45例SLE患者抗CyP与ENA多肽抗体谱测定结果分析
作者：令狐颖 谈华 虞伟 李芳秋 武建国
单位：南京军区南京总医院解放军医学检验中心，江苏南京 210002
关键词：亲环素；抗亲环素自身抗体；ENA多肽抗体谱；系统性红斑狼疮
医学研究生学报000219分类号：R392.11 文献标识码：
文章编号：1008-8199(2000)02-0134-01▲
0 引言
系统性红斑狼疮(SLE)是一种全身性的自身免疫病，其血清学异常常表现为产生一系列特异的自身抗体，如抗Sm、抗ds-DNA、抗U1-RNP等，其中可提取的核抗原(ENA)多肽抗体谱的出现在SLE的发病机制中具有重要作用。近年来，国外有学者发现SLE患者存在有较高水平的亲环素(CyP)自身抗体，并与疾病的活动性密切相关[1]。为探讨CyP自身抗体与ENA多肽抗体间的关系，作者以SLE患者为研究对象，对二者进行了测定和比较，现报告如下。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 主要试剂 重组人CyPA(rhCyPA)抗原、辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人γ、α、μ链抗体的F(ab＇)2片段，均由本科自行研制[3，4]。
1.2 研究对象 SLE患者45例，为南京市鼓楼医院免疫科、山东医科大学附属医院及本院确诊的患者，均符合1982年美国风湿病学会SLE诊断标准，其中男4例，女41例，平均年龄28.9(12～62)岁。根据Bombardier[2]提供的疾病活动指数(DAI)标准进行评分，将SLE患者分为疾病活动组(轻、中、高)与非活动组；正常对照30例，为本院健康体检者，年龄、性别与SLE组大致匹配。所有研究对象均取静脉血，肝素抗凝，及时分离血浆，置-20℃冰箱冻存待检。
1.3 抗CyP自身抗体检测 采用间接ELISA法[4]，于包被有rhCyPA的微孔板内加入1∶50稀释的待测血浆，并同时设阳性、阴性与空白对照，37℃温育后，依次加入HRP标记的抗人γ、α、μ链的F(ab＇)2和TMB-H2O2底物，终止反应后于450 nm测吸光度(A)值，结果以正常对照组吸光度均值加3倍标准差(
+3s)为为正常上限。
, 百拇医药
1.4 ENA多肽抗体谱检测 采用免疫印迹法，试剂盒购自广州万孚生物技术有限公司，操作按说明书。
2 结果
2.1 抗CyP测定结果 30例健康正常人检出有CyP抗体者仅1例(3.3%)，而45例SLE患者中检出23例，阳性率达51.1%，较对照组显著增高(P<0.01)，其抗体检出水平随SLE疾病活动程度增高而呈逐渐上升趋势(表1)。
表1 SLE患者CyP自身抗体测定结果
Table 1 Detection result of CyP autoantibodies in SLE patients Group
n
CyP antibody positive number
, 百拇医药
IgG
IgA
IgM
Total positive(%)
Inactive
2
0
0
1
1(50.0)*
Slight active
7
, 百拇医药 2
2
2
4(57.1)*
Secondary active
10
5
2
2
6(60.0)*
High active
10
, 百拇医药 4
2
4
7(70.0)*
Remainder
16
3
1
2
5(31.3)*
Normal control
30
1
, 百拇医药
0
0
1(3.3)
* vs normal contro， P<0.05
2.2 ENA多肽抗体测定结果及与CyP抗体比较 在45例SLE患者中，共检出有抗Sm者31例(70.5%)，抗SS-A 33例(73.7%)，抗SS-B 16例(35.6%)，抗U1-RNP 16例(35.6%)，抗U1-RNP 16例(35.6%)，抗Jo-1 2例(4.4%)，抗Scl-70 2例(4.4%)，其中前五种抗体有显著统计学意义(P<0.01)，但SLE患者CyP抗体与ENA多肽抗体谱间未发现有相关关系。
3 讨论
许多研究结果表明，SLE的发生发展及其复杂的临床表现与其产生的高滴度自身抗体有关。我们以往的研究工作证实，SLE患者中，CyP抗体阳性患者同时伴有皮肤、粘膜损害，关节痛，发热及白细胞减少的发生频率明显高于CyP抗体阴性组，提示该抗体的存在可以作为评价SLE活动程度的指标。本组研究中，有51.1%的SLE患者产生了抗CyP自身抗体，明显高于正常对照组(3.3%)。三类Ig中又以IgG类抗CyP为最高，其阳性率分别为IgG(35.6%)、IgA(20%)、IgM(22.4%)，与Hargai等[1]报道结果一致，且CyP抗体检出水平随SLE活动度的增加而呈逐渐上升趋势(50%～70%)，尽管在高活动组与中、轻度活动组间未发现有统计学意义。
, http://www.100md.com
由于免疫印迹技术的应用，使ENA抗体的检测更为简便，但因各家采用检测试剂不同，其结果很难达到一致。本组45例SLE患者中，除抗SS-A阳性率(73.3%)高于文献[5]报道外，其余各项指标均与多数学者报道结果一致。我们试图在活动与非活动组间分析ENA多肽抗体谱与CyP自身抗体的关系，但结果尚未发现二者间存在有某种关联。有趣的是，我们发现在CyP抗体阳性者中，有15例相对分子质量为31 000蛋白抗体阳性，这是因转印技术原因所致的杂带抑或抗CyP与该蛋白抗体确有关联?尚需继续观察。本研究结果还发现，部分多肽抗体与某些临床症状相关联，诸如抗U1-RNP与皮肤、粘膜损害，抗SS-A与心脏病变，抗SS-A与补体降低，抗Scl-70与雷诺现象等(资料未列出)，但由于SLE病因极为复杂，其血清学指标存在诸多异常，因而很难预测某种单一抗体在上述临床症状形成中的意义，作者认为某种临床表现亦可能是由多种自身抗体综合作用的结果。■
作者简介：令狐颖(1971-),女,贵州贵阳人,主管技师,医学学士,从事临床检验专业,现在贵州省临床检验中心工作
, http://www.100md.com
参考文献：
[1]Hargai M,Hara M,Takahashi N et al.Presence of autoantibodies to peptidyl-prolyl cis-trans isomerase (cydosporin A binding protein) in systemic lupvs erythematosvs[J].Chin Immunol Immunopathol,1992,63:58.
[2]Bombardier C,Gladman DD,Urowitz MB et al.Derivation of the SLEDAI: a disease activity index for lupus patients[J].Arthritis Rheum,1992,35:630～640.
[3]武建国主编.实用临床免疫学检验[M].南京：江苏科学技术出版社，1990.266～
[4]虞 伟，李芳秋，赵 权 等.CyPA三类Ig自身抗体测定方法的建立与临床应用[J].临床检验杂志，1998，16(5)：262～264.
[5]黄立群，彭秀云，沈 霞 等.245例风湿性疾病的自身抗体谱检测及临床意义[J].实用医学杂志，1994，10(6)：584～586.
收稿日期：1999-06-15, 百拇医药
单位：南京军区南京总医院解放军医学检验中心，江苏南京 210002
关键词：亲环素；抗亲环素自身抗体；ENA多肽抗体谱；系统性红斑狼疮
医学研究生学报000219分类号：R392.11 文献标识码：
文章编号：1008-8199(2000)02-0134-01▲
0 引言
系统性红斑狼疮(SLE)是一种全身性的自身免疫病，其血清学异常常表现为产生一系列特异的自身抗体，如抗Sm、抗ds-DNA、抗U1-RNP等，其中可提取的核抗原(ENA)多肽抗体谱的出现在SLE的发病机制中具有重要作用。近年来，国外有学者发现SLE患者存在有较高水平的亲环素(CyP)自身抗体，并与疾病的活动性密切相关[1]。为探讨CyP自身抗体与ENA多肽抗体间的关系，作者以SLE患者为研究对象，对二者进行了测定和比较，现报告如下。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 主要试剂 重组人CyPA(rhCyPA)抗原、辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗人γ、α、μ链抗体的F(ab＇)2片段，均由本科自行研制[3，4]。
1.2 研究对象 SLE患者45例，为南京市鼓楼医院免疫科、山东医科大学附属医院及本院确诊的患者，均符合1982年美国风湿病学会SLE诊断标准，其中男4例，女41例，平均年龄28.9(12～62)岁。根据Bombardier[2]提供的疾病活动指数(DAI)标准进行评分，将SLE患者分为疾病活动组(轻、中、高)与非活动组；正常对照30例，为本院健康体检者，年龄、性别与SLE组大致匹配。所有研究对象均取静脉血，肝素抗凝，及时分离血浆，置-20℃冰箱冻存待检。
1.3 抗CyP自身抗体检测 采用间接ELISA法[4]，于包被有rhCyPA的微孔板内加入1∶50稀释的待测血浆，并同时设阳性、阴性与空白对照，37℃温育后，依次加入HRP标记的抗人γ、α、μ链的F(ab＇)2和TMB-H2O2底物，终止反应后于450 nm测吸光度(A)值，结果以正常对照组吸光度均值加3倍标准差(
+3s)为为正常上限。, 百拇医药
1.4 ENA多肽抗体谱检测 采用免疫印迹法，试剂盒购自广州万孚生物技术有限公司，操作按说明书。
2 结果
2.1 抗CyP测定结果 30例健康正常人检出有CyP抗体者仅1例(3.3%)，而45例SLE患者中检出23例，阳性率达51.1%，较对照组显著增高(P<0.01)，其抗体检出水平随SLE疾病活动程度增高而呈逐渐上升趋势(表1)。
表1 SLE患者CyP自身抗体测定结果
Table 1 Detection result of CyP autoantibodies in SLE patients Group
n
CyP antibody positive number
, 百拇医药
IgG
IgA
IgM
Total positive(%)
Inactive
2
0
0
1
1(50.0)*
Slight active
7
, 百拇医药 2
2
2
4(57.1)*
Secondary active
10
5
2
2
6(60.0)*
High active
10
, 百拇医药 4
2
4
7(70.0)*
Remainder
16
3
1
2
5(31.3)*
Normal control
30
1
, 百拇医药
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0
1(3.3)
* vs normal contro， P<0.05
2.2 ENA多肽抗体测定结果及与CyP抗体比较 在45例SLE患者中，共检出有抗Sm者31例(70.5%)，抗SS-A 33例(73.7%)，抗SS-B 16例(35.6%)，抗U1-RNP 16例(35.6%)，抗U1-RNP 16例(35.6%)，抗Jo-1 2例(4.4%)，抗Scl-70 2例(4.4%)，其中前五种抗体有显著统计学意义(P<0.01)，但SLE患者CyP抗体与ENA多肽抗体谱间未发现有相关关系。
3 讨论
许多研究结果表明，SLE的发生发展及其复杂的临床表现与其产生的高滴度自身抗体有关。我们以往的研究工作证实，SLE患者中，CyP抗体阳性患者同时伴有皮肤、粘膜损害，关节痛，发热及白细胞减少的发生频率明显高于CyP抗体阴性组，提示该抗体的存在可以作为评价SLE活动程度的指标。本组研究中，有51.1%的SLE患者产生了抗CyP自身抗体，明显高于正常对照组(3.3%)。三类Ig中又以IgG类抗CyP为最高，其阳性率分别为IgG(35.6%)、IgA(20%)、IgM(22.4%)，与Hargai等[1]报道结果一致，且CyP抗体检出水平随SLE活动度的增加而呈逐渐上升趋势(50%～70%)，尽管在高活动组与中、轻度活动组间未发现有统计学意义。
, http://www.100md.com
由于免疫印迹技术的应用，使ENA抗体的检测更为简便，但因各家采用检测试剂不同，其结果很难达到一致。本组45例SLE患者中，除抗SS-A阳性率(73.3%)高于文献[5]报道外，其余各项指标均与多数学者报道结果一致。我们试图在活动与非活动组间分析ENA多肽抗体谱与CyP自身抗体的关系，但结果尚未发现二者间存在有某种关联。有趣的是，我们发现在CyP抗体阳性者中，有15例相对分子质量为31 000蛋白抗体阳性，这是因转印技术原因所致的杂带抑或抗CyP与该蛋白抗体确有关联?尚需继续观察。本研究结果还发现，部分多肽抗体与某些临床症状相关联，诸如抗U1-RNP与皮肤、粘膜损害，抗SS-A与心脏病变，抗SS-A与补体降低，抗Scl-70与雷诺现象等(资料未列出)，但由于SLE病因极为复杂，其血清学指标存在诸多异常，因而很难预测某种单一抗体在上述临床症状形成中的意义，作者认为某种临床表现亦可能是由多种自身抗体综合作用的结果。■
作者简介：令狐颖(1971-),女,贵州贵阳人,主管技师,医学学士,从事临床检验专业,现在贵州省临床检验中心工作
, http://www.100md.com
参考文献：
[1]Hargai M,Hara M,Takahashi N et al.Presence of autoantibodies to peptidyl-prolyl cis-trans isomerase (cydosporin A binding protein) in systemic lupvs erythematosvs[J].Chin Immunol Immunopathol,1992,63:58.
[2]Bombardier C,Gladman DD,Urowitz MB et al.Derivation of the SLEDAI: a disease activity index for lupus patients[J].Arthritis Rheum,1992,35:630～640.
[3]武建国主编.实用临床免疫学检验[M].南京：江苏科学技术出版社，1990.266～
[4]虞 伟，李芳秋，赵 权 等.CyPA三类Ig自身抗体测定方法的建立与临床应用[J].临床检验杂志，1998，16(5)：262～264.
[5]黄立群，彭秀云，沈 霞 等.245例风湿性疾病的自身抗体谱检测及临床意义[J].实用医学杂志，1994，10(6)：584～586.
收稿日期：1999-06-15, 百拇医药