协调性异种肝移植免疫病理学的实验研究谈
作者：景旺 张绍庚 杨甲梅 钱光相 吴孟超
单位：钱光相(第二军医大学东方肝胆外科医院，上海 200433)；杨甲梅(第二军医大学东方肝胆外科医院，上海 200433)；吴孟超(第二军医大学东方肝胆外科医院，上海 200433)；谈景旺(南京军区福州总医院肝胆外科中心,福州 350025)；张绍庚(南京军区福州总医院肝胆外科中心,福州 350025)
关键词：肝移植；移植；异种；病理学
第二军医大学学报000221 摘 要：目的：观察协调性异种肝移植免疫病理变化，探讨其免疫排斥反应机制。方法：建立仓鼠到大鼠原位肝移植模型，运用组织学方法检测异种肝移植受体脾脏、淋巴结的组织学的改变；采用免疫组织化学的方法检测移植肝大鼠抗体的沉着、淋巴细胞的浸润及穿孔素、Fas-L的表达；原位末端标记方法(TUNEL)检测移植肝细胞凋亡。结果：在移植免疫排斥反应中，受体脾脏、淋巴结内淋巴细胞迅速增殖；移植肝3 d后出现越来越多的大鼠抗体沉着和淋巴细胞浸润，并表达穿孔素、Fas-L，随之遭受免疫损害而产生大量的细胞凋亡及细胞坏死。结论：协调性异种肝移植免疫排斥反应中，T淋巴细胞可通过产生穿孔素、Fas-L而使供肝细胞凋亡或坏死；脾脏可产生大量抗体沉着于移植物而致免疫损害。
, 百拇医药
分类号：R 657.3 文献标识码：A
文章编号：0258-879X(2000)02-0166-03
The immunopathology in concordant liver xenograft
YANG Jia-Mei
(Department of Hepatobiliary Surgery, Eastern Hospital of Hepatobiliary Surgery, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
QIAN Guang-Xiang
(Department of Hepatobiliary Surgery, Eastern Hospital of Hepatobiliary Surgery, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
, 百拇医药
WU Meng-Chao
(Department of Hepatobiliary Surgery, Eastern Hospital of Hepatobiliary Surgery, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
TAN Jing-Wang
(Department of Hepatobiliary Surgery,Fuzhou General Hospital,Nanjing command Area, Fuzhou 350025, China)
ZHANG Shao-Geng
(Department of Hepatobiliary Surgery,Fuzhou General Hospital,Nanjing command Area, Fuzhou 350025, China)
, 百拇医药
ABSTRACT：Objectives： To investigate the immunopathologic change in the rejection of liver xenograft. Methods: After orthotopic liver transplantation model was established, the histologic change of spleen,lymphocyte node and the graft was observed histologically; the expression of perforin and Fas-L and the deposits of antibody was detected by immunohistochemistry; the apoptosis in grafts was examined by histology and TUNEL. Results: In the xenogenic rejection,the spleen and lymphocyte node proliferate rapidly and become larger. In the graft, the antibody deposits, the T lymphocyte infiltration,the expression of Fas-L and perforin could be detected, and increasing as time passes, the incidence of hepatocyte apoptosis increased markedly,too. Conclusion: In the xenogenic rejection,the antibody and T cell mediated-cytotoxicity plays an important role, T cell make the target cell necrotic or apoptotic by the pathway of Fas-L and perforin.
, 百拇医药
KEY WORDS：liver transplantation; transplantation, heterologous; pathology▲
异种移植是解决供体器官不足的根本办法。基因工程等技术的迅猛发展，显示了异种移植的广阔前景。基于异种器官具有选择方便、来源丰富、大小适宜等优点，人们的兴趣重新转向了异种移植的研究，目前存在关键的问题仍然是异种移植免疫学方面的障碍。我们在建立仓鼠到大鼠原位肝移植模型的基础上，运用免疫学、病理学等方法检测异种移植免疫排斥反应时的受体器官病理变化,探讨其免疫排斥反应机制。
1 材料和方法
1.1 原位肝移植动物模型的建立 (1) 实验动物 供体:仓鼠(上海计划生育研究所动物中心提供)，雌性，40～46 d龄，体质量110～150 g；受体 ：近交系Wistar大鼠(中科院上海分院动物中心提供)，雄性，50～60 d龄，体质量150～220 g。 (2) 操作步骤： 采用改进的Harihara法[1]，简述如下：供体氯胺酮麻醉，“十”字切口，游离肝周韧带及血管，并切除胆囊，结扎肝动脉，然后经门静脉插管，4℃乳酸盐液灌注，取下供肝，各血管套好套管后4℃冷藏待植。受体乙醚麻醉，切除受体肝脏，植入供肝，各血管袖套吻合，胆管内置管引流。
, 百拇医药
1.2 取材 分别于术后1，3，5，7 d处死动物，每组至少3只，留取受体脾、淋巴结及移植肝冻存，待检测。
1.3 普通组织学检查 常规石蜡切片，苏木精-伊红(HE)染色，常规光镜下观察。
1.4 免疫组织化学检查 (1) CD4，CD8，Fas-L，穿孔素的检测：取上述新鲜肝组织标本，液氮速冻，-80℃保存，冰冻切片ABC法[2]免疫组化染色。一抗：小鼠抗大鼠CD3，CD4，CB8单克隆杭体(均为Serotec公司产品，日本学者吴笑山博士惠赠)，Fas-L免抗人、大鼠等多克隆抗体(北京中山公司产品)，小鼠穿孔素多克隆抗体(美国Podack博士惠赠)。 二抗：生物素化羊抗小鼠单克隆抗体(华美公司产品)、生物素化羊抗兔单克隆抗体(华美公司产品)。(2)移植肝大鼠抗体沉着及脾脏大鼠抗体产生的检测： 直接运用生物素化兔抗大鼠抗体(华美公司产品)检测大鼠抗体。 DAB染色，苏木精复染，常规封片。
, 百拇医药
1.5 肝细胞凋亡的检测 参见TUNEL法[3]标记凋亡肝细胞。主要试剂：末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)、生物素化的dUTP(Biotin-11-dUTP)、亲和素碱性磷酸酶(Avidin-AKP)、显色液为NBT+BCIP(宝灵曼公司产品)。结果判断：细胞核染成蓝色者为阳性细胞，即凋亡细胞，表现为固缩状、或向核周边集聚、或呈碎片状等。
2 结 果
2.1 移植肝脏病理变化 术后第1天，肝组织结构正常，无淋巴细胞浸润；术后第3天，肝组织结构轻度损害，门管区可见少量的淋巴细胞浸润(图1A)；术后5 d，肝组织结构严重损害，肝间质及门管区可见大量的淋巴细胞浸润；术后第7天，肝组织结构进一步损害，动物死亡。
2.2 脾脏及淋巴细胞的病理变化 术后第1天，脾脏及淋巴细胞迅速增殖，术后5 d达到高峰；整个脾脏增大约4～5倍，其中边缘区增厚最为明显。
, 百拇医药
2.3 移植肝的淋巴细胞的分型 普通组织学观察结果显示，移植肝术后3 d可见少量的淋巴细胞浸润，术后5 d达到高峰；免疫组织化学的结果证实浸润的淋巴细胞包括CD4，CD8亚型T淋巴细胞，其中以CD8细胞为主。
2.4 移植肝穿孔素、Fas-L的表达 移植肝术后4 d可见少量穿孔素、Fas-L的表达，术后5～6 d达到高峰，穿孔素表达始终较Fas-L高(图1 B，C)。
图1 肝脏异种移植术后病理变化
Fig 1 Pathologic and histochemical changes of liver tissue after xenograft
A: The histopathologic manifestations characteristic of xenograft rejection detected 3 d after transplantation (×66)；
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B: The expression of perforin in liver grafts 5 d after xenograft (×400);
C: The expression of Fas-L in live grafts 5 d after xenograft (×400)
2.5 移植肝细胞凋亡的检测结果 普通组织学及原位末端标记方法均显示异种组术后1 d即可见少量的细胞凋亡，术后2 d稍下降，术后4 d迅速增加，第5～6天达到高峰。
2.6 移植肝大鼠抗体沉着、脾脏产生大鼠抗体的检测 异种组术后3 d，即可见移植肝大鼠抗体的沉着，逐日增加，至第5～6天达到高峰；术后3 d，脾脏边缘区即可见大鼠抗体的产生，逐日增加，术后5 d达到高峰。
3 讨 论
, 百拇医药
异种肝移植分为非协调性与协调性两种，既往的研究主要集中在非协调性异种移植上，发现其免疫排斥反应较剧烈，移植物建立血流后，天然抗体、补体系统、内皮细胞三大免疫因素相互作用，致移植物迅速遭受破坏而失去功能，而在协调性异种肝移植免疫排斥反应中，上述三大免疫因素作用不明显，而其他的免疫因素如细胞、体液作用相对较强，但具体作用机制目前尚不尽明确[1]。
众所周知，同种移植免疫排斥反应主要为细胞免疫，而在异种移植免疫排斥反应中，目前还没有肯定的答案。Thomas等[4]的研究发现，缺乏T淋巴细胞和NK细胞并不能减轻其免疫排斥反应和延长受体的存活时间，据此推断异种抗原不同于同种抗原，无须细胞免疫的参与，这与其他的学者的发现相矛盾，如实验运用CD4、CD8 单克隆抗体可延长仓鼠移植到大鼠心脏的存活时间，间接证实细胞免疫的作用[5]。我们的结果也显示异种移植免疫排斥反应发生时，移植肝中存在大量淋巴细胞浸润，并且表达穿孔素及Fas-L。据研究，穿孔素为T淋巴细胞和NK细胞激活产生的主要效应物质，通过使靶细胞膜穿孔，致使靶细胞凋亡或坏死，而Fas-L则主要为T淋巴细胞激活的产物，可通过与靶细胞的Fas抗原结合，使靶细胞内发生一系列的生化变化而最终凋亡[6，7]。因此，本实验结果直接证实细胞免疫在异种肝移植中的作用。Thomas等之所以得出的结论不同，主要因为其所选择的实验对象为非协调性异种移植，其免疫排斥反应非常强烈，即使缺乏细胞免疫，同样可使移植物遭受致命的损害。
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细胞凋亡不同于细胞坏死，移植术后早期，异种移植肝与同基因间肝移植一样也出现细胞凋亡[7]，为缺血再灌注损伤所致，同基因肝移植术后早期细胞凋亡即明显减少，但与之不同的是异种移植肝术后4 d组细胞凋亡急剧增高，与移植肝中穿孔素、Fas-L的表达水平相一致，间接说明细胞免疫的作用。
除细胞免疫外，我们的实验结果还显示体液免疫也参与了其免疫排斥反应。不同于非协调性异种移植，移植物恢复血流后天然抗体即与移植物结合激活补体，产生超急性免疫排斥反应，而在协调性异种免疫排斥反应，异种抗原必需激活免疫系统，使脾脏边缘区增厚，产生抗体，沉积于移植肝，致使移植肝遭受破坏。
总之，免疫病理结果显示，在协调性异种肝移植免疫排斥反应中，移植物可通过激活淋巴细胞产生穿孔素、Fas-L致移植肝细胞凋亡或坏死；脾脏经边缘区分泌特异性抗体，致移植物遭受破坏。
作者简介：谈景旺(1968～)，男(汉族)，硕士，主治医师
, 百拇医药
参考文献：
[1]Harihara Y, San JR, Idesuki Y, et al. A modified cuff technique for super hepatic vena cava anastomosis[J]. Transplantation, 1992, 53(6):707-710.
[2]倪灿荣,宋亚贵. 免疫组织化学实验新技术及应用[M]. 北京: 北京科学技术出版社, 1993. 248-250.
[3]Gavriell Y,Sherman Y,Ben-Sasson SA.Identification of programmed cell death in situ via specific labelling of number DNA fragmentation[J]. J Cell Biol, 1992, 119(3):493-495.
, http://www.100md.com
[4]Thomas F,Aranneda O,Henretta J,et al.Extended and expanded studies of xenograft rejection in immunodeficient animal[J]. Transplant Proc,1994，26(3):1224-1227.
[5]Ibrahim S, Burdick J,Baldwin W， et al. CTLA4Ig inhibits humoral and cellular immune responses to concordant xenografts[J]. Transplant Proc,1996,28(2):715-718.
[6]Kabelitz D.Apoptosis,graft rejection,and transplantation tolerance[J].Transplantation,1998,65(7)：869-875.
[7]Kagi D,Vignanx F,Lederman B,et al.Fas and perforin pathways as major mechanisms of T cell mediated cytotoxicity[J].Science,1994,265(5171):528-530.
收稿日期：1999-07-05
修稿日期：1999-11-20, 百拇医药
单位：钱光相(第二军医大学东方肝胆外科医院，上海 200433)；杨甲梅(第二军医大学东方肝胆外科医院，上海 200433)；吴孟超(第二军医大学东方肝胆外科医院，上海 200433)；谈景旺(南京军区福州总医院肝胆外科中心,福州 350025)；张绍庚(南京军区福州总医院肝胆外科中心,福州 350025)
关键词：肝移植；移植；异种；病理学
第二军医大学学报000221 摘 要：目的：观察协调性异种肝移植免疫病理变化，探讨其免疫排斥反应机制。方法：建立仓鼠到大鼠原位肝移植模型，运用组织学方法检测异种肝移植受体脾脏、淋巴结的组织学的改变；采用免疫组织化学的方法检测移植肝大鼠抗体的沉着、淋巴细胞的浸润及穿孔素、Fas-L的表达；原位末端标记方法(TUNEL)检测移植肝细胞凋亡。结果：在移植免疫排斥反应中，受体脾脏、淋巴结内淋巴细胞迅速增殖；移植肝3 d后出现越来越多的大鼠抗体沉着和淋巴细胞浸润，并表达穿孔素、Fas-L，随之遭受免疫损害而产生大量的细胞凋亡及细胞坏死。结论：协调性异种肝移植免疫排斥反应中，T淋巴细胞可通过产生穿孔素、Fas-L而使供肝细胞凋亡或坏死；脾脏可产生大量抗体沉着于移植物而致免疫损害。
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分类号：R 657.3 文献标识码：A
文章编号：0258-879X(2000)02-0166-03
The immunopathology in concordant liver xenograft
YANG Jia-Mei
(Department of Hepatobiliary Surgery, Eastern Hospital of Hepatobiliary Surgery, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
QIAN Guang-Xiang
(Department of Hepatobiliary Surgery, Eastern Hospital of Hepatobiliary Surgery, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
, 百拇医药
WU Meng-Chao
(Department of Hepatobiliary Surgery, Eastern Hospital of Hepatobiliary Surgery, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
TAN Jing-Wang
(Department of Hepatobiliary Surgery,Fuzhou General Hospital,Nanjing command Area, Fuzhou 350025, China)
ZHANG Shao-Geng
(Department of Hepatobiliary Surgery,Fuzhou General Hospital,Nanjing command Area, Fuzhou 350025, China)
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ABSTRACT：Objectives： To investigate the immunopathologic change in the rejection of liver xenograft. Methods: After orthotopic liver transplantation model was established, the histologic change of spleen,lymphocyte node and the graft was observed histologically; the expression of perforin and Fas-L and the deposits of antibody was detected by immunohistochemistry; the apoptosis in grafts was examined by histology and TUNEL. Results: In the xenogenic rejection,the spleen and lymphocyte node proliferate rapidly and become larger. In the graft, the antibody deposits, the T lymphocyte infiltration,the expression of Fas-L and perforin could be detected, and increasing as time passes, the incidence of hepatocyte apoptosis increased markedly,too. Conclusion: In the xenogenic rejection,the antibody and T cell mediated-cytotoxicity plays an important role, T cell make the target cell necrotic or apoptotic by the pathway of Fas-L and perforin.
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KEY WORDS：liver transplantation; transplantation, heterologous; pathology▲
异种移植是解决供体器官不足的根本办法。基因工程等技术的迅猛发展，显示了异种移植的广阔前景。基于异种器官具有选择方便、来源丰富、大小适宜等优点，人们的兴趣重新转向了异种移植的研究，目前存在关键的问题仍然是异种移植免疫学方面的障碍。我们在建立仓鼠到大鼠原位肝移植模型的基础上，运用免疫学、病理学等方法检测异种移植免疫排斥反应时的受体器官病理变化,探讨其免疫排斥反应机制。
1 材料和方法
1.1 原位肝移植动物模型的建立 (1) 实验动物 供体:仓鼠(上海计划生育研究所动物中心提供)，雌性，40～46 d龄，体质量110～150 g；受体 ：近交系Wistar大鼠(中科院上海分院动物中心提供)，雄性，50～60 d龄，体质量150～220 g。 (2) 操作步骤： 采用改进的Harihara法[1]，简述如下：供体氯胺酮麻醉，“十”字切口，游离肝周韧带及血管，并切除胆囊，结扎肝动脉，然后经门静脉插管，4℃乳酸盐液灌注，取下供肝，各血管套好套管后4℃冷藏待植。受体乙醚麻醉，切除受体肝脏，植入供肝，各血管袖套吻合，胆管内置管引流。
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1.2 取材 分别于术后1，3，5，7 d处死动物，每组至少3只，留取受体脾、淋巴结及移植肝冻存，待检测。
1.3 普通组织学检查 常规石蜡切片，苏木精-伊红(HE)染色，常规光镜下观察。
1.4 免疫组织化学检查 (1) CD4，CD8，Fas-L，穿孔素的检测：取上述新鲜肝组织标本，液氮速冻，-80℃保存，冰冻切片ABC法[2]免疫组化染色。一抗：小鼠抗大鼠CD3，CD4，CB8单克隆杭体(均为Serotec公司产品，日本学者吴笑山博士惠赠)，Fas-L免抗人、大鼠等多克隆抗体(北京中山公司产品)，小鼠穿孔素多克隆抗体(美国Podack博士惠赠)。 二抗：生物素化羊抗小鼠单克隆抗体(华美公司产品)、生物素化羊抗兔单克隆抗体(华美公司产品)。(2)移植肝大鼠抗体沉着及脾脏大鼠抗体产生的检测： 直接运用生物素化兔抗大鼠抗体(华美公司产品)检测大鼠抗体。 DAB染色，苏木精复染，常规封片。
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1.5 肝细胞凋亡的检测 参见TUNEL法[3]标记凋亡肝细胞。主要试剂：末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)、生物素化的dUTP(Biotin-11-dUTP)、亲和素碱性磷酸酶(Avidin-AKP)、显色液为NBT+BCIP(宝灵曼公司产品)。结果判断：细胞核染成蓝色者为阳性细胞，即凋亡细胞，表现为固缩状、或向核周边集聚、或呈碎片状等。
2 结 果
2.1 移植肝脏病理变化 术后第1天，肝组织结构正常，无淋巴细胞浸润；术后第3天，肝组织结构轻度损害，门管区可见少量的淋巴细胞浸润(图1A)；术后5 d，肝组织结构严重损害，肝间质及门管区可见大量的淋巴细胞浸润；术后第7天，肝组织结构进一步损害，动物死亡。
2.2 脾脏及淋巴细胞的病理变化 术后第1天，脾脏及淋巴细胞迅速增殖，术后5 d达到高峰；整个脾脏增大约4～5倍，其中边缘区增厚最为明显。
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2.3 移植肝的淋巴细胞的分型 普通组织学观察结果显示，移植肝术后3 d可见少量的淋巴细胞浸润，术后5 d达到高峰；免疫组织化学的结果证实浸润的淋巴细胞包括CD4，CD8亚型T淋巴细胞，其中以CD8细胞为主。
2.4 移植肝穿孔素、Fas-L的表达 移植肝术后4 d可见少量穿孔素、Fas-L的表达，术后5～6 d达到高峰，穿孔素表达始终较Fas-L高(图1 B，C)。
图1 肝脏异种移植术后病理变化
Fig 1 Pathologic and histochemical changes of liver tissue after xenograft
A: The histopathologic manifestations characteristic of xenograft rejection detected 3 d after transplantation (×66)；
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B: The expression of perforin in liver grafts 5 d after xenograft (×400);
C: The expression of Fas-L in live grafts 5 d after xenograft (×400)
2.5 移植肝细胞凋亡的检测结果 普通组织学及原位末端标记方法均显示异种组术后1 d即可见少量的细胞凋亡，术后2 d稍下降，术后4 d迅速增加，第5～6天达到高峰。
2.6 移植肝大鼠抗体沉着、脾脏产生大鼠抗体的检测 异种组术后3 d，即可见移植肝大鼠抗体的沉着，逐日增加，至第5～6天达到高峰；术后3 d，脾脏边缘区即可见大鼠抗体的产生，逐日增加，术后5 d达到高峰。
3 讨 论
, 百拇医药
异种肝移植分为非协调性与协调性两种，既往的研究主要集中在非协调性异种移植上，发现其免疫排斥反应较剧烈，移植物建立血流后，天然抗体、补体系统、内皮细胞三大免疫因素相互作用，致移植物迅速遭受破坏而失去功能，而在协调性异种肝移植免疫排斥反应中，上述三大免疫因素作用不明显，而其他的免疫因素如细胞、体液作用相对较强，但具体作用机制目前尚不尽明确[1]。
众所周知，同种移植免疫排斥反应主要为细胞免疫，而在异种移植免疫排斥反应中，目前还没有肯定的答案。Thomas等[4]的研究发现，缺乏T淋巴细胞和NK细胞并不能减轻其免疫排斥反应和延长受体的存活时间，据此推断异种抗原不同于同种抗原，无须细胞免疫的参与，这与其他的学者的发现相矛盾，如实验运用CD4、CD8 单克隆抗体可延长仓鼠移植到大鼠心脏的存活时间，间接证实细胞免疫的作用[5]。我们的结果也显示异种移植免疫排斥反应发生时，移植肝中存在大量淋巴细胞浸润，并且表达穿孔素及Fas-L。据研究，穿孔素为T淋巴细胞和NK细胞激活产生的主要效应物质，通过使靶细胞膜穿孔，致使靶细胞凋亡或坏死，而Fas-L则主要为T淋巴细胞激活的产物，可通过与靶细胞的Fas抗原结合，使靶细胞内发生一系列的生化变化而最终凋亡[6，7]。因此，本实验结果直接证实细胞免疫在异种肝移植中的作用。Thomas等之所以得出的结论不同，主要因为其所选择的实验对象为非协调性异种移植，其免疫排斥反应非常强烈，即使缺乏细胞免疫，同样可使移植物遭受致命的损害。
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细胞凋亡不同于细胞坏死，移植术后早期，异种移植肝与同基因间肝移植一样也出现细胞凋亡[7]，为缺血再灌注损伤所致，同基因肝移植术后早期细胞凋亡即明显减少，但与之不同的是异种移植肝术后4 d组细胞凋亡急剧增高，与移植肝中穿孔素、Fas-L的表达水平相一致，间接说明细胞免疫的作用。
除细胞免疫外，我们的实验结果还显示体液免疫也参与了其免疫排斥反应。不同于非协调性异种移植，移植物恢复血流后天然抗体即与移植物结合激活补体，产生超急性免疫排斥反应，而在协调性异种免疫排斥反应，异种抗原必需激活免疫系统，使脾脏边缘区增厚，产生抗体，沉积于移植肝，致使移植肝遭受破坏。
总之，免疫病理结果显示，在协调性异种肝移植免疫排斥反应中，移植物可通过激活淋巴细胞产生穿孔素、Fas-L致移植肝细胞凋亡或坏死；脾脏经边缘区分泌特异性抗体，致移植物遭受破坏。
作者简介：谈景旺(1968～)，男(汉族)，硕士，主治医师
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参考文献：
[1]Harihara Y, San JR, Idesuki Y, et al. A modified cuff technique for super hepatic vena cava anastomosis[J]. Transplantation, 1992, 53(6):707-710.
[2]倪灿荣,宋亚贵. 免疫组织化学实验新技术及应用[M]. 北京: 北京科学技术出版社, 1993. 248-250.
[3]Gavriell Y,Sherman Y,Ben-Sasson SA.Identification of programmed cell death in situ via specific labelling of number DNA fragmentation[J]. J Cell Biol, 1992, 119(3):493-495.
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[4]Thomas F,Aranneda O,Henretta J,et al.Extended and expanded studies of xenograft rejection in immunodeficient animal[J]. Transplant Proc,1994，26(3):1224-1227.
[5]Ibrahim S, Burdick J,Baldwin W， et al. CTLA4Ig inhibits humoral and cellular immune responses to concordant xenografts[J]. Transplant Proc,1996,28(2):715-718.
[6]Kabelitz D.Apoptosis,graft rejection,and transplantation tolerance[J].Transplantation,1998,65(7)：869-875.
[7]Kagi D,Vignanx F,Lederman B,et al.Fas and perforin pathways as major mechanisms of T cell mediated cytotoxicity[J].Science,1994,265(5171):528-530.
收稿日期：1999-07-05
修稿日期：1999-11-20, 百拇医药