DAKO EPOS免疫组化一步染色法
作者：林秋雄 李红
单位：林秋雄(广东省人民医院病理科，广东 广州 510080)；李红(暨南大学附属华侨医院病理科，广东 广州 510630)；通讯作者：林秋雄：Tel：86-20-83827812-2521
关键词：免疫组化；多聚物
癌症000233
中图分类号：R446.8 文献标识码：B
文章编号：1000-467X(2000)02-0190-01
自Nakane(1966)建立了免疫酶标记技术以来，这门技术得到了迅速的发展。DAKOEPOS先进的多聚螯合物免疫组化一步染色法，是一种即用型快速而有效的方法，具有更为简便、更为敏感和高特异性的特点。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 材料
均为本院日常活检组织共32例，其中肉瘤5例，淋巴瘤7例，上皮癌12例，胶质瘤8例。用10%甲醛固定，常规脱水、包埋、切片。
1.2 试剂
EPOS-Vimentin、LCA、Cytokeratin、S-100和一抗Vimentin、LCA、Cytokeratin、S100以及LSABKit(K681)均由DAKO公司生产，广州基因公司提供。
1.3 方法
1.3.1 LSAB法(略)。
1.3.2 DAKOEPOS法:(1)切片常规脱蜡至水；(2)3%过氧化氢室温孵育5min；(3)PBS缓冲液洗3次，每次5min；(4)用DAKOEPOS/Horseradish Peroxidase(HRP)室温孵育30～60min；(5)PBS缓冲液洗3次，每次5min；(6)DAB显色，水洗；(7)苏木素复染、脱水、封片。
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2 结果
DAKO EPOS一步法染色结果阳性物质呈棕黄色，LCA定位于细胞膜，Vimentin、Cytokeratin、及S100定位于细胞浆，苏木素复染细胞核呈蓝色，背景清晰，非特异性染色少，EPOS法与LSAB法比较，不但简化了操作步骤，而且大大缩短了染色时间，具有更佳的对比度，结果比较如表1所示。
表1 LSAB法与EPOS法染色时间和
结果比较 方法
时间(min)
结果/背景
LSAB法
100
+++～+/++～+
, http://www.100md.com
EPOS法
40
++++～++/+～-
3 讨论
DAKO EPOS一步染色法是将特异性抗体和酶标分子结合于柔韧的多聚螯合物，使特异性抗体和检测系统结合为一种试剂，具有高灵敏性、高特异性、省时、减少处理步骤、重复性好、即用、低背景染色的优点。
3.1 省时
传统的PAP、ABC或LSAB法整个染色程序时间在2～3h之间，而DAKOEPOS一步法染色时间只需40min，大大地节约了时间，而且省去了很多繁琐的步骤。值得一提的是，利用DAKOEPOS一步法加上微波快速处理，整个染色制片过程仅用10min即可，特别适合于冰冻切片急诊手术的鉴别诊断，只需Cytokeratin、LCA、S-100、Vimentin几种抗体，就可以区分该肿瘤是来源于上皮、淋巴、神经或间叶组织的肿瘤，为手术的进一步进行和及时用药治疗提供了更为可靠的依据。
, 百拇医药
3.2 低背景
从表1中可以发现，DAKO EPOS法染色的背景比LSAB法要低，其原因是前者只要一步即可，HRP直接结合在特异性的抗体上，无需引入桥抗，后者则需要三步，必需借助桥抗的连接且HRP是结合在非特异性的复合物上，染色步骤增多，导致背景染色加深。
3.3 高敏感性和高特异性
不同种系的IgG分子结构是相似的，因此抗一种动物的IgG可能与另一种动物的IgG会引起交叉反应。而DAKO EPOS法将一抗和检测系统结合为一种试剂，避免了动物间IgG的交叉反应，从而提高了敏感性和特异性。
此外，DAKO EPOS试剂是即用型产品，无需进行稀释，且以使用方便的滴瓶提供，减少了抗体的污染，更适合在实际操作中的应用。
收稿日期：1999-02-12；修回日期：1999-04-07, 百拇医药
单位：林秋雄(广东省人民医院病理科，广东 广州 510080)；李红(暨南大学附属华侨医院病理科，广东 广州 510630)；通讯作者：林秋雄：Tel：86-20-83827812-2521
关键词：免疫组化；多聚物
癌症000233
中图分类号：R446.8 文献标识码：B
文章编号：1000-467X(2000)02-0190-01
自Nakane(1966)建立了免疫酶标记技术以来，这门技术得到了迅速的发展。DAKOEPOS先进的多聚螯合物免疫组化一步染色法，是一种即用型快速而有效的方法，具有更为简便、更为敏感和高特异性的特点。
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1 材料和方法
1.1 材料
均为本院日常活检组织共32例，其中肉瘤5例，淋巴瘤7例，上皮癌12例，胶质瘤8例。用10%甲醛固定，常规脱水、包埋、切片。
1.2 试剂
EPOS-Vimentin、LCA、Cytokeratin、S-100和一抗Vimentin、LCA、Cytokeratin、S100以及LSABKit(K681)均由DAKO公司生产，广州基因公司提供。
1.3 方法
1.3.1 LSAB法(略)。
1.3.2 DAKOEPOS法:(1)切片常规脱蜡至水；(2)3%过氧化氢室温孵育5min；(3)PBS缓冲液洗3次，每次5min；(4)用DAKOEPOS/Horseradish Peroxidase(HRP)室温孵育30～60min；(5)PBS缓冲液洗3次，每次5min；(6)DAB显色，水洗；(7)苏木素复染、脱水、封片。
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2 结果
DAKO EPOS一步法染色结果阳性物质呈棕黄色，LCA定位于细胞膜，Vimentin、Cytokeratin、及S100定位于细胞浆，苏木素复染细胞核呈蓝色，背景清晰，非特异性染色少，EPOS法与LSAB法比较，不但简化了操作步骤，而且大大缩短了染色时间，具有更佳的对比度，结果比较如表1所示。
表1 LSAB法与EPOS法染色时间和
结果比较 方法
时间(min)
结果/背景
LSAB法
100
+++～+/++～+
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EPOS法
40
++++～++/+～-
3 讨论
DAKO EPOS一步染色法是将特异性抗体和酶标分子结合于柔韧的多聚螯合物，使特异性抗体和检测系统结合为一种试剂，具有高灵敏性、高特异性、省时、减少处理步骤、重复性好、即用、低背景染色的优点。
3.1 省时
传统的PAP、ABC或LSAB法整个染色程序时间在2～3h之间，而DAKOEPOS一步法染色时间只需40min，大大地节约了时间，而且省去了很多繁琐的步骤。值得一提的是，利用DAKOEPOS一步法加上微波快速处理，整个染色制片过程仅用10min即可，特别适合于冰冻切片急诊手术的鉴别诊断，只需Cytokeratin、LCA、S-100、Vimentin几种抗体，就可以区分该肿瘤是来源于上皮、淋巴、神经或间叶组织的肿瘤，为手术的进一步进行和及时用药治疗提供了更为可靠的依据。
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3.2 低背景
从表1中可以发现，DAKO EPOS法染色的背景比LSAB法要低，其原因是前者只要一步即可，HRP直接结合在特异性的抗体上，无需引入桥抗，后者则需要三步，必需借助桥抗的连接且HRP是结合在非特异性的复合物上，染色步骤增多，导致背景染色加深。
3.3 高敏感性和高特异性
不同种系的IgG分子结构是相似的，因此抗一种动物的IgG可能与另一种动物的IgG会引起交叉反应。而DAKO EPOS法将一抗和检测系统结合为一种试剂，避免了动物间IgG的交叉反应，从而提高了敏感性和特异性。
此外，DAKO EPOS试剂是即用型产品，无需进行稀释，且以使用方便的滴瓶提供，减少了抗体的污染，更适合在实际操作中的应用。
收稿日期：1999-02-12；修回日期：1999-04-07, 百拇医药