冬虫夏草对IgA肾病小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响
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山东医科大学学报 2000年第2期第38卷 论著
作者：文蓉珠 关广聚 管益君
单位：文蓉珠 关广聚(山东医科大学第二附属医院肾内科)；管益君(山东医科大学附属医院)
关键词：中草药；冬虫夏草；肾小球肾炎；IgA；巨噬细胞
山东医科大学学报000239摘 要：目的：探讨冬虫夏草对IgA肾病小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法：将30只BALB/c小鼠按体重随机分为正常对照组，模型组与虫草组，采用半体内法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力，以吞噬百分率和吞噬指数作为腹腔巨噬细胞吞噬功能的指标。结果：虫草组腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数均高于模型组(P<0.05)，血清循环免疫复合物(CIC)低于模型组(P<0.05)。结论：冬虫夏草可以改善IgA肾病小鼠巨噬细胞吞噬功能，降低CIC。
分类号：R93；R692.3±1；R331.2 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1000-0496(2000)02-0221-02
THE EFFECT OF CORDYCEPS SINENSIS ON ABDOMINAL CAVITY PHAGOCYTE FUNCTION OF IgA NEPHROPATHY MOUSE
WEN Rong-zhu,GUAN Guan-ju,GUAN Yi-jun
(Dept.of nephrology,the Second Affiliated Hospital of Shandong Medical University)
Abstract：Objective:To study the effect of cordyceps sinensis on abdominal cavity phagocyte function of IgA nephropathy mouse.Methods:Thirty BALB/c mice are divided into control group,model group and Cordyceps Sinensis group (CS group) at random according to body weight,observe the abdominal cavity phagocyte phagocytosing red blood cell of hen,phagocytic percentage and index are used to estimate phagocyte function. Resuits:Phagocytic percentage and index of CS group are higher than that of model group(P<0.05),circulating immune complex(CIC) is lower than that of model group(P<0.05),IgA immune fluorescence in mesengial area of glomerulus is weaker than that of model group.Conclusion:Cordyceps Sinensis can improve phagocyte function of IgA nephropathy mouse,decrease CIC and lessen IgA-IC deposition in mesengial area of glomerulus.
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Keywords：Drugs,Chinese herbal;Cordyceps Sinensis;Glomerulonephritis,IgA;Phagocytes IgA肾病在原发性肾小球疾病中占20%～40%，IgA肾病是CIC介导的免疫损伤，单核-巨噬系统在CIC的清除中具有重要作用。通过尾静脉注射葡萄球菌肠毒素[1]与口服免疫法[2]制成IgA肾病动物模型，观察了冬虫夏草对该模型腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。
1材料与方法
1.1材料实验动物为雌性BALB/c小鼠，体重18～22g，由山东医科大学实验动物中心提供。牛血清白蛋白(BSA)由天津生化制品厂提供。葡萄球菌肠毒素(SEB)和FITC标记的羊抗鼠IgA血清由军事医学科学院提供。冬虫夏草醇提液是将市售人工发酵虫草菌粉，用65%乙醇浸取多次，沸水中蒸发制成浸膏，临用时配成50%醇提液。
1.2方法
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1.2.1模型制备30只雌性BALB/c小鼠按体重随机分为3组，正常对照组10只，模型组10只，虫草组10只，3组小鼠在完全相同的条件下饲养，模型组及虫草组尾静脉注射SEB，每周1次，连续3周，同时隔日给予BSA酸化液口服，连续6周。对照组小鼠尾静脉注射相同量的生理盐水，给予酸化自来水饮用。制模同时，虫草组灌胃50%虫草醇提取液，每只0.5ml，正常组与模型组灌胃等量自来水。
1.2.2观察指标及测定方法腹腔巨噬细胞功能测定：处死小白鼠前4d，每只鼠腹腔注射0.5%淀粉生理盐水溶液约0.5ml，4d后，每鼠腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水悬液0.5ml，间隔30min，颈椎脱臼处死小鼠，正中剪开腹壁皮肤，经腹膜注入生理盐水2ml，轻揉鼠腹部1min后吸出腹腔洗液1ml，分滴于两片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃孵箱温育30min。用生理盐水漂洗，除去未粘片的细胞，晾干，以1：1丙酮-甲醇溶液固定5min。4%(V/V)Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，用流水冲洗晾干。
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油镜下记数巨噬细胞，每片200个按下式计算吞噬百分率和吞噬指数。
吞噬百分率＝[吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/200个巨噬细胞(吞及未吞的)]x100%
吞噬指数=(被吞噬的鸡红细胞/200个巨噬细胞)/2
血清CIC测定：聚二乙醇沉淀法
实验管(A管)：血清0.1ml加pH8.4，0.02mol硼酸-硼砂缓冲液0.2ml，加4.166%PEG(MW：6000)2.7ml；对照管(B管)：血清0.1ml加pH8.4，0.02mol硼酸-硼砂缓冲液2.9ml：混匀后放室温2h，取出后用721分光光度计(波长450nm)测各管光密度；以A，B二管OD值之差表示免疫复合物含量。
1.3结果判定：肾组织免疫荧光：将速冻后的肾组织切成3μm的冰冻切片，用FITC标记的羊抗鼠IgA血清直接法进行染色，观察肾小球内有无IgA沉积。模型组及虫草组肾小球系膜区有程度不等分散的颗粒样荧光，并依荧光强度分级如下：(一)：阴性；(±)：可疑；(+)：高倍视野下可见清晰微弱荧光；()：低倍视野下可见清晰微弱荧光；()：低倍及高倍视野下均可见较强的清晰微弱荧光；()：显示耀眼明亮而清晰的荧光。
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1.4统计学处理采用SAS统计软件包做方差分析，所有结果以平均数±标准差表示。
2结果
2.1腹腔巨噬细胞功能正常对照组吞噬百分率和吞噬指数分别为0.828+0.1156，53.2±5.03，与模型组及虫草组差异有显著性(P<0.05)模型组分别为0.460±0.1055，31.0±2.77，虫草组分别为0.559±0.1160，40.0±4.82，均高于模型组，差异有显著性(P<0.05)。
2.2CIC正常对照组为0.0422±0.0109，模型组为0.0750±0.0126，虫草组为0.0546±0.0117，3组差异有显著性(P<0.05)。
2.3肾组织免疫荧光对照组10只小鼠均为阴性，模型组8只小鼠为()，1只为()，1只为(±)，虫草组中4只为(±)，5只为(+)，1只为()，荧光沉积部位以系膜区为主。
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3讨论
IgA肾病是免疫复合物介导的肾小球疾病，正常情况下人体有完整的转输清除CIC的机制，包括红细胞粘附携带CIC并由单核-巨噬细胞吞噬。这一机制任何一个环节受损，均可导致CIC在体内蓄积。我们制成IgA肾病小鼠动物模型，免疫荧光证实在肾小球系膜区有IgA沉积，说明模型制作成功。做为单核-巨噬系统组成部分之一的腹腔巨噬细胞，其功能能够反映该系统的功能状态。半体内法检测腹腔巨噬细胞的吞噬功能基本是在体内完成的，具有简便易行，不受外界因素干扰等优点。本试验结果显示，模型组腹腔巨噬细胞吞噬百分率与吞噬指数均低于对照组，CIC则高于对照组，差异有显著性，(P<0.05)。徐君杰等的研究表明，原发性肾小球肾炎患者外周血单核细胞(MPS)吞噬功能减低，MPS功能减低后清除CIC能力下降，CIC沉积于肾小球致病，同时由于系膜吞噬细胞功能减弱，肾小球局部清除免疫复合物的能力降低[3]。虫草组腹腔巨噬细胞吞噬百分率与吞噬指数均高于模型组，CIC低于模型组，差异有显著性(P<0.05)，证明冬虫夏草能够改善单核-巨噬系统的功能，CIC降低可能与其改善外周血MPS功能，增加对CIC的清除有关。虫草组肾小球IgA荧光强度比模型组弱，说明肾小球系膜区沉积的IgA-IC少，这与血清CIC减少，系膜区沉积减少有关，也可能与冬虫夏草改善了系膜区吞噬细胞的功能有关。
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参考文献：
[1]刘志红，黎磊石，李莉.葡萄球菌肠毒素诱发的IgA肾病模型[J].中华肾脏病杂志，1989，1：6
[2]Steven N E,Gloria R,G,Michael E L.Experimental IgA nephropathy induced by oral immunization[J].J Exp Med,1983(157)：572
[3]徐君杰.免疫刺激疗法治疗原发性肾小球肾炎[J].中华肾脏病杂志，1994，4：113
收稿日期：1999-02-01, 百拇医药
单位：文蓉珠 关广聚(山东医科大学第二附属医院肾内科)；管益君(山东医科大学附属医院)
关键词：中草药；冬虫夏草；肾小球肾炎；IgA；巨噬细胞
山东医科大学学报000239摘 要：目的：探讨冬虫夏草对IgA肾病小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。方法：将30只BALB/c小鼠按体重随机分为正常对照组，模型组与虫草组，采用半体内法测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力，以吞噬百分率和吞噬指数作为腹腔巨噬细胞吞噬功能的指标。结果：虫草组腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数均高于模型组(P<0.05)，血清循环免疫复合物(CIC)低于模型组(P<0.05)。结论：冬虫夏草可以改善IgA肾病小鼠巨噬细胞吞噬功能，降低CIC。
分类号：R93；R692.3±1；R331.2 文献标识码：A
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文章编号：1000-0496(2000)02-0221-02
THE EFFECT OF CORDYCEPS SINENSIS ON ABDOMINAL CAVITY PHAGOCYTE FUNCTION OF IgA NEPHROPATHY MOUSE
WEN Rong-zhu,GUAN Guan-ju,GUAN Yi-jun
(Dept.of nephrology,the Second Affiliated Hospital of Shandong Medical University)
Abstract：Objective:To study the effect of cordyceps sinensis on abdominal cavity phagocyte function of IgA nephropathy mouse.Methods:Thirty BALB/c mice are divided into control group,model group and Cordyceps Sinensis group (CS group) at random according to body weight,observe the abdominal cavity phagocyte phagocytosing red blood cell of hen,phagocytic percentage and index are used to estimate phagocyte function. Resuits:Phagocytic percentage and index of CS group are higher than that of model group(P<0.05),circulating immune complex(CIC) is lower than that of model group(P<0.05),IgA immune fluorescence in mesengial area of glomerulus is weaker than that of model group.Conclusion:Cordyceps Sinensis can improve phagocyte function of IgA nephropathy mouse,decrease CIC and lessen IgA-IC deposition in mesengial area of glomerulus.
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Keywords：Drugs,Chinese herbal;Cordyceps Sinensis;Glomerulonephritis,IgA;Phagocytes IgA肾病在原发性肾小球疾病中占20%～40%，IgA肾病是CIC介导的免疫损伤，单核-巨噬系统在CIC的清除中具有重要作用。通过尾静脉注射葡萄球菌肠毒素[1]与口服免疫法[2]制成IgA肾病动物模型，观察了冬虫夏草对该模型腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。
1材料与方法
1.1材料实验动物为雌性BALB/c小鼠，体重18～22g，由山东医科大学实验动物中心提供。牛血清白蛋白(BSA)由天津生化制品厂提供。葡萄球菌肠毒素(SEB)和FITC标记的羊抗鼠IgA血清由军事医学科学院提供。冬虫夏草醇提液是将市售人工发酵虫草菌粉，用65%乙醇浸取多次，沸水中蒸发制成浸膏，临用时配成50%醇提液。
1.2方法
, http://www.100md.com
1.2.1模型制备30只雌性BALB/c小鼠按体重随机分为3组，正常对照组10只，模型组10只，虫草组10只，3组小鼠在完全相同的条件下饲养，模型组及虫草组尾静脉注射SEB，每周1次，连续3周，同时隔日给予BSA酸化液口服，连续6周。对照组小鼠尾静脉注射相同量的生理盐水，给予酸化自来水饮用。制模同时，虫草组灌胃50%虫草醇提取液，每只0.5ml，正常组与模型组灌胃等量自来水。
1.2.2观察指标及测定方法腹腔巨噬细胞功能测定：处死小白鼠前4d，每只鼠腹腔注射0.5%淀粉生理盐水溶液约0.5ml，4d后，每鼠腹腔注射5%鸡红细胞生理盐水悬液0.5ml，间隔30min，颈椎脱臼处死小鼠，正中剪开腹壁皮肤，经腹膜注入生理盐水2ml，轻揉鼠腹部1min后吸出腹腔洗液1ml，分滴于两片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃孵箱温育30min。用生理盐水漂洗，除去未粘片的细胞，晾干，以1：1丙酮-甲醇溶液固定5min。4%(V/V)Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，用流水冲洗晾干。
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油镜下记数巨噬细胞，每片200个按下式计算吞噬百分率和吞噬指数。
吞噬百分率＝[吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/200个巨噬细胞(吞及未吞的)]x100%
吞噬指数=(被吞噬的鸡红细胞/200个巨噬细胞)/2
血清CIC测定：聚二乙醇沉淀法
实验管(A管)：血清0.1ml加pH8.4，0.02mol硼酸-硼砂缓冲液0.2ml，加4.166%PEG(MW：6000)2.7ml；对照管(B管)：血清0.1ml加pH8.4，0.02mol硼酸-硼砂缓冲液2.9ml：混匀后放室温2h，取出后用721分光光度计(波长450nm)测各管光密度；以A，B二管OD值之差表示免疫复合物含量。
1.3结果判定：肾组织免疫荧光：将速冻后的肾组织切成3μm的冰冻切片，用FITC标记的羊抗鼠IgA血清直接法进行染色，观察肾小球内有无IgA沉积。模型组及虫草组肾小球系膜区有程度不等分散的颗粒样荧光，并依荧光强度分级如下：(一)：阴性；(±)：可疑；(+)：高倍视野下可见清晰微弱荧光；()：低倍视野下可见清晰微弱荧光；()：低倍及高倍视野下均可见较强的清晰微弱荧光；()：显示耀眼明亮而清晰的荧光。
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1.4统计学处理采用SAS统计软件包做方差分析，所有结果以平均数±标准差表示。
2结果
2.1腹腔巨噬细胞功能正常对照组吞噬百分率和吞噬指数分别为0.828+0.1156，53.2±5.03，与模型组及虫草组差异有显著性(P<0.05)模型组分别为0.460±0.1055，31.0±2.77，虫草组分别为0.559±0.1160，40.0±4.82，均高于模型组，差异有显著性(P<0.05)。
2.2CIC正常对照组为0.0422±0.0109，模型组为0.0750±0.0126，虫草组为0.0546±0.0117，3组差异有显著性(P<0.05)。
2.3肾组织免疫荧光对照组10只小鼠均为阴性，模型组8只小鼠为()，1只为()，1只为(±)，虫草组中4只为(±)，5只为(+)，1只为()，荧光沉积部位以系膜区为主。
, http://www.100md.com
3讨论
IgA肾病是免疫复合物介导的肾小球疾病，正常情况下人体有完整的转输清除CIC的机制，包括红细胞粘附携带CIC并由单核-巨噬细胞吞噬。这一机制任何一个环节受损，均可导致CIC在体内蓄积。我们制成IgA肾病小鼠动物模型，免疫荧光证实在肾小球系膜区有IgA沉积，说明模型制作成功。做为单核-巨噬系统组成部分之一的腹腔巨噬细胞，其功能能够反映该系统的功能状态。半体内法检测腹腔巨噬细胞的吞噬功能基本是在体内完成的，具有简便易行，不受外界因素干扰等优点。本试验结果显示，模型组腹腔巨噬细胞吞噬百分率与吞噬指数均低于对照组，CIC则高于对照组，差异有显著性，(P<0.05)。徐君杰等的研究表明，原发性肾小球肾炎患者外周血单核细胞(MPS)吞噬功能减低，MPS功能减低后清除CIC能力下降，CIC沉积于肾小球致病，同时由于系膜吞噬细胞功能减弱，肾小球局部清除免疫复合物的能力降低[3]。虫草组腹腔巨噬细胞吞噬百分率与吞噬指数均高于模型组，CIC低于模型组，差异有显著性(P<0.05)，证明冬虫夏草能够改善单核-巨噬系统的功能，CIC降低可能与其改善外周血MPS功能，增加对CIC的清除有关。虫草组肾小球IgA荧光强度比模型组弱，说明肾小球系膜区沉积的IgA-IC少，这与血清CIC减少，系膜区沉积减少有关，也可能与冬虫夏草改善了系膜区吞噬细胞的功能有关。
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参考文献：
[1]刘志红，黎磊石，李莉.葡萄球菌肠毒素诱发的IgA肾病模型[J].中华肾脏病杂志，1989，1：6
[2]Steven N E,Gloria R,G,Michael E L.Experimental IgA nephropathy induced by oral immunization[J].J Exp Med,1983(157)：572
[3]徐君杰.免疫刺激疗法治疗原发性肾小球肾炎[J].中华肾脏病杂志，1994，4：113
收稿日期：1999-02-01, 百拇医药