结肠癌P糖蛋白和p53蛋白表达的关系
作者：林震 施作霖 李建党 黄良祥
单位：林震 李建党 黄良祥(福建省立医院外科，福州 350001)；施作霖(福建省立医院病理科，福州 350001)
关键词：结肠肿瘤；P糖蛋白；蛋白质p53；免疫组织化学；抗药性；多药
福建医科大学学报000214
摘要:目的 探讨P糖蛋白(P-gp)和p53蛋白在结肠腺癌中的表达意义。方法 应用免疫组织化学方法检测术前未进行化疗的140例结肠癌组织中的多药耐药基因产物P-gp和p53蛋白的表达。结果 P-gp和p53在结肠癌中的表达分别为23.57%(33/140)和40%(56/140)。P-gp表达与结肠癌的组织学类型、浸润深度和淋巴结转移状况无关(P>0.05)；而p53除与淋巴结转移状况有关外(P<0.05)，与组织学类型和浸润深度无关(P>0.05)。P-gp在p53阳性的病例中的表达明显高于p53阴性者(P<0.01)。结论 P-gp和p53协同表达于结肠癌组织中，可作为结肠癌病人的临床耐药和预后判断的可靠指标。
, 百拇医药
中图分类号:R735.35;R977.6 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)02-0138-03
Expression of P-glycoprotein and P53 Protein in Colon Cancers
LIN Zhen，SHI Zuo-lin,LI Jian-dang，et al
(Department of General Surgery,Fujian Provincial Hospital,Fuzhou 350001,China)
ABSTRACT:Objective To investigate the correlation of the co-expression of p-glycoprotein(P-gp) and p53 protein in colon cancers.Methods One hundred forty patients with colon cancer,which had not been treated by chemotherapy before surgery,were studied for the expression of P-gp and p53 protein using immunohistochemistry.Results P-gp and p53 were 23.57%(33/140) and 40%(56/140) in colon cancers,respectively.Correlation was not observed between P-gp expression and histological grading,invasive depth and lymph node metastases(P>0.05) and p53 expression was not found any correlation with histological grading and invasive depth(P>0.05) except with lymph node metastases(P<0.05) in colon cancers.P-gp expression was significantly higher in p53-positive than in p53-negative(P<0.01).Conclusion It is indicated that the co-expression of p53 is often associated with P-gp and is a better predictive factor for clinic chemoresistance and for prognosis in colon cancers.
, 百拇医药
KEY WORDS:colon neoplasms;P-glycoprotein;protein p53;immunohistochemistry;resistance,multidrug
虽然联合化疗对恶性肿瘤病人的生存期有积极的临床意义，但肿瘤细胞产生的耐药性又是肿瘤化疗失败最常见和最难解决的问题之一。近年来对结肠癌的多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因及其产物P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的研究已有报道[1]。笔者收集我院自1996～1998年140例手术切除结肠癌标本，应用免疫组织化学方法检测P-gp和p53在结肠癌中的表达，并探讨二者与结肠癌各种预后指标的关系。
1 材料与方法
1.1 材料 来自我院手术切除140例结肠癌、并为病理科常规免疫组织化学染色的存档标本。男性80例，女性60例，年龄53.37±4.17岁(32～81岁)，男∶女=1.33∶1。所有病例术前均未化疗。标本经福尔马林固定，石蜡包埋，连续4 μm切片。
, 百拇医药
1.2 方法 采用SP免疫组织化学染色方法，鼠抗人p53(DO-7)和P-gp(JSB-1)为即用型抗体，均为福州迈新生物技术开发公司产品。染色步骤按产品说明书进行。染色前进行微波抗原修复，DAB显色。PBS代替第一抗体作阴性对照。
1.3 阳性判断 P-gp为胞膜和细胞质阳性，p53为胞核阳性。无阳性细胞或阳性细胞<5%为阴性，阳性细胞5%～25%为弱阳性(+),25%～75%为阳性(++)，>75%为强阳性(+++)。为方便统计学分析将弱阳性(+)，阳性(++)和强阳性(+++)均列为阳性。
1.4 统计学处理 采用χ2检验。
2 结 果
2.1 P-gp和p53在结肠癌中的阳性表达(附表)
附表 P-gp与p53在结肠癌中的阳性表达 生物学指标
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n
P-gp
p53
-
+
-
+
分化程度
高分化
43
32
11
22
21
, 百拇医药
中分化
75
58
17
51
24
低分化
22
17
5
11
11
浸润深度
粘膜层
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4
3
1
3
1
肌层
18
15
3
13
5
浆膜层
118
89
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29
68
50
淋巴结转移
阴性组
75
58
17
55
20
阳性组
65
49
16
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29
36
与淋巴结转移阴性者比较，：P<0.05. P-gp阳性部位主要为胞膜和细胞质(图1)，p53阳性部位主要为胞核(图2)。结肠癌P-gp阳性为23.57%(33/140)，p53阳性为40%(56/140)。P-gp的阳性表达与结肠癌的分化程度，浸润深度和淋巴结转移无关(P>0.05)；p53的阳性表达与结肠癌的分化程度和浸润深度无关(P>0.05)，与淋巴结转移差异有显著性(P<0.05)。
2.2 p53与P-gp阳性表达的关系 56例p53阳性的结肠癌中P-gp阳性24例，占42.85%，高于p53阴性组9/84(12%)，二者之间差异有显著性(P<0.01)。
3 讨 论
目前研究表明，肿瘤细胞产生的耐药性是多方面的，其中以多药耐药(MDR)最为常见。MDR的特点是一旦对某种化疗药物产生耐药，对不同类型的多种结构、细胞靶点和作用机理迥然不同的抗癌药物同时产生耐药，这是一种独特的广谱耐药现象[2]。在MDR细胞膜上有一种分子量为170 kD的膜糖蛋白，并称之为P糖蛋白(P-gp)。研究发现该蛋白的表达水平与细胞膜的通透性，细胞内药物浓度以及细胞耐药程度有关[2]。结肠癌P-gp表达率各家报道差异甚大(38%～85%)。本组140例中仅为23.57%，这可能与使用不同克隆的P-gp抗体和病例数量有关。P-gp表达与结肠癌的其他预后因素关系各家报道不一[1，2]。P-gp表达与结肠癌细胞的DNA含量、局部浸润和病理分型无关[3]。笔者的结果表明，P-gp表达与结肠癌细胞的分化程度、浸润深度和淋巴转移状况无关。P-gp阳性表达能否作为结肠癌病人预后判断的一个独立指标有待进一步证实。
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p53基因是重要的肿瘤抑制基因，许多人类肿瘤都伴有不同程度的p53基因突变，包括乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌和卵巢癌等。p53基因有野生型和突变型之分，目前用免疫组织化学所检测的多为突变型p53。野生型p53具有抑制癌细胞的增殖和促进癌细胞凋亡的作用，而突变型p53则相反，具有抑制癌细胞凋亡和促进癌细胞的增殖的作用。笔者的资料显示，结肠癌的p53阳性表达与肿瘤细胞分化程度和浸润深度无关(P>0.05)，与淋巴转移状况有关(P<0.05)，说明p53过度表达对癌细胞增殖的抑制作用减弱，并能促进癌细胞的转移，对判断包括结肠癌在内的各种癌症病人的预后有积极的临床意义。
近来研究表明，p53和P-gp之间有协同表达作用，从基因转录水平研究,发现野生型p53具有抑制MDR基因转录作用，减低P-gp的生成，如果野生型p53功能丧失，可上调多药耐药相关蛋白(MRP)基因的表达[4]。同样野生型p53能诱导肿瘤细胞凋亡，而突变型p53能增加MDR基因的表达[5]并通过抗细胞凋亡机制使肿瘤细胞产生耐药。从笔者的结果来看，结肠癌p53表达与P-gp表达呈显著正相关，与乳腺癌一样常表现为p53和P-gp的协同表达，说明二者之间存在有一定的内在关系，突变型p53能诱导MDR表达，可做为预后差的重要判断指标[6,7]。
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图1 结肠癌P-gp细胞膜和细胞质阳性，免疫组化SP法125
图2 结肠癌P53细胞核阳性，免疫组化SP法125
作者简介:林 震(1952～)，男，主治医师.
参考文献:
[1]Weinstein RS,Jakate SM,Dominguez JM,et al.Relationship of the expression of the multidrug resistance gene product(P-glycoprotein) in human colon carcinoma to local tumor aggressiveness and lymph node metastasis[J].Carcer Res,1991,51:2720.
, http://www.100md.com
[2]Goldstein LJ.Clinical reversal of drug resistance[J].Curr Probl Cancer,1995,19:69.
[3]Sinicrope FA,Hart J,Brasitus TA,et al.Relationship of P-glycoprotein and carcinoembryonic antigen expression in human colon carcinoma to local invasion,DNA ploidy,and disease relapse[J].Cancer,1994,74:2908.
[4]Wang Q,Beck WT.Transcriptional suppression of multidrug resistance-associated protein(MRP) gene expression by wild-type p53[J].Cancer Res,1998,58:5762.
, http://www.100md.com
[5]Nguyen KT,Liu B,Ueda K,et al.Transactivation of the human multidrug resistance(MDR1) gene promoter by p53 mutants[J].Oncol Res,1994,6:71.
[6]Linn SC,Honkoop AH,Hoekman K,et al.p53 and P-glycoprotein are often co-expression and associated with poor prognosis in breast cancer[J].Br J Cancer,1996,74:63.
[7]Honkoop AH,van-Diest PJ,de-Jong JS,et al.Prognostic role of clinic,pathological and biological characteristics in patients with locally advanced breast cancer[J].Br J Cancer,1998,77:621.
收稿日期:1999-10-29, 百拇医药
单位：林震 李建党 黄良祥(福建省立医院外科，福州 350001)；施作霖(福建省立医院病理科，福州 350001)
关键词：结肠肿瘤；P糖蛋白；蛋白质p53；免疫组织化学；抗药性；多药
福建医科大学学报000214
摘要:目的 探讨P糖蛋白(P-gp)和p53蛋白在结肠腺癌中的表达意义。方法 应用免疫组织化学方法检测术前未进行化疗的140例结肠癌组织中的多药耐药基因产物P-gp和p53蛋白的表达。结果 P-gp和p53在结肠癌中的表达分别为23.57%(33/140)和40%(56/140)。P-gp表达与结肠癌的组织学类型、浸润深度和淋巴结转移状况无关(P>0.05)；而p53除与淋巴结转移状况有关外(P<0.05)，与组织学类型和浸润深度无关(P>0.05)。P-gp在p53阳性的病例中的表达明显高于p53阴性者(P<0.01)。结论 P-gp和p53协同表达于结肠癌组织中，可作为结肠癌病人的临床耐药和预后判断的可靠指标。
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中图分类号:R735.35;R977.6 文献标识码:A
文章编号:1000-2235(2000)02-0138-03
Expression of P-glycoprotein and P53 Protein in Colon Cancers
LIN Zhen，SHI Zuo-lin,LI Jian-dang，et al
(Department of General Surgery,Fujian Provincial Hospital,Fuzhou 350001,China)
ABSTRACT:Objective To investigate the correlation of the co-expression of p-glycoprotein(P-gp) and p53 protein in colon cancers.Methods One hundred forty patients with colon cancer,which had not been treated by chemotherapy before surgery,were studied for the expression of P-gp and p53 protein using immunohistochemistry.Results P-gp and p53 were 23.57%(33/140) and 40%(56/140) in colon cancers,respectively.Correlation was not observed between P-gp expression and histological grading,invasive depth and lymph node metastases(P>0.05) and p53 expression was not found any correlation with histological grading and invasive depth(P>0.05) except with lymph node metastases(P<0.05) in colon cancers.P-gp expression was significantly higher in p53-positive than in p53-negative(P<0.01).Conclusion It is indicated that the co-expression of p53 is often associated with P-gp and is a better predictive factor for clinic chemoresistance and for prognosis in colon cancers.
, 百拇医药
KEY WORDS:colon neoplasms;P-glycoprotein;protein p53;immunohistochemistry;resistance,multidrug
虽然联合化疗对恶性肿瘤病人的生存期有积极的临床意义，但肿瘤细胞产生的耐药性又是肿瘤化疗失败最常见和最难解决的问题之一。近年来对结肠癌的多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因及其产物P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的研究已有报道[1]。笔者收集我院自1996～1998年140例手术切除结肠癌标本，应用免疫组织化学方法检测P-gp和p53在结肠癌中的表达，并探讨二者与结肠癌各种预后指标的关系。
1 材料与方法
1.1 材料 来自我院手术切除140例结肠癌、并为病理科常规免疫组织化学染色的存档标本。男性80例，女性60例，年龄53.37±4.17岁(32～81岁)，男∶女=1.33∶1。所有病例术前均未化疗。标本经福尔马林固定，石蜡包埋，连续4 μm切片。
, 百拇医药
1.2 方法 采用SP免疫组织化学染色方法，鼠抗人p53(DO-7)和P-gp(JSB-1)为即用型抗体，均为福州迈新生物技术开发公司产品。染色步骤按产品说明书进行。染色前进行微波抗原修复，DAB显色。PBS代替第一抗体作阴性对照。
1.3 阳性判断 P-gp为胞膜和细胞质阳性，p53为胞核阳性。无阳性细胞或阳性细胞<5%为阴性，阳性细胞5%～25%为弱阳性(+),25%～75%为阳性(++)，>75%为强阳性(+++)。为方便统计学分析将弱阳性(+)，阳性(++)和强阳性(+++)均列为阳性。
1.4 统计学处理 采用χ2检验。
2 结 果
2.1 P-gp和p53在结肠癌中的阳性表达(附表)
附表 P-gp与p53在结肠癌中的阳性表达 生物学指标
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n
P-gp
p53
-
+
-
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分化程度
高分化
43
32
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, 百拇医药
中分化
75
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低分化
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浸润深度
粘膜层
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肌层
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淋巴结转移
阴性组
75
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阳性组
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与淋巴结转移阴性者比较，：P<0.05. P-gp阳性部位主要为胞膜和细胞质(图1)，p53阳性部位主要为胞核(图2)。结肠癌P-gp阳性为23.57%(33/140)，p53阳性为40%(56/140)。P-gp的阳性表达与结肠癌的分化程度，浸润深度和淋巴结转移无关(P>0.05)；p53的阳性表达与结肠癌的分化程度和浸润深度无关(P>0.05)，与淋巴结转移差异有显著性(P<0.05)。
2.2 p53与P-gp阳性表达的关系 56例p53阳性的结肠癌中P-gp阳性24例，占42.85%，高于p53阴性组9/84(12%)，二者之间差异有显著性(P<0.01)。
3 讨 论
目前研究表明，肿瘤细胞产生的耐药性是多方面的，其中以多药耐药(MDR)最为常见。MDR的特点是一旦对某种化疗药物产生耐药，对不同类型的多种结构、细胞靶点和作用机理迥然不同的抗癌药物同时产生耐药，这是一种独特的广谱耐药现象[2]。在MDR细胞膜上有一种分子量为170 kD的膜糖蛋白，并称之为P糖蛋白(P-gp)。研究发现该蛋白的表达水平与细胞膜的通透性，细胞内药物浓度以及细胞耐药程度有关[2]。结肠癌P-gp表达率各家报道差异甚大(38%～85%)。本组140例中仅为23.57%，这可能与使用不同克隆的P-gp抗体和病例数量有关。P-gp表达与结肠癌的其他预后因素关系各家报道不一[1，2]。P-gp表达与结肠癌细胞的DNA含量、局部浸润和病理分型无关[3]。笔者的结果表明，P-gp表达与结肠癌细胞的分化程度、浸润深度和淋巴转移状况无关。P-gp阳性表达能否作为结肠癌病人预后判断的一个独立指标有待进一步证实。
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p53基因是重要的肿瘤抑制基因，许多人类肿瘤都伴有不同程度的p53基因突变，包括乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌和卵巢癌等。p53基因有野生型和突变型之分，目前用免疫组织化学所检测的多为突变型p53。野生型p53具有抑制癌细胞的增殖和促进癌细胞凋亡的作用，而突变型p53则相反，具有抑制癌细胞凋亡和促进癌细胞的增殖的作用。笔者的资料显示，结肠癌的p53阳性表达与肿瘤细胞分化程度和浸润深度无关(P>0.05)，与淋巴转移状况有关(P<0.05)，说明p53过度表达对癌细胞增殖的抑制作用减弱，并能促进癌细胞的转移，对判断包括结肠癌在内的各种癌症病人的预后有积极的临床意义。
近来研究表明，p53和P-gp之间有协同表达作用，从基因转录水平研究,发现野生型p53具有抑制MDR基因转录作用，减低P-gp的生成，如果野生型p53功能丧失，可上调多药耐药相关蛋白(MRP)基因的表达[4]。同样野生型p53能诱导肿瘤细胞凋亡，而突变型p53能增加MDR基因的表达[5]并通过抗细胞凋亡机制使肿瘤细胞产生耐药。从笔者的结果来看，结肠癌p53表达与P-gp表达呈显著正相关，与乳腺癌一样常表现为p53和P-gp的协同表达，说明二者之间存在有一定的内在关系，突变型p53能诱导MDR表达，可做为预后差的重要判断指标[6,7]。
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图1 结肠癌P-gp细胞膜和细胞质阳性，免疫组化SP法125
图2 结肠癌P53细胞核阳性，免疫组化SP法125
作者简介:林 震(1952～)，男，主治医师.
参考文献:
[1]Weinstein RS,Jakate SM,Dominguez JM,et al.Relationship of the expression of the multidrug resistance gene product(P-glycoprotein) in human colon carcinoma to local tumor aggressiveness and lymph node metastasis[J].Carcer Res,1991,51:2720.
, http://www.100md.com
[2]Goldstein LJ.Clinical reversal of drug resistance[J].Curr Probl Cancer,1995,19:69.
[3]Sinicrope FA,Hart J,Brasitus TA,et al.Relationship of P-glycoprotein and carcinoembryonic antigen expression in human colon carcinoma to local invasion,DNA ploidy,and disease relapse[J].Cancer,1994,74:2908.
[4]Wang Q,Beck WT.Transcriptional suppression of multidrug resistance-associated protein(MRP) gene expression by wild-type p53[J].Cancer Res,1998,58:5762.
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[5]Nguyen KT,Liu B,Ueda K,et al.Transactivation of the human multidrug resistance(MDR1) gene promoter by p53 mutants[J].Oncol Res,1994,6:71.
[6]Linn SC,Honkoop AH,Hoekman K,et al.p53 and P-glycoprotein are often co-expression and associated with poor prognosis in breast cancer[J].Br J Cancer,1996,74:63.
[7]Honkoop AH,van-Diest PJ,de-Jong JS,et al.Prognostic role of clinic,pathological and biological characteristics in patients with locally advanced breast cancer[J].Br J Cancer,1998,77:621.
收稿日期:1999-10-29, 百拇医药