视网膜色素上皮移植失败原因分析
作者：李光辉 高汝龙
单位：李光辉(第一军医大学南方医院眼科 广州，510515)；高汝龙(中山医科大学中山眼科中心)
关键词：视网膜色素上皮；上皮移植
眼科新进展000143
分类号：R774.1 文献标识码：A
文章编号：1003-5141(2000)01-0029-01▲
视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)具有重要的生理作用，与其有关的疾病是致盲的重要眼病之一。视网膜色素上皮移植是近年来颇受关注的研究内容，期望移植健康的细胞替代病变的细胞，为某些眼病的治疗奠定基础。本文总结分析了外路法移植失败的原因。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料 动物均来自中山医科大学实验动物中心，RPE细胞供体取自青紫蓝有色兔，受体为新西兰无色兔，雌雄随机选择，体重2.2～3.5kg不等。所用胎牛血清、EDTA、胰蛋白酶等试剂均来自Sigma公司。
1.2 方法 细胞供体的准备：取有色兔眼球，沿角膜缘后2～3mm环形剪开眼球壁，去除角膜、晶状体、玻璃体。分离视网膜神经层，暴露视网膜的色素上皮层。用灭菌生理盐水轻轻冲洗所得眼杯，用棉签吸干。加2.5g.L-1胰蛋白酶(含0.2g.L-1EDTA)于眼杯中，放入37℃温箱中消化30min，倒去眼杯中的消化液，加1～2mL胎牛血清终止消化。用玻璃吸管轻轻吹打视网膜色素上皮层，使RPE细胞脱落。收集含脱落的RPE细胞的悬液，放于玻璃试管中，常温下800r.min-1离心10min。倒去离心后上清液，保留试管底部的细胞团块，加50～80μL不含Ca2+、Mg2+的平衡盐液，溶解RPE细胞于平衡盐液中，摇匀，细胞密度约为3～5 000个.μL-1，试管存放在含冰块的烧杯中，作细胞移植用。
, 百拇医药
1.2.2 外路法RPE移植 新西兰纯种无色素兔，脱品酰胺点眼散瞳，以氯胺酮50mg.kg-1肌注麻醉，开睑器开睑，缝线固定上、下直肌。在眼球赤道部作一近乎全层的巩膜瓣，大小约2mm×2mm，作为移植的窗口，由此用玻璃微细管抵达视网膜下腔，并注入RPE细胞，共实施8只兔眼。
2 结果
8例移植手术全部失败，其中2例针头刺入玻璃体腔，4例脉络膜出血移植层次不清，2例移植部位及层次不清。移植中最容易出现的并发症：脉络膜出血、针头刺入玻璃体腔、移植层次不清。
3 讨论
80年代中期，一系列报告结果表明：RPE细胞移植到RCS鼠的视网膜下，可阻止感光细胞的变性坏死，挽救感光细胞，为未来眼底病的治疗带来了希望[1，2]。
, http://www.100md.com
视网膜色素上皮移植的方法主要有2种，经玻璃体腔的内路法，制造局限性视网膜脱离后将细胞注入视网膜下腔；外路法则由巩膜侧经脉络膜抵达视网膜下腔，其优点为不经过玻璃体，不需要玻璃体切割机等贵重仪器。缺点为经过脉络膜易引起出血，移植层次及移植区不能直接观察，手术带有一定的盲目性，易穿破视网膜而将细胞注入玻璃体腔。因此，内路法及外路法各有优缺点。
本文报告的8例手术是作者该项研究的最初实例，没有移植的经验，因此全部失败，而国外报告通过外路法可以成功进行移植。此后我们的研究改为内路法移植，结果见文献[3]。我们体会内路法成功率较高，可能与作者长期习惯做视网膜玻璃体手术有关。但从方法学讲，由于外路法首先必须经过脉络膜，而脉络膜富含血管不易止血，层次及视野不清，移植容易失败。
参考文献：
[1]Gouras P,Lopez R,Brittis M,et al.The ultrastructure of transplanted rabbit retinal epithelium[J].Graefe's Arch Exp Ophthalmol 1992;230∶468-475.
, 百拇医药
[2]Li L,Turner JE.Inherited retinal dystrophy in the RCS rat:prevention of photoreceptor degenerations by pigment epithelial cell transplantation[J].Exe Eye Res 1988;47∶911-917.
[3]李光辉，吴乐正，高汝龙，等.视网膜色素上皮移植细胞超微结构的观察[J].中华眼科杂志 1999；35(1)∶50-51.
收稿日期：1998-11-20
修稿日期：1999-03-29, 百拇医药
单位：李光辉(第一军医大学南方医院眼科 广州，510515)；高汝龙(中山医科大学中山眼科中心)
关键词：视网膜色素上皮；上皮移植
眼科新进展000143
分类号：R774.1 文献标识码：A
文章编号：1003-5141(2000)01-0029-01▲
视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)具有重要的生理作用，与其有关的疾病是致盲的重要眼病之一。视网膜色素上皮移植是近年来颇受关注的研究内容，期望移植健康的细胞替代病变的细胞，为某些眼病的治疗奠定基础。本文总结分析了外路法移植失败的原因。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 材料 动物均来自中山医科大学实验动物中心，RPE细胞供体取自青紫蓝有色兔，受体为新西兰无色兔，雌雄随机选择，体重2.2～3.5kg不等。所用胎牛血清、EDTA、胰蛋白酶等试剂均来自Sigma公司。
1.2 方法 细胞供体的准备：取有色兔眼球，沿角膜缘后2～3mm环形剪开眼球壁，去除角膜、晶状体、玻璃体。分离视网膜神经层，暴露视网膜的色素上皮层。用灭菌生理盐水轻轻冲洗所得眼杯，用棉签吸干。加2.5g.L-1胰蛋白酶(含0.2g.L-1EDTA)于眼杯中，放入37℃温箱中消化30min，倒去眼杯中的消化液，加1～2mL胎牛血清终止消化。用玻璃吸管轻轻吹打视网膜色素上皮层，使RPE细胞脱落。收集含脱落的RPE细胞的悬液，放于玻璃试管中，常温下800r.min-1离心10min。倒去离心后上清液，保留试管底部的细胞团块，加50～80μL不含Ca2+、Mg2+的平衡盐液，溶解RPE细胞于平衡盐液中，摇匀，细胞密度约为3～5 000个.μL-1，试管存放在含冰块的烧杯中，作细胞移植用。
, 百拇医药
1.2.2 外路法RPE移植 新西兰纯种无色素兔，脱品酰胺点眼散瞳，以氯胺酮50mg.kg-1肌注麻醉，开睑器开睑，缝线固定上、下直肌。在眼球赤道部作一近乎全层的巩膜瓣，大小约2mm×2mm，作为移植的窗口，由此用玻璃微细管抵达视网膜下腔，并注入RPE细胞，共实施8只兔眼。
2 结果
8例移植手术全部失败，其中2例针头刺入玻璃体腔，4例脉络膜出血移植层次不清，2例移植部位及层次不清。移植中最容易出现的并发症：脉络膜出血、针头刺入玻璃体腔、移植层次不清。
3 讨论
80年代中期，一系列报告结果表明：RPE细胞移植到RCS鼠的视网膜下，可阻止感光细胞的变性坏死，挽救感光细胞，为未来眼底病的治疗带来了希望[1，2]。
, http://www.100md.com
视网膜色素上皮移植的方法主要有2种，经玻璃体腔的内路法，制造局限性视网膜脱离后将细胞注入视网膜下腔；外路法则由巩膜侧经脉络膜抵达视网膜下腔，其优点为不经过玻璃体，不需要玻璃体切割机等贵重仪器。缺点为经过脉络膜易引起出血，移植层次及移植区不能直接观察，手术带有一定的盲目性，易穿破视网膜而将细胞注入玻璃体腔。因此，内路法及外路法各有优缺点。
本文报告的8例手术是作者该项研究的最初实例，没有移植的经验，因此全部失败，而国外报告通过外路法可以成功进行移植。此后我们的研究改为内路法移植，结果见文献[3]。我们体会内路法成功率较高，可能与作者长期习惯做视网膜玻璃体手术有关。但从方法学讲，由于外路法首先必须经过脉络膜，而脉络膜富含血管不易止血，层次及视野不清，移植容易失败。
参考文献：
[1]Gouras P,Lopez R,Brittis M,et al.The ultrastructure of transplanted rabbit retinal epithelium[J].Graefe's Arch Exp Ophthalmol 1992;230∶468-475.
, 百拇医药
[2]Li L,Turner JE.Inherited retinal dystrophy in the RCS rat:prevention of photoreceptor degenerations by pigment epithelial cell transplantation[J].Exe Eye Res 1988;47∶911-917.
[3]李光辉，吴乐正，高汝龙，等.视网膜色素上皮移植细胞超微结构的观察[J].中华眼科杂志 1999；35(1)∶50-51.
收稿日期：1998-11-20
修稿日期：1999-03-29, 百拇医药