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编号:10244672
角膜移植患者外周血免疫功能动态变化的研究
http://www.100md.com 《眼科新进展》 2000年第1期
     作者:姜国民 杨朝忠 徐则林 耿燕

    单位:姜国民(山东省青岛医学院第二附属医院眼科 266042);杨朝忠(山东省青岛医学院第二附属医院眼科 266042);徐则林(山东省青岛医学院第二附属医院眼科 266042);耿燕(山东省青岛医学院第二附属医院眼科 266042)

    关键词:角膜移植;体液免疫;细胞免疫

    眼科新进展000107

    摘 要:目的 探讨角膜移植术后病人外周血免疫功能的动态变化。方法 检测26例行带环形巩膜全角膜移植术(CST)和76例部分穿透性角膜移植术(PKP)病人的术前和术后不同时期体液与细胞免疫指标,并进行对比分析。结果 角膜移植病人的细胞和体液免疫术前与术后比较有显著差异(P<0.05),带环形巩膜全角膜移植术病人体液免疫持续时间较部分穿透性角膜移植术组延长,细胞免疫持续时间差异无显著性。结论 带环形巩膜全角膜移植术后体液免疫较部分穿透性角膜移植反应程度高,可能是排斥率高的原因之一。
, 百拇医药
    分类号:R779.65 文献标识码:A

    文章编号:1003-5141(2000)01-0021-03

    Comparative studies on cell-mediated and humoral immunity of patients with CST and PKP

    JIANG Guo-Min,YANG Chao-Zhong,XU Ze-Lin,GENG Yan

    (Department of Ophthalmology,the Second Affiliated Hospital,Qingdao Medical College,Qingdao 266042,Shandong Province,China)

    Abstract:Objective To explore the immunity of total cornea with circle lameller sclera transplantation(CST) and part penertrating keratoplasty(PKP).Methods Twenty-six cases of CST and 76 cases of PKP were observed and compared on T-cell subset and their pre-operative and post-operative humoral immunity were analyzed.Result The existing time of humoral immunity of CST was longer than that of PKP,but there was no significant changes in T-cell immunity between the two groups.Conclusion The existing time of humoral immunity in CST was longer than that in PKP,one reason may be that the rate of rejection in CST is higher.
, 百拇医药
    Key words:corneal tansplantation;cell-mediated immunity;humoral immunity▲

    本文报告1993~1997年,在我院行角膜移植术患者术前和术后的外周血免疫功能状态动态变化规律,结果如下。

    1 材料和方法

    1.1 临床资料 本组病人共102例(102眼),男70例,女32例,平均年龄41a;其中角膜溃疡23例,包括铜绿假单胞菌性角膜溃疡7例,真菌性角膜溃疡12例,不明原因溃疡4例,严重化学伤3例,角膜白斑76例。102例病人分为带环形巩膜全角膜移植组26例和部分穿透性角膜移植术组76例。

    1.2 手术方法

    1.2.1 带环形板层巩膜瓣全角膜移植 (1)供体移植片制作:严格无菌操作,植片制作由保存方式不同而异。完整眼球保存者,在距离角膜缘后4mm用自制巩膜环钻钻切巩膜,厚达1/2板层,板层分离至巩膜缘,再斜形穿透入前房,取下巩角膜植片,待用;角巩膜瓣式保存者,将植片放于凹状硅胶角膜枕上,内皮面向上,小心固定,剖剪环形板层巩膜瓣达前述厚度,待用;(2)受体植床制作:沿角膜缘环形剪开球结膜,缝线固定眼球,止血,用自制巩膜环钻钻切受体巩膜,角膜缘后3mm(较植片<1mm)板层分离至角膜缘前界,尽量保护房角组织;(3)缝合方法:将植片置于植床上,9-0号尼龙线间断缝合板层巩膜缘,共20~30针;
, 百拇医药
    1.2.2 部分穿透性角膜移植术方法同以往报道[1]

    1.2.3 供体角巩膜材料 使用新鲜湿房保存材料外,其余为眼库保存角巩膜材料,包括深低温保存材料、甘油保存材料等,材料均取自死亡后2~12h,年龄1~59a,平均年龄37a。

    1.3 免疫功能检测 所有病人分别于术前1~3d、术后7、30、90、180d及1a检测外周血免疫球蛋白、T细胞亚群及补体C3、C4的变化。由美国Beckman公司生产的Array特定蛋白分析仪,采用免疫浊度法分析免疫球蛋白和补体;T细胞亚群检测试剂盒由北京邦定生物制剂中心提供。

    2 结果

    2.1 体液免疫动态变化 角膜移植手术前后体液免疫动态变化见表1。

, http://www.100md.com     表1 角膜移植手术前后体液免疫动态变化

    Table 1 Changes of humoral immunity Pre-operation and Post-operation corneal transplant (g.L-1)

    IgA

    IgG

    IgM

    C3

    C4

    CST

    PKP
, 百拇医药
    CST

    PKP

    CST

    PKP

    CST

    PKP

    CST

    PKP

    Pre-operation

    1.79

    1.82

    10.82

    10.72
, 百拇医药
    0.62

    0.52

    0.82

    0.76

    0.51

    0.45

    Post-operation 7d

    3.52

    2.42

    15.20

    14.52

    1.69

    1.67
, 百拇医药
    0.54

    0.65

    0.32

    0.39

    Post-operation 30d

    3.58

    3.18

    16.13

    15.61

    2.52

    1.92

    0.48

    0.58
, 百拇医药
    0.29

    0.32

    Post-operation 90d

    3.10

    3.01

    16.41

    15.41

    1.40

    1.40

    0.50

    0.68

    0.40

    0.41
, http://www.100md.com
    Post-operation 180d

    3.01

    2.01

    15.36

    13.56

    1.89

    0.98

    0.56

    0.75

    0.41

    0.47

    Post-operation 1a
, http://www.100md.com
    1.85

    1.84

    12.42

    11.42

    0.85

    0.65

    0.82

    0.80

    0.49

    0.46

    2.2 细胞亚群动态变化 角膜移植手术前后T细胞亚群动态变化见表2。

    表2 角膜移植手术前后T细胞亚群的动态变化
, 百拇医药
    Table 2 Changes of cell-mediated immunity Pre-Operation and Post-Operation corneal transplant (%)

    CD3

    CD4

    CD8

    CD4/CD8

    CST

    PKP

    CST

    PKP

, http://www.100md.com     CST

    PKP

    CST

    PKP

    Pre-operation

    63.21

    63.20

    41.92

    40.60

    34.52

    31.52

    1.25

    1.15
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    Post-operation7d

    64.72

    61.72

    37.26

    40.32

    31.92

    32.61

    1.16

    1.21

    Post-operation30d

    70.57

    70.87
, http://www.100md.com
    53.47

    53.44

    37.57

    36.75

    1.42

    1.54

    Post-operation90d

    67.10

    68.10

    58.63

    55.63

    38.99

, http://www.100md.com     38.19

    1.50

    1.57

    Post-operation180d

    68.10

    68.51

    45.21

    49.21

    36.92

    36.60

    1.22

    1.52

    Post-operation1a
, 百拇医药
    68.21

    63.21

    44.25

    42.25

    36.98

    32.68

    1.19

    1.19

    由表1可见,角膜移植术后血清免疫球蛋白值呈逐渐升高趋势,术后30d时达到高峰。可持续至术后90~180d,术后1a时便渐降至术前水平。经统计学处理:术后7、30、90、180d时所测得的IgA、IgG、IgM值分别与术前、术后1a相比有差异性(P<0.05)。术后1a与术前值比较P>0.05无显著差异,同时发现,带环形巩膜瓣全角膜移植组免疫球蛋白升高所持续的时间较部分穿透性角膜移植组延长1~2mo,IgG和IgM比较有显著差异(F值分别为43.33和10.88,P<0.05)。
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    C3、C4值术后呈逐渐下降,术后30d时降至最低水平,术后0.5~1a时便恢复术前水平。经统计学处理:术后7、30、90、180d的C3、C4值均较术前、术后1a值低,P<0.05,差异显著。术后1a与术前值比较差异无显著性(P>0.05)。说明排斥反应时有较多免疫复合物形成,从而消耗了较多的补体成分。而带环形巩膜瓣全角膜移植组C3、C4与部分穿透性角膜移植组比较无显著差异(F值分别为0.67和0.31,P>0.05)。

    由表2可见,2组中T3、T4及T8值术后7d内均无明显改变,与术前比较均无显著差异(P>0.05),术后30d都开始升高,180d后呈下降趋势,术后1a基本降至正常水平。经统计学处理,术后30、90、180d的T3、T4较术前、术后7d、1a值增加显著(P<0.01),术后7d、1a与术前值比较,无显著差异(P>0.05)。T8值术后亦呈增加趋势,1~3mo达高峰,但增加幅度小,与术前及术后1a值比较无显著差异(P>0.05)。2组在持续时间上相同。2组中T4/T8比值均于术后1~3mo时最高,与术前、术后7d、90d、1a比无显著差异(P>0.05)。而带环形巩膜瓣全角膜移植组术后T3、T4及T8值与部分穿透性角膜移植组比较无显著差异(F值分别为1.15、0.011和1.18,P>0.05)。
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    3 讨论

    3.1 一般认为,移植免疫排斥反应的发生、发展,主要与细胞免疫和体液免疫有关。这种反应自移植抗原进入宿主开始,继而导致致敏淋巴细胞的出现和特异性抗体的产生和释放。这些免疫效应物质到达移植物处并对移植物发起免疫攻击,从而使移植物遭受破坏。本文重点讨论全角膜带环形板层巩膜瓣移植术的外周血特异性免疫功能,包括体液免疫和细胞免疫二个方面。

    3.2 体液免疫是由抗体参与的免疫反应。B细胞受抗原刺激后转化为浆细胞产生抗体,且在移植排斥反应中血清抗体的出现、升高和消失具有一定规律,与移植排斥反应呈相关关系。有研究提示抗体亦参与角膜移植排斥反应[2],但一般认为,体液免疫在角膜排斥反应中仅起次要作用[3],短期内出现的排斥反应可能是体液免疫所致[4]。1974年Alberth等的检测结果表明,39例圆锥角膜病人角膜移植后抗角膜抗体有规律的出现、升高和消失。1975年Kapichnikov等也得出相同的结论:同种移植术后第3天约1/3~1/2的动物的血清抗体滴度增高,到第1wk末有规律地升高,第3周达高峰,持续2mo后下降,4~6mo后消失[3]。从本文结果看:(1)全角膜带环形板层巩膜瓣移植术后12wk内即有抗体增高,IgG、IgM、IgA的变化证明体液免疫确实参与术后的免疫反应;(2)术后抗体出现具有规律性,一般7d内出现,30d后至高峰,而且持续到术后90d~180d,1a后消失。这与学者报告的部分穿透性角膜移植免疫抗体持续时间及本文对照组比较有所延长[5],作者认为可能与全角膜带环形板层巩膜瓣移植术中保留了大量角膜缘抗原如朗格罕细胞等,异体抗原量多而强有关,与抗原直接和血管接触有关;(3)C3、C4的降低与抗体的变化时间类似,认为免疫球蛋白和抗原抗体补体免疫复合物是体液免疫的主要参与物质,可能起中和封闭作用,也可能起细胞免疫的介导功能。同时发现,带环形巩膜瓣全角膜移植组IgG和IgM与部分穿透性角膜移植组比较有显著差异。带环形巩膜全角膜移植术后体液免疫较部分穿透性角膜移植反应程度高,可能是排斥率高的原因之一。
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    3.3 细胞免疫是以T细胞参与为主的免疫反应,其在移植免疫发生上具有重要意义。一般认为,同种角膜移植排斥反应主要由T淋巴细胞介导。抗原使T细胞致敏后,当相同抗原再次进入机体时,致敏T细胞便能直接杀伤靶细胞,亦可通过抗原和致敏T细胞接触后释放的淋巴因子杀伤或破坏靶细胞。其中T4细胞是一种辅助性T细胞,能促进B细胞产生抗体,其分子的某些部位能诱导免疫球蛋白的合成;T8细胞是一种抑制性T细胞,能够通过自身抑制因子抑制B细胞的功能。T4细胞的增高,或T8细胞的减低都被认为是排斥反应发出的信号之一。角膜移植排斥反应中T细胞经角膜缘血管或从葡萄膜经房水到达角膜植片内皮细胞,破坏异体上皮和内皮,引起植片排斥,表现为排斥线出现,基质水肿、混浊、甚至溶解。本文结果显示:T3、T4及T8值术后7d内无明显变化,而术后30d开始升高,持续90~180d,这与HLA引起的迟发性过敏反应发生时间2~6mo相符合;其中T3、T4增加显著,T8幅度较小,相应的T4/T8增加,且在发生时间上与临床观察到的排斥反应发生率在1~3mo最高相一致[6]。而带环形巩膜瓣全角膜移植组术后T3、T4及T8值与部分穿透性角膜移植组比较无显著差异,认为2种角膜移植病人术后都会产生细胞免疫应答,可能是排斥反应发生的主要机制。
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    基金项目:山东省青岛市科委课题

    作者简介:姜国民,男,1969年11月出生于山东省潍坊市,汉族,1993年山东医科大学临床医学

    系本科毕业,获医学学士学位。现为青岛大学医学院第二附属医院眼科医师,先后完

    成省市级课题3项,在国家及省级专业杂志发表论文5篇。联系电话:0532-4851577-

    6246

    参考文献:

    [1]杨朝忠,柳 林.现代角膜移植学[M].北京:人民军医出版社 1998∶101-106.

    [2]刘学景.角膜移植体液免疫研究[J].眼科研究 1991;11(4)∶264-265.
, http://www.100md.com
    [3]杨朝忠.角膜免疫学[M].香港:金陵书社出版公司 1993∶1-57.

    [4]杨德旺.眼科临床免疫学[M].北京:人民卫生出版社 1991∶159.

    [5]赵 谨,徐志能,洪朝阳,等.角膜移植手术前后外周血中体液与细胞免疫动态变化比较[J].中国实用眼科学杂志 1996;14(12)∶722-724.

    [6]李志杰(综述).角膜移植免疫学的进展[J].国外医学眼科学分册 1993;11(4)∶264-266.

    收稿日期:1998-09-21

    修稿日期:1998-11-12, 百拇医药