肾综合征出血热患者血浆一氧化氮及内皮素水平的动态观察
作者：郑曲波 李灼亮 罗端德 曾令兰
单位：郑曲波 李灼亮(510602 空军广州医院传染科)；罗端德 曾令兰(同济医科大学附属协和医院传染病实验室)
关键词：
中华传染病杂志000113 一氧化氮(NO)和内皮素(ET)是可由血管内皮细胞产生，在血管的生理和病理过程中起着重要 作用的两种小分子物质。肾综合征出血热(HFRS)的基本病变为全身小血管的损伤。为探讨NO 和ET在HFRS发病中的作用机制，对各期HFRS患者血浆NO和ET水平进行了观察，现将结果报道 如下。
材料与方法
一、病例选择
病例为1994年11月～1995年3月于同济医科大学协和医院、湖北省襄樊市传染病医院、宜城 市医院、通城医院、咸宁地区医院的住院HFRS患者，按1986年全国(南京)HFRS临床专题学术 会议制定的标准进行诊断及分型。一周内未用过含硝酸盐及亚硝酸盐类的食物及药物。随机 选择各期HFRS患者56例(血标本84份)，其中男44例，女12例，年龄14～52岁，平均(32.6±1 6.5)岁。对照组20例为健康实习生及协和医院传染病实验室工作人员，年龄及性别差异无显 著性。
, 百拇医药
二、标本的采集
采清晨空腹静脉血4 ml，取2 ml置于含10%EDTA二钠30 μl和400 IU抑肽酶的试管中混匀，4 ℃，300 r/min离心10 min，分离血浆，-20℃保存备ET-1检测。其余血立即离心取血浆，- 20℃冻存备NO-2/NO-3检测。
三、检测方法
(一) NO-2/NO-3检测 采用镉柱还原法[1]，即用镉柱还原NO-3，重 氮法测定NO-2，计本身所含的NO-2及NO-3过柱还原后产生的NO-2总值(NO -2/NO-3)。脱蛋白采用0.5 mmol/L NaOH及10%ZnSO4(终浓度)，过柱后按1∶ 1 加入Griess试剂(1%对氨基苯磺酰胺、0.1%萘基乙二胺、2.5%磷酸)，于波长540 nm处比 色。与用亚硝酸钠制作的标准曲线对照，读取NO-2的μmol值。
, 百拇医药
(二) ET-1检测 采用放免法测定血浆ET浓度，试剂盒购自解放军总医院东亚免疫技术研究 所，按说明书操作。
结果
一、HFRS患者各期血浆NO和ET-1水平与对照组相互关系
见表1。
表1 HFRS患者各期NO-2/NO-3和ET-1水平与对照组相互关系(
±s) 分 组
例数
ET-1
(ng/l)
, 百拇医药
NO-2/NO-3
(μmol/L)
r
HFRS组
发热期
15
50.54±14.28
28.23±13.36*
0.35
低血压休克期
13
, 百拇医药
94.43±35.57**
57.58±31.17**
0.69**
少尿期
16
144.86±64.56**
81.39±29.46**
0.76**
多尿期
18
, 百拇医药 84.26±32.18**
42.37±14.28**
0.64**
恢复期
22
44.26±10.36
22.36±10.83
0.67**
对照组
20
47.93±10.87
, 百拇医药
19.93±9.56
注：* P<0.05,** P<0.01
发热期患者血浆NO-2/NO-3水平开始较明显升高(P<0.05)，低血压休 克期ET-1与NO-2/NO-3水平均显著升高(P<0.01)，少尿期达高峰，多尿期开始 下降，并于恢复期降至基本正常。
二、HFRS患者各期血浆NO-2/NO-3和ET-1水平的相关回归分析结果
除发热期外，其他各期HFRS患者血浆NO和ET-1水平的变化均呈显著正相关(r值的显著 性检验P<0.01)。
, 百拇医药
讨论
血管内皮遍布全身，通过自分泌、旁分泌、细胞分泌或周身分泌等方式产生多种血管活性物 质，如以ET为代表的血管内皮收缩因子(EDCF)，以NO为代表的血管内皮舒张因子(EDRF)，以及利钠肽家族等，构成机体最大的内分泌腺[2]，形成了一个新的研究热点领域——“血管内分泌学说”。ET是目前所发现的最强的血管收缩肽[3]，它由血管内皮细胞分泌，通过与血管平滑肌细胞上的受体结合，激活钙通道，增加钙离子的内流，促进血管平滑肌收缩。当内皮损伤时，其合成释放增加，调节血管的紧张度，同时还作为一种生长因子，刺激血管平滑肌的增生。NO等EDRF则通过cGMP和cAMP途径降低细胞内钙离子浓度，使血管平滑肌细胞舒张[2]。人体内合成NO的酶有原生酶和诱生酶两种，原生酶在生理状态下催化合成少量NO，维持某些正常的生理功能。诱生酶主要存在于巨噬细胞、血管内皮细胞和肝细胞内，病毒、各种细胞因子(如TNF，IFN，IL-2等)和内毒素等可诱导这些细胞产生大量的NO。由此产生的大量NO，一方面松弛血管平滑肌，另一方面产生细胞毒而损伤组织[4]。
, http://www.100md.com
本实验结果显示，血浆NO和ET水平均随HFRS病情发展呈动态变化，且呈正相关，说明两者在 HFRS的发病机制中起着重要作用。在HFRS发热期NO水平即有较明显升高，可能与早期病毒直接作用和上述各种细胞因子的释放而诱导激活巨噬细胞等细胞内的诱生酶有关。大量的NO又在低血压休克的发生与发展中起着重要作用，同时NO还参与全身小血管内皮的损伤以致刺激ET释放增加，从而启动血管内皮的内分泌失调，促进病情的进一步发展。由于ET主要由血管内皮细胞产生，其作用主要发生在局部血管而NO则可由多种细胞产生，其作用遍布全身。因此局部ET的大量释放可能是HFRS的肾损伤的重要原因。局部大量ET引起的肾血管剧烈收缩，致使肾血流量下降，肾小球滤过率降低，尿量减少，而进入少尿期。随着血管内皮的进一步损伤，NO的大量产生和蓄积，发挥其舒张血管，灭活自由基等作用[5]，从而改善肾脏微循环，减少坏死，肾血管内皮开始修复，NO和ET释放量减少，加之抗ET抗体的产生，肾血流量增加，尿量增多，进入多尿期和恢复期。
所以我们认为，病毒的直接作用和免疫反应等造成“血管内分泌失调”是HFRS的发病机制中 的一个重要环节，NO和ET可能是其重要的效应分子。NO与ET的改变呈一定的相关性，可能与 两者相互影响产生有关，但其主要产生和作用机制是不同的。有人还认为，NO具有抗病毒活 性，值得进一步研究。
, 百拇医药
参考文献
1，Green LC,Wagner DA,Glogowski J,et al.Analysis of Nitrate,Nitrite,and [15N] Nitrate in Biological Fluids.Anal Biochem,1982,126:131-138.
2，Inagami T,Naruse M,Richard H.Endothelium as an endocrine organ.Annu Rev Physi ol,1995,57:171-189.
3，Yanagisawa M,Kurihara H,Kimura S,et al.A novel potent vasoconstrictor peptide produced by vascular endothelial cells,Nature,1988,332:411-415.
4，Kilbourn RG, Griffith OW, Gross SS. Pathogenetic mechanisms of septic shock.N Engl J Med. 1993, 329:1427-1428.
5，Harbrecht BG,Billiar TR,Stadler J,et al.Nitric oxide synthesis serves to reduce hepatic damage during acute murine endotoxemia.Crit Care Med,1992,20:1568-1574.
收稿日期：1999-05-27, http://www.100md.com
单位：郑曲波 李灼亮(510602 空军广州医院传染科)；罗端德 曾令兰(同济医科大学附属协和医院传染病实验室)
关键词：
中华传染病杂志000113 一氧化氮(NO)和内皮素(ET)是可由血管内皮细胞产生，在血管的生理和病理过程中起着重要 作用的两种小分子物质。肾综合征出血热(HFRS)的基本病变为全身小血管的损伤。为探讨NO 和ET在HFRS发病中的作用机制，对各期HFRS患者血浆NO和ET水平进行了观察，现将结果报道 如下。
材料与方法
一、病例选择
病例为1994年11月～1995年3月于同济医科大学协和医院、湖北省襄樊市传染病医院、宜城 市医院、通城医院、咸宁地区医院的住院HFRS患者，按1986年全国(南京)HFRS临床专题学术 会议制定的标准进行诊断及分型。一周内未用过含硝酸盐及亚硝酸盐类的食物及药物。随机 选择各期HFRS患者56例(血标本84份)，其中男44例，女12例，年龄14～52岁，平均(32.6±1 6.5)岁。对照组20例为健康实习生及协和医院传染病实验室工作人员，年龄及性别差异无显 著性。
, 百拇医药
二、标本的采集
采清晨空腹静脉血4 ml，取2 ml置于含10%EDTA二钠30 μl和400 IU抑肽酶的试管中混匀，4 ℃，300 r/min离心10 min，分离血浆，-20℃保存备ET-1检测。其余血立即离心取血浆，- 20℃冻存备NO-2/NO-3检测。
三、检测方法
(一) NO-2/NO-3检测 采用镉柱还原法[1]，即用镉柱还原NO-3，重 氮法测定NO-2，计本身所含的NO-2及NO-3过柱还原后产生的NO-2总值(NO -2/NO-3)。脱蛋白采用0.5 mmol/L NaOH及10%ZnSO4(终浓度)，过柱后按1∶ 1 加入Griess试剂(1%对氨基苯磺酰胺、0.1%萘基乙二胺、2.5%磷酸)，于波长540 nm处比 色。与用亚硝酸钠制作的标准曲线对照，读取NO-2的μmol值。
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(二) ET-1检测 采用放免法测定血浆ET浓度，试剂盒购自解放军总医院东亚免疫技术研究 所，按说明书操作。
结果
一、HFRS患者各期血浆NO和ET-1水平与对照组相互关系
见表1。
表1 HFRS患者各期NO-2/NO-3和ET-1水平与对照组相互关系(
±s) 分 组例数
ET-1
(ng/l)
, 百拇医药
NO-2/NO-3
(μmol/L)
r
HFRS组
发热期
15
50.54±14.28
28.23±13.36*
0.35
低血压休克期
13
, 百拇医药
94.43±35.57**
57.58±31.17**
0.69**
少尿期
16
144.86±64.56**
81.39±29.46**
0.76**
多尿期
18
, 百拇医药 84.26±32.18**
42.37±14.28**
0.64**
恢复期
22
44.26±10.36
22.36±10.83
0.67**
对照组
20
47.93±10.87
, 百拇医药
19.93±9.56
注：* P<0.05,** P<0.01
发热期患者血浆NO-2/NO-3水平开始较明显升高(P<0.05)，低血压休 克期ET-1与NO-2/NO-3水平均显著升高(P<0.01)，少尿期达高峰，多尿期开始 下降，并于恢复期降至基本正常。
二、HFRS患者各期血浆NO-2/NO-3和ET-1水平的相关回归分析结果
除发热期外，其他各期HFRS患者血浆NO和ET-1水平的变化均呈显著正相关(r值的显著 性检验P<0.01)。
, 百拇医药
讨论
血管内皮遍布全身，通过自分泌、旁分泌、细胞分泌或周身分泌等方式产生多种血管活性物 质，如以ET为代表的血管内皮收缩因子(EDCF)，以NO为代表的血管内皮舒张因子(EDRF)，以及利钠肽家族等，构成机体最大的内分泌腺[2]，形成了一个新的研究热点领域——“血管内分泌学说”。ET是目前所发现的最强的血管收缩肽[3]，它由血管内皮细胞分泌，通过与血管平滑肌细胞上的受体结合，激活钙通道，增加钙离子的内流，促进血管平滑肌收缩。当内皮损伤时，其合成释放增加，调节血管的紧张度，同时还作为一种生长因子，刺激血管平滑肌的增生。NO等EDRF则通过cGMP和cAMP途径降低细胞内钙离子浓度，使血管平滑肌细胞舒张[2]。人体内合成NO的酶有原生酶和诱生酶两种，原生酶在生理状态下催化合成少量NO，维持某些正常的生理功能。诱生酶主要存在于巨噬细胞、血管内皮细胞和肝细胞内，病毒、各种细胞因子(如TNF，IFN，IL-2等)和内毒素等可诱导这些细胞产生大量的NO。由此产生的大量NO，一方面松弛血管平滑肌，另一方面产生细胞毒而损伤组织[4]。
, http://www.100md.com
本实验结果显示，血浆NO和ET水平均随HFRS病情发展呈动态变化，且呈正相关，说明两者在 HFRS的发病机制中起着重要作用。在HFRS发热期NO水平即有较明显升高，可能与早期病毒直接作用和上述各种细胞因子的释放而诱导激活巨噬细胞等细胞内的诱生酶有关。大量的NO又在低血压休克的发生与发展中起着重要作用，同时NO还参与全身小血管内皮的损伤以致刺激ET释放增加，从而启动血管内皮的内分泌失调，促进病情的进一步发展。由于ET主要由血管内皮细胞产生，其作用主要发生在局部血管而NO则可由多种细胞产生，其作用遍布全身。因此局部ET的大量释放可能是HFRS的肾损伤的重要原因。局部大量ET引起的肾血管剧烈收缩，致使肾血流量下降，肾小球滤过率降低，尿量减少，而进入少尿期。随着血管内皮的进一步损伤，NO的大量产生和蓄积，发挥其舒张血管，灭活自由基等作用[5]，从而改善肾脏微循环，减少坏死，肾血管内皮开始修复，NO和ET释放量减少，加之抗ET抗体的产生，肾血流量增加，尿量增多，进入多尿期和恢复期。
所以我们认为，病毒的直接作用和免疫反应等造成“血管内分泌失调”是HFRS的发病机制中 的一个重要环节，NO和ET可能是其重要的效应分子。NO与ET的改变呈一定的相关性，可能与 两者相互影响产生有关，但其主要产生和作用机制是不同的。有人还认为，NO具有抗病毒活 性，值得进一步研究。
, 百拇医药
参考文献
1，Green LC,Wagner DA,Glogowski J,et al.Analysis of Nitrate,Nitrite,and [15N] Nitrate in Biological Fluids.Anal Biochem,1982,126:131-138.
2，Inagami T,Naruse M,Richard H.Endothelium as an endocrine organ.Annu Rev Physi ol,1995,57:171-189.
3，Yanagisawa M,Kurihara H,Kimura S,et al.A novel potent vasoconstrictor peptide produced by vascular endothelial cells,Nature,1988,332:411-415.
4，Kilbourn RG, Griffith OW, Gross SS. Pathogenetic mechanisms of septic shock.N Engl J Med. 1993, 329:1427-1428.
5，Harbrecht BG,Billiar TR,Stadler J,et al.Nitric oxide synthesis serves to reduce hepatic damage during acute murine endotoxemia.Crit Care Med,1992,20:1568-1574.
收稿日期：1999-05-27, http://www.100md.com