FD-Nd:YAG 532激光制作眼内出血模型的体会
作者：李晟 梁凤鸣 王明芳 陈博宇
单位：李晟 王明芳(成都中医药大学附属医院眼科 成都 610072)；梁凤鸣(广州中医药大学附属第一医院眼科)；陈博宇(成都中医药大学眼科研究生)
关键词：
中国中医眼科杂志000104 FD-Nd:YAG 532激光属固体激光，主要用于眼底疾病的光凝治疗，包括氩激光的所有适应证和黄斑病变。我们采用此激光器造成眼内出血模型，为探讨治疗眼内出血的药效研究，增添了一种动物模型。本文仅就激光造模体会报告如下。
1 材料与方法
实验动物：日本大耳白兔38只，颗粒饲料喂养，体重2～2.5kg，雌雄各半，双眼正常，由成都中医药大学实验动物研究中心提供。
仪器：VIRIDIS FD-Nd：YAG激光器波长532nm，法国BVI国际公司。Haeg_Strert900型裂隙灯，瑞士产，配BVI激光适配器。Ocular激光三面镜。Topc on 50x眼底照相机。
, 百拇医药
选模：38只实验兔中6只预试验(8眼造成眼内出血，另4眼造成视网膜静脉阻塞)；32只眼正式实验(全部造眼内出血模型)。预试验结束后进行正式实验。造模方法：术前交替滴1%阿托品眼液和0.5%新福林眼液，充分散瞳至8mm左右，并滴1%的卡因3次，将兔装入固定盒内，平置于裂隙灯托架上，安装角膜接触镜，角膜面充满2%甲基纤维素，瞄准视盘颞侧视网膜静脉照射(颞侧动静脉相距太近者照鼻侧)。激光能量0.8～1.0W，光斑大小50～100μm，曝光时间0.01～0.1ms，以直接击穿静脉出血为度，若不易击穿，可先用0.6～0.8W，光斑100μm，曝光0.1～0.2ms，阻塞近端，远端即扩张，再用小光斑照射远端即出血。术后滴0.5%氯霉素眼液。
观察方法：造模后立即检查眼底，仔细观察眼底情况，并绘图记录；4小时后再眼底检查1次。以后每天滴1%阿托品眼液散瞳检查1次，1周后隔日检查1次。
造模后第1日随机抽样4只，耳缘静脉注射20%荧光素钠1ml行荧光素眼底血管造影(FFA)，以便确定出血的来源。另行抽样追踪观察出血变化等情况，并观察激光能量、光斑大小、曝光时间与出血的关系。
, 百拇医药
2 实验结果
预试验6只兔8只眼出血，4只眼视网膜静脉阻塞。32只兔正式实验造模，眼底均有出血，呈红色点状、片状、线状出血，出血遮盖部分血管，附近可见圆形白色混浊斑点，或多个斑点融合扩大的白色水肿反应，中心偶见暗灰色碳化点，外围少许色素或无色素沉着。造模后4小时出血增加，呈鲜红色大片状或不规则形状，量多在0.5～1PD，部分可见舟状视网膜前出血，出血大小未超过3PD，48小时后出血基本停止。FFA显示激光照射点荧光素渗漏，出血区遮散荧光，证实出血来自视网膜静脉血管。预试验4只眼视网膜静脉阻塞者FFA显示动静脉充盈迟缓，小静脉显著扩张，到造模后7日处死时均未见出血，另7只眼直接击穿视网膜静脉者均造成不同程度视网膜出血。
造成眼内出血的激光技术指标与照射点数的关系如表1。
表1 成功造模兔眼激光指标参数 成功造
模兔(眼)
, 百拇医药
激光光斑
直径(μm)
激光照射点数
3～10
11～30
6
100
1
5
10
50
6
4
, 百拇医药
24
100～50
19
5
表1统计结果比较χ2=8.3883，P<0.05，说明用激光技术指标的变化明显影响造成出血的照射点数，即高能量大光斑所需点数多，高能量小光斑所需点数小；若用低能量大光斑先行近端光凝，再用高能量小光斑照射远端膨胀处则更易引起出血，所需点数最少。尽管照射血管目标的瞄准情况及整体配合情况都会影响造成出血所需的点数，但在同等条件下，这些因素都不影响统计结果。
3 讨论
目前眼科使用激光器有气体、固体、染料三大类。染料激光由于其维护和性能原因较少用于临床外，气体激光的氩、氪激光，固体激光中的半导体激光，半导体倍频激光都是目前用于眼底病治疗的常用激光，本实验采用的激光器是半导体激光泵浦的倍频532nm激光，其输出性能稳定，光斑均匀清晰，操作简便，其黄绿光可用于多种眼底病的治疗〔1〕。
, 百拇医药
激光眼内造模法在60年代初视网膜激光光凝开始即有所发现，激光过大的能量可引起视网膜前出血或视网膜下出血〔2，3〕。国内70年代卫煊等〔4〕用白兔、猫、狗、猴等进行红宝石激光视网膜光凝实验，已发现过高能量会引起视网膜出血乃至玻璃体出血。1987年段俊国用Q开关红宝石激光成功造成眼内出血模型，荧光造影证实出血来自脉络膜(全国中医眼科学术会议资料)。马景学等〔5〕用氩激光造成猕猴视网膜静脉阻塞，同时伴有少许视网膜出血或视网膜前出血，出血量逐日递增，5天后出血不再增加。
我们采用VI RIDIS FD-Nd:YAG 532激光造成典型视网膜出血和视网膜前出血模型，眼底照相和荧光素眼底血管造影证实出血来源于视网膜静脉，24小时内出血逐渐增加，48小时后检眼镜下未见增加，出血很少进入玻璃体，不影响眼底检查和眼底照相。本实验模型是参考红宝石
激光眼内出血模型、氩激光视网膜静脉阻塞模型的基础上设计而成，激光通过裂隙灯适配器发射，经激光角膜接触镜能准确聚焦于所需要照射部位，定位性好，出血位置便于观察，是较理想的眼内出血模型。
, 百拇医药
本实验及前期的预试验体会到：用≤0.8W造成4眼视网膜静脉阻塞7天之内均未出血，其余直接击穿视网膜静脉造成不同程度的视网膜出血，在0.8～1.0W能量，>100μm光斑，不易击破血管，而50μm则较易击破血管，若用100μm，0.8～1.0W光凝近端血管，造成阻塞，待远端血管扩张充盈后用50μm，1.0W直接照射扩张处血管，特别是侧壁，曝光时间由原来0.1S变为0.01S，这样更易造成出血。提示临床进行视网膜光凝治疗时，血管附近宜用小能量，大光斑；尽量避免高能量，小光斑直接照射血管，以免引起出血。
参考文献
1.孙心铨，王燕琪.激光全视网膜光凝术.中国实用眼科杂志，1998，16(9)：514
2.Zaret M M.Ocular lesions produ ced by an optical maser(Laset). Science, 1961, 134: 1525
, 百拇医药
3.Campbell C J.Ocular effects produced by experimental alsers I,Q—Switched ruby laser.Am J Ophthalmol,1968,66(3):459
4.卫 煊，杨 冠，戴友林，等.激光在医学中的应用.北京：科学出版社，1974.88
5.马景学，梁树今，李丽艳，等.实验性视网膜静脉阻塞.1 眼底荧光血管造影改变.眼底病，1990，6(2)：71
收稿：1999-05-31
修回：1999-11-29, 百拇医药
单位：李晟 王明芳(成都中医药大学附属医院眼科 成都 610072)；梁凤鸣(广州中医药大学附属第一医院眼科)；陈博宇(成都中医药大学眼科研究生)
关键词：
中国中医眼科杂志000104 FD-Nd:YAG 532激光属固体激光，主要用于眼底疾病的光凝治疗，包括氩激光的所有适应证和黄斑病变。我们采用此激光器造成眼内出血模型，为探讨治疗眼内出血的药效研究，增添了一种动物模型。本文仅就激光造模体会报告如下。
1 材料与方法
实验动物：日本大耳白兔38只，颗粒饲料喂养，体重2～2.5kg，雌雄各半，双眼正常，由成都中医药大学实验动物研究中心提供。
仪器：VIRIDIS FD-Nd：YAG激光器波长532nm，法国BVI国际公司。Haeg_Strert900型裂隙灯，瑞士产，配BVI激光适配器。Ocular激光三面镜。Topc on 50x眼底照相机。
, 百拇医药
选模：38只实验兔中6只预试验(8眼造成眼内出血，另4眼造成视网膜静脉阻塞)；32只眼正式实验(全部造眼内出血模型)。预试验结束后进行正式实验。造模方法：术前交替滴1%阿托品眼液和0.5%新福林眼液，充分散瞳至8mm左右，并滴1%的卡因3次，将兔装入固定盒内，平置于裂隙灯托架上，安装角膜接触镜，角膜面充满2%甲基纤维素，瞄准视盘颞侧视网膜静脉照射(颞侧动静脉相距太近者照鼻侧)。激光能量0.8～1.0W，光斑大小50～100μm，曝光时间0.01～0.1ms，以直接击穿静脉出血为度，若不易击穿，可先用0.6～0.8W，光斑100μm，曝光0.1～0.2ms，阻塞近端，远端即扩张，再用小光斑照射远端即出血。术后滴0.5%氯霉素眼液。
观察方法：造模后立即检查眼底，仔细观察眼底情况，并绘图记录；4小时后再眼底检查1次。以后每天滴1%阿托品眼液散瞳检查1次，1周后隔日检查1次。
造模后第1日随机抽样4只，耳缘静脉注射20%荧光素钠1ml行荧光素眼底血管造影(FFA)，以便确定出血的来源。另行抽样追踪观察出血变化等情况，并观察激光能量、光斑大小、曝光时间与出血的关系。
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2 实验结果
预试验6只兔8只眼出血，4只眼视网膜静脉阻塞。32只兔正式实验造模，眼底均有出血，呈红色点状、片状、线状出血，出血遮盖部分血管，附近可见圆形白色混浊斑点，或多个斑点融合扩大的白色水肿反应，中心偶见暗灰色碳化点，外围少许色素或无色素沉着。造模后4小时出血增加，呈鲜红色大片状或不规则形状，量多在0.5～1PD，部分可见舟状视网膜前出血，出血大小未超过3PD，48小时后出血基本停止。FFA显示激光照射点荧光素渗漏，出血区遮散荧光，证实出血来自视网膜静脉血管。预试验4只眼视网膜静脉阻塞者FFA显示动静脉充盈迟缓，小静脉显著扩张，到造模后7日处死时均未见出血，另7只眼直接击穿视网膜静脉者均造成不同程度视网膜出血。
造成眼内出血的激光技术指标与照射点数的关系如表1。
表1 成功造模兔眼激光指标参数 成功造
模兔(眼)
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激光光斑
直径(μm)
激光照射点数
3～10
11～30
6
100
1
5
10
50
6
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24
100～50
19
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表1统计结果比较χ2=8.3883，P<0.05，说明用激光技术指标的变化明显影响造成出血的照射点数，即高能量大光斑所需点数多，高能量小光斑所需点数小；若用低能量大光斑先行近端光凝，再用高能量小光斑照射远端膨胀处则更易引起出血，所需点数最少。尽管照射血管目标的瞄准情况及整体配合情况都会影响造成出血所需的点数，但在同等条件下，这些因素都不影响统计结果。
3 讨论
目前眼科使用激光器有气体、固体、染料三大类。染料激光由于其维护和性能原因较少用于临床外，气体激光的氩、氪激光，固体激光中的半导体激光，半导体倍频激光都是目前用于眼底病治疗的常用激光，本实验采用的激光器是半导体激光泵浦的倍频532nm激光，其输出性能稳定，光斑均匀清晰，操作简便，其黄绿光可用于多种眼底病的治疗〔1〕。
, 百拇医药
激光眼内造模法在60年代初视网膜激光光凝开始即有所发现，激光过大的能量可引起视网膜前出血或视网膜下出血〔2，3〕。国内70年代卫煊等〔4〕用白兔、猫、狗、猴等进行红宝石激光视网膜光凝实验，已发现过高能量会引起视网膜出血乃至玻璃体出血。1987年段俊国用Q开关红宝石激光成功造成眼内出血模型，荧光造影证实出血来自脉络膜(全国中医眼科学术会议资料)。马景学等〔5〕用氩激光造成猕猴视网膜静脉阻塞，同时伴有少许视网膜出血或视网膜前出血，出血量逐日递增，5天后出血不再增加。
我们采用VI RIDIS FD-Nd:YAG 532激光造成典型视网膜出血和视网膜前出血模型，眼底照相和荧光素眼底血管造影证实出血来源于视网膜静脉，24小时内出血逐渐增加，48小时后检眼镜下未见增加，出血很少进入玻璃体，不影响眼底检查和眼底照相。本实验模型是参考红宝石
激光眼内出血模型、氩激光视网膜静脉阻塞模型的基础上设计而成，激光通过裂隙灯适配器发射，经激光角膜接触镜能准确聚焦于所需要照射部位，定位性好，出血位置便于观察，是较理想的眼内出血模型。
, 百拇医药
本实验及前期的预试验体会到：用≤0.8W造成4眼视网膜静脉阻塞7天之内均未出血，其余直接击穿视网膜静脉造成不同程度的视网膜出血，在0.8～1.0W能量，>100μm光斑，不易击破血管，而50μm则较易击破血管，若用100μm，0.8～1.0W光凝近端血管，造成阻塞，待远端血管扩张充盈后用50μm，1.0W直接照射扩张处血管，特别是侧壁，曝光时间由原来0.1S变为0.01S，这样更易造成出血。提示临床进行视网膜光凝治疗时，血管附近宜用小能量，大光斑；尽量避免高能量，小光斑直接照射血管，以免引起出血。
参考文献
1.孙心铨，王燕琪.激光全视网膜光凝术.中国实用眼科杂志，1998，16(9)：514
2.Zaret M M.Ocular lesions produ ced by an optical maser(Laset). Science, 1961, 134: 1525
, 百拇医药
3.Campbell C J.Ocular effects produced by experimental alsers I,Q—Switched ruby laser.Am J Ophthalmol,1968,66(3):459
4.卫 煊，杨 冠，戴友林，等.激光在医学中的应用.北京：科学出版社，1974.88
5.马景学，梁树今，李丽艳，等.实验性视网膜静脉阻塞.1 眼底荧光血管造影改变.眼底病，1990，6(2)：71
收稿：1999-05-31
修回：1999-11-29, 百拇医药