沈彤《释骨》研究
作者:钱超尘
单位:
关键词:
中国中医基础医学杂志000107 摘要:目的:研究人参皂甙与川芎嗪合用对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用家兔开胸心肌缺血再灌注(I-R)模型。结果:发现人参皂甙和川芎嗪合用(GS+TMP),不仅能够显著抑制I-R期间血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氧(NO)水平的升高(P<0.001)和左室舒缩功能的降低(P<0.01~0.001),还能显著降低RA的危险性(P<0.05)和心肌梗塞的范围(P<0.001),且作用明显强于GS、TMP和Ver。结论:提示两者合用对心肌I-R损伤有着更为显著的保护作用,其作用机制与其抑制心肌I-R期间TNF-α和NO的大量释放有着一定联系。
中图分类号:R285.5 文献标识码:B
, 百拇医药
文章编号:1006-3250(2000)01-0070-03
随着溶栓、经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)等新技术的广泛开展,心肌I-R损伤日益成为科研的热点。近年来发现其与TNF-α、NO之间存在着密切联系。本课题着重考察GS和TMP合用对心肌I-R损伤的保护作用,及其对I-R期间TNF-α和NO释放的影响。
材料与方法
1 实验动物与分组
选取健康雄性成年家兔35只,体重为2.5kg±0.5kg。实验前随机分为5组:(A)模型对照组,简称Model(0.9%NS 5ml iv)组,n=7;(B)维拉帕米〈德国基诺药厂巴斯夫中国有限公司产品,5mg/2ml,批号970115〉治疗对照组,简称Ver.(0.25mg/kgiv)组,n=7;(C)川芎嗪(无锡市第七制药厂产品,40mg/2ml,批号 970418)治疗对照组,简称TMP(40mg/kg iv)组,n=7;(D)人参皂甙(安徽中医学院第一附属医院制剂室提供,2g/10ml,批号97040)治疗对照组,简称GS (0.2g/kg iv)组,n=7;(E)人参皂苷与川芎嗪合用治疗组,简称GS+TMP(0.2g/kg和40mg/kg依次iv)组,n=7。
, 百拇医药
2 实验步骤
家兔称重后依次经耳缘静脉注射20%乌拉坦溶液(1g/kg)、肝素钠溶液(500U/kg)进行麻醉与抗凝,然后固定于手术台上,取仰卧位,接上ECG电极(标准肢体Ⅱ导联),与RM-86型八道生理记录仪相通。
6F 心导管(注入肝素溶液)插入左侧股静脉供药物注射使用;7F 心导管(注入肝素溶液)经右侧颈静脉插至冠装静脉窦处,供取血用;另一6F心导管(注入肝素溶液,经三路开关接压力换能器,再通过载波放大器与RM-86型八道生理记录仪相通)沿左侧颈总动脉插入左心室,监测与记录左心室内压(LVP)波形和左室内压变化速率(±dp/dt)波形。心肌I-R模型制作:剪毛,沿胸骨左缘第三四肋间开胸,不弄破胸膜,维持自主呼吸,剪开心包,制作心包吊床,分离左冠状动脉前降支(LAD),缺血前15min时静脉注射实验药物,于LAD中上1/3处(第一分支后),穿线结扎(ST段升高大于2mv标志结扎成功),15min后剪开结扎线(ST段骤降标志再灌注成功),再灌注60min。
, 百拇医药
3 实验指标的记录与测取
通过RM-86型八道生理记录仪记录各组发生RA的时间、类型和各组缺血前、缺血15min、再灌注30min和60min时LVP曲线及其±dp/dt曲线,测出LVSP、LVEDP和dp/dtmax数值;并分别在以上各时间点抽血2~3ml检测血清TNF-α、NO值(分别由安徽中医学院经络研究所同位素室及生化室测定)。实验完毕后,立即取下心脏,用生理盐水冲洗干净,在心脏结扎线以下,平行于冠状沟沿心脏长轴均匀地将心室肌横断切成5片,然后置于1%红四氮唑(TTC)磷酸盐缓冲液(0.2mol/L,PH7.4)中浸染,37℃染色15min,坏死心肌不着色,存活心肌显砖红色。用滤纸吸干心肌表面的水分,称取左室心肌与梗塞心肌湿重,以梗塞心肌湿重占左室心肌湿重的百分比来表示梗塞范围。
4 室性心律失常的分类标准
室性心律失常按Lambeth标准分为室性纤维颤动(VF)、室性心动过速(VT)和仅有室性早搏(VPB)三类,其中VPB又根据Lown和Wolf标准分Ⅰ级(偶发,<1bpm或30bph)、Ⅱ级(频发,>6bpm或30bph)和Ⅲ级(多源)。按危险性由低到高分为VPB Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、VT、VF 5个级别,如果同时出现两个及以上级别的室性心律失常,则将之归入级别最高的那一类。
, 百拇医药
5 统计学方法
所有数据均以均值±标准差(x±s)表示,计量资料采用t检验,计数资料采用x检验,等级资料采用Ridit分析及U检验。
结果
35只家兔中,有3只在再灌注过程中因VF而死亡,其中Model组2只,TMP组1只。
1 各组家兔在缺血前、缺血15min、再灌注30min及60min时由冠状静脉窦取血检测TNF-α、NO水平,结果(见表1)显示,各组缺血前TNF-α、NO值无明显差异(P<0.05),除NO在缺血15min时均有所下降外,其他时间点两者均持续升高,以再灌注60min时最为显著(P<0.001),而各组之中又以Model组增高为甚,同Model组相比,GS+TMP组差异性最大(P<0.001)。
表1 各组家兔缺血前、缺血15min、再灌注30min和
, http://www.100md.com
60min时血清TNF-α、NO变化情况 Group
n
Preischaemic
Ischaemic
15min
Reperfusion
30min
60min
TNF-α Model
5
2.16±0.38
10.45±2.14
, http://www.100md.com
26.67±3.68
34.61±4.95△
(ng/ml)Ver.
7
2.53±0.41
8.54±2.43
22.18±4.15
28.90±4.62△
TMP
6
2.47±0.36
, 百拇医药 8.10±2.71
19.51±3.26
26.36±4.15△*
GS
7
1.98±0.37
6.43±2.39
16.76±3.47
23.17±4.52△**
GS+TMP
7
2.24±0.40
, http://www.100md.com
5.02±2.67
14.36±3.04
19.20±4.01△***
NO Model
5
2.03±0.31
0.94±0.21
12.43±2.16
14.30±2.21△
(umol/L)Ver.
7
, 百拇医药
2.01±0.35
1.37±0.27
9.13±1.95
11.64±1.40△*
TMP
6
1.97±0.29
1.30±0.24
8.57±2.01
11.05±1.97△*
GS
, http://www.100md.com 7
2.24±0.33
1.42±0.28
8.23±1.86
9.76±1.58△**
GS±TMP
7
1.99±0.36
1.50±0.30
6.27±1.90
7.50±1.64△***
, 百拇医药 注:Values are (x±s):*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;vs Model group:△P<0.001;vs preischaemia。 2 再灌注后,所有家兔均在5min内出现各种室性RA(见表2)
通过Ridit分析及U检验发现,同Model组相比,只有GS+TMP组和Ver.组能够显著降低RA的危险程度,而GS组和TMP组无显著性差别。
3 心肌缺血前各组的左室舒缩功能参数值无明显差异(P>0.05),缺血15min时均有明显减退,再灌注30min时这一变化尤为显著,随后各组(除Model组外)舒缩功能虽有所恢复,但同缺血前相比,仍有显著差别(P<0.001)。同Model组相比,再灌注后各组收缩功能的减退程度均较之为小,但具有统计学意义的只有GS组(P<0.05)和GS+TMP组(P<0.01);各组舒张功能的减退程度亦较之为小,且都有统计学意义,按显著性由大到小的顺序依次是Ver.组、GS+TMP组(P<0.001)>TMP组(P<0.01)>GS组(P<0.05),详见表3。
, http://www.100md.com
4 通过1%TTC染色后发现各组家兔心脏的左室前壁均出现心肌梗塞。心肌梗塞范围(见表4)以Model组最大,与之相比,GS+TMP组心肌梗塞范围最小(P<0.001),其次是GS组、Ver.组和TMP组(P<0.05)。
表2 各组家兔在再灌注期间发生RA的情况 GROUP
n
Ⅰ
VPB
Ⅱ
Ⅲ
VT
VF
-R
, 百拇医药
U
Model
7
0
1
1
3
2
0.7143
Ver.
7
1
2
3
, 百拇医药
1
0
0.3980
2.050*
TMP
7
0
2
2
2
1
0.5694
0.939
, http://www.100md.com
GS
7
0
3
2
2
0
0.4633
1.624
GS+TMP
7
1
3
2
, 百拇医药
1
0
0.3551
2.328*
注:Ridit:*P<0.05 vs Model Group。表3 各组家兔在缺血前、缺血15min、再灌注30min和60min时
LVSP、±dp/dt max 和LVEDP变化情况 GROUP
n
PREISCHAEMIC
ISCHAEMTC
REPERFUSION
, http://www.100md.com
15min
30min
60min
LVSP(KPa)Model
5
15.81± 2.20
13.42± 1.41
11.13± 2.73
10.12± 1.90△
Ver.
7
15.90± 2.31
, 百拇医药
12.14± 2.34
10.92± 2.55
11.00± 2.29△
TMP
6
15.68± 1.98
13.02± 2.28
11.20± 2.03
11.66± 2.46△
GS
7
, 百拇医药 15.60± 2.16
14.23± 1.94
12.79± 1.83
13.01± 2.06△*
GS+TMP
7
15.41± 1.79
14.06± 1.76
12.87± 1.69
13.44± 1.57△**
+dp/dtmax Model
, 百拇医药
5
469.67±47.20
408.34±53.04
299.90±40.70
280.47±45.36△
(KPa/s)Ver.
7
458.16±55.23
353.67±35.47
301.38±37.59
317.40±44.67△
, http://www.100md.com
TMP
6
471.45±44.35
396.98±49.07
330.29±35.90
339.02±48.05△
GS
7
469.12±41.75
417.27±48.76
351.04±50.71
360.00±55.02△*
, 百拇医药
GS+TMP
7
463.13±37.56
425.02±44.41
368.10±46.00
379.90±49.83△**
LVEDP (KPa)Model
5
0.56± 0.14
1.46± 0.31
2.37± 0.33
, http://www.100md.com
2.66± 0.29△
Ver.
7
0.57± 0.19
0.96± 0.22
1.78± 0.26
1.69± 0.24△***
TMP
6
0.64± 0.18
1.15± 0.21
, 百拇医药 1.96± 0.30
1.84± 0.31△**
GS
7
0.59± 0.13
1.22± 0.27
2.14± 0.31
2.03± 0.39△*
GS+TMP
7
0.62± 0.15
1.09± 0.23
, 百拇医药
1.87± 0.24
1.76± 0.23△***
-dp/dt max Model
5
405.08±45.73
318.14±46.92
263.97±36.57
247.68±43.47△
(KPa/s) Ver.
7
402.68±39.47
, 百拇医药
378.07±44.20
337.26±41.27
351.29±35.67△***
TMP
6
400.19±46.67
358.89±41.40
317.67±38.50
329.76±37.36△**
GS
7
, 百拇医药
409.52±40.01
343.16±46.72
311.94±38.79
320.39±47.58△*
GS+TMP
7
399.96±37.58
352.19±42.03
319.26±36.59
346.84±32.45△***
注:Values are (x±s):*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,vs Model group;△P<0.001 vs preischaemia。讨论
, 百拇医药
心肌I-R损伤除与“钙超载”、“氧自由基”和“无复流现象”等因素密切相关外,近年来还发现,TNF-α和NO与心肌I-R损伤之间有着密切联系。
1 TNF-α(1)能减弱心肌的收缩力;(2)能刺激血管内皮细胞和中性粒细胞(PMN)表达表面粘附因子,促进PMN聚集,从而不仅增高了RA的发生率,而且还有助于PMN释放活性氧和蛋白水解酶等物质,加重RI程度;(3)尚能刺激诱生型NO合成酶(inducible NOS,iNOS)合成释放大量的NO,后者又可与超氧负离子(O)迅速反应生所过氧亚硝酸根(ONOO),并进一步产生氧化能力更强的羟自由基(OH),致使组织损伤加重。
2 目前研究证实,I-R期间cNOS活性降低,iNOS活性却显著增高,大量释放的NO是由iNOS合成的。后者不仅能通过上述自由基途径发挥破坏效应,而且能够减弱心肌舒缩功能,其机制可能是:(1)过量产生的NO使组织cGMP产生增加,激活cGMP依赖性蛋白激酶,减少细胞钙内流,抑制心肌收缩功能;(2)也可通过非cGMP依赖性途径,激活胞浆内ADP-核糖基转移酶,催化ADP-核糖基转移到3-磷酸甘油醛脱氢酶(GADPH),抑制糖酵解供能。
, 百拇医药
急性心肌梗塞(AMI)隶属于中医胸痹心痛范畴,其病机主要是“气虚血瘀”,而临床上心肌I-R常发生于AMI期,根据中医辨证施治原则,中药防治心肌I-R损伤仍宜使用益气活血法。因此,我们从众多临床制剂中将GS与TMP注射液筛选出来并加以组合运用,来考察两者合用对家兔心肌I-R损伤的保护作用。实验结果表明,GS和TMP合用能显著降低RA的危险程度,I-R期间左室舒缩功能的减退(心肌顿抑主要表现为左室舒缩功能的低下)及再灌注后心肌梗塞的范围,还能显著抑制I-R期间TNF-α和NO的大量释放,且作用比单用及Ver.更显著。依此我们得出以下结论:(1)GS+TMP合用较单用对心肌I-R损伤有着更为显著的保护作用。这一事实说明,依据中医辨证施治原则选取药物,不仅有助于挖掘、筛选中药及其提取物,而且还显著提高了临床疗效。(2)GS+TMP对I-R期间TNF-α和NO大量释放的抑制程度与其对心肌I-R损伤的保护作用之间存在着相平行的关系,表明它们除了能通过阻止心肌细胞内钙超载的出现,降低氧自由基的产生及改善心肌微循环等途径以外,还能通过显著抑制TNF-α和NO的大量释放,来发挥其对心肌I-R损伤的保护作用。至于GS+TMP是直接抑制iNOS合成NO,还是通过抑制TNF-α来减少iNOS合成NO,尚有待于进一步研究。
, 百拇医药
表4 各组家兔再灌注后心肌梗塞范围(x±s) Group
n
IW(mg)
LVM(mg)
I/L(%)
x2
Model
5
249.09±34.78
1497.85±72.50
16.63±2.52
Ver.
, 百拇医药
7
207.26±28.91
1506.27±67.28
13.75±2.09
4.16
TMP
6
215.02±30.10
1535.90±78.4
14.00±2.13
4.05
, http://www.100md.com GS
7
196.45±29.47
1489.12±65.1
13.19±1.80
6.18
GS+TMP
7
180.97±32.30
1524.56±60.11
11.86±1.96
12.92
, http://www.100md.com
注:Values are (x±s): P<0.05 P<0.001 ,vs Model group。
作者简介:韩明向(1940-),男,安徽中医学院第一附属医院教授,主任医师,从事中西药防治老年病研究。
参考文献
[1]浦奎,等.心肌缺血-再灌注时体内细胞因子活性动态变化的实验研究.中华心血管病杂志,1997,25(4):305-307.
[2]朱洪生,等.实验性缺血再灌注心肌顿抑与一氧化氮的关系及东莨菪碱对其影响.中华心血管病杂志,1998,26(1):65-67.
[3]Walder MJA,et al. The lambeth convention:guideline for the study of arrhythmias in ischemia,reperfusion,and infarction.Cardiovas Res.1988,22:447.
, 百拇医药
[4]Lown B,Wolf M.Approaches to sudden death from coronary heart disease.Circulation,1971,44:130.
[5]Finkel MS,et al.Negative inotropic effects of cytokines on the heart mediated by nitric oxide.Science,1992,257:387-389.
[6]Kuklelka G, et al.Regulation of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) in ischemic and reperfused canine myocardium.J Clin Invest,1993,92:1504.
[7]S.Dhein,et al.The contribution of neutrophils to reperfusion arrhythmia and a possible role for antiadhesion pharmacological substances.Cardiovas Res,1995,30:881-888.
, 百拇医药
[8]David Simper,et al.Indirect evidence for stimulation of nitric oxide release by tumour necrosis factor-α in human vein in vivo.Cardiovas Res.1995,30:960-964.
[9]Beckman JS,et al.Apparent hydroxyl radical production by peroxynitrine:implications for endothelial injury from nitric oxider and superoxide,Proc Natl Acad Sci USA,1990,87:1620.
[10]Ma XL.et al.Diminished base nitric oxide release after myocardial ischemia and reperfusion promotes neutrophil adherence to coronary endothelium.Cir Res,1993,72:403.
[11]魏刘华,等.东茛菪碱对缺氧再灌注动脉血管内皮细胞的保护作用.中华胸心血管外科杂志,1995,11(5):306-308.
[12]赵根尚,等.超氧化物歧化酶及川芎嗪对家兔缺血再灌注损伤的影响.中西医结合杂志,1988,8(5):284.
[13]韩畅,等.心肌缺血和再灌注时蛋白激酶C活性变化及人参二醇皂甙的影响.中国病理生理杂志,1993,9(5):565-567.
收稿日期:1999-06-23
修回日期:1999-08-26, 百拇医药
单位:
关键词:
中国中医基础医学杂志000107 摘要:目的:研究人参皂甙与川芎嗪合用对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法:采用家兔开胸心肌缺血再灌注(I-R)模型。结果:发现人参皂甙和川芎嗪合用(GS+TMP),不仅能够显著抑制I-R期间血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氧(NO)水平的升高(P<0.001)和左室舒缩功能的降低(P<0.01~0.001),还能显著降低RA的危险性(P<0.05)和心肌梗塞的范围(P<0.001),且作用明显强于GS、TMP和Ver。结论:提示两者合用对心肌I-R损伤有着更为显著的保护作用,其作用机制与其抑制心肌I-R期间TNF-α和NO的大量释放有着一定联系。
中图分类号:R285.5 文献标识码:B
, 百拇医药
文章编号:1006-3250(2000)01-0070-03
随着溶栓、经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)等新技术的广泛开展,心肌I-R损伤日益成为科研的热点。近年来发现其与TNF-α、NO之间存在着密切联系。本课题着重考察GS和TMP合用对心肌I-R损伤的保护作用,及其对I-R期间TNF-α和NO释放的影响。
材料与方法
1 实验动物与分组
选取健康雄性成年家兔35只,体重为2.5kg±0.5kg。实验前随机分为5组:(A)模型对照组,简称Model(0.9%NS 5ml iv)组,n=7;(B)维拉帕米〈德国基诺药厂巴斯夫中国有限公司产品,5mg/2ml,批号970115〉治疗对照组,简称Ver.(0.25mg/kgiv)组,n=7;(C)川芎嗪(无锡市第七制药厂产品,40mg/2ml,批号 970418)治疗对照组,简称TMP(40mg/kg iv)组,n=7;(D)人参皂甙(安徽中医学院第一附属医院制剂室提供,2g/10ml,批号97040)治疗对照组,简称GS (0.2g/kg iv)组,n=7;(E)人参皂苷与川芎嗪合用治疗组,简称GS+TMP(0.2g/kg和40mg/kg依次iv)组,n=7。
, 百拇医药
2 实验步骤
家兔称重后依次经耳缘静脉注射20%乌拉坦溶液(1g/kg)、肝素钠溶液(500U/kg)进行麻醉与抗凝,然后固定于手术台上,取仰卧位,接上ECG电极(标准肢体Ⅱ导联),与RM-86型八道生理记录仪相通。
6F 心导管(注入肝素溶液)插入左侧股静脉供药物注射使用;7F 心导管(注入肝素溶液)经右侧颈静脉插至冠装静脉窦处,供取血用;另一6F心导管(注入肝素溶液,经三路开关接压力换能器,再通过载波放大器与RM-86型八道生理记录仪相通)沿左侧颈总动脉插入左心室,监测与记录左心室内压(LVP)波形和左室内压变化速率(±dp/dt)波形。心肌I-R模型制作:剪毛,沿胸骨左缘第三四肋间开胸,不弄破胸膜,维持自主呼吸,剪开心包,制作心包吊床,分离左冠状动脉前降支(LAD),缺血前15min时静脉注射实验药物,于LAD中上1/3处(第一分支后),穿线结扎(ST段升高大于2mv标志结扎成功),15min后剪开结扎线(ST段骤降标志再灌注成功),再灌注60min。
, 百拇医药
3 实验指标的记录与测取
通过RM-86型八道生理记录仪记录各组发生RA的时间、类型和各组缺血前、缺血15min、再灌注30min和60min时LVP曲线及其±dp/dt曲线,测出LVSP、LVEDP和dp/dtmax数值;并分别在以上各时间点抽血2~3ml检测血清TNF-α、NO值(分别由安徽中医学院经络研究所同位素室及生化室测定)。实验完毕后,立即取下心脏,用生理盐水冲洗干净,在心脏结扎线以下,平行于冠状沟沿心脏长轴均匀地将心室肌横断切成5片,然后置于1%红四氮唑(TTC)磷酸盐缓冲液(0.2mol/L,PH7.4)中浸染,37℃染色15min,坏死心肌不着色,存活心肌显砖红色。用滤纸吸干心肌表面的水分,称取左室心肌与梗塞心肌湿重,以梗塞心肌湿重占左室心肌湿重的百分比来表示梗塞范围。
4 室性心律失常的分类标准
室性心律失常按Lambeth标准分为室性纤维颤动(VF)、室性心动过速(VT)和仅有室性早搏(VPB)三类,其中VPB又根据Lown和Wolf标准分Ⅰ级(偶发,<1bpm或30bph)、Ⅱ级(频发,>6bpm或30bph)和Ⅲ级(多源)。按危险性由低到高分为VPB Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、VT、VF 5个级别,如果同时出现两个及以上级别的室性心律失常,则将之归入级别最高的那一类。
, 百拇医药
5 统计学方法
所有数据均以均值±标准差(x±s)表示,计量资料采用t检验,计数资料采用x检验,等级资料采用Ridit分析及U检验。
结果
35只家兔中,有3只在再灌注过程中因VF而死亡,其中Model组2只,TMP组1只。
1 各组家兔在缺血前、缺血15min、再灌注30min及60min时由冠状静脉窦取血检测TNF-α、NO水平,结果(见表1)显示,各组缺血前TNF-α、NO值无明显差异(P<0.05),除NO在缺血15min时均有所下降外,其他时间点两者均持续升高,以再灌注60min时最为显著(P<0.001),而各组之中又以Model组增高为甚,同Model组相比,GS+TMP组差异性最大(P<0.001)。
表1 各组家兔缺血前、缺血15min、再灌注30min和
, http://www.100md.com
60min时血清TNF-α、NO变化情况 Group
n
Preischaemic
Ischaemic
15min
Reperfusion
30min
60min
TNF-α Model
5
2.16±0.38
10.45±2.14
, http://www.100md.com
26.67±3.68
34.61±4.95△
(ng/ml)Ver.
7
2.53±0.41
8.54±2.43
22.18±4.15
28.90±4.62△
TMP
6
2.47±0.36
, 百拇医药 8.10±2.71
19.51±3.26
26.36±4.15△*
GS
7
1.98±0.37
6.43±2.39
16.76±3.47
23.17±4.52△**
GS+TMP
7
2.24±0.40
, http://www.100md.com
5.02±2.67
14.36±3.04
19.20±4.01△***
NO Model
5
2.03±0.31
0.94±0.21
12.43±2.16
14.30±2.21△
(umol/L)Ver.
7
, 百拇医药
2.01±0.35
1.37±0.27
9.13±1.95
11.64±1.40△*
TMP
6
1.97±0.29
1.30±0.24
8.57±2.01
11.05±1.97△*
GS
, http://www.100md.com 7
2.24±0.33
1.42±0.28
8.23±1.86
9.76±1.58△**
GS±TMP
7
1.99±0.36
1.50±0.30
6.27±1.90
7.50±1.64△***
, 百拇医药 注:Values are (x±s):*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001;vs Model group:△P<0.001;vs preischaemia。 2 再灌注后,所有家兔均在5min内出现各种室性RA(见表2)
通过Ridit分析及U检验发现,同Model组相比,只有GS+TMP组和Ver.组能够显著降低RA的危险程度,而GS组和TMP组无显著性差别。
3 心肌缺血前各组的左室舒缩功能参数值无明显差异(P>0.05),缺血15min时均有明显减退,再灌注30min时这一变化尤为显著,随后各组(除Model组外)舒缩功能虽有所恢复,但同缺血前相比,仍有显著差别(P<0.001)。同Model组相比,再灌注后各组收缩功能的减退程度均较之为小,但具有统计学意义的只有GS组(P<0.05)和GS+TMP组(P<0.01);各组舒张功能的减退程度亦较之为小,且都有统计学意义,按显著性由大到小的顺序依次是Ver.组、GS+TMP组(P<0.001)>TMP组(P<0.01)>GS组(P<0.05),详见表3。
, http://www.100md.com
4 通过1%TTC染色后发现各组家兔心脏的左室前壁均出现心肌梗塞。心肌梗塞范围(见表4)以Model组最大,与之相比,GS+TMP组心肌梗塞范围最小(P<0.001),其次是GS组、Ver.组和TMP组(P<0.05)。
表2 各组家兔在再灌注期间发生RA的情况 GROUP
n
Ⅰ
VPB
Ⅱ
Ⅲ
VT
VF
-R
, 百拇医药
U
Model
7
0
1
1
3
2
0.7143
Ver.
7
1
2
3
, 百拇医药
1
0
0.3980
2.050*
TMP
7
0
2
2
2
1
0.5694
0.939
, http://www.100md.com
GS
7
0
3
2
2
0
0.4633
1.624
GS+TMP
7
1
3
2
, 百拇医药
1
0
0.3551
2.328*
注:Ridit:*P<0.05 vs Model Group。表3 各组家兔在缺血前、缺血15min、再灌注30min和60min时
LVSP、±dp/dt max 和LVEDP变化情况 GROUP
n
PREISCHAEMIC
ISCHAEMTC
REPERFUSION
, http://www.100md.com
15min
30min
60min
LVSP(KPa)Model
5
15.81± 2.20
13.42± 1.41
11.13± 2.73
10.12± 1.90△
Ver.
7
15.90± 2.31
, 百拇医药
12.14± 2.34
10.92± 2.55
11.00± 2.29△
TMP
6
15.68± 1.98
13.02± 2.28
11.20± 2.03
11.66± 2.46△
GS
7
, 百拇医药 15.60± 2.16
14.23± 1.94
12.79± 1.83
13.01± 2.06△*
GS+TMP
7
15.41± 1.79
14.06± 1.76
12.87± 1.69
13.44± 1.57△**
+dp/dtmax Model
, 百拇医药
5
469.67±47.20
408.34±53.04
299.90±40.70
280.47±45.36△
(KPa/s)Ver.
7
458.16±55.23
353.67±35.47
301.38±37.59
317.40±44.67△
, http://www.100md.com
TMP
6
471.45±44.35
396.98±49.07
330.29±35.90
339.02±48.05△
GS
7
469.12±41.75
417.27±48.76
351.04±50.71
360.00±55.02△*
, 百拇医药
GS+TMP
7
463.13±37.56
425.02±44.41
368.10±46.00
379.90±49.83△**
LVEDP (KPa)Model
5
0.56± 0.14
1.46± 0.31
2.37± 0.33
, http://www.100md.com
2.66± 0.29△
Ver.
7
0.57± 0.19
0.96± 0.22
1.78± 0.26
1.69± 0.24△***
TMP
6
0.64± 0.18
1.15± 0.21
, 百拇医药 1.96± 0.30
1.84± 0.31△**
GS
7
0.59± 0.13
1.22± 0.27
2.14± 0.31
2.03± 0.39△*
GS+TMP
7
0.62± 0.15
1.09± 0.23
, 百拇医药
1.87± 0.24
1.76± 0.23△***
-dp/dt max Model
5
405.08±45.73
318.14±46.92
263.97±36.57
247.68±43.47△
(KPa/s) Ver.
7
402.68±39.47
, 百拇医药
378.07±44.20
337.26±41.27
351.29±35.67△***
TMP
6
400.19±46.67
358.89±41.40
317.67±38.50
329.76±37.36△**
GS
7
, 百拇医药
409.52±40.01
343.16±46.72
311.94±38.79
320.39±47.58△*
GS+TMP
7
399.96±37.58
352.19±42.03
319.26±36.59
346.84±32.45△***
注:Values are (x±s):*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,vs Model group;△P<0.001 vs preischaemia。讨论
, 百拇医药
心肌I-R损伤除与“钙超载”、“氧自由基”和“无复流现象”等因素密切相关外,近年来还发现,TNF-α和NO与心肌I-R损伤之间有着密切联系。
1 TNF-α(1)能减弱心肌的收缩力;(2)能刺激血管内皮细胞和中性粒细胞(PMN)表达表面粘附因子,促进PMN聚集,从而不仅增高了RA的发生率,而且还有助于PMN释放活性氧和蛋白水解酶等物质,加重RI程度;(3)尚能刺激诱生型NO合成酶(inducible NOS,iNOS)合成释放大量的NO,后者又可与超氧负离子(O)迅速反应生所过氧亚硝酸根(ONOO),并进一步产生氧化能力更强的羟自由基(OH),致使组织损伤加重。
2 目前研究证实,I-R期间cNOS活性降低,iNOS活性却显著增高,大量释放的NO是由iNOS合成的。后者不仅能通过上述自由基途径发挥破坏效应,而且能够减弱心肌舒缩功能,其机制可能是:(1)过量产生的NO使组织cGMP产生增加,激活cGMP依赖性蛋白激酶,减少细胞钙内流,抑制心肌收缩功能;(2)也可通过非cGMP依赖性途径,激活胞浆内ADP-核糖基转移酶,催化ADP-核糖基转移到3-磷酸甘油醛脱氢酶(GADPH),抑制糖酵解供能。
, 百拇医药
急性心肌梗塞(AMI)隶属于中医胸痹心痛范畴,其病机主要是“气虚血瘀”,而临床上心肌I-R常发生于AMI期,根据中医辨证施治原则,中药防治心肌I-R损伤仍宜使用益气活血法。因此,我们从众多临床制剂中将GS与TMP注射液筛选出来并加以组合运用,来考察两者合用对家兔心肌I-R损伤的保护作用。实验结果表明,GS和TMP合用能显著降低RA的危险程度,I-R期间左室舒缩功能的减退(心肌顿抑主要表现为左室舒缩功能的低下)及再灌注后心肌梗塞的范围,还能显著抑制I-R期间TNF-α和NO的大量释放,且作用比单用及Ver.更显著。依此我们得出以下结论:(1)GS+TMP合用较单用对心肌I-R损伤有着更为显著的保护作用。这一事实说明,依据中医辨证施治原则选取药物,不仅有助于挖掘、筛选中药及其提取物,而且还显著提高了临床疗效。(2)GS+TMP对I-R期间TNF-α和NO大量释放的抑制程度与其对心肌I-R损伤的保护作用之间存在着相平行的关系,表明它们除了能通过阻止心肌细胞内钙超载的出现,降低氧自由基的产生及改善心肌微循环等途径以外,还能通过显著抑制TNF-α和NO的大量释放,来发挥其对心肌I-R损伤的保护作用。至于GS+TMP是直接抑制iNOS合成NO,还是通过抑制TNF-α来减少iNOS合成NO,尚有待于进一步研究。
, 百拇医药
表4 各组家兔再灌注后心肌梗塞范围(x±s) Group
n
IW(mg)
LVM(mg)
I/L(%)
x2
Model
5
249.09±34.78
1497.85±72.50
16.63±2.52
Ver.
, 百拇医药
7
207.26±28.91
1506.27±67.28
13.75±2.09
4.16
TMP
6
215.02±30.10
1535.90±78.4
14.00±2.13
4.05
, http://www.100md.com GS
7
196.45±29.47
1489.12±65.1
13.19±1.80
6.18
GS+TMP
7
180.97±32.30
1524.56±60.11
11.86±1.96
12.92
, http://www.100md.com
注:Values are (x±s): P<0.05 P<0.001 ,vs Model group。
作者简介:韩明向(1940-),男,安徽中医学院第一附属医院教授,主任医师,从事中西药防治老年病研究。
参考文献
[1]浦奎,等.心肌缺血-再灌注时体内细胞因子活性动态变化的实验研究.中华心血管病杂志,1997,25(4):305-307.
[2]朱洪生,等.实验性缺血再灌注心肌顿抑与一氧化氮的关系及东莨菪碱对其影响.中华心血管病杂志,1998,26(1):65-67.
[3]Walder MJA,et al. The lambeth convention:guideline for the study of arrhythmias in ischemia,reperfusion,and infarction.Cardiovas Res.1988,22:447.
, 百拇医药
[4]Lown B,Wolf M.Approaches to sudden death from coronary heart disease.Circulation,1971,44:130.
[5]Finkel MS,et al.Negative inotropic effects of cytokines on the heart mediated by nitric oxide.Science,1992,257:387-389.
[6]Kuklelka G, et al.Regulation of intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) in ischemic and reperfused canine myocardium.J Clin Invest,1993,92:1504.
[7]S.Dhein,et al.The contribution of neutrophils to reperfusion arrhythmia and a possible role for antiadhesion pharmacological substances.Cardiovas Res,1995,30:881-888.
, 百拇医药
[8]David Simper,et al.Indirect evidence for stimulation of nitric oxide release by tumour necrosis factor-α in human vein in vivo.Cardiovas Res.1995,30:960-964.
[9]Beckman JS,et al.Apparent hydroxyl radical production by peroxynitrine:implications for endothelial injury from nitric oxider and superoxide,Proc Natl Acad Sci USA,1990,87:1620.
[10]Ma XL.et al.Diminished base nitric oxide release after myocardial ischemia and reperfusion promotes neutrophil adherence to coronary endothelium.Cir Res,1993,72:403.
[11]魏刘华,等.东茛菪碱对缺氧再灌注动脉血管内皮细胞的保护作用.中华胸心血管外科杂志,1995,11(5):306-308.
[12]赵根尚,等.超氧化物歧化酶及川芎嗪对家兔缺血再灌注损伤的影响.中西医结合杂志,1988,8(5):284.
[13]韩畅,等.心肌缺血和再灌注时蛋白激酶C活性变化及人参二醇皂甙的影响.中国病理生理杂志,1993,9(5):565-567.
收稿日期:1999-06-23
修回日期:1999-08-26, 百拇医药