系膜增生性肾炎患儿肾组织中核因子-κB的活化及其意义
作者：张爱华 陈荣华 林娜 黄松明 郭梅 费莉 潘晓勤 蔡毅
单位：张爱华(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 南京，210029)；陈荣华(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 南京，210029)；林娜(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 南京，210029)；黄松明(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 南京，210029)；郭梅(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 南京，210029)；费莉(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 南京，210029)
关键词：系膜增生性肾小球肾炎；核因子-κB；细胞外基质
肾脏病与透析肾移植杂志000118
核因子-κB(NF-κB)是一种与炎症性细胞因子和趋化因子的产生、细胞增生、细胞外基质(ECM)交联和细胞凋亡有关的转录因子，参与多种炎症介质的信号传导过程[1]。本研究采用免疫组化染色及真彩色医学图像分析系统，观察系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)患儿肾组织中NF-κB的活化，为阐明MsPGN的发病机制及防治MsPGN的发生、发展提供实验依据。
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 研究对象 MsPGN患儿22例，男16例，女6例，平均年龄8.5岁，均排除紫癜性肾炎、狼疮性肾炎等继发性肾小球肾炎。所有患儿均经肾穿刺活检，按WHO 1982年制订的肾小球疾病分类标准及分度标准诊断为MsPGN(不包括IgA肾病)，其中轻度MsPGN 6例，中度MsPGN 10例，重度MsPGN 6例。对照组2例，为肾肿瘤手术切除的正常肾组织。
1.2 免疫组织化学染色 采用改良ABC法，免疫组化试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司，按说明书操作。山羊抗人NF-κB p65抗体及兔抗山羊IgG均为SANTA CRUZ产品。
1.3 计算机图像分析 应用真彩色医学图像分析系统由计算机自动单盲法计算每例肾小球染色区域的平均吸光度。阳性小管则以高倍视野下每100个小管中的阳性小管所占的百分数表示。另外常规方法对患儿肾组织病理切片进行PASM染色，并对病理切片上的肾小球进行嗜银结构的扫描定量，计算出其平均积分吸光度，以表示系膜基质扩大的程度。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 实验结果以均数±标准差表示，采用t检验和相关分析进行统计学处理。
2 结 果
2.1 MsPGN患儿与正常对照组肾组织中NF-κB的活性比较 MsPGN患儿肾小球及肾小管中NF-κB表达均较对照组显著增强，见表1。
表1 MsPGN患儿与正常对照组肾组织中NF-κB活性比较 分 组
n
肾小球(A)
肾小管(%)
正常对照组
2
0.17±0.06
, 百拇医药
17.04±7.84
MsPGN组
22
0.33±1.12*
39.95±21.80*
*与正常对照组比较，P<0.01
2.2 MsPGN中系膜细胞增生程度与肾组织中NF-κB活性的相关关系 由表2可见，随系膜细胞增生程度的加重，肾小球及肾小管中NF-κB的表达亦逐渐增强。
表2 MsPGN患儿系膜细胞增生程度与肾组织中
NF-κB活性比较 分 组
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n
肾小球(A)
肾小管(%)
正常对照组
2
0.17±0.06
17.04±7.84
轻度MsPGN组
6
0.23±0.08
30.57±15.23*
中度MsPGN组
, 百拇医药
10
0.34±0.08*△
38.83±22.45*
重度MsPGN组
6
0.42±0.10*△★
50.43±23.14*△
与正常对照组比较，P<0.05，*与正常对照组比较，P<0.01
△与轻度MsPGN比较，P<0.01，★与中度MsPGN比较，P<0.01
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2.3 MsPGN患儿伴新月体形成组与无新月体形成组肾组织中NF-κB的活性比较 如表3所示，MsPGN伴新月体形成组肾小球中NF-κB的表达显著高于无新月体形成组，而肾小管中NF-κB的表达在两组间无显著差异。 表3 MsPGN伴新月体形成组与无新月体形成组
肾组织中NF-κB活性比较 分 组
n
肾小球(A)
肾小管(%)
无新月体组
19
0.33±0.12
36.80±23.20
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伴新月体组
3
0.40±0.10*
40.85±21.59
*与无新月体组比较，P<0.05
2.4 MsPGN患儿伴肾小球节段硬化组与无硬化组肾组织中NF-κB的活性比较 MsPGN伴肾小球节段硬化组肾小球及肾小管中NF-κB的表达均较无硬化组显著增高，见表4。
表4 MsPGN伴肾小球节段硬化组与无硬化组
肾组织中NF-κB活性比较 分 组
n
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肾小球(A)
肾小管(%)
无节段硬化组
15
0.32±0.11
35.73±20.74
伴节段硬化组
7
0.40±0.10*
56.43±18.34*
*与无节段硬化组比较，P<0.01
, 百拇医药
2.5 MsPGN患儿伴肾小管间质单核细胞浸润组与无单核细胞浸润组肾组织中NF-κB的活性比较 MsPGN伴肾小管间质单核细胞浸润组肾小管中NF-κB的表达显著高于无单核细胞浸润组，而肾小球中NF-κB的表达在两组间无显著差异，见表5。
表5 MsPGN伴肾小管间质单核细胞浸润组与
无单核细胞浸润组肾组织中NF-κB活性比较 分 组
n
肾小球(A)
肾小管(%)
无单核细胞浸润组
14
0.33±0.12
, http://www.100md.com
33.47±18.39
伴单核细胞浸润组
8
0.34±0.13
65.26±14.13*
*与无单核细胞浸润组比较，P<0.01
2.6 MsPGN患儿肾小球中NF-κB的活性与系膜基质扩张相关分析 肾小球中NF-κB的表达与系膜基质扩张呈显著正相关，回归方程为Y＝-0.3697+12.2855X(P<0.01)，r＝0.9263(P<0.001)。
3 讨 论
NF-κB是转录因子家庭的重要成员，参与多种炎症性细胞因子、趋化因子和促纤维化因子的合成、细胞增生、ECM交联、细胞凋亡以及成纤维细胞的分化过程，在肾小球肾炎的炎症反应中发挥重要作用[1，2]。我们采用免疫组化研究其在MsPGN患儿肾组织中的活化，并分析其与MsPGN病理改变的相关关系，探讨其在MsPGN分子发病机制中的作用。
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我们的研究结果表明，MsPGN患儿肾组织中NF-κB的活性较正常对照组显著增高且与病变程度相关，即病变程度越重，肾组织中NF-κB的活性越高。此外，MsPGN伴肾间质单核细胞浸润组肾小管中NF-κB的活性亦较无单核细胞浸润组明显增高。Sakurai等应用凝胶电泳迁移率(EMSA)研究肾毒血清性肾炎大鼠肾组织中NF-κB的活性时发现，肾小球内NF-κB的活性在注射肾毒血清后第一天即显著增高，NF-κB活化先于蛋白尿的出现。该作者进一步采用抗氧化剂PDTC抑制NF-κB活性后发现，炎症介质IL-1β，MCP-1，ICAM-1及一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达显著下调[3，4]。有研究证实，IL-1β和TNF-α可诱导培养的人肾小球系膜细胞中NF-κB的活化及MCP-1和VCAM-1mRNA的表达[5，6]。这些研究结果表明，NF-κB的活化参与了肾小球肾炎的炎症反应，它诱导炎症介质的合成及单核细胞浸润，而且参与炎症介质的病理生理过程，从而启动肾脏损害。
本研究结果证实，MsPGN患儿肾组织中NF-κB的活性显著上调，且与病变的严重程度、ECM集聚相关，表明NF-κB活化在MsPGN的发病机制中发挥着重要作用，它可能启动了MsPGN的炎症反应，阻断NF-κB的活化将可能为防治MsPGN的发生和进展提供新的治疗方法。
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参考文献
1，Morrissey J，Klahr S.Transcription factor NF-κB regulation of renal fibrosis during ureteral obstruction.Semin Nephrol，1998，18：603
2，May MJ，Ghosh S.Signal transduction through NF-κB.Immunol Today，1998，19：80
3，Sakurai H，Shigemori N，Hisada Y et al.Suppression of NF-kappa B and AP-1 activation by glucocorticoids in experimental glomerulonephritis in rats：molecular mechanisms of anti-nephritic action.Biochim Biophys Acta，1997，1362：252
, 百拇医药
4，Sakurai H，Hisada Y，Ueno M et al.Activation of transcription factor NF-kappa B in experimental glomerulonephritis in rats.Biochim Biophys Acta，1996，1316：132
5，Rovin-BH，Dickerson-JA，Tan-LC et al.Modulation of IL-1-induced chemokine expression in human mesangial cells through alterations in redox status.Cytokine，1997，9：178
6，Khachigian LM，Collins T，Fries JW.Nuclear factor-kappa B mediates induction of vascular cell adhesion molecule-1 in glomerular mesangial cells.Biochem Biophys Res Commun，1995，206：462
收稿1999-06-25
修回1999-07-26, http://www.100md.com
单位：张爱华(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 南京，210029)；陈荣华(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 南京，210029)；林娜(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 南京，210029)；黄松明(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 南京，210029)；郭梅(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 南京，210029)；费莉(南京医科大学小儿肾脏病研究中心 南京，210029)
关键词：系膜增生性肾小球肾炎；核因子-κB；细胞外基质
肾脏病与透析肾移植杂志000118
核因子-κB(NF-κB)是一种与炎症性细胞因子和趋化因子的产生、细胞增生、细胞外基质(ECM)交联和细胞凋亡有关的转录因子，参与多种炎症介质的信号传导过程[1]。本研究采用免疫组化染色及真彩色医学图像分析系统，观察系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)患儿肾组织中NF-κB的活化，为阐明MsPGN的发病机制及防治MsPGN的发生、发展提供实验依据。
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 研究对象 MsPGN患儿22例，男16例，女6例，平均年龄8.5岁，均排除紫癜性肾炎、狼疮性肾炎等继发性肾小球肾炎。所有患儿均经肾穿刺活检，按WHO 1982年制订的肾小球疾病分类标准及分度标准诊断为MsPGN(不包括IgA肾病)，其中轻度MsPGN 6例，中度MsPGN 10例，重度MsPGN 6例。对照组2例，为肾肿瘤手术切除的正常肾组织。
1.2 免疫组织化学染色 采用改良ABC法，免疫组化试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司，按说明书操作。山羊抗人NF-κB p65抗体及兔抗山羊IgG均为SANTA CRUZ产品。
1.3 计算机图像分析 应用真彩色医学图像分析系统由计算机自动单盲法计算每例肾小球染色区域的平均吸光度。阳性小管则以高倍视野下每100个小管中的阳性小管所占的百分数表示。另外常规方法对患儿肾组织病理切片进行PASM染色，并对病理切片上的肾小球进行嗜银结构的扫描定量，计算出其平均积分吸光度，以表示系膜基质扩大的程度。
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1.4 统计学处理 实验结果以均数±标准差表示，采用t检验和相关分析进行统计学处理。
2 结 果
2.1 MsPGN患儿与正常对照组肾组织中NF-κB的活性比较 MsPGN患儿肾小球及肾小管中NF-κB表达均较对照组显著增强，见表1。
表1 MsPGN患儿与正常对照组肾组织中NF-κB活性比较 分 组
n
肾小球(A)
肾小管(%)
正常对照组
2
0.17±0.06
, 百拇医药
17.04±7.84
MsPGN组
22
0.33±1.12*
39.95±21.80*
*与正常对照组比较，P<0.01
2.2 MsPGN中系膜细胞增生程度与肾组织中NF-κB活性的相关关系 由表2可见，随系膜细胞增生程度的加重，肾小球及肾小管中NF-κB的表达亦逐渐增强。
表2 MsPGN患儿系膜细胞增生程度与肾组织中
NF-κB活性比较 分 组
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n
肾小球(A)
肾小管(%)
正常对照组
2
0.17±0.06
17.04±7.84
轻度MsPGN组
6
0.23±0.08
30.57±15.23*
中度MsPGN组
, 百拇医药
10
0.34±0.08*△
38.83±22.45*
重度MsPGN组
6
0.42±0.10*△★
50.43±23.14*△
与正常对照组比较，P<0.05，*与正常对照组比较，P<0.01
△与轻度MsPGN比较，P<0.01，★与中度MsPGN比较，P<0.01
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2.3 MsPGN患儿伴新月体形成组与无新月体形成组肾组织中NF-κB的活性比较 如表3所示，MsPGN伴新月体形成组肾小球中NF-κB的表达显著高于无新月体形成组，而肾小管中NF-κB的表达在两组间无显著差异。 表3 MsPGN伴新月体形成组与无新月体形成组
肾组织中NF-κB活性比较 分 组
n
肾小球(A)
肾小管(%)
无新月体组
19
0.33±0.12
36.80±23.20
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伴新月体组
3
0.40±0.10*
40.85±21.59
*与无新月体组比较，P<0.05
2.4 MsPGN患儿伴肾小球节段硬化组与无硬化组肾组织中NF-κB的活性比较 MsPGN伴肾小球节段硬化组肾小球及肾小管中NF-κB的表达均较无硬化组显著增高，见表4。
表4 MsPGN伴肾小球节段硬化组与无硬化组
肾组织中NF-κB活性比较 分 组
n
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肾小球(A)
肾小管(%)
无节段硬化组
15
0.32±0.11
35.73±20.74
伴节段硬化组
7
0.40±0.10*
56.43±18.34*
*与无节段硬化组比较，P<0.01
, 百拇医药
2.5 MsPGN患儿伴肾小管间质单核细胞浸润组与无单核细胞浸润组肾组织中NF-κB的活性比较 MsPGN伴肾小管间质单核细胞浸润组肾小管中NF-κB的表达显著高于无单核细胞浸润组，而肾小球中NF-κB的表达在两组间无显著差异，见表5。
表5 MsPGN伴肾小管间质单核细胞浸润组与
无单核细胞浸润组肾组织中NF-κB活性比较 分 组
n
肾小球(A)
肾小管(%)
无单核细胞浸润组
14
0.33±0.12
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33.47±18.39
伴单核细胞浸润组
8
0.34±0.13
65.26±14.13*
*与无单核细胞浸润组比较，P<0.01
2.6 MsPGN患儿肾小球中NF-κB的活性与系膜基质扩张相关分析 肾小球中NF-κB的表达与系膜基质扩张呈显著正相关，回归方程为Y＝-0.3697+12.2855X(P<0.01)，r＝0.9263(P<0.001)。
3 讨 论
NF-κB是转录因子家庭的重要成员，参与多种炎症性细胞因子、趋化因子和促纤维化因子的合成、细胞增生、ECM交联、细胞凋亡以及成纤维细胞的分化过程，在肾小球肾炎的炎症反应中发挥重要作用[1，2]。我们采用免疫组化研究其在MsPGN患儿肾组织中的活化，并分析其与MsPGN病理改变的相关关系，探讨其在MsPGN分子发病机制中的作用。
, http://www.100md.com
我们的研究结果表明，MsPGN患儿肾组织中NF-κB的活性较正常对照组显著增高且与病变程度相关，即病变程度越重，肾组织中NF-κB的活性越高。此外，MsPGN伴肾间质单核细胞浸润组肾小管中NF-κB的活性亦较无单核细胞浸润组明显增高。Sakurai等应用凝胶电泳迁移率(EMSA)研究肾毒血清性肾炎大鼠肾组织中NF-κB的活性时发现，肾小球内NF-κB的活性在注射肾毒血清后第一天即显著增高，NF-κB活化先于蛋白尿的出现。该作者进一步采用抗氧化剂PDTC抑制NF-κB活性后发现，炎症介质IL-1β，MCP-1，ICAM-1及一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达显著下调[3，4]。有研究证实，IL-1β和TNF-α可诱导培养的人肾小球系膜细胞中NF-κB的活化及MCP-1和VCAM-1mRNA的表达[5，6]。这些研究结果表明，NF-κB的活化参与了肾小球肾炎的炎症反应，它诱导炎症介质的合成及单核细胞浸润，而且参与炎症介质的病理生理过程，从而启动肾脏损害。
本研究结果证实，MsPGN患儿肾组织中NF-κB的活性显著上调，且与病变的严重程度、ECM集聚相关，表明NF-κB活化在MsPGN的发病机制中发挥着重要作用，它可能启动了MsPGN的炎症反应，阻断NF-κB的活化将可能为防治MsPGN的发生和进展提供新的治疗方法。
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参考文献
1，Morrissey J，Klahr S.Transcription factor NF-κB regulation of renal fibrosis during ureteral obstruction.Semin Nephrol，1998，18：603
2，May MJ，Ghosh S.Signal transduction through NF-κB.Immunol Today，1998，19：80
3，Sakurai H，Shigemori N，Hisada Y et al.Suppression of NF-kappa B and AP-1 activation by glucocorticoids in experimental glomerulonephritis in rats：molecular mechanisms of anti-nephritic action.Biochim Biophys Acta，1997，1362：252
, 百拇医药
4，Sakurai H，Hisada Y，Ueno M et al.Activation of transcription factor NF-kappa B in experimental glomerulonephritis in rats.Biochim Biophys Acta，1996，1316：132
5，Rovin-BH，Dickerson-JA，Tan-LC et al.Modulation of IL-1-induced chemokine expression in human mesangial cells through alterations in redox status.Cytokine，1997，9：178
6，Khachigian LM，Collins T，Fries JW.Nuclear factor-kappa B mediates induction of vascular cell adhesion molecule-1 in glomerular mesangial cells.Biochem Biophys Res Commun，1995，206：462
收稿1999-06-25
修回1999-07-26, http://www.100md.com
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