乙型肝炎病毒DNA聚合酶链反应测定的全国室间质量评价
作者：李金明 王露楠 邓巍 马嵘 郑怀竞 杨振华
单位：(100730 卫生部北京医院、卫生部临床检验中心)
关键词：
中华医学杂志000214 聚合酶链反应(PCR)技术现已广泛地用于临床医学检验，尤其是病原微生物的检测。乙型肝炎病毒(HBV)DNA测定在国内是开展最早和最为广泛的临床PCR检测项目，但由于人员操作水平，实验室管理以及试剂盒质量的参差不齐，加之质控措施的缺乏，临床测定情况较为混乱，不少实验室都不同程度的存在有测定的特异性和敏感性问题。为此，我们对全国临床HBV DNA PCR测定现状进行了室间质量评价。报道如下。
一、对象和方法
1.材料：质评用“血清盘”:为本室自制，共22份样本，样本情况见表1。
, http://www.100md.com
表1 HBV DNA样本(981批)情况 样本编号
HBsAg
HBsAb
HBeAg
HBeAb
HBcAb
预期
结果
(拷贝数/ml)
各实验室结果
假阳性或
假阴性(%)
, 百拇医药
+
-
01
-
-
-
-
-
-
8
83
8.8
02
+
, 百拇医药
-
+
-
+
+
(9.4×108)
84
7
7.7
03
+
-
+
, 百拇医药 -
+
+
(4.2×108)
84
7
7.7
04
-
-
-
-
-
-
, http://www.100md.com
3
88
3.3
05
-
-
-
+
+
+
(5.0×106)
48
43
, http://www.100md.com
47.3
06
+
-
+
-
+
+
(2.0×109)
78
13
14.3
07
, 百拇医药
-
-
-
-
+
-
5
86
5.5
08
-
+
-
-
, http://www.100md.com
-
-
9
82
9.9
09
-
+
-
-
-
-
1
90
, http://www.100md.com
1.1
10
+
-
+
-
+
+
(2.8×109)
85
6
6.6
11
, 百拇医药
+
-
+
-
+
+
(7.0×105)
53
38
41.8
12
+
-
, 百拇医药
+
-
+
+
(3.0×108)
84
7
7.7
13
+
-
+
-
, 百拇医药 +
+
(3.2×108)
80
11
12.1
14
(14-17)
为13#样本的10倍稀释系列
+
76
15
16.5
, 百拇医药
15
+
63
28
30.8
16
+
41
50
54.9
17
(不计分)
17
74
, http://www.100md.com
81.3
18
+
-
+
-
+
+
(5.0×107)
69
22
24.2
19
, http://www.100md.com
(19-22)
为18#样本的10倍稀释系列
+
58
33
36.3
20
+
40
51
56.0
21
(不计分)
, 百拇医药
34
57
62.6
22
(不计分)
8
83
91.2
上述“血清盘”中HBV DNA强阳性标本的拷贝数约为108～109/ml，弱阳性标本的拷贝数约为105～106/ml，13#为单人份强阳性标本，18#为多人份混合HBV DNA阳性血清样本。
2.评价方法: 将上述血清盘以邮政快件方式寄发给全国各临床和试剂生产厂家实验室，要求其在规定的时间内使用其实验室常规使用的PCR试剂盒或自制试剂检测，并将测定结果填写在回报表上寄回，由我们进行统计分析。在邮寄质评样本中，包括一套“盲邮”至广州的样本,以保证样本邮寄中的稳定性是可靠的。
, 百拇医药
质评分的确定: 参考欧洲病毒快速诊断和病毒性肝炎专家委员会[1]制定的评分标准，确定评分原则如下，即质评分分为特异性得分和灵敏度得分。特异性按如下所述计分，即所有强阳性样本测定正确给1分，所有阴性样本测定正确给1分，每个稀释系列测定正确 给1分(只要稀释系列中一个以上最低稀释度的样本测定阳性,就可视为该系列测定正确)。因此特异性得分的最高分为4分。灵敏度得分则按如下原则计分,弱阳性样本测定正确每份给1分，每个稀释系列中除第一个稀释系列的最低2个稀释度，最高1个稀释度和第二个稀释系列的最低1个稀释度，最高2个稀释度外,每份样本测定正确给1分，这样灵敏度得分的最高分为6分。
二、结果
1.结果统计：从表1可见, 对全国HBV DNA PCR各质评样本的测定均有一定程度的假阳性和假阴性，假阳性率在1.1%～9.9%之间，对强阳性样本测定的假阴性率在6.6%～14.3%之间，对2份弱阳性样本测定的假阴性率分别为47.3% 和 41.8%。
, http://www.100md.com
2.各实验室测定的假阳性和假阴性情况：在所有91家实验室中，仅有28家 (30.8%) 测定结果全部正确；仅出现假阳性的实验室有8家(8.8%);仅有假阴性的实验室有40家(43.9%)；有15家 (16.5%) 的测定结果既有假阳性也有假阴性，假阴性主要是对弱阳性样本的检出率太低所致。
3.各实验室得分分布情况：从表2可知，全国各实验室在特异性上得分较好，60.4%的实验室获得满分；而灵敏度却仅有25.3%的实验室得满分，得0分的竞达五分之一(19.7%)。
表2 各实验室质评得分分布情况 特异性分
灵敏度分
质评总分
得分
实验室数
, 百拇医药
(%)
得分
实验室数
(%)
得分
实验室数
(%)
1～2
15(16.5)
0
18(19.7)
1～3
15(16.5)
, 百拇医药
3
21(23.1)
1～3
27(29.7)
4～6
26(28.5)
4
55(60.4)
4～5
23(25.3)
7～9
30(33.0)
6(满分)
, 百拇医药
23(25.3)
10(满分)
20(22.0)
三、讨论
临床PCR测定项目的室间质评，国外是在90年代初开始的[1-3]，评价方法尚处于探索之中。本研究主要是采用欧洲病毒快速诊断和病毒性肝炎专家委员会[1]制定的评分标准，对全国临床实验室HBV DNA PCR测定的特异性和灵敏度进行了评价。结果表明在所有参评的91个实验室中，全部样本测定正确的仅有28家 (30.8%)，而在大部分临床实验室中，都不同程度的存在假阳性或假阴性问题。假阳性结果的出现一般与污染有关。从本次质评来看，各实验室对5份阴性样本测定的假阳性率在1.1%～9.9%之间，较文献报道的要低。比较起来，假阴性亦即测定的灵敏度问题似乎更大，几乎约有一半的实验室对含量为105拷贝数/ml的弱阳性样本测不出来，远较文献[1]报道的(27.9%)为高。这可能与目前国内检测试剂的灵敏度低有关。此外，不同实验室的测定水平差异很大，有少数几个实验室的测定结果相当混乱，个别的甚至对5份强阳性样本1份也测不出来。样本处理方法和扩增模式由于全国各实验室基本相同，尚看不出其对测定结果有何明显影响。
, 百拇医药
基金项目：卫生部科研基金资助项目
参考文献
[1]Quint WGV, Heijtink RA, Schirm J, et al. Reliability of methods for hepatitis B virus DNA detection. J Clin Microbiol，1995,33:225-228.
[2]Zaaijer HL, Cuypers HTM, Reesink HW, et al. Reliability of polymerase chain reaction for detection of hepatitis C virus. Lancet，1993，341:722-724.
[3]Bootman J, Kitchin P. An international collaborative study to assess a set of reference reagents for HIV-1 PCR. J Virol Methods， 1992，37:23-42.
收稿日期：1999-03-26, 百拇医药
单位：(100730 卫生部北京医院、卫生部临床检验中心)
关键词：
中华医学杂志000214 聚合酶链反应(PCR)技术现已广泛地用于临床医学检验，尤其是病原微生物的检测。乙型肝炎病毒(HBV)DNA测定在国内是开展最早和最为广泛的临床PCR检测项目，但由于人员操作水平，实验室管理以及试剂盒质量的参差不齐，加之质控措施的缺乏，临床测定情况较为混乱，不少实验室都不同程度的存在有测定的特异性和敏感性问题。为此，我们对全国临床HBV DNA PCR测定现状进行了室间质量评价。报道如下。
一、对象和方法
1.材料：质评用“血清盘”:为本室自制，共22份样本，样本情况见表1。
, http://www.100md.com
表1 HBV DNA样本(981批)情况 样本编号
HBsAg
HBsAb
HBeAg
HBeAb
HBcAb
预期
结果
(拷贝数/ml)
各实验室结果
假阳性或
假阴性(%)
, 百拇医药
+
-
01
-
-
-
-
-
-
8
83
8.8
02
+
, 百拇医药
-
+
-
+
+
(9.4×108)
84
7
7.7
03
+
-
+
, 百拇医药 -
+
+
(4.2×108)
84
7
7.7
04
-
-
-
-
-
-
, http://www.100md.com
3
88
3.3
05
-
-
-
+
+
+
(5.0×106)
48
43
, http://www.100md.com
47.3
06
+
-
+
-
+
+
(2.0×109)
78
13
14.3
07
, 百拇医药
-
-
-
-
+
-
5
86
5.5
08
-
+
-
-
, http://www.100md.com
-
-
9
82
9.9
09
-
+
-
-
-
-
1
90
, http://www.100md.com
1.1
10
+
-
+
-
+
+
(2.8×109)
85
6
6.6
11
, 百拇医药
+
-
+
-
+
+
(7.0×105)
53
38
41.8
12
+
-
, 百拇医药
+
-
+
+
(3.0×108)
84
7
7.7
13
+
-
+
-
, 百拇医药 +
+
(3.2×108)
80
11
12.1
14
(14-17)
为13#样本的10倍稀释系列
+
76
15
16.5
, 百拇医药
15
+
63
28
30.8
16
+
41
50
54.9
17
(不计分)
17
74
, http://www.100md.com
81.3
18
+
-
+
-
+
+
(5.0×107)
69
22
24.2
19
, http://www.100md.com
(19-22)
为18#样本的10倍稀释系列
+
58
33
36.3
20
+
40
51
56.0
21
(不计分)
, 百拇医药
34
57
62.6
22
(不计分)
8
83
91.2
上述“血清盘”中HBV DNA强阳性标本的拷贝数约为108～109/ml，弱阳性标本的拷贝数约为105～106/ml，13#为单人份强阳性标本，18#为多人份混合HBV DNA阳性血清样本。
2.评价方法: 将上述血清盘以邮政快件方式寄发给全国各临床和试剂生产厂家实验室，要求其在规定的时间内使用其实验室常规使用的PCR试剂盒或自制试剂检测，并将测定结果填写在回报表上寄回，由我们进行统计分析。在邮寄质评样本中，包括一套“盲邮”至广州的样本,以保证样本邮寄中的稳定性是可靠的。
, 百拇医药
质评分的确定: 参考欧洲病毒快速诊断和病毒性肝炎专家委员会[1]制定的评分标准，确定评分原则如下，即质评分分为特异性得分和灵敏度得分。特异性按如下所述计分，即所有强阳性样本测定正确给1分，所有阴性样本测定正确给1分，每个稀释系列测定正确 给1分(只要稀释系列中一个以上最低稀释度的样本测定阳性,就可视为该系列测定正确)。因此特异性得分的最高分为4分。灵敏度得分则按如下原则计分,弱阳性样本测定正确每份给1分，每个稀释系列中除第一个稀释系列的最低2个稀释度，最高1个稀释度和第二个稀释系列的最低1个稀释度，最高2个稀释度外,每份样本测定正确给1分，这样灵敏度得分的最高分为6分。
二、结果
1.结果统计：从表1可见, 对全国HBV DNA PCR各质评样本的测定均有一定程度的假阳性和假阴性，假阳性率在1.1%～9.9%之间，对强阳性样本测定的假阴性率在6.6%～14.3%之间，对2份弱阳性样本测定的假阴性率分别为47.3% 和 41.8%。
, http://www.100md.com
2.各实验室测定的假阳性和假阴性情况：在所有91家实验室中，仅有28家 (30.8%) 测定结果全部正确；仅出现假阳性的实验室有8家(8.8%);仅有假阴性的实验室有40家(43.9%)；有15家 (16.5%) 的测定结果既有假阳性也有假阴性，假阴性主要是对弱阳性样本的检出率太低所致。
3.各实验室得分分布情况：从表2可知，全国各实验室在特异性上得分较好，60.4%的实验室获得满分；而灵敏度却仅有25.3%的实验室得满分，得0分的竞达五分之一(19.7%)。
表2 各实验室质评得分分布情况 特异性分
灵敏度分
质评总分
得分
实验室数
, 百拇医药
(%)
得分
实验室数
(%)
得分
实验室数
(%)
1～2
15(16.5)
0
18(19.7)
1～3
15(16.5)
, 百拇医药
3
21(23.1)
1～3
27(29.7)
4～6
26(28.5)
4
55(60.4)
4～5
23(25.3)
7～9
30(33.0)
6(满分)
, 百拇医药
23(25.3)
10(满分)
20(22.0)
三、讨论
临床PCR测定项目的室间质评，国外是在90年代初开始的[1-3]，评价方法尚处于探索之中。本研究主要是采用欧洲病毒快速诊断和病毒性肝炎专家委员会[1]制定的评分标准，对全国临床实验室HBV DNA PCR测定的特异性和灵敏度进行了评价。结果表明在所有参评的91个实验室中，全部样本测定正确的仅有28家 (30.8%)，而在大部分临床实验室中，都不同程度的存在假阳性或假阴性问题。假阳性结果的出现一般与污染有关。从本次质评来看，各实验室对5份阴性样本测定的假阳性率在1.1%～9.9%之间，较文献报道的要低。比较起来，假阴性亦即测定的灵敏度问题似乎更大，几乎约有一半的实验室对含量为105拷贝数/ml的弱阳性样本测不出来，远较文献[1]报道的(27.9%)为高。这可能与目前国内检测试剂的灵敏度低有关。此外，不同实验室的测定水平差异很大，有少数几个实验室的测定结果相当混乱，个别的甚至对5份强阳性样本1份也测不出来。样本处理方法和扩增模式由于全国各实验室基本相同，尚看不出其对测定结果有何明显影响。
, 百拇医药
基金项目：卫生部科研基金资助项目
参考文献
[1]Quint WGV, Heijtink RA, Schirm J, et al. Reliability of methods for hepatitis B virus DNA detection. J Clin Microbiol，1995,33:225-228.
[2]Zaaijer HL, Cuypers HTM, Reesink HW, et al. Reliability of polymerase chain reaction for detection of hepatitis C virus. Lancet，1993，341:722-724.
[3]Bootman J, Kitchin P. An international collaborative study to assess a set of reference reagents for HIV-1 PCR. J Virol Methods， 1992，37:23-42.
收稿日期：1999-03-26, 百拇医药