虫对慢性血瘀型大鼠血液流变性和红细胞免疫功能的影响
作者：袁静 吴华强 张景湖 侯正明 陈全珠 章复清 宋小鸽 唐照亮
单位：安徽中医学院，合肥 230038
关键词：虫；慢性血瘀模型；血液流变学；活血化瘀；红细胞免疫
安徽中医学院学报000128 摘要：目的：观察
虫对慢性血瘀型大鼠血液流变性和红细胞免疫功能的影响。方法：模拟阴虚火旺复制慢性血瘀大鼠模型，用毛细血管法测定不同切速下的全血比粘度、血浆比粘度，常规法测定红细胞压积。参照郭氏法测定红细胞免疫粘附功能指标，并将其与血液流变性有关指标作一相关分析。结果：虫能明显降低瘀血大鼠的全血比粘度、血浆比粘度和红细胞压积；提高瘀血大鼠红细胞C3b受体花环率，使红细胞免疫复合物花环率下降，血清红细胞免疫粘附促进因子活性增强，而抑制因子减弱；血液粘度与红细胞C3b受体花环率的相关分析呈显著负相关。结论：虫不仅有活血化瘀作用，还具有促进红细胞免疫功能的功效。
, 百拇医药
中图分类号：R285.5 文献标识码：A
文章编号：1000-2219(2000)01-0041-03
THE INFLUENCE OF ZHECHONG ON BLOOD RHEOLOGY AND RED CELL
IMMUNE FUNCTION IN CHRONIC BLOOD STASIS RATS MODEL
Yuan Jing,Wu Huaqiang,Zhang Jinghu,Hou Zhengming,Cheng Quanzhu,Zhang Fuqing,Song Xiaoge,Tang Zhaoliang
(Anhui College of TCM,Hefei 230038，China)
, 百拇医药
Abstract：Objective:To observe the influence of Zhechong on blood rheology and red cell immune function in chronic blood stasis rats model.Method:This model was made by imitating Yinxu-Huowang.Whole blood viscosity and plasmatic viscosity were measured in capillary.Packed cell volume was measured in a routine test.Red cell immune function indexes were measured by Guo's methods,and there was a correlativity relating to blood viscosity.Result:It was showed that Zhechong not only lowered markedly whole blood viscosity,plasmatic viscosity and packed cell volume but also promoted red cell immune function,which may be:①RBC C3b receptor rosette rate(RCR1R) could be enhanced,②RBC immune complexes rosette rate(RICR) could be reduced,③the serum rosette forming enhancing rate of RBC C3b receptor(RFER) could be increased,④the serum rosette forming inhibitory rate of RBC C3b receptor (RFIR) could be decreased.Moreover,there were the inverse correlation between blood viscositv and RCR1R.Conclusion:Zhechong not only activate blood circulation against stasis but also promote red cell immune function.
, http://www.100md.com
Key words：Zhechong;Chronic blood stasis model;Blood rheology;Activate blood circulation against stasis;Red cell immune
近年来，中药对红细胞免疫调节的研究，尤其在研究扶正中药对红细胞免疫功能影响的方面已得到广泛的重视。但关于活血化瘀药物对红细胞免疫功能影响的报道很少，本研究通过模拟阴虚火旺复制慢性血瘀证模型及用活血化瘀药物虫治疗，观察模型鼠血液流变性变化，同时观察红细胞免疫应答功能。
1 材料
1.1 动物 健康wistar大白鼠，体重240±25g，雌雄各半，由本校动物室提供，全部大鼠饲养1W后开始实验。
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1.2 药物 将虫用水煎煮3次，合并滤液，恒温水浴80℃浓缩至含生药量200mg/ml和400mg/ml的两种药液。
1.3 试剂 氢化考的松注射液，陕西西安制药厂，批号970818。盐酸肾上腺素注射液，上海禾丰制药有限公司，批号970502，补体致敏和未致敏酵母冻干试剂，第二军医大学长海医院提供。
1.4 仪器 L-100型微机化血液粘度计，上海医科大学生产。
2 方法与结果
2.1 造模〔1〕与处理 将48只大鼠随机分成4组。除正常对照组外，其它3组均每日1次肌肉注射氢化考的松，按10mg/kg剂量，连续10d，第11d皮下注射1次0.1%肾上腺素0.1ml。造模期间控制饮水量，按2ml/100g给予饮水量，食料不限，室温为25±5℃。造模结束后，对照组与模型组每天灌1ml自来水，虫组分高、低剂量组，分别灌服高、低浓度的药液，每次1ml，疗程13d。
, 百拇医药
2.2 体重与肾上腺重量 分别称大鼠造模11d时及用药12d时的体重，并在剖杀大鼠时称取同侧肾上腺重量。结果见表1。
表1虫对模型鼠体重及肾上腺重量影响(
±s) 组 别
n
体 重(g)
肾上腺
(mg/100g)
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造模后
给药后
对照组
12
268.25±23.50
262.50±21.67
10.49±2.27
模型组
12
230.00±12.50△△
232.50±15.55△△
10.44±3.07虫(低)
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12
222.25±20.00△△
252.13±18.60*
9.96±3.25虫(高)
12
229.50±22.50△△
258.60±16.61*
10.85±2.99
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与对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01(下同)
2.3 血液流变性指标 大鼠断头取血4ml置肝素管中摇匀，用毛细管法测定在不同切速下的全血比粘度、血浆比粘度，另按常规法测红细胞压积。检测温度25℃，所有指标在5h内完成。结果见表2。
表2虫对模型鼠血液流变性影响(±s) 组 别
n
, 百拇医药
全血比粘度(mPa.s)
血浆比粘度
(mPa.s)
红细胞压积
(%)
20S-1
30S-1
40S-1
60S-1
80S-1
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对照组
12
9.46±1.62
8.62±1.27
7.29±1.07
6.59±0.87
5.94±0.62
1.70±0.06
46.00±3.30
模型组
12
11.29±1.61△△
, http://www.100md.com
10.11±1.57△△
8.75±1.34△△
7.77±1.08△△
6.53±0.78△
1.84±0.08△△
49.25±3.36△虫(低)
12
, http://www.100md.com
10.05±1.20*
9.11±1.55
8.24±1.27
7.51±1.00
6.11±0.79
1.70±0.09**
47.10±3.96虫(高)
12
10.22±1.16*
, 百拇医药
9.58±1.20
7.53±1.30*
6.75±0.89*
6.44±1.17
1.70±0.08**
46.02±2.26*
2.4 红细胞免疫功能变化 参照郭峰方法〔2〕测定红细胞C3b受体花环率(RCR1R)、红细胞免疫复合物花环率(RICR)、红细胞免疫粘附促进率(RFER)、红细胞免疫粘附抑制率(RFIR)。
由于大鼠红细胞CR1数量较少，1个红细胞结上1个或以上酵母菌即为1朵花环。结果见表3。表3虫对模型鼠红细胞免疫功能影响(%，±s) 组 别
, http://www.100md.com
n
RCR1R
RICR
RFER
RFIR
对照组
12
17.00±1.91
6.43±2.15
92.08±17.88
37.07±9.46
模型组
, 百拇医药
12
14.00±2.83△
10.43±4.16△
61.99±24.64△
45.99±6.28△虫(低)
12
16.86±2.55*
7.29±1.60*
, 百拇医药
81.22±13.22*
42.08±0.13虫(高)
12
16.09±2.43*
8.71±2.75
84.36±14.39*
39.21±7.03*
2.5 模型组与虫(高)组RCR1R与血液流变性有关指标直线相关分析 结果见表4。 表4 模型、虫(高)组血液流变性有关指标与RCR1R的关系 项 目
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相关系数
P值
全血比粘度
-0.5063
<0.01
血浆比粘度
-0.3966
<0.05
红细胞压积
-0.3654
<0.05
4 讨论
4.1 模拟阴虚火旺复制慢性血瘀模型 清代王清任曾曰：“血受热煎熬成块”，据此模拟阴虚火旺状态以复制血瘀模型。该模型原设计认为皮质激素体内增多与阴虚有关，儿茶酚胺增多与火旺有关，故两者相加复制阴虚火旺模型。我们参照了马治中等〔1〕的方法，但用氢化考的松代替氟氢考的松造成大鼠阴虚状态。从大鼠用药前的体重看是有明显差异的，结合全血比粘度、血浆比粘度和红细胞压积较对照组明显增高，说明模型复制成功。造模大鼠肾上腺重量与对照组比无统计学差异，说明较小剂量肾上腺素的使用，肾上腺皮质未受反馈抑制。
, 百拇医药
4.2虫对血液流变性指标的影响虫，咸、寒，有小毒，临床上具有活血化瘀、消症破坚、疗伤定痛等作用，是活血化瘀最常用药之一。本实验也证明了虫确能有效地降低瘀血大鼠的全血比粘度、血浆比粘度和红细胞压积，这可能由于虫化学成分里含有一种丝氨基蛋白酶，它具有纤维酶原激活作用，且具有尿激酶型纤溶酶原激活物的特点〔3〕。实验用药的两个剂量组之间虽无明显差异，但对高切速下的全血比粘度，高剂量组有效，而低剂量组无效，可能说明前者的药效更强些，但有待进步验证。
, 百拇医药
4.3虫对红细胞免疫粘附功能的影响有关研究表明，红细胞具有识别、粘附、浓缩、杀伤抗原、清除循环免疫复合物(CIC)的能力，且参与机体免疫调控，并有自我调控系统。红细胞的这些免疫功能主要以其表面具有的C3b受体(即Ⅰ型补体受体CR1)为基础实现的。实验结果表明，瘀血模型鼠的RCR1R减少，RICR增多，这可能由于瘀血状态下体内凝血酶、纤维蛋白酶增加，而红细胞CR1是一种跨膜糖蛋白，对此类酶特别敏感，易受破坏〔4〕，所以CR1活性减弱；再者，瘀血时血液循环和微循环障碍，体内CIC增多，红细胞粘附IC过多不易解脱清除，故RICR增多，如此也使红细胞CR1空位减少，活性下降，而RICR的增多是否会使红细胞表面的负电荷减少，从而红细胞聚集性增强，瘀血加重，形成恶性循环，有待进一步证实。实验还显示，瘀血模型鼠RFER活性减弱，RFIR活性增强，说明其红细胞免疫功能低下还与机体的免疫系统自我调控功能紊乱有关。虫因其活血化瘀，改善凝血状态，促进血液循环，提高机体的自我调控功能，故可提高RCR1R和RFER，降低RICR和RFIR。当然虫因提高红细胞免疫功能，改善红细胞表面电荷状态，从而改善瘀血状况，这也是极有可能的。
, 百拇医药
从瘀血模型组与虫(高)组的RCR1R与全血比粘度、血浆比粘度、红细胞压积的相关性分析来看，血液流变性有关指标与RCR1R呈显著负相关，可见虫具有降低血粘度，提高RCR1R之功效。
本研究结果一方面为活血化瘀药虫促进红细胞免疫功能的药理作用提供了实验依据；另一方面提示，提高机体红细胞免疫功能可能是治疗慢性血瘀症的另一有效途径，值得深入研究。
, 百拇医药
基金项目：安徽省自然科学基金资助项目(95-医-12)
作者简介：袁静(1958-)，女，副研究员，医学硕士
参考文献：
〔1〕马治中，杨明，和岚，等.血瘀病理模型探索(三)〔J〕.北京医科大学学报，1991，23(4)：287.
〔2〕郭峰，骆永珍.红细胞学新探〔M〕.南京：南京大学出版社，1993.93.
〔3〕陈可冀，欧兴长.活血化瘀药化学药理与临床〔M〕.济南：山东科学技术出版社，1995.285.
〔4〕朱卫华，李伯埙.红细胞免疫功能CR1缺陷及其治疗〔J〕.中国实验临床免疫学杂志，1998，10(4)：63.
1999-10-25收稿, 百拇医药
单位：安徽中医学院，合肥 230038
关键词：虫；慢性血瘀模型；血液流变学；活血化瘀；红细胞免疫
安徽中医学院学报000128 摘要：目的：观察
虫对慢性血瘀型大鼠血液流变性和红细胞免疫功能的影响。方法：模拟阴虚火旺复制慢性血瘀大鼠模型，用毛细血管法测定不同切速下的全血比粘度、血浆比粘度，常规法测定红细胞压积。参照郭氏法测定红细胞免疫粘附功能指标，并将其与血液流变性有关指标作一相关分析。结果：虫能明显降低瘀血大鼠的全血比粘度、血浆比粘度和红细胞压积；提高瘀血大鼠红细胞C3b受体花环率，使红细胞免疫复合物花环率下降，血清红细胞免疫粘附促进因子活性增强，而抑制因子减弱；血液粘度与红细胞C3b受体花环率的相关分析呈显著负相关。结论：虫不仅有活血化瘀作用，还具有促进红细胞免疫功能的功效。, 百拇医药
中图分类号：R285.5 文献标识码：A
文章编号：1000-2219(2000)01-0041-03
THE INFLUENCE OF ZHECHONG ON BLOOD RHEOLOGY AND RED CELL
IMMUNE FUNCTION IN CHRONIC BLOOD STASIS RATS MODEL
Yuan Jing,Wu Huaqiang,Zhang Jinghu,Hou Zhengming,Cheng Quanzhu,Zhang Fuqing,Song Xiaoge,Tang Zhaoliang
(Anhui College of TCM,Hefei 230038，China)
, 百拇医药
Abstract：Objective:To observe the influence of Zhechong on blood rheology and red cell immune function in chronic blood stasis rats model.Method:This model was made by imitating Yinxu-Huowang.Whole blood viscosity and plasmatic viscosity were measured in capillary.Packed cell volume was measured in a routine test.Red cell immune function indexes were measured by Guo's methods,and there was a correlativity relating to blood viscosity.Result:It was showed that Zhechong not only lowered markedly whole blood viscosity,plasmatic viscosity and packed cell volume but also promoted red cell immune function,which may be:①RBC C3b receptor rosette rate(RCR1R) could be enhanced,②RBC immune complexes rosette rate(RICR) could be reduced,③the serum rosette forming enhancing rate of RBC C3b receptor(RFER) could be increased,④the serum rosette forming inhibitory rate of RBC C3b receptor (RFIR) could be decreased.Moreover,there were the inverse correlation between blood viscositv and RCR1R.Conclusion:Zhechong not only activate blood circulation against stasis but also promote red cell immune function.
, http://www.100md.com
Key words：Zhechong;Chronic blood stasis model;Blood rheology;Activate blood circulation against stasis;Red cell immune
近年来，中药对红细胞免疫调节的研究，尤其在研究扶正中药对红细胞免疫功能影响的方面已得到广泛的重视。但关于活血化瘀药物对红细胞免疫功能影响的报道很少，本研究通过模拟阴虚火旺复制慢性血瘀证模型及用活血化瘀药物
虫治疗，观察模型鼠血液流变性变化，同时观察红细胞免疫应答功能。1 材料
1.1 动物 健康wistar大白鼠，体重240±25g，雌雄各半，由本校动物室提供，全部大鼠饲养1W后开始实验。
, http://www.100md.com
1.2 药物 将
虫用水煎煮3次，合并滤液，恒温水浴80℃浓缩至含生药量200mg/ml和400mg/ml的两种药液。1.3 试剂 氢化考的松注射液，陕西西安制药厂，批号970818。盐酸肾上腺素注射液，上海禾丰制药有限公司，批号970502，补体致敏和未致敏酵母冻干试剂，第二军医大学长海医院提供。
1.4 仪器 L-100型微机化血液粘度计，上海医科大学生产。
2 方法与结果
2.1 造模〔1〕与处理 将48只大鼠随机分成4组。除正常对照组外，其它3组均每日1次肌肉注射氢化考的松，按10mg/kg剂量，连续10d，第11d皮下注射1次0.1%肾上腺素0.1ml。造模期间控制饮水量，按2ml/100g给予饮水量，食料不限，室温为25±5℃。造模结束后，对照组与模型组每天灌1ml自来水，
虫组分高、低剂量组，分别灌服高、低浓度的药液，每次1ml，疗程13d。, 百拇医药
2.2 体重与肾上腺重量 分别称大鼠造模11d时及用药12d时的体重，并在剖杀大鼠时称取同侧肾上腺重量。结果见表1。
表1
虫对模型鼠体重及肾上腺重量影响(±s) 组 别n
体 重(g)
肾上腺
(mg/100g)
, http://www.100md.com
造模后
给药后
对照组
12
268.25±23.50
262.50±21.67
10.49±2.27
模型组
12
230.00±12.50△△
232.50±15.55△△
10.44±3.07
虫(低), http://www.100md.com
12
222.25±20.00△△
252.13±18.60*
9.96±3.25
虫(高)12
229.50±22.50△△
258.60±16.61*
10.85±2.99
, http://www.100md.com
与对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01(下同)
2.3 血液流变性指标 大鼠断头取血4ml置肝素管中摇匀，用毛细管法测定在不同切速下的全血比粘度、血浆比粘度，另按常规法测红细胞压积。检测温度25℃，所有指标在5h内完成。结果见表2。
表2
虫对模型鼠血液流变性影响(±s) 组 别n
, 百拇医药
全血比粘度(mPa.s)
血浆比粘度
(mPa.s)
红细胞压积
(%)
20S-1
30S-1
40S-1
60S-1
80S-1
, http://www.100md.com
对照组
12
9.46±1.62
8.62±1.27
7.29±1.07
6.59±0.87
5.94±0.62
1.70±0.06
46.00±3.30
模型组
12
11.29±1.61△△
, http://www.100md.com
10.11±1.57△△
8.75±1.34△△
7.77±1.08△△
6.53±0.78△
1.84±0.08△△
49.25±3.36△
虫(低)12
, http://www.100md.com
10.05±1.20*
9.11±1.55
8.24±1.27
7.51±1.00
6.11±0.79
1.70±0.09**
47.10±3.96
虫(高)12
10.22±1.16*
, 百拇医药
9.58±1.20
7.53±1.30*
6.75±0.89*
6.44±1.17
1.70±0.08**
46.02±2.26*
2.4 红细胞免疫功能变化 参照郭峰方法〔2〕测定红细胞C3b受体花环率(RCR1R)、红细胞免疫复合物花环率(RICR)、红细胞免疫粘附促进率(RFER)、红细胞免疫粘附抑制率(RFIR)。
由于大鼠红细胞CR1数量较少，1个红细胞结上1个或以上酵母菌即为1朵花环。结果见表3。表3
虫对模型鼠红细胞免疫功能影响(%，±s) 组 别, http://www.100md.com
n
RCR1R
RICR
RFER
RFIR
对照组
12
17.00±1.91
6.43±2.15
92.08±17.88
37.07±9.46
模型组
, 百拇医药
12
14.00±2.83△
10.43±4.16△
61.99±24.64△
45.99±6.28△
虫(低)12
16.86±2.55*
7.29±1.60*
, 百拇医药
81.22±13.22*
42.08±0.13
虫(高)12
16.09±2.43*
8.71±2.75
84.36±14.39*
39.21±7.03*
2.5 模型组与
虫(高)组RCR1R与血液流变性有关指标直线相关分析 结果见表4。 表4 模型、虫(高)组血液流变性有关指标与RCR1R的关系 项 目, http://www.100md.com
相关系数
P值
全血比粘度
-0.5063
<0.01
血浆比粘度
-0.3966
<0.05
红细胞压积
-0.3654
<0.05
4 讨论
4.1 模拟阴虚火旺复制慢性血瘀模型 清代王清任曾曰：“血受热煎熬成块”，据此模拟阴虚火旺状态以复制血瘀模型。该模型原设计认为皮质激素体内增多与阴虚有关，儿茶酚胺增多与火旺有关，故两者相加复制阴虚火旺模型。我们参照了马治中等〔1〕的方法，但用氢化考的松代替氟氢考的松造成大鼠阴虚状态。从大鼠用药前的体重看是有明显差异的，结合全血比粘度、血浆比粘度和红细胞压积较对照组明显增高，说明模型复制成功。造模大鼠肾上腺重量与对照组比无统计学差异，说明较小剂量肾上腺素的使用，肾上腺皮质未受反馈抑制。
, 百拇医药
4.2
虫对血液流变性指标的影响虫，咸、寒，有小毒，临床上具有活血化瘀、消症破坚、疗伤定痛等作用，是活血化瘀最常用药之一。本实验也证明了虫确能有效地降低瘀血大鼠的全血比粘度、血浆比粘度和红细胞压积，这可能由于虫化学成分里含有一种丝氨基蛋白酶，它具有纤维酶原激活作用，且具有尿激酶型纤溶酶原激活物的特点〔3〕。实验用药的两个剂量组之间虽无明显差异，但对高切速下的全血比粘度，高剂量组有效，而低剂量组无效，可能说明前者的药效更强些，但有待进步验证。, 百拇医药
4.3
虫对红细胞免疫粘附功能的影响有关研究表明，红细胞具有识别、粘附、浓缩、杀伤抗原、清除循环免疫复合物(CIC)的能力，且参与机体免疫调控，并有自我调控系统。红细胞的这些免疫功能主要以其表面具有的C3b受体(即Ⅰ型补体受体CR1)为基础实现的。实验结果表明，瘀血模型鼠的RCR1R减少，RICR增多，这可能由于瘀血状态下体内凝血酶、纤维蛋白酶增加，而红细胞CR1是一种跨膜糖蛋白，对此类酶特别敏感，易受破坏〔4〕，所以CR1活性减弱；再者，瘀血时血液循环和微循环障碍，体内CIC增多，红细胞粘附IC过多不易解脱清除，故RICR增多，如此也使红细胞CR1空位减少，活性下降，而RICR的增多是否会使红细胞表面的负电荷减少，从而红细胞聚集性增强，瘀血加重，形成恶性循环，有待进一步证实。实验还显示，瘀血模型鼠RFER活性减弱，RFIR活性增强，说明其红细胞免疫功能低下还与机体的免疫系统自我调控功能紊乱有关。虫因其活血化瘀，改善凝血状态，促进血液循环，提高机体的自我调控功能，故可提高RCR1R和RFER，降低RICR和RFIR。当然虫因提高红细胞免疫功能，改善红细胞表面电荷状态，从而改善瘀血状况，这也是极有可能的。, 百拇医药
从瘀血模型组与
虫(高)组的RCR1R与全血比粘度、血浆比粘度、红细胞压积的相关性分析来看，血液流变性有关指标与RCR1R呈显著负相关，可见虫具有降低血粘度，提高RCR1R之功效。本研究结果一方面为活血化瘀药
虫促进红细胞免疫功能的药理作用提供了实验依据；另一方面提示，提高机体红细胞免疫功能可能是治疗慢性血瘀症的另一有效途径，值得深入研究。, 百拇医药
基金项目：安徽省自然科学基金资助项目(95-医-12)
作者简介：袁静(1958-)，女，副研究员，医学硕士
参考文献：
〔1〕马治中，杨明，和岚，等.血瘀病理模型探索(三)〔J〕.北京医科大学学报，1991，23(4)：287.
〔2〕郭峰，骆永珍.红细胞学新探〔M〕.南京：南京大学出版社，1993.93.
〔3〕陈可冀，欧兴长.活血化瘀药化学药理与临床〔M〕.济南：山东科学技术出版社，1995.285.
〔4〕朱卫华，李伯埙.红细胞免疫功能CR1缺陷及其治疗〔J〕.中国实验临床免疫学杂志，1998，10(4)：63.
1999-10-25收稿, 百拇医药