内毒素性发热家兔脑腹中隔和血浆精氨酸加压素的变化及中药治疗的研究
作者：薛玉凤 赵聚宾 张杰 孙爱励 许顺江
单位：薛玉凤 张杰 孙爱励 许顺江(河北省医学科学院实验医学研究所，河北 石家庄 050021)；赵聚宾(河北省医学科学院附属医院，河北 石家庄 050011)
关键词：内毒素；发热；精氨酸加压素；脑腹中隔区；中药治疗
中国中西医结合急救杂志000109摘 要：目的：探讨内毒素(ET)性发热家兔脑腹中隔区(VSA)和血浆精氨酸加压素(AVP)含量的变化及清毒退热煮散剂(QDP)的治疗作用。方法：建立家兔ET性发热模型。灌胃，观察QDP对家兔体温的影响，用放射免疫分析法检测VSA和血浆中AVP含量的变化。结果：QDP能明显抑制ET引起的体温升高(P<0.01)，同时伴有VSA和血浆AVP含量明显增加(P<0.01)，但对正常体温无影响(P>0.05)。结论：QDP的解热作用可能与VSA和血浆AVP含量增加有关；发热时中枢神经不但存在正调节途径，也存在负调节途径，体温上升的水平是正负调节相互作用的结果；QDP对ET性发热有治疗作用。
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分类号：R364.6；R453 文献标识码：A
文章编号：1008-9691(2000)01-0030-03
Changes in arginine vasopressin contents-in-the ventral septal area and plasma in rabbits with endotoxin-induced fever and effects of drug treatment
XUE Yu-feng,ZHAO Ju-bin,ZHANG Jie,et al
(Institute of Experimental Medicine,Hebei Academy of Medical Sciences,Shijiazhuang 050021)
, 百拇医药
Abstract：Objective：To study the role of arginine vasopressin (AVP) in the ventral septal area (VSA) and plasma in endotoxin-induced fever and to observe the effects of Qingdutuire Decoction Powder(QDP，清毒退热煮散剂) on endotoxin-induced fever.Methods：A model of endotoxin-induced fever was established in rabbits.Fever response of rabbits was observed,and AVP contents in VSA and plasma were determined by radioimmunoassay following stomach gavage of QDP.Results：Stomach gavage of QDP inhibited febrile response (P<0.01) and increased AVP contents in VSA and plasma (P<0.01),while it did not affect temperature in normal animals (P>0.05).Conclusions：The inhibitory effect of QDP on endotoxin-induced fever appears to be associated with elevation of AVP contents in VSA and plasma,suggesting the possibility that the regulation of febrile response may depend on the interaction between positive and negative pathway.QDP can be useful in the treatment of endotoxin-fever.
, 百拇医药
Key words：endotoxin;fever;arginine vasopressin;ventral septal area;Chinese traditional drug therapy▲
目前临床上所使用的化学解热剂大多是通过阻断前列腺素E(prostaglandin E,PGE)的合成发挥解热作用[1]，但这些化学解热剂的解热效果不理想，而且大剂量或长期用药有较大不良反应。因此，寻找高效低毒的解热剂是当前发热研究的重要课题。近年研究表明，某些中药以其解热快，效果稳定，不良反应小而易被患者接受。以往对解热中药的实验研究以单味药居多，而对复方中药研究较少。精氨酸加压素(arginine vasopressin,AVP)是一种内生解热性神经递质，参与了发热时体温的负调节。中药的降温作用是否与AVP含量变化有关，尚未见有关报道。本研究旨在观察中药清毒退热煮散剂(qingdutuire decoction powder,QDP)对内毒素性发热家兔脑腹中隔区(VSA)和血浆AVP含量的影响，并探讨QDP的解热作用机制。
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1 材料与方法
1.1 QDP中药制备：将金银花、黄芩、大青叶、藿香等中药研成粉，纱布包封成袋，每袋100 g，用300 ml水煎15分钟，制成100%浓缩液，按人体表面积换算家兔给药剂量，相当于生药20.021 g/kg，灌胃。
1.2 试剂和仪器：大肠杆菌内毒素(E.coli O111B4)由上海生物制品所提供；AVP放免药盒由上海第二军医大学神经生物学教研室提供；北京产FT630 Gγ液体闪烁计数仪；ST1型数字温度计由上海医用仪表厂生产。
1.3 体温测定：使用ST1型数字温度计测温，使用前以标准温度计校正。实验时将测温探头经肛门插入10 cm，并固定在尾根部，待体温稳定后，测定家兔结肠温度3次(每10分钟1次)，取均数作为基础体温，体温变化最大高度(ΔT，℃)，体温反应指标用平均体温反应曲线和150分钟体温反应指数(TRI150)表示。
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1.4 实验动物：健康新西兰家兔32只，体重2.0～2.8 kg，基础体温38.3～39.5 ℃，雌雄不拘，单笼饲养，自由饮水进食，实验室温度保持在(23±1)℃。实验前，家兔置于特制的兔架上，用模拟探头的导管，经肛门插入10 cm，并固定在尾根部，持续每日4小时，适应3日，第4日开始正式实验。
1.5 实验分组：实验动物随机分为4组，每组8只：①正常对照组：静注生理盐水(NS)1 ml/kg；②内毒素+NS组：静注内毒素10 EU/kg和NS 1 ml/kg；③内毒素+QDP组：静注内毒素10 EU/kg，灌胃QDP 21.021 g/kg；④QDP+NS组：灌胃QDP 21.021 g/kg和NS 1 ml/kg。
1.6 AVP含量测定：注射内毒素150分钟后，先从右心室穿刺取血2 ml，注入加有EDTA*Na2抗凝剂的试管中，离心(3 000 r/min)10分钟，分离血浆，置-30 ℃冰箱待测。然后立即断头处死家兔，打开颅骨，迅速剪取兔脑，放入沸生理盐水中煮5分钟后取出，按自然界限分出腹中隔，称取腹中隔区组织30 mg，置于玻璃匀浆器中，充分匀浆，加1 mol/L的HCl 1 ml，室温放置100分钟，加1 mol/L的NaOH 1 ml，混合后离心(3 000 r/min)10分钟，取上清液于-20 ℃冰箱保存待测。
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1.7 统计学方法：实验数据以均数±标准差(
)表示，用Student′s t检验判断均数差异的显著性。
2 结 果
2.1 QDP对内毒素性发热和正常体温的影响：注射内毒素+NS组，家兔直肠温度上升，最大体温上升幅度可达1.23 ℃，ΔT ℃与TRI150明显高于NS对照组(P<0.01)；而内毒素+QDP组体温呈现降低，最大体温下降幅度可达0.15 ℃，ΔT ℃与TRI150均明显低于内毒素+NS组(P均<0.01)；QDP+NS组家兔直肠温度无显著变化，与NS组之间ΔT ℃与TRI150均无显著差异(P均>0.05)。表明QDP完全拮抗了内毒素的致热效应，而不降低家兔的正常体温。见图1和表1。
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图1 各组家兔平均体温变化曲线
表1 QDP对体温及AVP含量变化的影响() 组别
ΔT(℃)
TRI150
AVP含量
脑腹中隔(ng/g)
血浆(ng/L)
NS组
0.02±0.04
0.02±0.06
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7.31±3.05
6.81±2.33
内毒素+NS组
1.23±0.27**
2.61±0.56**
12.88±4.19*
10.69±3.91*
内毒素+QDP组
0.28±0.15＃＃
0.15±0.11＃＃
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35.57±6.77**＃＃
19.13±5.81**＃＃
QDP+NS组
0.03±0.07
0.03±0.05
16.83±8.24**＃
13.62±3.29**＃
注：与NS组比较：*P<0.05，**P<0.01；与内毒素+NS组比较：＃P<0.05，＃＃P<0.01
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2.2 QDP降温作用及脑腹中隔区和血浆AVP含量的变化：表1可见，静注ET致发热时，脑腹中隔和血浆AVP含量均明显高于NS组(P均<0.01)；同时灌服QDP则脑腹中隔和血浆中AVP含量均非常显著高于ET+NS组(P均<0.01)；静注NS，同时灌服QDP，脑腹中隔和血浆中AVP含量也均明显高于NS组(P均<0.05)。
3 讨 论
AVP是一种内源性降温9肽神经递质，是由下丘脑视上核和室旁核分泌而释放入血和脑脊液，AVP在脑内最敏感的作用点及发挥解热作用的部位是脑腹中隔区和中杏仁核。当发热时脑腹中隔区AVP含量明显增高，当向脑腹中隔区注入微量AVP，能明显抑制多种物质(如内皮素、PGE、白介素1和内生致热源等)，但不影响正常体温，刺激AVP的内源性释放可抑制发热[2，3]。本研究首先发现，QDP灌胃不降低家兔正常体温，而抑制由内毒素引起的发热反应，使体温降低，同时脑腹中隔和血浆中AVP含量明显增高。提示：清毒退热煮散剂可能参与了发热时体温的负调节[4]，通过刺激内源性AVP的释放而发挥降温作用。清毒退热煮散剂是根据中医病机，按君臣佐使的组方原理，严谨配伍由十几味中草药经煎煮而成，该药具有单味药的性质，又具有复方的协同作用，它的降温作用有可能与刺激了内源性调节性多肽AVP的合成释放有关。实验表明，清毒退热煮散剂表现的解热作用很强烈，它不仅参与了发热时体温的负调节，还与正调节有关[5]。至于清毒退热煮散剂是如何调节AVP的释放，通过什么途径参与体温正负调节发挥解热作用，有待进一步研究。
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基金项目：河北省中医药管理局基金资助项目(96023)
作者简介：薛玉凤(1953-)，女(汉族)，河北省人，副研究员。从事感染疾病的研究工作，近5年公开发表学术论文20余篇，获省级科技进步奖2项，厅级科技进步奖4项。
参考文献：
[1]王德成.解热镇痛抗炎药.见王焕斗主编.应用药理学.第1版.贵阳：人民出版社，1984.151-159.
[2]Cooper K E,Malkinsin T J,Monda M,et al.New neurobiological concepts of the genesis of fever and of antipyresis.In：Bartfai T,Ottoson D,eds.Neuroimmunology of fever.New York：Pergamon Press,1992.225-230.
, 百拇医药
[3]Cooper K E,Kasting N W,Lederos K,et al.Evidence supporting a role for endogenous vasopressin in natural suppression of fever in the sheep.J Physiol,1979,295：33-38.
[4]李楚杰.发热时体温的正调节和负调节.中国病理生理杂志，1994，5：553-557.
[5]薛玉凤，赵聚宾，张杰，等.清毒退热药对内毒素性发热家兔脑脊液和血浆中cAMP水平的影响.安徽中医临床杂志，1998，专刊：44-45.
收稿日期：1999-07-29
修稿日期：1999-10-06, 百拇医药
单位：薛玉凤 张杰 孙爱励 许顺江(河北省医学科学院实验医学研究所，河北 石家庄 050021)；赵聚宾(河北省医学科学院附属医院，河北 石家庄 050011)
关键词：内毒素；发热；精氨酸加压素；脑腹中隔区；中药治疗
中国中西医结合急救杂志000109摘 要：目的：探讨内毒素(ET)性发热家兔脑腹中隔区(VSA)和血浆精氨酸加压素(AVP)含量的变化及清毒退热煮散剂(QDP)的治疗作用。方法：建立家兔ET性发热模型。灌胃，观察QDP对家兔体温的影响，用放射免疫分析法检测VSA和血浆中AVP含量的变化。结果：QDP能明显抑制ET引起的体温升高(P<0.01)，同时伴有VSA和血浆AVP含量明显增加(P<0.01)，但对正常体温无影响(P>0.05)。结论：QDP的解热作用可能与VSA和血浆AVP含量增加有关；发热时中枢神经不但存在正调节途径，也存在负调节途径，体温上升的水平是正负调节相互作用的结果；QDP对ET性发热有治疗作用。
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分类号：R364.6；R453 文献标识码：A
文章编号：1008-9691(2000)01-0030-03
Changes in arginine vasopressin contents-in-the ventral septal area and plasma in rabbits with endotoxin-induced fever and effects of drug treatment
XUE Yu-feng,ZHAO Ju-bin,ZHANG Jie,et al
(Institute of Experimental Medicine,Hebei Academy of Medical Sciences,Shijiazhuang 050021)
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Abstract：Objective：To study the role of arginine vasopressin (AVP) in the ventral septal area (VSA) and plasma in endotoxin-induced fever and to observe the effects of Qingdutuire Decoction Powder(QDP，清毒退热煮散剂) on endotoxin-induced fever.Methods：A model of endotoxin-induced fever was established in rabbits.Fever response of rabbits was observed,and AVP contents in VSA and plasma were determined by radioimmunoassay following stomach gavage of QDP.Results：Stomach gavage of QDP inhibited febrile response (P<0.01) and increased AVP contents in VSA and plasma (P<0.01),while it did not affect temperature in normal animals (P>0.05).Conclusions：The inhibitory effect of QDP on endotoxin-induced fever appears to be associated with elevation of AVP contents in VSA and plasma,suggesting the possibility that the regulation of febrile response may depend on the interaction between positive and negative pathway.QDP can be useful in the treatment of endotoxin-fever.
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Key words：endotoxin;fever;arginine vasopressin;ventral septal area;Chinese traditional drug therapy▲
目前临床上所使用的化学解热剂大多是通过阻断前列腺素E(prostaglandin E,PGE)的合成发挥解热作用[1]，但这些化学解热剂的解热效果不理想，而且大剂量或长期用药有较大不良反应。因此，寻找高效低毒的解热剂是当前发热研究的重要课题。近年研究表明，某些中药以其解热快，效果稳定，不良反应小而易被患者接受。以往对解热中药的实验研究以单味药居多，而对复方中药研究较少。精氨酸加压素(arginine vasopressin,AVP)是一种内生解热性神经递质，参与了发热时体温的负调节。中药的降温作用是否与AVP含量变化有关，尚未见有关报道。本研究旨在观察中药清毒退热煮散剂(qingdutuire decoction powder,QDP)对内毒素性发热家兔脑腹中隔区(VSA)和血浆AVP含量的影响，并探讨QDP的解热作用机制。
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1 材料与方法
1.1 QDP中药制备：将金银花、黄芩、大青叶、藿香等中药研成粉，纱布包封成袋，每袋100 g，用300 ml水煎15分钟，制成100%浓缩液，按人体表面积换算家兔给药剂量，相当于生药20.021 g/kg，灌胃。
1.2 试剂和仪器：大肠杆菌内毒素(E.coli O111B4)由上海生物制品所提供；AVP放免药盒由上海第二军医大学神经生物学教研室提供；北京产FT630 Gγ液体闪烁计数仪；ST1型数字温度计由上海医用仪表厂生产。
1.3 体温测定：使用ST1型数字温度计测温，使用前以标准温度计校正。实验时将测温探头经肛门插入10 cm，并固定在尾根部，待体温稳定后，测定家兔结肠温度3次(每10分钟1次)，取均数作为基础体温，体温变化最大高度(ΔT，℃)，体温反应指标用平均体温反应曲线和150分钟体温反应指数(TRI150)表示。
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1.4 实验动物：健康新西兰家兔32只，体重2.0～2.8 kg，基础体温38.3～39.5 ℃，雌雄不拘，单笼饲养，自由饮水进食，实验室温度保持在(23±1)℃。实验前，家兔置于特制的兔架上，用模拟探头的导管，经肛门插入10 cm，并固定在尾根部，持续每日4小时，适应3日，第4日开始正式实验。
1.5 实验分组：实验动物随机分为4组，每组8只：①正常对照组：静注生理盐水(NS)1 ml/kg；②内毒素+NS组：静注内毒素10 EU/kg和NS 1 ml/kg；③内毒素+QDP组：静注内毒素10 EU/kg，灌胃QDP 21.021 g/kg；④QDP+NS组：灌胃QDP 21.021 g/kg和NS 1 ml/kg。
1.6 AVP含量测定：注射内毒素150分钟后，先从右心室穿刺取血2 ml，注入加有EDTA*Na2抗凝剂的试管中，离心(3 000 r/min)10分钟，分离血浆，置-30 ℃冰箱待测。然后立即断头处死家兔，打开颅骨，迅速剪取兔脑，放入沸生理盐水中煮5分钟后取出，按自然界限分出腹中隔，称取腹中隔区组织30 mg，置于玻璃匀浆器中，充分匀浆，加1 mol/L的HCl 1 ml，室温放置100分钟，加1 mol/L的NaOH 1 ml，混合后离心(3 000 r/min)10分钟，取上清液于-20 ℃冰箱保存待测。
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1.7 统计学方法：实验数据以均数±标准差(
)表示，用Student′s t检验判断均数差异的显著性。2 结 果
2.1 QDP对内毒素性发热和正常体温的影响：注射内毒素+NS组，家兔直肠温度上升，最大体温上升幅度可达1.23 ℃，ΔT ℃与TRI150明显高于NS对照组(P<0.01)；而内毒素+QDP组体温呈现降低，最大体温下降幅度可达0.15 ℃，ΔT ℃与TRI150均明显低于内毒素+NS组(P均<0.01)；QDP+NS组家兔直肠温度无显著变化，与NS组之间ΔT ℃与TRI150均无显著差异(P均>0.05)。表明QDP完全拮抗了内毒素的致热效应，而不降低家兔的正常体温。见图1和表1。
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图1 各组家兔平均体温变化曲线
表1 QDP对体温及AVP含量变化的影响(
) 组别ΔT(℃)
TRI150
AVP含量
脑腹中隔(ng/g)
血浆(ng/L)
NS组
0.02±0.04
0.02±0.06
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7.31±3.05
6.81±2.33
内毒素+NS组
1.23±0.27**
2.61±0.56**
12.88±4.19*
10.69±3.91*
内毒素+QDP组
0.28±0.15＃＃
0.15±0.11＃＃
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35.57±6.77**＃＃
19.13±5.81**＃＃
QDP+NS组
0.03±0.07
0.03±0.05
16.83±8.24**＃
13.62±3.29**＃
注：与NS组比较：*P<0.05，**P<0.01；与内毒素+NS组比较：＃P<0.05，＃＃P<0.01
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2.2 QDP降温作用及脑腹中隔区和血浆AVP含量的变化：表1可见，静注ET致发热时，脑腹中隔和血浆AVP含量均明显高于NS组(P均<0.01)；同时灌服QDP则脑腹中隔和血浆中AVP含量均非常显著高于ET+NS组(P均<0.01)；静注NS，同时灌服QDP，脑腹中隔和血浆中AVP含量也均明显高于NS组(P均<0.05)。
3 讨 论
AVP是一种内源性降温9肽神经递质，是由下丘脑视上核和室旁核分泌而释放入血和脑脊液，AVP在脑内最敏感的作用点及发挥解热作用的部位是脑腹中隔区和中杏仁核。当发热时脑腹中隔区AVP含量明显增高，当向脑腹中隔区注入微量AVP，能明显抑制多种物质(如内皮素、PGE、白介素1和内生致热源等)，但不影响正常体温，刺激AVP的内源性释放可抑制发热[2，3]。本研究首先发现，QDP灌胃不降低家兔正常体温，而抑制由内毒素引起的发热反应，使体温降低，同时脑腹中隔和血浆中AVP含量明显增高。提示：清毒退热煮散剂可能参与了发热时体温的负调节[4]，通过刺激内源性AVP的释放而发挥降温作用。清毒退热煮散剂是根据中医病机，按君臣佐使的组方原理，严谨配伍由十几味中草药经煎煮而成，该药具有单味药的性质，又具有复方的协同作用，它的降温作用有可能与刺激了内源性调节性多肽AVP的合成释放有关。实验表明，清毒退热煮散剂表现的解热作用很强烈，它不仅参与了发热时体温的负调节，还与正调节有关[5]。至于清毒退热煮散剂是如何调节AVP的释放，通过什么途径参与体温正负调节发挥解热作用，有待进一步研究。
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基金项目：河北省中医药管理局基金资助项目(96023)
作者简介：薛玉凤(1953-)，女(汉族)，河北省人，副研究员。从事感染疾病的研究工作，近5年公开发表学术论文20余篇，获省级科技进步奖2项，厅级科技进步奖4项。
参考文献：
[1]王德成.解热镇痛抗炎药.见王焕斗主编.应用药理学.第1版.贵阳：人民出版社，1984.151-159.
[2]Cooper K E,Malkinsin T J,Monda M,et al.New neurobiological concepts of the genesis of fever and of antipyresis.In：Bartfai T,Ottoson D,eds.Neuroimmunology of fever.New York：Pergamon Press,1992.225-230.
, 百拇医药
[3]Cooper K E,Kasting N W,Lederos K,et al.Evidence supporting a role for endogenous vasopressin in natural suppression of fever in the sheep.J Physiol,1979,295：33-38.
[4]李楚杰.发热时体温的正调节和负调节.中国病理生理杂志，1994，5：553-557.
[5]薛玉凤，赵聚宾，张杰，等.清毒退热药对内毒素性发热家兔脑脊液和血浆中cAMP水平的影响.安徽中医临床杂志，1998，专刊：44-45.
收稿日期：1999-07-29
修稿日期：1999-10-06, 百拇医药