老年牙周炎患者中性粒细胞的研究
作者：毛钊 杨俭 丁传林 于晓勤
单位：毛钊(南京军区南京总医院口腔科，江苏南京 210002)；杨俭(江苏职工医科大学免疫室)；丁传林(江苏职工医科大学免疫室)；于晓勤(南京军区南京总医院口腔科，江苏南京 210002)
关键词：老年牙周炎；中性粒细胞功能
医学研究生学报000207摘 要：目的：研究老年牙周炎患者外周血中性粒细胞趋化功能和吞噬功能，并与成人慢性牙周炎、青少年牙周炎的中性粒细胞趋化和吞噬功能比较。方法：测定三组牙周炎患者外周血中性粒细胞趋化和吞噬功能，并进行比较。结果：老年牙周炎患者中性粒细胞移动指数明显低于成人慢性牙周炎和青少年牙周炎患者(P<0.05,P<0.01);吞噬能力和吞噬活性均较成人慢性牙周炎和青少年牙周炎患者明显减低(P<0.01)。结论：老年牙周炎患者中性粒细胞功能明显降低，可能是老年牙周炎发病率高、病情重、牙周组 织破坏明显、牙齿缺失多的主要原因之一。
, 百拇医药
分类号：R781.4 文献标识码：A
文章编号：1008-8199(2000)02-0089-02
Research on the functions of neutrophil leukocytes in elderly patients with periodontitis
MAO Zhao YU Xiao-qin
(Department of Odontology, Jinling Hospital, Nanjing 210002,Jiangsu,China)
YANG Jian DING Chuang-lin
(Department of Immunology,the Medical University for Workers and Staffs of Jiangsu,China)
, 百拇医药
Abstract：Objectives:Research on the functions of neutrophil leukocytes in elderly patients with periodontitis, matched with adult and juvenile patients. Methods:Chemotaxis and phagocytosis of neutrophil leukocytes were measured in the three groups of patients. Results:Chemotaxis and phagocytosis of neutrophil leukocytes in elderly patients were much lower than those in adult and juvenile patients(P<0.05,P<0.01). Conclusions:Defect of host defense may be one of the major factors causing periodontitis in elderly patients.
, 百拇医药
Key words：Periodontitis in elderly patients; Function of neutrophil leukocytes▲
0 引言
国内外一些学者发现青少年牙周炎、快速进展型牙周炎的中性粒细胞功能障碍[1]，但对于老年牙周炎的中性粒细胞功能状况未见报道。本研究通过观察老年牙周炎患者中性粒细胞功能变化，并与成人慢性牙周炎和青少年牙周炎中性粒细胞功能进行比较，以期探索老年牙周炎的病因及发病机制，为诊断和治疗提供科学依据。
1 对象和方法
1.1 研究对象 患者选自我院牙周病门诊、临床检查和口腔X线片诊断为慢性牙周炎的老年患者10例(老年组)，平均年龄70.5(65～79)岁；成年患者10例(成年组)，平均年龄46.1(40～54)岁；按Baer(1971年)的标准诊断青少年牙周炎患者8例(青少年组)，平均年龄20.6(16～28)岁。凡经临床和实验室检查非全口牙周炎患者；有免疫缺陷病、内分泌疾病、肝肾功能异常、出血性疾病和血液病、变态反应性疾病及严重的心血管疾病者；3个月内服用过抗生素和做过牙周系统治疗者均排除在外。三组牙周袋深度比较基本一致，即老年组为(5.23±1.76) mm，成年组为(4.94±1.96) mm，青少年组为(5.34±2.04) mm，P>0.05。
, 百拇医药
1.2 白细胞悬液的制备 抽取静脉血3 ml，肝素抗凝，用37℃自然沉降法沉淀红细胞，吸出白细胞，经洗涤后，用含10%牛血清的RPMI 1640液配成5×107/ml白细胞悬液。
1.3 中性粒细胞趋化功能检查 采用琼脂糖玻板法[2]：①用1640液配制琼脂糖溶液，含10%灭活AB血清，倾注在玻板上，待凝后，分组打孔，每组为3个呈直线排列的圆孔，孔的直径和孔间距离为2.5 mm。②于三孔一组的中间孔中加入5 μl白细胞悬液(5×107/ml)，在一侧孔中加入大肠杆菌24 h培养过滤液5 μl作为趋化因子。另一侧孔中加入5 μl的1640液作为对照。③将此琼脂糖玻板在饱和湿度和5%CO2气体的37℃温箱中温育4 h。取出后用甲醇甲醛固定，去除琼脂糖凝胶，用Wright染色，光镜下测量细胞从孔缘向两侧孔移动的距离(图1)。
, 百拇医药
图1 中性粒细胞趋化功能示意图
Figure 1 Chart of the function of chemotaxis
and spontaneous migration of neutrophil leukocytes
a.leukocyte b.chemoattractant c.RPMI 1640
migration index=B/A
1.4 中性粒细胞的吞噬功能检查[2]
1.4.1 菌液制备 取白色葡萄球菌在琼脂斜面上生长24 h，用无菌等渗盐水刮洗菌落，用PBS洗涤2次，最后用比浓法将菌液调整成5×107/ml 的悬液(悬液100℃加热15 min，4℃冰箱保存备用)。
, 百拇医药
1.4.2 步骤 ①取3滴含肝素的血液于凹玻片上，继加白色葡萄球菌悬液3 滴，混匀，放在密闭湿盒内，置于37℃下培养30 min，每隔10 min振摇1次；②用毛细吸管取血1滴，在载玻片上推成薄片，甲醇固定，姬姆萨染色；③光镜下计数100个中性粒细胞，计算下列指标：吞噬能力＝100 个 中性粒细胞吞噬细菌的总数。
2 结果
2.1 中性粒细胞趋化功能 老年组的移动指数(A/B)为(2.06±0.53)，成年组为(2.94±0.58)，青少年组为(3.56±0.75)，老年组移动指数与成年组及青少年组比较，差异均显著(P<0.05，P<0.01)，而成年组移动指数与青少年组比较差异不显著。说明老年牙周炎患者中性粒细胞趋化功能较成人慢性牙周炎患者和青少年牙周炎患者明显低(表1)。
表1 中性粒细胞趋化功能的比较
, 百拇医药
Table 1 The function of chemotaxis and
spontaneous migration of neutrophil leukocytes Groups
n
A
B
A/B
Old people
10
0.87±0.15
0.44±0.16
2.06±0.53*△
, 百拇医药
Adult
10
0.75±0.17
0.27±0.10
2.94±0.58
Teenager
8
0.84±0.20
0.25±0.09
3.56±0.75
*Compared with adult group,P<0.05；
, 百拇医药 △Compared with teen-ager group,P<0.01
2.2 中性粒细胞吞噬功能 老年组中性粒细胞的吞噬能力和吞噬活性分别是(292.00±43.69)、(72.22±4.05)；成年组分别是(365.29±28.75)、(81.57±2.98)；青少年组分别是(390.00±35.95)、(80.40±2.84)。老年组的吞噬能力及吞噬活性与成年组及青少年组比较差异均显著(P<0.01)，而成年组的吞噬功能及吞噬活性与青少年组比较差异不显著。说明老年牙周炎患者的吞噬功能较成人牙周炎患者和青少年牙周炎患者明显降低(表2)。
表2 中性粒细胞吞噬功能的比较
Table 2 The function of phagocytosis
of neutrophil leukocytes Groups
, http://www.100md.com
n
Phagocytotic ability
Phagocytotic activity
Old people
10
292.00±43.69△*
72.22±4.05△*
Adult
10
365.29±28.75
81.57±2.98
, 百拇医药
Teenager
8
390.00±35.95
80.40±2.84
*Compared with adult group,P<0.01；
△Compared with teen-ager group,P<0.01
3 讨论
目前，多数学者认为中性粒细胞在抵抗牙周感染中是重要的保护细胞，这已在局限性青少年牙周炎的研究中得到了证实[3,4]。章锦才等也发现局限性青少年牙周炎患者，特别是快速进展型牙周炎患者，中性粒细胞趋化功能降低而吞噬功能正常，他认为由于中性粒细胞趋化功能减弱，使青少年牙周炎患者对特定的局部细菌易感，造成牙周组织的快速破坏[5]。本研究发现老年牙周炎患者中性粒细胞趋化功能和吞噬功能均较成人牙周炎患者和青少年牙周炎患者明显降低。提示在老年牙周炎患者中性粒细胞功能明显障碍，部分失去了中性粒细胞抵抗牙周感染的重要保护作用，造成老年牙周炎较其他类型牙周炎具有发病率高、病情重、牙周组织破坏明显、牙齿缺失多的特点。同时还提示中性粒细胞功能异常是牙周疾病发展的危险因素。
, http://www.100md.com
有一些研究认为，当中性粒细胞保护功能障碍时，牙周组织是最先遭受影响的组织器官之一[6]，本研究也支持这一观点。然而，还有一些研究发现，许多牙周病病原菌的毒性因子如抗吞噬因子和淋巴因子能降低中性粒细胞的保护功能[6]，那么，老年牙周炎患者局部病原菌对全身中性粒细胞功能是否有影响，本研究无法确切回答，有待进一步探讨。■
作者简介：毛钊(1959-),男,南京市人,副主任医师,口腔医学硕士,从事口腔医学牙周病专业
参考文献：
[1]Aluman LC.Assessment of host defenses and serun antibodies to suspected periodontal pathogens in patients with various types of periodontitis[J].J Periodont Res,1982,17:495.
, 百拇医药
[2]上海市医学化验所主编.临床免疫学检验(上册)[M].上海：上海科技出版社，1983.114～115.
[3]Van Dyke TE.Role of the neutrophil in oral disease:receptor deficiency in leukocytes in patients with juvenile periodontitis[J].Rev Infect Dis,1985,7:94.
[4]Van Dyke TE,Levine MJ,Genco RJ.Neutrophil function and oral disease[J].J Oral Pathol,1985,14:94.
[5]章锦才，张举之.青少年牙周炎患者中性多核白细胞功能的初步研究[J].中华口腔医学杂志，1987，22(3)：131.
[6]Genco RJ,Slots J.Host responsesin periodontal disease[J].J Dent Res,1984,63:441.
收稿日期：1999-08-30
, 百拇医药
单位：毛钊(南京军区南京总医院口腔科，江苏南京 210002)；杨俭(江苏职工医科大学免疫室)；丁传林(江苏职工医科大学免疫室)；于晓勤(南京军区南京总医院口腔科，江苏南京 210002)
关键词：老年牙周炎；中性粒细胞功能
医学研究生学报000207摘 要：目的：研究老年牙周炎患者外周血中性粒细胞趋化功能和吞噬功能，并与成人慢性牙周炎、青少年牙周炎的中性粒细胞趋化和吞噬功能比较。方法：测定三组牙周炎患者外周血中性粒细胞趋化和吞噬功能，并进行比较。结果：老年牙周炎患者中性粒细胞移动指数明显低于成人慢性牙周炎和青少年牙周炎患者(P<0.05,P<0.01);吞噬能力和吞噬活性均较成人慢性牙周炎和青少年牙周炎患者明显减低(P<0.01)。结论：老年牙周炎患者中性粒细胞功能明显降低，可能是老年牙周炎发病率高、病情重、牙周组 织破坏明显、牙齿缺失多的主要原因之一。
, 百拇医药
分类号：R781.4 文献标识码：A
文章编号：1008-8199(2000)02-0089-02
Research on the functions of neutrophil leukocytes in elderly patients with periodontitis
MAO Zhao YU Xiao-qin
(Department of Odontology, Jinling Hospital, Nanjing 210002,Jiangsu,China)
YANG Jian DING Chuang-lin
(Department of Immunology,the Medical University for Workers and Staffs of Jiangsu,China)
, 百拇医药
Abstract：Objectives:Research on the functions of neutrophil leukocytes in elderly patients with periodontitis, matched with adult and juvenile patients. Methods:Chemotaxis and phagocytosis of neutrophil leukocytes were measured in the three groups of patients. Results:Chemotaxis and phagocytosis of neutrophil leukocytes in elderly patients were much lower than those in adult and juvenile patients(P<0.05,P<0.01). Conclusions:Defect of host defense may be one of the major factors causing periodontitis in elderly patients.
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Key words：Periodontitis in elderly patients; Function of neutrophil leukocytes▲
0 引言
国内外一些学者发现青少年牙周炎、快速进展型牙周炎的中性粒细胞功能障碍[1]，但对于老年牙周炎的中性粒细胞功能状况未见报道。本研究通过观察老年牙周炎患者中性粒细胞功能变化，并与成人慢性牙周炎和青少年牙周炎中性粒细胞功能进行比较，以期探索老年牙周炎的病因及发病机制，为诊断和治疗提供科学依据。
1 对象和方法
1.1 研究对象 患者选自我院牙周病门诊、临床检查和口腔X线片诊断为慢性牙周炎的老年患者10例(老年组)，平均年龄70.5(65～79)岁；成年患者10例(成年组)，平均年龄46.1(40～54)岁；按Baer(1971年)的标准诊断青少年牙周炎患者8例(青少年组)，平均年龄20.6(16～28)岁。凡经临床和实验室检查非全口牙周炎患者；有免疫缺陷病、内分泌疾病、肝肾功能异常、出血性疾病和血液病、变态反应性疾病及严重的心血管疾病者；3个月内服用过抗生素和做过牙周系统治疗者均排除在外。三组牙周袋深度比较基本一致，即老年组为(5.23±1.76) mm，成年组为(4.94±1.96) mm，青少年组为(5.34±2.04) mm，P>0.05。
, 百拇医药
1.2 白细胞悬液的制备 抽取静脉血3 ml，肝素抗凝，用37℃自然沉降法沉淀红细胞，吸出白细胞，经洗涤后，用含10%牛血清的RPMI 1640液配成5×107/ml白细胞悬液。
1.3 中性粒细胞趋化功能检查 采用琼脂糖玻板法[2]：①用1640液配制琼脂糖溶液，含10%灭活AB血清，倾注在玻板上，待凝后，分组打孔，每组为3个呈直线排列的圆孔，孔的直径和孔间距离为2.5 mm。②于三孔一组的中间孔中加入5 μl白细胞悬液(5×107/ml)，在一侧孔中加入大肠杆菌24 h培养过滤液5 μl作为趋化因子。另一侧孔中加入5 μl的1640液作为对照。③将此琼脂糖玻板在饱和湿度和5%CO2气体的37℃温箱中温育4 h。取出后用甲醇甲醛固定，去除琼脂糖凝胶，用Wright染色，光镜下测量细胞从孔缘向两侧孔移动的距离(图1)。
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图1 中性粒细胞趋化功能示意图
Figure 1 Chart of the function of chemotaxis
and spontaneous migration of neutrophil leukocytes
a.leukocyte b.chemoattractant c.RPMI 1640
migration index=B/A
1.4 中性粒细胞的吞噬功能检查[2]
1.4.1 菌液制备 取白色葡萄球菌在琼脂斜面上生长24 h，用无菌等渗盐水刮洗菌落，用PBS洗涤2次，最后用比浓法将菌液调整成5×107/ml 的悬液(悬液100℃加热15 min，4℃冰箱保存备用)。
, 百拇医药
1.4.2 步骤 ①取3滴含肝素的血液于凹玻片上，继加白色葡萄球菌悬液3 滴，混匀，放在密闭湿盒内，置于37℃下培养30 min，每隔10 min振摇1次；②用毛细吸管取血1滴，在载玻片上推成薄片，甲醇固定，姬姆萨染色；③光镜下计数100个中性粒细胞，计算下列指标：吞噬能力＝100 个 中性粒细胞吞噬细菌的总数。
2 结果
2.1 中性粒细胞趋化功能 老年组的移动指数(A/B)为(2.06±0.53)，成年组为(2.94±0.58)，青少年组为(3.56±0.75)，老年组移动指数与成年组及青少年组比较，差异均显著(P<0.05，P<0.01)，而成年组移动指数与青少年组比较差异不显著。说明老年牙周炎患者中性粒细胞趋化功能较成人慢性牙周炎患者和青少年牙周炎患者明显低(表1)。
表1 中性粒细胞趋化功能的比较
, 百拇医药
Table 1 The function of chemotaxis and
spontaneous migration of neutrophil leukocytes Groups
n
A
B
A/B
Old people
10
0.87±0.15
0.44±0.16
2.06±0.53*△
, 百拇医药
Adult
10
0.75±0.17
0.27±0.10
2.94±0.58
Teenager
8
0.84±0.20
0.25±0.09
3.56±0.75
*Compared with adult group,P<0.05；
, 百拇医药 △Compared with teen-ager group,P<0.01
2.2 中性粒细胞吞噬功能 老年组中性粒细胞的吞噬能力和吞噬活性分别是(292.00±43.69)、(72.22±4.05)；成年组分别是(365.29±28.75)、(81.57±2.98)；青少年组分别是(390.00±35.95)、(80.40±2.84)。老年组的吞噬能力及吞噬活性与成年组及青少年组比较差异均显著(P<0.01)，而成年组的吞噬功能及吞噬活性与青少年组比较差异不显著。说明老年牙周炎患者的吞噬功能较成人牙周炎患者和青少年牙周炎患者明显降低(表2)。
表2 中性粒细胞吞噬功能的比较
Table 2 The function of phagocytosis
of neutrophil leukocytes Groups
, http://www.100md.com
n
Phagocytotic ability
Phagocytotic activity
Old people
10
292.00±43.69△*
72.22±4.05△*
Adult
10
365.29±28.75
81.57±2.98
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Teenager
8
390.00±35.95
80.40±2.84
*Compared with adult group,P<0.01；
△Compared with teen-ager group,P<0.01
3 讨论
目前，多数学者认为中性粒细胞在抵抗牙周感染中是重要的保护细胞，这已在局限性青少年牙周炎的研究中得到了证实[3,4]。章锦才等也发现局限性青少年牙周炎患者，特别是快速进展型牙周炎患者，中性粒细胞趋化功能降低而吞噬功能正常，他认为由于中性粒细胞趋化功能减弱，使青少年牙周炎患者对特定的局部细菌易感，造成牙周组织的快速破坏[5]。本研究发现老年牙周炎患者中性粒细胞趋化功能和吞噬功能均较成人牙周炎患者和青少年牙周炎患者明显降低。提示在老年牙周炎患者中性粒细胞功能明显障碍，部分失去了中性粒细胞抵抗牙周感染的重要保护作用，造成老年牙周炎较其他类型牙周炎具有发病率高、病情重、牙周组织破坏明显、牙齿缺失多的特点。同时还提示中性粒细胞功能异常是牙周疾病发展的危险因素。
, http://www.100md.com
有一些研究认为，当中性粒细胞保护功能障碍时，牙周组织是最先遭受影响的组织器官之一[6]，本研究也支持这一观点。然而，还有一些研究发现，许多牙周病病原菌的毒性因子如抗吞噬因子和淋巴因子能降低中性粒细胞的保护功能[6]，那么，老年牙周炎患者局部病原菌对全身中性粒细胞功能是否有影响，本研究无法确切回答，有待进一步探讨。■
作者简介：毛钊(1959-),男,南京市人,副主任医师,口腔医学硕士,从事口腔医学牙周病专业
参考文献：
[1]Aluman LC.Assessment of host defenses and serun antibodies to suspected periodontal pathogens in patients with various types of periodontitis[J].J Periodont Res,1982,17:495.
, 百拇医药
[2]上海市医学化验所主编.临床免疫学检验(上册)[M].上海：上海科技出版社，1983.114～115.
[3]Van Dyke TE.Role of the neutrophil in oral disease:receptor deficiency in leukocytes in patients with juvenile periodontitis[J].Rev Infect Dis,1985,7:94.
[4]Van Dyke TE,Levine MJ,Genco RJ.Neutrophil function and oral disease[J].J Oral Pathol,1985,14:94.
[5]章锦才，张举之.青少年牙周炎患者中性多核白细胞功能的初步研究[J].中华口腔医学杂志，1987，22(3)：131.
[6]Genco RJ,Slots J.Host responsesin periodontal disease[J].J Dent Res,1984,63:441.
收稿日期：1999-08-30
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