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编号:10244040
鼠三叉神经节中神经肽阳性胞体的分布与密度
http://www.100md.com 《临床口腔医学杂志》 2000年第1期
     作者:刘向辉 斯方杰 徐正林 饶志仁

    单位:刘向辉(解放军81医院 南京,210002);徐正林(解放军81医院 南京,210002);斯方杰(第四军医大学口腔医学院);饶志仁(神经生物研究所)

    关键词:P物质;降钙素基因相关肽;神经肽Y;神经元;三叉神经节

    临床口腔医学杂志000102 摘 要:目的 观察鼠三叉神经节中神经肽P物质、降钙素基因相关肽及神经肽Y阳性神经元的分布与密度,为今后研究神经肽在口腔颌面部的作用提供形态学依据。方法 SD雄性大白鼠8只,灌注固定,取双侧三叉神经节水平位连续切片,ABC法漂染,镜检,计算机图像分析。结果 三叉神经节中有丰富而均匀分布的P物质及降钙素基因相关肽阳性胞体,分别占神经元总数的15%和40%左右,染色深浅不一,主要为中小型假单极细胞,其阳性纤维聚集成束,远心端加入上、下颌神经及眼神经,近心端通向中枢神系统,但三叉神经节中无神经肽Y阳性胞体,只有散在阳性纤维分布。结论 三叉神经节中有丰富的P物质和降钙素基因相关肽神经元,但无神经肽Y神经元。
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    分类号:R329.24 Q5932 文献标识码:A

    文章编号:1003-1634(2000)01-0005-03

    The distributions and densities of neuropeptides-like immunoreactive neurons in the trigeminal ganglions of rats

    Liu Xianghui,Si Fangjie,Xu Zhenglin et al.

    (Department of the Stomatology,the 81 Hospital.Nanjing,210002).

    Abstract:Objective To observe the distributions and densities of substance (PSP) calcitonin gene related peptide (CGRP)and neuropeptide NPY-like immunoreactive (-LI) neurons in the rat trigeminal ganglions (TrG) and provide morphologic basis ofr further studying the roles of neuropeptides in the oral and maxillofacial area.Methods The avidin-biotin-peroxidase complex method and imagine analysis were employed to detect neuro peptides-LI neurons in trigeminal ganglions of eight SD male rats.Results Substance P-and calcitonin gene related peptide-LI neurons were plentifully located in rat trigeminal ganglions.They accounted for 15% and 40% of all neurons respectively and were middle to small sized pseudounipolar cells mainly.Their immunoreactive fibres gathered and joined ophthalimic,maxillary and mandibular nerve.There were not any neuropeptide Y-LI cell bodys but a few of neuropeptide Y-LI fibres.Conclusion There are plentiful substance P-and calcitonin gene related peptide-LI neurons but no neuropeptide Y-LI neurons in the rat trigeminal ganglions.
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    Key words:Substance P Calcitonin gene related peptide Neuropeptide Y Neuron; Trigeminal ganglion.▲

    为了解口腔颌面部神经肽(尤其感觉神经肽)的合成与分泌情况,我们对三叉神经节中感觉神经肽P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)和交感神经来源的神经肽Y(NPY)的分布与密度进行研究。

    材料和方法

    1.动物:SD雄性大鼠8只,鼠龄4周,体重180g~220g。

    2.试剂与仪器:兔抗鼠SP血清(-抗)和合成鼠SP纯品(美国Serotec公司),兔抗鼠CGRP血清(一抗)和合成鼠CGRP纯品(新西兰Watpa公司),兔抗鼠NPY血清(一抗)和合成鼠NPY纯品(美国Serotec公司),生物素化羊抗兔血清(二抗)和ABC复合物(美国Sigma公司),四盐酸3.3-二氨基联苯胺(DAB)及葡萄糖氧化酶(美国Sigma公司),恒冷切片机(美国Bright公司),计算机图像分析系统(德国Leica公司)。
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    3.标本制备及染色:经鼠腹膜下注射1%戊巴比妥钠1ml,待麻醉满意后经心脏插管,4℃生理盐水快速冲洗后,用含4%多聚甲醛和0.2%苦味酸的固定液600ml先快后慢灌注固定3小时,取双侧TrG,置于20%蔗糖液中脱水24小时,取出标本用恒冷切片机行水平位连续切片,片厚40μm,分为4组:SP组、CGRP组、NPY组和对照组,采用ABC法漂染,DAB+葡萄糖氧化酶+氯化胺呈色。每TrG取中位切片一张中性红复染2分钟。

    4.对照试验:①空白对照:用0.01mol/L PBS(PH7.4)取代一抗;②血清对照:用正常兔血清取代一抗;③吸收对照:分别用合成鼠SP、CGRP、NPY纯品1.0nmol/ml加入相应的稀释一抗中,置4℃湿盒中48小时后离心,取上清液取代各自的一抗,分别加入。其余步骤同实验组。

    5.光镜下观察、摄像,计算机图像分析系统分析每组TrG中阳性胞体与纤维的密度。

    结 果
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    1.CGRP:TrG由上、下颌突和眼突组成,镜下观察表明棕黑色假单极CGRP阳性胞体均匀分布于三突中,直径从8μm至40μm不等,数目占全部神经元的40%左右,主要为中小型细胞,其中中型细胞约占45%,小型细胞占55%;阳性胞体染色深浅不一,部分细胞中心部位着色浅或不着色,周围胞浆点状着色,似菊花样,部分细胞胞浆内染色致密均匀,只在中心部位略淡,胞体染色深浅与胞体大小无关(图一)。TrG中有丰富的CGRP阳性纤维直径0.35~0.70μm;阳性纤维近胞体处,尤其发自染色致密的神经元时呈均质的腊肠状,而在胞体较远处或从染色淡的胞体发出的纤维则呈明显的扩张状态,纤维内串珠状膨体清晰可见;各突的阳性纤维聚集成束,远心端加入上、下颌神经及眼神经,分布于外周组织,近心端通向中枢神经系统。

    图1 鼠TrG下颌突中有丰富的CGRP阳性胞体及纤维(ABC×20)

    2.SP组:镜下观察表明SP阳性胞体为棕黑色假单极细胞,它们不甚均匀地分布于三突中,细胞数目少于CGRP阳性细胞,约占神经元总数的15~20%,主要为中小型细胞,直径从8μm至40μm不等,其中小型细胞占80%以上,中型细胞占20%以下,胞体染色普遍较深,约45%呈菊花样点状着色,55%呈致密均匀着色(图二)。TrG中有串珠状的阳性纤维散在分布,直径0.35~0.65μm,走行较直,逐渐聚集成束,远心端加入上、下颌神经和眼神经,近心端通向中枢神经系统。
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    图2 鼠TrG下颌突中有SP阳性胞体及纤维的分布(ABC×20)

    3.NPY组:TrG中无明确阳性胞体,偶有着色淡、轮廓不清的细胞,但有稀少的呈曲张状态的串珠状阳性纤维,背景色很淡(图三)。

    图3 鼠TrG眼突中无NPY阳性胞体,偶见NPY阳性纤维(ABC×20)

    4.对照组中均无阳性反应产物。

    为检测TrG中阳性反应产物的密度,从各实验组的每只鼠TrG中各取中位切片一张,每组共8张,用计算机图像分析系统分析三突中阳性反应产物的密度,结果表明SP、CGRP、NPY在TrG三突中的分布无明显差异,将三突中阳性反应物的密度值相加取其均值为该组阳性反应物的密度值,结果:SP组497.1±56.3mm2,CGRP组1056.7±142.3mm2,NPY组11.3±6.7mm2,表明CGRP组>SP组>NPY组,统计学分析显示三组之间差异显著(P<0.01),即:TrG中CGRP的密度显著高于SP的密度,SP的密度显著高于NPY的密度。
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    讨 论

    1.三叉感觉神经系统的特征之一就是存在两类假单极初级感觉神经元,其大部分位于中枢神经系统外的TrG,少量位于三叉神经中脑核。TrG主要支配口腔颌面部及眼鼻等处的机械、温度和伤害感受器,中枢突止于脑干的几组神经元中,然后在丘脑转换,投射至大脑躯体感觉皮层〔5〕

    2.神经肽是新近发现的一类神经递质,生物活性广泛,它的发现是神经生物学最重要的研究进展之一,其中有代表性的有SP、CGRP、NPY、脑啡肽及血管活性肠肽等,近来的研究表明SP、CGRP主要存在于初级感觉神经元,而NPY主要存在于去甲肾上腺素能神经元中。1993年Maarten等〔4〕证实猴TrG中有SP及CGRP阳性胞体,1995年Nikolail〔5〕发现猫TrG中NPY阳性胞体占神经元总数的1%左右,但多数实验认为正常TrG中无NPY阳性胞体〔6〕。而目前国内尚无这方面的报道。
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    3.本实验表明鼠TrG中有丰富的CGRP及SP阳性胞体的分布,主要为中小型假单极细胞,染色深浅不一,分别占TrG神经元总数的15%和40%左右。从阳性胞体发出的神经纤维聚集成束后,远心端加入眼及上下颌神经中,近心端则通向中枢神经系统。在正常鼠TrG中基本没有NPY阳性胞体,只有散在的阳性纤维,它们可能来自节外组织。神经肽在胞体内合成后以囊泡形式贮存,经轴突运输至外周,因此TrG中SP、CGRP、NPY阳性胞体的数目和染色深浅反应了它们合成、加工的水平及轴突运输的速度。

    4.根据神经生物学的研究,SP、CGRP和NPY在口腔颌面部的作用主要有以下几个方面:①传导痛觉等伤害性信息:SP、CGRP是初级感觉神经元的兴奋性递质,它们顺行向中枢传导痛觉等伤害性信息,而逆行释放于局部组织中可引起痛觉过敏〔2,7〕;②对血管的作用:SP、CGRP能显著扩张微血管,尤其是动脉,增加局部血流量,而SP还能显著增加血管壁的通透性,引起血浆外渗和炎细胞浸润,与CGRP共同引起神经源性炎症;而NPY一方面有很强的钙依赖性的非肾上腺素能的血管收缩作用。另一方面,它能通过突触前方式抑制去甲肾上腺素的释放,即在不同情况下对交感神经的功能有兴奋和抑制双重作用〔8,9〕;③调节局部免疫和炎症介质的释放:SP能促进T淋巴细胞增殖和B淋巴细胞分泌抗体,促进单核细胞,巨噬细胞和中性粒细胞等的渗出趋化、游走及吞噬功能,诱导肥大细胞释放组胺,单核巨噬细胞释放白介素1、白介素6及肿瘤坏死因子等〔3,10.10〕;④对结缔组织的作用:SP、CGRP、NPY能共同促进成纤维细胞增生和合成胶原纤维,诱导成纤维细胞分泌胶原酶、前列腺素E2〔2,3〕;⑤对滑膜的作用:SP和CGRP能促进颞下颌关节滑膜细胞增生及分泌前列腺素E2和胶原酶等〔12〕;⑥对涎腺的作用:SP及CGRP能促进涎液的分泌〔3〕;⑦感觉和交感神经系统的相互作用:目前认为交感神经和感觉神经通过感受器和炎症介质发挥相互作用,而另有实验表明NPY抑制体外培养的背根神经节细胞释放SP、CGRP,怀疑TrG中散在分布的NPY阳性纤维对SP、CGRP等的合成与分泌有调节作用〔2,3〕
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    本实验对TrG中SP、CGRP、NPY阳性反应的观察将有助于进一步研究神经肽在口腔颌面部病理状态下的作用机制。■

    参考文献:

    [1]艾民康.神经生物学基础.第一版,同济医科大学出版社,1992;220~234,259~266.

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    收稿日期:1999-05-15, 百拇医药