醒脑益智方对SAM-P/10老化痴呆鼠脑皮层、海马、纹状体Ach、AchE活性的影响
作者：王平 李平 张六通 邱幸凡 梅家俊 周安方
单位：王平 张六通 邱幸凡 梅家俊 周安方(湖北中医学院老年医学研究室，武汉 430061)；李平(天津中医学院第一附属医院老年病室)
关键词：老年痴呆；中医药疗法；胆碱能神经
中国老年学杂志000223摘 要 目的 探讨醒脑益智方作用机制。方法 选择7月龄SAM-P/10老年痴呆鼠48只，给药治疗后断头处死，并进行乙酰酯碱(Ach)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性测定。结果 小鼠脑皮层、海马AchE活性降低与P/10空白对照组比较，预防组、1号方组均有显著改善(P<0.01或0.05)，预防组Ach升高，在海马更优于西药组，2号方仅于皮层Ach、AchE水平较SAM-P/10空白组表现出有意义的改善。结论 以脑萎缩、学习记忆障碍为特征的SAM-P/10老化痴呆鼠确有胆碱能系统功能减退，且以皮层、海马最明显，而醒脑益智方能明显增强胆碱能系统的功能，调节Ach的代谢，且预防给药效果最为明显。
, 百拇医药
中枢胆碱能系统功能衰退与老年痴呆的发病关系密切。测定与之相关的指标在老年痴呆的实验研究中占有重要地位。本实验采用日本快速老化痴呆鼠SAM-P/10模型观察其大脑皮层、海马、纹状体乙酰胆碱(Ach)、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性变化及药物的影响，以探讨中医临床以补肾化痰、化瘀为主治疗老年痴呆的有效验方——醒脑益智方的作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物及分组 选择7月龄SAM-P/10老化痴呆鼠48只，随机分为5组，即醒脑益智方1号、2号、预防组各1组，西药喜得镇(Hydergin)组，空白对照组。另选7月龄SAM-P/10正常老化鼠8只作为青年对照。各组均为雌、雄各半。由天津中医学院第一附属医院动物房提供。
1.2 给药方法 采用江苏天江制药有限公司生产的中药颗粒剂(批号：961009)，用前按醒脑益智方配方混匀，煎煮10 min。根据《中药新药研究指南》方法换算得醒脑益智1号方(由熟地、制首乌、天麻、胆星、石菖蒲等组成)小白鼠用量为24 g(相当原生药)/kg体重.d-1，醒脑益智2号方(由熟地、制首乌、川芎、丹参等组成)用量为19 g(相当原生药)/kg体重.d-1，中药预防组为醒脑益智1号方剂量减半，即12 g(相当原生药)/kg体重.d-1，西药喜得镇(Hydergine，瑞士山德士药厂，天津华津药厂合作生产，批号：970135)临床用量为3～6 mg/d，换算小白鼠药量为0.5 mg/kg体重.d-1。各组均每日1次，0.4～0.6 ml/次，9∶00 Am灌胃给药，对照组灌以等量自来水。预防组提前给药1个月后，各组开始治疗，疗程6 w。
, 百拇医药
1.3 仪器与试剂 仪器：日本岛津UV-240型紫外可见分光光度计，上海医用分析仪器厂TGL-16 G台式高速离心机、SONICATORXL型细胞超声粉碎仪。试剂：三氯乙酸、盐酸羟胺、三氯化铁(FeCl3.6H2o)、HCl、NaOH等均为国产优级纯化学试剂，溴化乙酰胆碱底物(Ach.Br)购自天津四方公司。
1.4 取材及检测方法 在完成治疗后，各组同时断头处死动物，在冰台上快速取出左侧皮层、海马及纹状体(1.5 min之内)，置于-80 ℃冰箱待测。
1.4.1 Ach测定 将各部分脑组织用0.1 mmol/L HCl 1/10(W/V)超声粉碎，取0.6 ml匀浆，加入等量三氯乙酸沉淀蛋白后离心，1 500 r/min离心 15 min，取上清液加入等体积碱性羟胺、三氯化铁、1 mol/L HCl混匀后于540 nm处测其吸光度值，并根据蛋白量计算乙酰胆碱含量。用每克蛋白含Ach毫克数即mg/g表示。蛋白测定用双缩脲法。
, http://www.100md.com
1.4.2 AchE活性测定 取各部分脑组织10 mg用1/15 mol/L磷酸缓冲液(pH 7.2)制成1∶4(W∶V)匀浆，然后1 500 r/min离心15 min，上清液即为酶样本，按羟胺比色法测定。
所有结果用方差分析软件进行统计学处理。
2 结果与讨论
各组动物Ach、AchE活性的变化见表1。
Ach是重要的神经递质，它是由胆碱、乙酰辅酶A在胆碱乙酰化酶的(ChAT)的催化下合成，并由胆碱酯酶水解成胆碱和乙醇。早在70年代初期，Deutsch等通过动物实验发现胆碱能系统与记忆形成和储存有关。以往的研究表明，脑组织中的ChAT活性随增龄明显降低，AchE的活性随增龄明显升高。进一步的研究还发现，老年痴呆(AD)患者中枢神经系统的AchE活性和Ach的合成与释放及胆碱的摄取等多种胆碱能系统的功能均有缺陷。胆碱能学说已成为AD病因的经典学说之一。围绕改善胆碱能系统功能，研究中药益智健脑方剂的作用较多。但是就补肾化痰、化瘀药较系统地观察脑内Ach、AchE不同部位的变化尚未见诸报导。日本对SAM-P/10动物模型研究也证实其有明显胆碱能系统功能下降。
, http://www.100md.com
本研究结果表明：(1)与正常老化的同龄SAM-R/1品系比较，SAM-P/10鼠海马、皮层的Ach含量显著降低(P<0.01)，而纹状体AchE水平虽较SAM-R/1低但无显著差异。SAM-R/1动物Ach及AchE水平表现为纹状体最高、皮层次之、海马最低，而SAM-P/10鼠则表现为皮层最高，海马次之、纹状体最低。(2)经应用药物防治后皮层、海马AchE活性降低，与P/10空白组比较，预防组、醒脑1号方组、西药组均有显著改善(P<0.01或0.05)，预防组Ach升高，在海马更优于西药组，醒脑2号方仅于皮层Ach、AchE水平较SAM-P/10空白组表现出有意义的改善。
表1 各组动物海马、皮层、纹状体Ach、AchE变化(
±s) 组别
n
Ach活性
, http://www.100md.com
AchE活性
海马
皮层
纹状体(mg/g)
海马
皮层
纹状体(μmol/h.g-1)
P/10醒脑预防组
10
189.61±28.602)
148.53±16.852)
, 百拇医药
200.92±45.08
384.60±96.141)
426.64±46.232)
413.33±42.30
P/10醒脑1号组
10
166.08±28.591)
143.18±9.742)
196.71±42.68
428.89±43.041)
, 百拇医药
455.21±82.542)
428.54±64.67
P/10醒脑2号组
10
143.86±32.23
36.29±13.651)
193.35±19.80
460.63±62.31
488.75±48.291)
448.26±56.15
, http://www.100md.com
P/10西药治疗组
10
168.56±38.341)
148.66±13.932)
198.02±18.96
416.21±47.551)
439.06±91.672)
419.66±44.77
P/10空白对照组
8
, http://www.100md.com
133.02±16.98
119.67±10.71
187.14±7.27
507.24±62.68
542.39±86.31
462.34±92.15
P/10同龄对照组
8
228.10±39.202)
152.22±17.162)
204.74±28.58
, http://www.100md.com
361.56±75.582)
396.12±84.363)
408.11±88.63
与P/10空白组比较：1)P<0.05，2)P<0.01
本研究结果证实以脑萎缩、学习记忆障碍为特征的SAM-P/10老化痴呆鼠确有胆碱能系统功能减退，且以皮层、海马最明显，而醒脑益智方可以明显调节Ach的代谢，推测此作用是该方治疗老年痴呆的作用机制之一。值得重视的是预防给药组效果最为明显，值得进一步探讨。 作者简介：王平,男,37岁，医学博士，副教授，主要研究方向：脑老化、老年痴呆的中医药防治
收稿日期：1999-01-17
修回日期：1999-06-09, 百拇医药
单位：王平 张六通 邱幸凡 梅家俊 周安方(湖北中医学院老年医学研究室，武汉 430061)；李平(天津中医学院第一附属医院老年病室)
关键词：老年痴呆；中医药疗法；胆碱能神经
中国老年学杂志000223摘 要 目的 探讨醒脑益智方作用机制。方法 选择7月龄SAM-P/10老年痴呆鼠48只，给药治疗后断头处死，并进行乙酰酯碱(Ach)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性测定。结果 小鼠脑皮层、海马AchE活性降低与P/10空白对照组比较，预防组、1号方组均有显著改善(P<0.01或0.05)，预防组Ach升高，在海马更优于西药组，2号方仅于皮层Ach、AchE水平较SAM-P/10空白组表现出有意义的改善。结论 以脑萎缩、学习记忆障碍为特征的SAM-P/10老化痴呆鼠确有胆碱能系统功能减退，且以皮层、海马最明显，而醒脑益智方能明显增强胆碱能系统的功能，调节Ach的代谢，且预防给药效果最为明显。
, 百拇医药
中枢胆碱能系统功能衰退与老年痴呆的发病关系密切。测定与之相关的指标在老年痴呆的实验研究中占有重要地位。本实验采用日本快速老化痴呆鼠SAM-P/10模型观察其大脑皮层、海马、纹状体乙酰胆碱(Ach)、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性变化及药物的影响，以探讨中医临床以补肾化痰、化瘀为主治疗老年痴呆的有效验方——醒脑益智方的作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物及分组 选择7月龄SAM-P/10老化痴呆鼠48只，随机分为5组，即醒脑益智方1号、2号、预防组各1组，西药喜得镇(Hydergin)组，空白对照组。另选7月龄SAM-P/10正常老化鼠8只作为青年对照。各组均为雌、雄各半。由天津中医学院第一附属医院动物房提供。
1.2 给药方法 采用江苏天江制药有限公司生产的中药颗粒剂(批号：961009)，用前按醒脑益智方配方混匀，煎煮10 min。根据《中药新药研究指南》方法换算得醒脑益智1号方(由熟地、制首乌、天麻、胆星、石菖蒲等组成)小白鼠用量为24 g(相当原生药)/kg体重.d-1，醒脑益智2号方(由熟地、制首乌、川芎、丹参等组成)用量为19 g(相当原生药)/kg体重.d-1，中药预防组为醒脑益智1号方剂量减半，即12 g(相当原生药)/kg体重.d-1，西药喜得镇(Hydergine，瑞士山德士药厂，天津华津药厂合作生产，批号：970135)临床用量为3～6 mg/d，换算小白鼠药量为0.5 mg/kg体重.d-1。各组均每日1次，0.4～0.6 ml/次，9∶00 Am灌胃给药，对照组灌以等量自来水。预防组提前给药1个月后，各组开始治疗，疗程6 w。
, 百拇医药
1.3 仪器与试剂 仪器：日本岛津UV-240型紫外可见分光光度计，上海医用分析仪器厂TGL-16 G台式高速离心机、SONICATORXL型细胞超声粉碎仪。试剂：三氯乙酸、盐酸羟胺、三氯化铁(FeCl3.6H2o)、HCl、NaOH等均为国产优级纯化学试剂，溴化乙酰胆碱底物(Ach.Br)购自天津四方公司。
1.4 取材及检测方法 在完成治疗后，各组同时断头处死动物，在冰台上快速取出左侧皮层、海马及纹状体(1.5 min之内)，置于-80 ℃冰箱待测。
1.4.1 Ach测定 将各部分脑组织用0.1 mmol/L HCl 1/10(W/V)超声粉碎，取0.6 ml匀浆，加入等量三氯乙酸沉淀蛋白后离心，1 500 r/min离心 15 min，取上清液加入等体积碱性羟胺、三氯化铁、1 mol/L HCl混匀后于540 nm处测其吸光度值，并根据蛋白量计算乙酰胆碱含量。用每克蛋白含Ach毫克数即mg/g表示。蛋白测定用双缩脲法。
, http://www.100md.com
1.4.2 AchE活性测定 取各部分脑组织10 mg用1/15 mol/L磷酸缓冲液(pH 7.2)制成1∶4(W∶V)匀浆，然后1 500 r/min离心15 min，上清液即为酶样本，按羟胺比色法测定。
所有结果用方差分析软件进行统计学处理。
2 结果与讨论
各组动物Ach、AchE活性的变化见表1。
Ach是重要的神经递质，它是由胆碱、乙酰辅酶A在胆碱乙酰化酶的(ChAT)的催化下合成，并由胆碱酯酶水解成胆碱和乙醇。早在70年代初期，Deutsch等通过动物实验发现胆碱能系统与记忆形成和储存有关。以往的研究表明，脑组织中的ChAT活性随增龄明显降低，AchE的活性随增龄明显升高。进一步的研究还发现，老年痴呆(AD)患者中枢神经系统的AchE活性和Ach的合成与释放及胆碱的摄取等多种胆碱能系统的功能均有缺陷。胆碱能学说已成为AD病因的经典学说之一。围绕改善胆碱能系统功能，研究中药益智健脑方剂的作用较多。但是就补肾化痰、化瘀药较系统地观察脑内Ach、AchE不同部位的变化尚未见诸报导。日本对SAM-P/10动物模型研究也证实其有明显胆碱能系统功能下降。
, http://www.100md.com
本研究结果表明：(1)与正常老化的同龄SAM-R/1品系比较，SAM-P/10鼠海马、皮层的Ach含量显著降低(P<0.01)，而纹状体AchE水平虽较SAM-R/1低但无显著差异。SAM-R/1动物Ach及AchE水平表现为纹状体最高、皮层次之、海马最低，而SAM-P/10鼠则表现为皮层最高，海马次之、纹状体最低。(2)经应用药物防治后皮层、海马AchE活性降低，与P/10空白组比较，预防组、醒脑1号方组、西药组均有显著改善(P<0.01或0.05)，预防组Ach升高，在海马更优于西药组，醒脑2号方仅于皮层Ach、AchE水平较SAM-P/10空白组表现出有意义的改善。
表1 各组动物海马、皮层、纹状体Ach、AchE变化(
±s) 组别n
Ach活性
, http://www.100md.com
AchE活性
海马
皮层
纹状体(mg/g)
海马
皮层
纹状体(μmol/h.g-1)
P/10醒脑预防组
10
189.61±28.602)
148.53±16.852)
, 百拇医药
200.92±45.08
384.60±96.141)
426.64±46.232)
413.33±42.30
P/10醒脑1号组
10
166.08±28.591)
143.18±9.742)
196.71±42.68
428.89±43.041)
, 百拇医药
455.21±82.542)
428.54±64.67
P/10醒脑2号组
10
143.86±32.23
36.29±13.651)
193.35±19.80
460.63±62.31
488.75±48.291)
448.26±56.15
, http://www.100md.com
P/10西药治疗组
10
168.56±38.341)
148.66±13.932)
198.02±18.96
416.21±47.551)
439.06±91.672)
419.66±44.77
P/10空白对照组
8
, http://www.100md.com
133.02±16.98
119.67±10.71
187.14±7.27
507.24±62.68
542.39±86.31
462.34±92.15
P/10同龄对照组
8
228.10±39.202)
152.22±17.162)
204.74±28.58
, http://www.100md.com
361.56±75.582)
396.12±84.363)
408.11±88.63
与P/10空白组比较：1)P<0.05，2)P<0.01
本研究结果证实以脑萎缩、学习记忆障碍为特征的SAM-P/10老化痴呆鼠确有胆碱能系统功能减退，且以皮层、海马最明显，而醒脑益智方可以明显调节Ach的代谢，推测此作用是该方治疗老年痴呆的作用机制之一。值得重视的是预防给药组效果最为明显，值得进一步探讨。 作者简介：王平,男,37岁，医学博士，副教授，主要研究方向：脑老化、老年痴呆的中医药防治
收稿日期：1999-01-17
修回日期：1999-06-09, 百拇医药