率
凡血浆内毒素浓度≥50pg/ml定为内毒素血症(ETM)阳性，慢性重肝各期患者血中PAF、E T、TNF、TB水平，见表1。
表1 慢重肝各期患者血中PAF、ET、TB水平(±s) 组 别
例数
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PAF
(ng/ml)
ET
(ng/L)
TNF
(ng/ml)
TB
(μmol/L)
对照组
20
1.49±0.37
55±11
0.67±0.17
, 百拇医药
9.4±3.65
慢重肝(早)
14
2.96±0.68*
79±14*
1.86±0.52*
243.2±38.5*
慢型肝(中)
18
3.85±0.62△
115±17△
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3.74±0.95△
384.8±50.9△
慢重肝(晚)
16
5.47±1.02△△
143±21△△
5.89±1.24△△
431.9±62.4△△
*与对照组比较P<0.05;△与慢重肝(早)比较P<0.05；△△与慢重肝(中)比较P<0.05
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ETM发生率在慢重肝早、中、晚期分别为56.2%、74.9%及89.2%。
二、慢性重肝患者血中PAF水平与ET、TNF和TB水平相关性分析
慢性重型肝炎患者血中PAF水平与ET、TNF-α和TB水平呈非常显著正相关(r=0.528,P<0.01;r=0.433,P<0.01;r=0.748,P<0.01)。
三、慢性重肝患者血清PAF水平与HBV、HCV、HDV感染状态的关系
48例慢性重肝均行乙型肝炎病毒(HBV)、丁型肝炎病毒(HDV)、丙型肝炎病毒(HCV)检查，结 果显示28例单纯HBV或HCV感染者PAF水平为(3.69±0.51)ng/ml，9例HBV+HCV/HDV感染者PAF水平(4.88±0.94)ng/ml，两者相关非常显著(P<0.01)。
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讨论
正常情况下，肝脏单核-吞噬细胞能阻止肠源性内毒素进入体循环。但当肝Kupffer细胞 受到抑制和损伤时，内毒素可进入体循环形成ETM。我们发现慢重肝晚期患者ETM发生率高于 早、中期，且慢重肝晚期患者血中PAF水平显著高于早、中期。血中PAF水平与ETM有关，ETM 形成可能是肝病时血中PAF增高的重要原因。新近Kelber等[4]研究发现各种肝病患 者血清PAF含量升高，其中急性黄疸型肝炎最为明显，其次是肝硬化和肝外胆道梗阻，但未 检测慢性肝炎和慢性重肝。内毒素是PAF强有力的激动剂，可刺激单核-吞噬细胞释放P AF。反之，PAF也可破坏肠粘膜机械性屏障，降低肠粘膜局部免疫功能，使肠粘膜通透性增 加，引起肠源性感染，继发ETM[5]，提示PAF与内毒素互为因果，共同参与肝损伤 。
PAF能促进单核-吞噬细胞产生TNF，用PAF受体拮抗剂RP50778可减少其发生，减轻TNF对多 形核粒细胞的预激及氧自由基、白三烯的产生。TNF也可刺激多种细胞释放PAF，参与病毒性 肝 炎发生[6]。ET能刺激Kupffer细胞释放PAF。在肝功能受损所致肠源性ETM时及低氧 血症等因素可损伤血管内皮细胞释放ET，而使门静脉收缩，肝脏水肿，细胞脂质过氧化和溶 酶体的漏出，形成恶性循环，进一步加重肝损伤[7]。我们也观察到慢性重肝患者 血中TNF、ET水平显著升高，与PAF呈非常显著正相关。总之，这些细胞因子间存在着复 杂的网络联系，它们的产生和释放过程既可以相互激发又具有协同作用，共同参与肝细胞损 害。
, 百拇医药
我们还发现，慢性重肝患者血中PAF水平升高与TB呈非常显著正相关，提示PAF与病毒性 肝炎病变呈平行关系，测定PAF有助于判断患者病情及预后。另外还发现慢性重肝单纯H BV感染与HBV合并HCV/HDV感染者PAF水平差异有显著性，推测双重或三重病毒感染时肝脏病 变较重，故PAF水平较高。
参考文献
1，Fukuoka T, Nakajima Y, Nakano H. The platelet activating factor as a pivotal mediator of shock after liver ischemia. Surg Today, 1995,25:351-356.
2，病毒性肝炎防治方案.中华传染病杂志，1995，13：241-247.
3，Nakamura T, Morita Y, Kuriyama M, et al. Platelet-activating factor in late asthmatic response. Int Arch Allergy Appl Immunol,1987,82:57-62.
, 百拇医药
4，Kleber G, Wieber C, Heuer C, et al. Evidence for systemic release of platele t activating factor in liver disease. J of Hepatlogy, 1996,23:127-132.
5，Braquet P, Touqui L, Shen TY, et al. Perspectives in platelet activating fact or research. Pharmacol Rev. 1987,39:97-102.
6，Valone FH, Ruis NM. Stimulation of tumour necrosis factor release by cytotox ic analogues of platelet activating factor. Immunology, 1992,76:24-29.
7，Mastafa SB, Gandhi CR, Harvey SA， et al. Endothelin stimulates pla telet activating factor synthesis by cultured rat kupffer cells. Hepatology, 199 5,21:545-553.
收稿日期：1999-05-31, 百拇医药
单位：何云(550009 贵阳，解放军第44医院)；顾长海 王宇明 郝飞(第三军医大学西南医院)
关键词：
中华传染病杂志000116 血小板活化因子(PAF)是一生物活性很强的脂质介质，与内毒素有着密切的关系，后者对肝脏的损害较为明确。PAF参与了缺血再灌流肝损伤和内毒素性肝损伤，且有中心放大作用[1]。但关于PAF在病毒性肝炎中的作用报道甚少。我们对48例慢性重型肝炎(重肝)患者血中PAF水平进行观察，并探讨其与发病机制的关系。
材料与方法
一、病例选择
对照组20例，男15例，女5例，平均年龄41岁，均为健康献血员。48例慢性重型肝炎患者均 为西南医院住院患者，男34例，女14例，年龄23～67岁，平均(45.2±12.8)岁。诊断符 合199 5年全国传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案诊断标准[2]，8例 有肝组织病理检查依据。其中，慢性重肝早期14例，慢性重肝中期18例，慢性重肝晚期16例 。
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二、检查方法
(一) PAF的测定[3] 将洗涤好的兔血小板悬液、消炎痛10～5 mol/L、磷酸肌酸 激 酶(4.68mg/ml)/磷酸肌酸钠盐(360 u/ml)及样品或标准品加入测定管，在T YXN-91型智能血液凝集仪上测定血小板聚集率标准曲线，计算出样品中PAF含量。每次检测 均另取1份加入特异性PAF受体拮抗剂WFB2170(德国Zimmer博士惠赠)，作为阴性对照。
(二) 内毒素测定 将与内毒素测定有关的器材经常规处理后，用60Co放射线照 射24 h除去致热原，按基质显色法测定，药盒由上海医药化验所提供。
(三) 内皮素(Endothelin, ET)测定 采用放射免疫分析法，试剂盒购自解放军总医院， 按试剂盒说明操作。
(四) 肿瘤坏死因子(TNF)测定 采用双抗夹心法，试剂盒由北京邦定生物学公司提供。
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三、统计分析
研究结果以平均数±标准差(
±s)表示，组间两两比较采用t检验。结果
一、慢性重肝患者血中PAF、ET、TNF、总胆红素(TB)水平及其内毒素血症的发生率
凡血浆内毒素浓度≥50pg/ml定为内毒素血症(ETM)阳性，慢性重肝各期患者血中PAF、E T、TNF、TB水平，见表1。
表1 慢重肝各期患者血中PAF、ET、TB水平(
±s) 组 别例数
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PAF
(ng/ml)
ET
(ng/L)
TNF
(ng/ml)
TB
(μmol/L)
对照组
20
1.49±0.37
55±11
0.67±0.17
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9.4±3.65
慢重肝(早)
14
2.96±0.68*
79±14*
1.86±0.52*
243.2±38.5*
慢型肝(中)
18
3.85±0.62△
115±17△
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3.74±0.95△
384.8±50.9△
慢重肝(晚)
16
5.47±1.02△△
143±21△△
5.89±1.24△△
431.9±62.4△△
*与对照组比较P<0.05;△与慢重肝(早)比较P<0.05；△△与慢重肝(中)比较P<0.05
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ETM发生率在慢重肝早、中、晚期分别为56.2%、74.9%及89.2%。
二、慢性重肝患者血中PAF水平与ET、TNF和TB水平相关性分析
慢性重型肝炎患者血中PAF水平与ET、TNF-α和TB水平呈非常显著正相关(r=0.528,P<0.01;r=0.433,P<0.01;r=0.748,P<0.01)。
三、慢性重肝患者血清PAF水平与HBV、HCV、HDV感染状态的关系
48例慢性重肝均行乙型肝炎病毒(HBV)、丁型肝炎病毒(HDV)、丙型肝炎病毒(HCV)检查，结 果显示28例单纯HBV或HCV感染者PAF水平为(3.69±0.51)ng/ml，9例HBV+HCV/HDV感染者PAF水平(4.88±0.94)ng/ml，两者相关非常显著(P<0.01)。
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讨论
正常情况下，肝脏单核-吞噬细胞能阻止肠源性内毒素进入体循环。但当肝Kupffer细胞 受到抑制和损伤时，内毒素可进入体循环形成ETM。我们发现慢重肝晚期患者ETM发生率高于 早、中期，且慢重肝晚期患者血中PAF水平显著高于早、中期。血中PAF水平与ETM有关，ETM 形成可能是肝病时血中PAF增高的重要原因。新近Kelber等[4]研究发现各种肝病患 者血清PAF含量升高，其中急性黄疸型肝炎最为明显，其次是肝硬化和肝外胆道梗阻，但未 检测慢性肝炎和慢性重肝。内毒素是PAF强有力的激动剂，可刺激单核-吞噬细胞释放P AF。反之，PAF也可破坏肠粘膜机械性屏障，降低肠粘膜局部免疫功能，使肠粘膜通透性增 加，引起肠源性感染，继发ETM[5]，提示PAF与内毒素互为因果，共同参与肝损伤 。
PAF能促进单核-吞噬细胞产生TNF，用PAF受体拮抗剂RP50778可减少其发生，减轻TNF对多 形核粒细胞的预激及氧自由基、白三烯的产生。TNF也可刺激多种细胞释放PAF，参与病毒性 肝 炎发生[6]。ET能刺激Kupffer细胞释放PAF。在肝功能受损所致肠源性ETM时及低氧 血症等因素可损伤血管内皮细胞释放ET，而使门静脉收缩，肝脏水肿，细胞脂质过氧化和溶 酶体的漏出，形成恶性循环，进一步加重肝损伤[7]。我们也观察到慢性重肝患者 血中TNF、ET水平显著升高，与PAF呈非常显著正相关。总之，这些细胞因子间存在着复 杂的网络联系，它们的产生和释放过程既可以相互激发又具有协同作用，共同参与肝细胞损 害。
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我们还发现，慢性重肝患者血中PAF水平升高与TB呈非常显著正相关，提示PAF与病毒性 肝炎病变呈平行关系，测定PAF有助于判断患者病情及预后。另外还发现慢性重肝单纯H BV感染与HBV合并HCV/HDV感染者PAF水平差异有显著性，推测双重或三重病毒感染时肝脏病 变较重，故PAF水平较高。
参考文献
1，Fukuoka T, Nakajima Y, Nakano H. The platelet activating factor as a pivotal mediator of shock after liver ischemia. Surg Today, 1995,25:351-356.
2，病毒性肝炎防治方案.中华传染病杂志，1995，13：241-247.
3，Nakamura T, Morita Y, Kuriyama M, et al. Platelet-activating factor in late asthmatic response. Int Arch Allergy Appl Immunol,1987,82:57-62.
, 百拇医药
4，Kleber G, Wieber C, Heuer C, et al. Evidence for systemic release of platele t activating factor in liver disease. J of Hepatlogy, 1996,23:127-132.
5，Braquet P, Touqui L, Shen TY, et al. Perspectives in platelet activating fact or research. Pharmacol Rev. 1987,39:97-102.
6，Valone FH, Ruis NM. Stimulation of tumour necrosis factor release by cytotox ic analogues of platelet activating factor. Immunology, 1992,76:24-29.
7，Mastafa SB, Gandhi CR, Harvey SA， et al. Endothelin stimulates pla telet activating factor synthesis by cultured rat kupffer cells. Hepatology, 199 5,21:545-553.
收稿日期：1999-05-31, 百拇医药