中药木回春对肿瘤细胞株的杀伤作用
作者：杨世忠 刘铁军 杨玉洁 白静丽 张静敏
单位：杨世忠 刘铁军 杨玉洁 白静丽(长春中医学院附属医院，长春 130021)；张静敏(白求恩医科大学药学院生药教研室)
关键词：木回春；人肝肺肿瘤细胞株；3H-TdR
中国老年学杂志000220摘 要 目的 观察中药木回春体外抗肝癌、肺癌的作用。方法 采用3H-TdR掺入法检测木回春对人肝癌细胞QGY-7703和人肺癌细胞SPC-A-1细胞的抑瘤效应。结果 对人肝癌细胞半数生长抑制值为462.1 μg/ml，对QGY-7703细胞DNA合成量较对照组皆有明显减少，差异显著(P<0.001)，其合成量随药物浓度增加呈减少趋势。ED50值为270.9 μg/ml；对SPC-A-1细胞半数生长抑制值为512.7 μg/ml。结论 木回春很可能成为治疗多种肿瘤的理想药物。
, 百拇医药
The cell killing effects of traditional Chinese medicine Mu Hui Chun on liver and lung tumor cell
Yang Shizhong,Zhang Jingmin,Liu Tiejun et al
(Changchun College of Chinese Traditional Medicine,Changchun 130021)
Abstract：Objective To observe the anti-liver and lung tumors responses of Mu Hui Chun in vitro.Methods Using 3 H-thymidine deoxyribose(3 H-TdR) incorporation technique to detect the inhibitive effect of Mu Hui Chun on the DNA synthesis of liver tumor QGy-7703 cell and lung tumor SPC-A-1 cell respectively.Results Median cell growth inhibitive dose of QGy-7703 cell was 462.1 μg/ml,the amount of QGy-7703 cell DNA sythesis was siginificantly less than that in the control group,with the higher concentration of Mu Hui Chun accompanied by the lower amount of DNA synthesis,and the value of ED50 was 270,968 μg/ml.As to SPC-A-1 cell,the median cell growth inhibitive dose was 512.7 μg/ml.Conclusion Mu Hui Chun has potential anti-turmor property.
, 百拇医药
Key words Mu Hui Chun Human liver and lung tumor cell 3H-TdR
中药治疗肿瘤现今可见诸多报道〔1，2〕，我们自1992年以“固本*活血*解毒法，中药木回春治疗肝癌的实验与临床研究”为题在吉林省科委立项，经过几年来多学科的联合攻关，初步达到预期目的，1998年通过省级鉴定，被评审为国内先进水平的科研成果。本文仅就课题实验研究的部分结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 中药木回春粉剂由长春中医学院研制，每克相当于生药2.8 g，用生理盐水配成不同浓度，充分浸泡。QGY-7703人肝癌细胞株，SPC-A-1人肺癌细胞株均由吉林省肿瘤防治研究所提供。3H-TdR由北京中国原子能科学院提供。药品和器材：RPMI1640培养基(日本)；HEPES培养基(日本)；胎牛血清(中国大连)；胰酶(中国上海)；CO2孵箱(日本)。
, http://www.100md.com
1.2 方法 取指数增殖期人肝癌细胞株QGY-7703细胞和人肺癌细胞株SPC-A-1细胞，调细胞浓度为5×104/ml，种植于24孔培养板中(0.9 ml/孔)；设6个剂量组，每个剂量组设4个复孔，同时设阳性对照组和阴性对照组。对照组每组剂量设6个复孔，37 ℃、5%CO2饱和湿度条件下培养24 h，按设计剂量加药0.1 ml/孔，继续培养24 h，弃上清，加浓度0.25%胰酶0.5 ml/孔，分散细胞1 min，弃胰酶，生理盐水洗1次，加生理盐水0.4 ml/孔，用滴管吹打悬浮细胞，加胎盼蓝染液0.1 ml/孔，混匀，室温染色5 min，计数活细胞。
3 H-TdR掺入法〔3〕测定DNA合成抑制率：将指数增长期的QGY-7703人肝癌细胞调至浓度为1×105个/ml，0.1 ml/孔加入96孔培养板中，置37 ℃、5%CO2培养箱中，培养24 h取出，实验组加入不同剂量的木回春，阳性对照组加5-FU，阴性对照组加入生理盐水，体积分别为0.1 ml/孔，各设6个平行样，置于CO2培养箱中，培养6 h，以1 μci/孔加入3H-TdR，继续培养1.5 h，胰酶消化1 min，收集细胞，放置干燥后用液闪测量CPM值。
, 百拇医药
1.3 抑制率计算 细胞生长抑制率=(对照组活细胞数-实验组活细胞数)/对照组活细胞数×100%
DNA合成抑制率=(阴性对照组CPM值-实验组CPM值)/(阴性对照组CPM值)×100%。
2 结果与讨论
表1 中药木回春对人肿瘤细胞生长抑制作用 组别
剂量
μg/ml
活细胞计数(104/ml)
生长抑制率
肝癌
肺癌
, 百拇医药
肝癌
肺癌
对照组
0
8.776
8.292
实验组
1 000
1.146
2.313
86.94
72.11
750
, http://www.100md.com
2.292
2.834
73.88
65.58
500
4.625
4.875
47.30
45.45
250
6.604
6.396
24.75
, 百拇医药
27.12
125
8.250
8.000
6.00
8.84
62.5
8.563
9.390
2.43
0.00
5-FU组
50.0
, 百拇医药
2.083
1.532
76.26
77.47
25.0
3.364
2.096
58.45
64.95
表2 中药木回春对QGY-7703细胞DNA合成的抑制作用 组别
剂量
(μg/ml)
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CPM值(
±s)
抑制率
(%)
P1值
P2值
阴性
对照组
0
5 531.67±459.85(6)
-
实验组
, 百拇医药
500
417.17±31.41(6)
92.46
<0.001
<0.001
250
2 109.00±268.90(6)
61.87
<0.001
<0.05
100
3 847.67±373.16(6)
, http://www.100md.com
30.44
<0.001
50
4 564.67±356.17(6)
17.48
<0.001
5-FU组
100
2 614.50±279.96(6)
52.74
<0.001
P1与阴性对照组比较，P2与5-FU组比较
, 百拇医药
中药木回春对人肿瘤细胞生长抑制作用见表1。可见中药木回春对人两种肿瘤细胞均有杀伤作用。当剂量达到750 μg/ml时，其细胞生长抑制率均大于50%。该药对两种肿瘤细胞株均有杀伤作用。对QGY-7703细胞DNA合成的抑制作用见表2。当药物浓度≥250 μg/ml时，DNA合抑制率在50%以上，说明中药木回春对肝癌细胞的杀伤作用。
中药治疗肿瘤近年来已受普遍关注并取得了可喜的进展，逐渐发展为继手术、放疗、化疗和生物疗法后的又一肿瘤治疗手段。中药可以减轻肿瘤患者放、化疗中出现的副作用、增强免疫功能、延长生存时间、提高生存质量。因此，重视开发中草药在肿瘤防治中的作用，对提高肿瘤疗效具有十分深远的意义。临床观察40例患者显示：中药木回春对提高患者生存期，延长生命有积极影响；对生活质量的改善治疗前后有统计学意义(P<0.05)；对临床分期治疗前后统计学处理有显著差异(P<0.05)，对癌灶缩小，稳定及发展缓慢有一定作用，说明木回春的疗效作用。本实验表明，该制剂对QGY-7703人肝癌细胞ED50值为462.1 μg/ml；对SPC-A-1人肺癌细胞ED50值为512.7 μg/ml；3H-TdR掺入法，QGY-7703人肝癌细胞DNA合成量较对照组明显减少，ED50值为270.9 μg/ml，经统计学处理有极显著意义(P<0.001)。该实验结果证实了中药木回春很可能成为对多种肿瘤治疗的理想药物，从而为延长病人存活期及提高生存质量找到了一条新的治疗途径。 吉林省科委八五攻关课题
, 百拇医药
作者简介：杨世忠，男，46岁，教授，从事老年肝病研究
参考文献
1，杜德极，杨 蔽，叶玉兰 et al.葛根主要成分的体外癌细胞毒活性.癌症，1997；16(3)：165
2，陈树森，李 智.杜 杰.原发性肝癌的中医治疗研究进展概述.实用中医内科杂志，1997；11(1)：10
3，龚守良.实用基础医学实验技术.长春：吉林科学出版社，1991：180-182
收稿日期：1998-12-21
修回日期：1999-01-25, 百拇医药
单位：杨世忠 刘铁军 杨玉洁 白静丽(长春中医学院附属医院，长春 130021)；张静敏(白求恩医科大学药学院生药教研室)
关键词：木回春；人肝肺肿瘤细胞株；3H-TdR
中国老年学杂志000220摘 要 目的 观察中药木回春体外抗肝癌、肺癌的作用。方法 采用3H-TdR掺入法检测木回春对人肝癌细胞QGY-7703和人肺癌细胞SPC-A-1细胞的抑瘤效应。结果 对人肝癌细胞半数生长抑制值为462.1 μg/ml，对QGY-7703细胞DNA合成量较对照组皆有明显减少，差异显著(P<0.001)，其合成量随药物浓度增加呈减少趋势。ED50值为270.9 μg/ml；对SPC-A-1细胞半数生长抑制值为512.7 μg/ml。结论 木回春很可能成为治疗多种肿瘤的理想药物。
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The cell killing effects of traditional Chinese medicine Mu Hui Chun on liver and lung tumor cell
Yang Shizhong,Zhang Jingmin,Liu Tiejun et al
(Changchun College of Chinese Traditional Medicine,Changchun 130021)
Abstract：Objective To observe the anti-liver and lung tumors responses of Mu Hui Chun in vitro.Methods Using 3 H-thymidine deoxyribose(3 H-TdR) incorporation technique to detect the inhibitive effect of Mu Hui Chun on the DNA synthesis of liver tumor QGy-7703 cell and lung tumor SPC-A-1 cell respectively.Results Median cell growth inhibitive dose of QGy-7703 cell was 462.1 μg/ml,the amount of QGy-7703 cell DNA sythesis was siginificantly less than that in the control group,with the higher concentration of Mu Hui Chun accompanied by the lower amount of DNA synthesis,and the value of ED50 was 270,968 μg/ml.As to SPC-A-1 cell,the median cell growth inhibitive dose was 512.7 μg/ml.Conclusion Mu Hui Chun has potential anti-turmor property.
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Key words Mu Hui Chun Human liver and lung tumor cell 3H-TdR
中药治疗肿瘤现今可见诸多报道〔1，2〕，我们自1992年以“固本*活血*解毒法，中药木回春治疗肝癌的实验与临床研究”为题在吉林省科委立项，经过几年来多学科的联合攻关，初步达到预期目的，1998年通过省级鉴定，被评审为国内先进水平的科研成果。本文仅就课题实验研究的部分结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 中药木回春粉剂由长春中医学院研制，每克相当于生药2.8 g，用生理盐水配成不同浓度，充分浸泡。QGY-7703人肝癌细胞株，SPC-A-1人肺癌细胞株均由吉林省肿瘤防治研究所提供。3H-TdR由北京中国原子能科学院提供。药品和器材：RPMI1640培养基(日本)；HEPES培养基(日本)；胎牛血清(中国大连)；胰酶(中国上海)；CO2孵箱(日本)。
, http://www.100md.com
1.2 方法 取指数增殖期人肝癌细胞株QGY-7703细胞和人肺癌细胞株SPC-A-1细胞，调细胞浓度为5×104/ml，种植于24孔培养板中(0.9 ml/孔)；设6个剂量组，每个剂量组设4个复孔，同时设阳性对照组和阴性对照组。对照组每组剂量设6个复孔，37 ℃、5%CO2饱和湿度条件下培养24 h，按设计剂量加药0.1 ml/孔，继续培养24 h，弃上清，加浓度0.25%胰酶0.5 ml/孔，分散细胞1 min，弃胰酶，生理盐水洗1次，加生理盐水0.4 ml/孔，用滴管吹打悬浮细胞，加胎盼蓝染液0.1 ml/孔，混匀，室温染色5 min，计数活细胞。
3 H-TdR掺入法〔3〕测定DNA合成抑制率：将指数增长期的QGY-7703人肝癌细胞调至浓度为1×105个/ml，0.1 ml/孔加入96孔培养板中，置37 ℃、5%CO2培养箱中，培养24 h取出，实验组加入不同剂量的木回春，阳性对照组加5-FU，阴性对照组加入生理盐水，体积分别为0.1 ml/孔，各设6个平行样，置于CO2培养箱中，培养6 h，以1 μci/孔加入3H-TdR，继续培养1.5 h，胰酶消化1 min，收集细胞，放置干燥后用液闪测量CPM值。
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1.3 抑制率计算 细胞生长抑制率=(对照组活细胞数-实验组活细胞数)/对照组活细胞数×100%
DNA合成抑制率=(阴性对照组CPM值-实验组CPM值)/(阴性对照组CPM值)×100%。
2 结果与讨论
表1 中药木回春对人肿瘤细胞生长抑制作用 组别
剂量
μg/ml
活细胞计数(104/ml)
生长抑制率
肝癌
肺癌
, 百拇医药
肝癌
肺癌
对照组
0
8.776
8.292
实验组
1 000
1.146
2.313
86.94
72.11
750
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2.292
2.834
73.88
65.58
500
4.625
4.875
47.30
45.45
250
6.604
6.396
24.75
, 百拇医药
27.12
125
8.250
8.000
6.00
8.84
62.5
8.563
9.390
2.43
0.00
5-FU组
50.0
, 百拇医药
2.083
1.532
76.26
77.47
25.0
3.364
2.096
58.45
64.95
表2 中药木回春对QGY-7703细胞DNA合成的抑制作用 组别
剂量
(μg/ml)
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CPM值(
±s)抑制率
(%)
P1值
P2值
阴性
对照组
0
5 531.67±459.85(6)
-
实验组
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500
417.17±31.41(6)
92.46
<0.001
<0.001
250
2 109.00±268.90(6)
61.87
<0.001
<0.05
100
3 847.67±373.16(6)
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30.44
<0.001
50
4 564.67±356.17(6)
17.48
<0.001
5-FU组
100
2 614.50±279.96(6)
52.74
<0.001
P1与阴性对照组比较，P2与5-FU组比较
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中药木回春对人肿瘤细胞生长抑制作用见表1。可见中药木回春对人两种肿瘤细胞均有杀伤作用。当剂量达到750 μg/ml时，其细胞生长抑制率均大于50%。该药对两种肿瘤细胞株均有杀伤作用。对QGY-7703细胞DNA合成的抑制作用见表2。当药物浓度≥250 μg/ml时，DNA合抑制率在50%以上，说明中药木回春对肝癌细胞的杀伤作用。
中药治疗肿瘤近年来已受普遍关注并取得了可喜的进展，逐渐发展为继手术、放疗、化疗和生物疗法后的又一肿瘤治疗手段。中药可以减轻肿瘤患者放、化疗中出现的副作用、增强免疫功能、延长生存时间、提高生存质量。因此，重视开发中草药在肿瘤防治中的作用，对提高肿瘤疗效具有十分深远的意义。临床观察40例患者显示：中药木回春对提高患者生存期，延长生命有积极影响；对生活质量的改善治疗前后有统计学意义(P<0.05)；对临床分期治疗前后统计学处理有显著差异(P<0.05)，对癌灶缩小，稳定及发展缓慢有一定作用，说明木回春的疗效作用。本实验表明，该制剂对QGY-7703人肝癌细胞ED50值为462.1 μg/ml；对SPC-A-1人肺癌细胞ED50值为512.7 μg/ml；3H-TdR掺入法，QGY-7703人肝癌细胞DNA合成量较对照组明显减少，ED50值为270.9 μg/ml，经统计学处理有极显著意义(P<0.001)。该实验结果证实了中药木回春很可能成为对多种肿瘤治疗的理想药物，从而为延长病人存活期及提高生存质量找到了一条新的治疗途径。 吉林省科委八五攻关课题
, 百拇医药
作者简介：杨世忠，男，46岁，教授，从事老年肝病研究
参考文献
1，杜德极，杨 蔽，叶玉兰 et al.葛根主要成分的体外癌细胞毒活性.癌症，1997；16(3)：165
2，陈树森，李 智.杜 杰.原发性肝癌的中医治疗研究进展概述.实用中医内科杂志，1997；11(1)：10
3，龚守良.实用基础医学实验技术.长春：吉林科学出版社，1991：180-182
收稿日期：1998-12-21
修回日期：1999-01-25, 百拇医药