牙周炎治疗后龈沟液中弹性蛋白酶水平的变化
作者：和璐 曹采方 沙月琴
单位：北京医科大学口腔医学院牙周科 100081
关键词：牙周炎；胰肽酶；龈沟液
中华口腔医学杂志000105 摘 要：目的：观察龈沟液(gingival crevicular fluid,GCF)中细胞外弹性蛋白酶(elastase in the supernatant,EA-s) 和细胞内弹性蛋白酶(elastase in the pellet,EA-p) 在牙周基础治疗后的变化。方法：用滤纸条的袋内取样法取8例患者43个牙位治疗前后的GCF样本，以底物检测法测定其中的EA-s及EA-p水平。结果：治疗后的GCF-EA-s、EA-p总量及EA-s浓度、EA-s/EA-p(S/P)比值均较治疗前显著下降(P<0.001)，但EA-p浓度治疗前后无显著差异(P>0.05)。结论：GCF-EA水平反映牙周组织的炎症破坏程度，可作为评价疗效的客观指标，尤其是EA-s和S/P的作用明显，二者在判断牙周组织的活动性破坏中有意义。
, 百拇医药
Changes of elastase in gingival crevicular fluid after periodontal treatment of adult periodontitis patients
HE Lu
(Department of Periodontology,School of Stomatology,Beijing Medical University,Beijing 100081,China)
CAO Caifang
(Department of Periodontology,School of Stomatology,Beijing Medical University,Beijing 100081,China)
, 百拇医药 SHA Yueqin
(Department of Periodontology,School of Stomatology,Beijing Medical University,Beijing 100081,China)
Abstract：Objective：To examine the changes of elastase in the supernatant (EA-s) and in the pellet (EA-p) after centrifuge in gingival crevicular fluid(GCF) before and after periodontal treatment.Methods：GCF was sampled with filter paper strips by intra-pocket method to determine EA levels .Forty-three teeth of eight subjects were included.EA-s and EA-p were determined seperately using the subtract Meosuc-ala-ala-val-pro-NA.Results：EA-s per site and per ml,EA-p per site and the ratio of EA-s/EA-p(S/P) decreased significantly after non-surgical periodontal treatment (P<0.001),while EA-p concentration didn't change(P>0.05).Conclusions：GCF-EA-s and EA-p could act as objective parameters to evaluate the effect of periodontal therapy,especially EA-s and S/P,which may be sensitive diagnostic parameters for determining periodontal disease activity.
, 百拇医药
Key words：Periodontitis;Pancreatopeptidase;Gingival crevicular fluid▲
龈沟液(gingival crevicular fluid,GCF)中的弹性蛋白酶(elastase,EA)主要源于中性多形核白细胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN),它能广泛地破坏牙周结缔组织和骨组织,与牙周组织的活动性破坏密切相关。少数研究认为,EA有可能预测未来附着丧失的发生，但对其预测能力有争议，这除了不同学者采用的活动期判断标准、检测方法、纵向观察时间不同外，还与检测的多是EA总水平有关[1,2]。实际上，GCF中EA总水平有一部分是已被释放、具有活性作用的细胞外EA(EA in the supernatant,EA-s)，另一部分是还存在于PMN中未被释放出来、尚无活性的细胞内EA(EA in the pellet,EA-p)[3,4]。二者治疗前、后的变化是否一样尚未见报道。我们观察了牙周基础治疗后这两种成分的变化,以期更深入地了解EA在牙周炎发生中的作用。
, 百拇医药
材料和方法
1.病例选择：从北京医科大学口腔医学院牙周科选择成人牙周炎患者8例，男3例，女5例，年龄27～58岁。患者全身健康,1年以上未做过牙周治疗,3个月内未服用抗生素、非甾体类药物及其他可能影响白细胞的药物,妇女未妊娠。从每例患者口腔内选不相邻的邻面颊侧牙周炎位点(探诊深度34 mm)3～8个，根尖片示邻面牙槽骨有不同程度的吸收。对患者不做口腔卫生指导和治疗，3～5天后复诊取GCF样本。
2.收集GCF样本并记录临床指标：参考周爽英等[5]的方法，用滤纸条收集GCF并定量和贮存，取样前记录菌斑指数(plaque index，PLI)，取样后记录探诊深度(probing depth，PD)、附着丧失(attachment loss，AL)和出血指数(bleeding index，BI)。然后行口腔卫生指导、全口洁治及深部刮治等基础治疗。取样牙位刮治后6周复查，重复前述步骤。
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3.取样完成后，将贮存的GCF样本集中于1d测定，用和璐等[6]的底物(Meosuc-ala-ala-pro-val-NA，1 mmol/L)检测法测定EA-s 和EA-p水平。每例患者治疗前、后的样本在同一块96孔酶标板上测定。
4.统计学处理：采用配对t检验比较治疗前、后的PD及AL，其余指标治疗前、后的比较均采用配对秩和检验。
结果
牙周基础治疗前后各项临床和生化指标的比较详见表1。由表1可见，牙周基础治疗后6周，EA-s和EA-p总量、EA-s浓度、酶比活性S/P均比治疗前显著下降(P<0.001)，且治疗后S/P比值均小于1,但EA-p浓度治疗前后水平相近,无统计学差异(P>0.05); 各临床指标均有显著改善( P< 0.001): AL平均增加1.48 mm,PD平均减少2.72 mm,PLI和BI显著降低,表明口腔卫生控制良好、炎症明显减轻; GCF量也显著减少(P<0.001)。
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表1 牙周基础治疗前、后临床及生化指标的比较 指标
治疗前
治疗后
范围
范围
EA-s(A/样本)
0.70±0.46
0.65～1.83
0.04±0.03*
, 百拇医药 0.004～0.16
EA-p(A/样本)
1.05±0.39
0.36～2.36
0.17±0.20*
0.02～1.02
EA-s(A/ml)
0.92±0.53
0.11～2.67
0.34±0.31*
0.05～1.78
, 百拇医药
EA-p(A/ml)
1.53±0.65
0.43～0.16
1.52±1.13
0.17～4.31
S/P
0.68±0.43
0.12～2.12
0.34±0.23*
0.08～0.93
AL(mm)
4.41±1.51
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1～8
2.93±1.12*
0.5～6
PD(mm)
5.14±0.69
4～6.5
2.42±0.63*
1～3.5
BI
3.44±0.85
1～4
0.84±0.81*
, 百拇医药
0～2
PLI
2.28±0.77
1～3
0.42±0.50*
0～1
GCF(unit)
162.05±33.39
95～200
36.98±22.13*
8～105
注:EA-s:细胞外弹性蛋白酶;EA-p:细胞内弹性蛋白酶;S/P:EA-s/EA-p;AL:附着丧失;PD:探诊深度;BI:出血指数;PLI:菌斑指数;GCF:龈沟液;*治疗前、后比较,P<0.001
, 百拇医药
讨论
牙周基础治疗后，临床指标显著改善，GCF量减少，进入牙周袋的PMN减少，其激活因子的作用减弱，释放的EA必然减少。 因此，EA-s和EA-p均可用作疗效判断的客观指标。但治疗后S/P比值明显下降，表明EA-s的改善比EA-p明显，且EA-p的浓度在治疗前、后没有明显变化，因而EA-s作为疗效判断指标更有意义。
在EA的检测中，大多数样本中EA-p水平高于EA-s水平，尤其是治疗后的所有样本S/P比值均小于1，体现了细胞内EA较细胞外EA丰富。因EA-s受到PMN数目和激活因子的双重影响，EA-p仅与PMN数目有关，故牙周组织状态相对静止、细菌和宿主间相对平衡时，S/P比值较小；反之，大量EA-p转化为EA-s，S/P比值明显升高，则意味着该部位牙周组织的活动性破坏可能正在发生。提示，EA-s水平和S/P比值有可能成为确定牙周炎活动期的敏感的客观指标。又由于S/P比值能间接反映PMN数量对EA的影响，是反映EA和PMN在牙周炎中作用的一个综合指标，建议在牙周炎的诊断性研究中，EA-s和S/P比值都应观察。 Cimasoni和Giannopolou[7]曾建议研究溶酶体源的酶时，宜考虑PMN的影响，只是由于取样方法的限制而不能做到，S/P比值则实现了对EA的这种研究设想。
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Cox和Eley[8]及沙月琴等[9]曾报道，牙周基础治疗或服用强力霉素后，EA总水平(总量和浓度)下降，但用浓度表示比用总量表示时的变化不明显，可能就是其中的EA-p浓度作用的结果。有学者因此主张在牙周炎的诊断性实验中宜用酶总量表示[10]，本研究结果支持此主张。
参考文献：
[1]Eley BM,Cox SW.A 2-year longitudinal study of elastase in human gingival crevicular fluid and periodontal attachment loss.J Clin Periodontol，1996，23:681-692.
[2]Palcanis KG,Larjava IK,Wells BR,et al.Elastase as an indicator of periodontal disease progression.J Periodontol，1992，63:237-242.
, http://www.100md.com
[3]Gustafsson A,Asman B,Bergstrom K.Altered relation between granulocyte elastase and alpha-2-macroglobulin in gingival crevicular fluid from sites with periodontal destruction.J Clin Periodontol，1994，21:17-21.
[4]Jin LJ,Soder PO,Asman B,et al.Granulocyte elastase in gingival crevicular fluid: improved monitoring of the site-specific response to treatment in patients with destructive periodontitis.J Clin Periodontol，1995，22:240-246.
, 百拇医药
[5]周爽英,曹采方,陈智滨，等.牙周炎基础治疗后龈沟液中碱性磷酸酶的纵向观察.现代口腔医学杂志，1997， 11(专辑): 32-34.
[6]和璐,曹采方,沙月琴，等.龈沟液中弹性蛋白酶水平与白细胞数目的关系.中华口腔医学杂志，1998,33: 344-346.
[7]Cimasoni G,Giannopolou C.Can crevicular component analysis assist in diagnosis and monitoring periodontal breakdown?In:Periodontology today.1 ed.Karger：Guggenheim B Zurich，1988.260-270.
[8]Cox SW,Eley BM.Cathepsin B/L-,elastase-,tryptase-,trypsin- and dipeptidyl peptidase IV-like activities in gingival crevicular fluid.A comparison of levels before and after basic periodontal treatment of chronic periodontitis patients.J Clin Periodontol,1992,19: 333-339.
[9]沙月琴，Gollub LM，Lee HM.低量强力霉素对牙周炎患者龈沟液胶原酶等活性的影响.中华口腔医学杂志,1995,30：289-291.
[10]曹采方，Smith QT.龈沟液中髓过氧化物酶活性与牙周病的关系.中华口腔医学杂志,1989,24：204-207.
收稿日期:1999-01-29, 百拇医药
单位：北京医科大学口腔医学院牙周科 100081
关键词：牙周炎；胰肽酶；龈沟液
中华口腔医学杂志000105 摘 要：目的：观察龈沟液(gingival crevicular fluid,GCF)中细胞外弹性蛋白酶(elastase in the supernatant,EA-s) 和细胞内弹性蛋白酶(elastase in the pellet,EA-p) 在牙周基础治疗后的变化。方法：用滤纸条的袋内取样法取8例患者43个牙位治疗前后的GCF样本，以底物检测法测定其中的EA-s及EA-p水平。结果：治疗后的GCF-EA-s、EA-p总量及EA-s浓度、EA-s/EA-p(S/P)比值均较治疗前显著下降(P<0.001)，但EA-p浓度治疗前后无显著差异(P>0.05)。结论：GCF-EA水平反映牙周组织的炎症破坏程度，可作为评价疗效的客观指标，尤其是EA-s和S/P的作用明显，二者在判断牙周组织的活动性破坏中有意义。
, 百拇医药
Changes of elastase in gingival crevicular fluid after periodontal treatment of adult periodontitis patients
HE Lu
(Department of Periodontology,School of Stomatology,Beijing Medical University,Beijing 100081,China)
CAO Caifang
(Department of Periodontology,School of Stomatology,Beijing Medical University,Beijing 100081,China)
, 百拇医药 SHA Yueqin
(Department of Periodontology,School of Stomatology,Beijing Medical University,Beijing 100081,China)
Abstract：Objective：To examine the changes of elastase in the supernatant (EA-s) and in the pellet (EA-p) after centrifuge in gingival crevicular fluid(GCF) before and after periodontal treatment.Methods：GCF was sampled with filter paper strips by intra-pocket method to determine EA levels .Forty-three teeth of eight subjects were included.EA-s and EA-p were determined seperately using the subtract Meosuc-ala-ala-val-pro-NA.Results：EA-s per site and per ml,EA-p per site and the ratio of EA-s/EA-p(S/P) decreased significantly after non-surgical periodontal treatment (P<0.001),while EA-p concentration didn't change(P>0.05).Conclusions：GCF-EA-s and EA-p could act as objective parameters to evaluate the effect of periodontal therapy,especially EA-s and S/P,which may be sensitive diagnostic parameters for determining periodontal disease activity.
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Key words：Periodontitis;Pancreatopeptidase;Gingival crevicular fluid▲
龈沟液(gingival crevicular fluid,GCF)中的弹性蛋白酶(elastase,EA)主要源于中性多形核白细胞(polymorphonuclear leukocyte,PMN),它能广泛地破坏牙周结缔组织和骨组织,与牙周组织的活动性破坏密切相关。少数研究认为,EA有可能预测未来附着丧失的发生，但对其预测能力有争议，这除了不同学者采用的活动期判断标准、检测方法、纵向观察时间不同外，还与检测的多是EA总水平有关[1,2]。实际上，GCF中EA总水平有一部分是已被释放、具有活性作用的细胞外EA(EA in the supernatant,EA-s)，另一部分是还存在于PMN中未被释放出来、尚无活性的细胞内EA(EA in the pellet,EA-p)[3,4]。二者治疗前、后的变化是否一样尚未见报道。我们观察了牙周基础治疗后这两种成分的变化,以期更深入地了解EA在牙周炎发生中的作用。
, 百拇医药
材料和方法
1.病例选择：从北京医科大学口腔医学院牙周科选择成人牙周炎患者8例，男3例，女5例，年龄27～58岁。患者全身健康,1年以上未做过牙周治疗,3个月内未服用抗生素、非甾体类药物及其他可能影响白细胞的药物,妇女未妊娠。从每例患者口腔内选不相邻的邻面颊侧牙周炎位点(探诊深度34 mm)3～8个，根尖片示邻面牙槽骨有不同程度的吸收。对患者不做口腔卫生指导和治疗，3～5天后复诊取GCF样本。
2.收集GCF样本并记录临床指标：参考周爽英等[5]的方法，用滤纸条收集GCF并定量和贮存，取样前记录菌斑指数(plaque index，PLI)，取样后记录探诊深度(probing depth，PD)、附着丧失(attachment loss，AL)和出血指数(bleeding index，BI)。然后行口腔卫生指导、全口洁治及深部刮治等基础治疗。取样牙位刮治后6周复查，重复前述步骤。
, http://www.100md.com
3.取样完成后，将贮存的GCF样本集中于1d测定，用和璐等[6]的底物(Meosuc-ala-ala-pro-val-NA，1 mmol/L)检测法测定EA-s 和EA-p水平。每例患者治疗前、后的样本在同一块96孔酶标板上测定。
4.统计学处理：采用配对t检验比较治疗前、后的PD及AL，其余指标治疗前、后的比较均采用配对秩和检验。
结果
牙周基础治疗前后各项临床和生化指标的比较详见表1。由表1可见，牙周基础治疗后6周，EA-s和EA-p总量、EA-s浓度、酶比活性S/P均比治疗前显著下降(P<0.001)，且治疗后S/P比值均小于1,但EA-p浓度治疗前后水平相近,无统计学差异(P>0.05); 各临床指标均有显著改善( P< 0.001): AL平均增加1.48 mm,PD平均减少2.72 mm,PLI和BI显著降低,表明口腔卫生控制良好、炎症明显减轻; GCF量也显著减少(P<0.001)。
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表1 牙周基础治疗前、后临床及生化指标的比较 指标
治疗前
治疗后
范围
范围
EA-s(A/样本)
0.70±0.46
0.65～1.83
0.04±0.03*
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EA-p(A/样本)
1.05±0.39
0.36～2.36
0.17±0.20*
0.02～1.02
EA-s(A/ml)
0.92±0.53
0.11～2.67
0.34±0.31*
0.05～1.78
, 百拇医药
EA-p(A/ml)
1.53±0.65
0.43～0.16
1.52±1.13
0.17～4.31
S/P
0.68±0.43
0.12～2.12
0.34±0.23*
0.08～0.93
AL(mm)
4.41±1.51
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1～8
2.93±1.12*
0.5～6
PD(mm)
5.14±0.69
4～6.5
2.42±0.63*
1～3.5
BI
3.44±0.85
1～4
0.84±0.81*
, 百拇医药
0～2
PLI
2.28±0.77
1～3
0.42±0.50*
0～1
GCF(unit)
162.05±33.39
95～200
36.98±22.13*
8～105
注:EA-s:细胞外弹性蛋白酶;EA-p:细胞内弹性蛋白酶;S/P:EA-s/EA-p;AL:附着丧失;PD:探诊深度;BI:出血指数;PLI:菌斑指数;GCF:龈沟液;*治疗前、后比较,P<0.001
, 百拇医药
讨论
牙周基础治疗后，临床指标显著改善，GCF量减少，进入牙周袋的PMN减少，其激活因子的作用减弱，释放的EA必然减少。 因此，EA-s和EA-p均可用作疗效判断的客观指标。但治疗后S/P比值明显下降，表明EA-s的改善比EA-p明显，且EA-p的浓度在治疗前、后没有明显变化，因而EA-s作为疗效判断指标更有意义。
在EA的检测中，大多数样本中EA-p水平高于EA-s水平，尤其是治疗后的所有样本S/P比值均小于1，体现了细胞内EA较细胞外EA丰富。因EA-s受到PMN数目和激活因子的双重影响，EA-p仅与PMN数目有关，故牙周组织状态相对静止、细菌和宿主间相对平衡时，S/P比值较小；反之，大量EA-p转化为EA-s，S/P比值明显升高，则意味着该部位牙周组织的活动性破坏可能正在发生。提示，EA-s水平和S/P比值有可能成为确定牙周炎活动期的敏感的客观指标。又由于S/P比值能间接反映PMN数量对EA的影响，是反映EA和PMN在牙周炎中作用的一个综合指标，建议在牙周炎的诊断性研究中，EA-s和S/P比值都应观察。 Cimasoni和Giannopolou[7]曾建议研究溶酶体源的酶时，宜考虑PMN的影响，只是由于取样方法的限制而不能做到，S/P比值则实现了对EA的这种研究设想。
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Cox和Eley[8]及沙月琴等[9]曾报道，牙周基础治疗或服用强力霉素后，EA总水平(总量和浓度)下降，但用浓度表示比用总量表示时的变化不明显，可能就是其中的EA-p浓度作用的结果。有学者因此主张在牙周炎的诊断性实验中宜用酶总量表示[10]，本研究结果支持此主张。
参考文献：
[1]Eley BM,Cox SW.A 2-year longitudinal study of elastase in human gingival crevicular fluid and periodontal attachment loss.J Clin Periodontol，1996，23:681-692.
[2]Palcanis KG,Larjava IK,Wells BR,et al.Elastase as an indicator of periodontal disease progression.J Periodontol，1992，63:237-242.
, http://www.100md.com
[3]Gustafsson A,Asman B,Bergstrom K.Altered relation between granulocyte elastase and alpha-2-macroglobulin in gingival crevicular fluid from sites with periodontal destruction.J Clin Periodontol，1994，21:17-21.
[4]Jin LJ,Soder PO,Asman B,et al.Granulocyte elastase in gingival crevicular fluid: improved monitoring of the site-specific response to treatment in patients with destructive periodontitis.J Clin Periodontol，1995，22:240-246.
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[5]周爽英,曹采方,陈智滨，等.牙周炎基础治疗后龈沟液中碱性磷酸酶的纵向观察.现代口腔医学杂志，1997， 11(专辑): 32-34.
[6]和璐,曹采方,沙月琴，等.龈沟液中弹性蛋白酶水平与白细胞数目的关系.中华口腔医学杂志，1998,33: 344-346.
[7]Cimasoni G,Giannopolou C.Can crevicular component analysis assist in diagnosis and monitoring periodontal breakdown?In:Periodontology today.1 ed.Karger：Guggenheim B Zurich，1988.260-270.
[8]Cox SW,Eley BM.Cathepsin B/L-,elastase-,tryptase-,trypsin- and dipeptidyl peptidase IV-like activities in gingival crevicular fluid.A comparison of levels before and after basic periodontal treatment of chronic periodontitis patients.J Clin Periodontol,1992,19: 333-339.
[9]沙月琴，Gollub LM，Lee HM.低量强力霉素对牙周炎患者龈沟液胶原酶等活性的影响.中华口腔医学杂志,1995,30：289-291.
[10]曹采方，Smith QT.龈沟液中髓过氧化物酶活性与牙周病的关系.中华口腔医学杂志,1989,24：204-207.
收稿日期:1999-01-29, 百拇医药