72例膀胱移行细胞癌中Fas和FasL的表达
作者：谢庆祥 汪鸿 缪友仁 林福地 李金雨
单位：谢庆祥(解放军第175中心医院 泌尿外科，福建 漳州 363000)；汪鸿(解放军第175中心医院 泌尿外科，福建 漳州 363000)；缪友仁(解放军第175中心医院 泌尿外科，福建 漳州 363000)；林福地(解放军第175中心医院 病理科，福建 漳州 363000)；李金雨(解放军第175中心医院 泌尿外科，福建 漳州 363000)
关键词：膀胱肿瘤；Fas；细胞凋亡
癌症000217
【摘 要】目的:探讨细胞凋亡基因Fas和FasL在膀胱癌发病中作用及与肿瘤生物学行为和预后之间关系。方法：应用免疫组化方法检测16例正常膀胱粘膜和72例膀胱移行细胞癌标本中Fas和FasL表达。结果：膀胱癌中Fas和FasL表达均显著低于正常膀胱粘膜中表达；Fas表达与肿瘤分级、分期和复发之间均密切相关，但FasL表达与三者之间均无相关性。结论：Fas和FasL系统异常可能是膀胱癌发生发展过程中免疫逃避的重要因素；Fas可作为膀胱癌生物学行为和预后的标记物。
, http://www.100md.com
中图分类号：R737.14 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(2000)02-0156-03
The expressions of Fas and FasL in 72 cases with transitional cell cancer of bladder
XIE Qing-xiang WANG Hong MIAO You-reng et al
(The Department of Urology,The 175th Hospital of PLA,Zhangzhou 363000,P.R. China)
【Abstract】 Objective： To investigate the roles of pro-apoptosis genes Fas and FasL in the pathogenesis of transitional cell cancer of bladder and their relationships with tumor biological behaviors and prognosis. Methods: The immunohi-stochemistry technique was applied to examine the expression of Fas and FasL in 16 normal bladder mucosa and 72 specimens of transitional cell cancer of bladder. Results： The expressions of Fas and FasL in bladder cancer were significantly lower than those in normal mucosa. The expression of Fas was closely associated with tumor grade, stage and recurrence, while there was no relationship being found for the FasL expression. Conclusions: Fas and FasL system play an important role of immune-privilege in the development and progression of bladder cancer; Fas may be a predictor for biological behaviors and prognosis of bladder cancer.
, 百拇医药
Key words：Bladder neoplasm; Fas; Apoptosis
肿瘤细胞能在体内迅速增长和扩散而不被机体免疫系统清除，一直是受人关注的问题。近年来随着对Fas及其配体FasL的研究深入，人们对肿瘤免疫逃避乃至肿瘤耐药性等问题有了新的认识[1～5]，但目前对于膀胱癌Fas和FasL系统的研究甚少。本组应用免疫组化方法检测Fas和FasL蛋白在膀胱癌组织中表达并探讨其意义。
1 材料与方法
1.1 材料
收集膀胱移行细胞癌手术标本72例，年龄29～78岁，平均49.3岁，男56例、女16例，47例行肿瘤切除、17例行膀胱部分切除、8例行全膀胱切除。按WHO分级标准，Ⅰ级20例、Ⅱ级31例、Ⅲ级21例；按UICC分期，T0～T1期46例、T2～T4期26例，61例获随访1年以上，复发15例。16例正常膀胱粘膜组织作为对照。
, http://www.100md.com
⒈2 免疫组化方法
所有标本均为石蜡包埋的存档标本，切片厚4μm。免疫组化采用SP方法。Fas(1∶100)和FasL(1∶50,抗原修复)均为兔抗多克隆抗体，系Santa.Cruz公司产品，SP试剂盒为Zymed公司产品，DAB显色，苏木素复染。PBS替代一抗作为阴性对照，结肠癌组织作为阳性对照。
1.3 结果评估
根据染色程度和范围综合判断。阳性细胞数≤10%为阴性(-)、>10%为阳性，其中≤30%为(+)、≤60%为(++)、>60%为(+++)。统计方法：χ2检验。
2 结果
2.1 分布
Fas和FasL均主要分布于移行上皮细胞和癌细胞胞浆中，部分病例Fas可见胞膜和核膜分布，炎症细胞也可见两者阳性染色(图1～4)。
, 百拇医药
图1 膀胱癌(G1T1)Fas表达(SP法,×400)
图2 膀胱癌(G2T1)Fas表达(SP法,×400)
图3 正常膀胱粘膜Fas表达(SP法,×400)
图4 膀胱癌(G2T2)FasL表达(SP法,抗原修复×400)
2.2 表达
, 百拇医药
Fas和FasL在膀胱癌中表达均显著低于正常膀胱粘膜中表达(P<0.05)，Fas表达与肿瘤分级、分期和复发之间有密切相关(P<0.05)，而FasL表达与上述三者之间均无相关性(P>0.05)，具体见表1。
表1 Fas和FasL在膀胱组织中表达及其与膀胱癌病理特征之间关系 病理特征
n
Fas表达
FasL表达
-
+
, http://www.100md.com P值
-
+
P值
正常
16
0
0
0
16
1
, 百拇医药 2
3
10
癌
72
8
12
22
30
<0.01
25
11
17
19
, http://www.100md.com
>0.05
分级
Ⅰ级
20
0
2
9
9
8
2
5
5
Ⅱ级
31
, 百拇医药
3
8
5
15
8
5
9
9
Ⅲ级
21
5
2
8
6
, 百拇医药
<0.05
9
4
3
5
>0.05
分期
T0～1
46
2
6
14
24
, 百拇医药
15
7
11
13
T2～4
26
6
6
8
6
<0.05
10
4
, http://www.100md.com 6
6
>0.05
复发
有
15
4
2
3
6
4
2
4
5
, 百拇医药
否
46
1
6
17
22
<0.05
17
7
11
11
>0.05
注：表中P值为各组内Fas或FasL表达之间比较的结果
, 百拇医药
Fas表达与FasL表达之间关系：正常膀胱粘膜中两者表达基本一致；膀胱癌中两者表达之间也呈密切正相关(P<0.05)，具体见表2。复发者中两者表达之间关系也见表2。
表2 膀胱癌及肿瘤复发者中Fas与FasL表达之间关系 FasL表达
膀胱癌Fas表达
肿瘤复发者Fas表达
低表达
高表达
低表达
高表达
FasL低表达
15
, 百拇医药
21
4
2
FasL高表达
5
31
2
7
注：低表达：-和+；高表达：++和+++
3 讨论
Fas是一种属于肿瘤坏死因子受体超家族的膜蛋白，分子量为45KD；FasL则是肿瘤坏死因子超家族成员，分子量为40KD。研究表明Fas系统在介导细胞凋亡过程中可能起着重要的信号传递作用。当Fas与FasL以三聚体形式结合，可诱导表达Fas的细胞发生凋亡[1]。
, 百拇医药
研究证实许多肿瘤细胞表达Fas和/或FasL[2,4,6,7]，但对于膀胱癌中两者表达的研究了解甚少。本组结果显示正常膀胱粘膜和癌组织中均见Fas和FasL表达，而且两者表达之间密切相关，提示Fas系统参与膀胱细胞凋亡过程。膀胱癌组织中两者表达均显著低于正常组织，其中Fas表达减少更为显著，提示由于Fas系统异常而导致细胞凋亡障碍、从而促使膀胱癌的发生发展，表明Fas和FasL在膀胱癌发病中起着重要作用。
近年研究显示，Fas系统在肿瘤免疫逃避机制中起着重要作用。一方面肿瘤细胞通过减少Fas表达，逃避了T淋巴细胞的攻击作用[6,7]；其次，肿瘤细胞通过表达FasL对T淋巴细胞进行免疫反击[3～5]；第三，一些肿瘤细胞虽然表达Fas，但其能够抵制T淋巴细胞FasL介导的凋亡[8]；此外，Fas突变能够导致凋亡信号传导途径的改变[7]。从表2可以看出膀胱癌中Fas和FasL表达的模式并非呈单一型;肿瘤复发者中两者的表达也并非一致，复发者中Fas和FasL均低表达的仅为4/15、而两者高表达的为7/15，提示膀胱癌的发病与Fas和FasL系统异常而逃避免疫清除有密切关系，而且其逃避机体免疫清除的机制可能是多样性。本组同时发现相当一部分组织中浸润淋巴细胞表达FasL，但其周围的肿瘤细胞却生长活跃、PCNA指数显著高于膀胱癌平均水平[9]，而且部分肿瘤复发者中也发现此现象，进一步支持了膀胱癌发生发展过程中存在着免疫逃避的现象。因此，如何克服肿瘤免疫逃避是将来肿瘤预防、治疗新的方向。
, 百拇医药
一些研究显示Fas和FasL表达与肿瘤浸袭转移有一定关系[7,8]。Mizutanl等[10]也发现膀胱癌患者血清中一种能够拮抗Fas功能的可溶性Fas的水平显著增高，而且其水平与生存率和外周血淋巴细胞毒性负相关。本组结果则显示Fas表达与膀胱癌分级、分期和肿瘤复发之间均有密切关系，提示Fas表达强度可以反映膀胱癌恶性程度、侵袭深度和复发机率，其有可能成为预示膀胱癌生物学行为和预后的标记物。但本组发现FasL表达与膀胱癌分级、分期及复发之间均无显著关系，推测FasL异常改变主要发生在肿瘤早期阶段。
通讯作者：谢庆祥：Tel：86-596-2941472
[参考文献]
[1] Schulze OK. The Fas/APO-1 receptor and its deadly ligand [J]. Trends Cell Biol,1994,4：421～425.
, 百拇医药
[2] Xerri L, Devilard E, Hassoun J,et al. Fas ligand is not only expressed in immune privileged human organs but is also coexpressed with Fas in various epithelial tissues [J]. J Clin Pathol, 1997,50：87～91.
[3] Griffith TS,Brunner T,Fletcher SM,et al. Fas ligand-induced apoptosis as a mechanism of immune privilege [J]. Science,1995,270：1189～1192.
[4] O'Connell BJ, O'Sullivan GC, Collins JK, et al . The Fas counterattack:Fas mediated T cell killing by colon cancer cells expressing Fas ligand [J]. J Exp Med, 1996,184:1075～1082.
, 百拇医药
[5] 王晋豫,骆抗先,陈泊,等.表达FasL的肝癌细胞诱导淋巴细胞凋亡-肿瘤细胞的反击免疫机制[J].中华医学杂志,1998,78:580～581.
[6] Leithauser F,Dhein J,Mechtershimer G,et al. Constitutive and induced expression of APO-1,a new member of the nerve growth factor /tumor necrosis factor receptor superfamily,in normal and neoplastic cells [J]. Lab Invest,1993,69:415～429.
[7] Hedlund TE,Duke RC,Schleicher MS,et al.Fas-mediated apoptosis in seven human prostate cancer cell lines: correlation with tumor stage [J].Prostate, 1998:36:92～101.
, 百拇医药
[8] Ungefroren H, Voss M, Jansen M,et al. Human pancreatic adenocarcinomas express Fas and Fas ligand yet are resistant to Fas-mediated apoptosis [J]. Cancer Res,1998,58:1741～1749.
[9] 谢庆祥，汪鸿，缪友仁，等.膀胱癌碱性成纤维细胞生长因子表达的意义及其与增殖细胞核抗原的关系[J].中华实验外科杂志，1998,15:431～432.
[10] Mizutani Y,Yoshida O,Bonavida B.Prognostic significance of soluble Fas in the serum of patients with bladder cancer [J]. J Urol, 1998,160:571～576.
收稿日期：1999-03-23;修回日期：1999-04-25, http://www.100md.com
单位：谢庆祥(解放军第175中心医院 泌尿外科，福建 漳州 363000)；汪鸿(解放军第175中心医院 泌尿外科，福建 漳州 363000)；缪友仁(解放军第175中心医院 泌尿外科，福建 漳州 363000)；林福地(解放军第175中心医院 病理科，福建 漳州 363000)；李金雨(解放军第175中心医院 泌尿外科，福建 漳州 363000)
关键词：膀胱肿瘤；Fas；细胞凋亡
癌症000217
【摘 要】目的:探讨细胞凋亡基因Fas和FasL在膀胱癌发病中作用及与肿瘤生物学行为和预后之间关系。方法：应用免疫组化方法检测16例正常膀胱粘膜和72例膀胱移行细胞癌标本中Fas和FasL表达。结果：膀胱癌中Fas和FasL表达均显著低于正常膀胱粘膜中表达；Fas表达与肿瘤分级、分期和复发之间均密切相关，但FasL表达与三者之间均无相关性。结论：Fas和FasL系统异常可能是膀胱癌发生发展过程中免疫逃避的重要因素；Fas可作为膀胱癌生物学行为和预后的标记物。
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中图分类号：R737.14 文献标识码：A
文章编号：1000-467X(2000)02-0156-03
The expressions of Fas and FasL in 72 cases with transitional cell cancer of bladder
XIE Qing-xiang WANG Hong MIAO You-reng et al
(The Department of Urology,The 175th Hospital of PLA,Zhangzhou 363000,P.R. China)
【Abstract】 Objective： To investigate the roles of pro-apoptosis genes Fas and FasL in the pathogenesis of transitional cell cancer of bladder and their relationships with tumor biological behaviors and prognosis. Methods: The immunohi-stochemistry technique was applied to examine the expression of Fas and FasL in 16 normal bladder mucosa and 72 specimens of transitional cell cancer of bladder. Results： The expressions of Fas and FasL in bladder cancer were significantly lower than those in normal mucosa. The expression of Fas was closely associated with tumor grade, stage and recurrence, while there was no relationship being found for the FasL expression. Conclusions: Fas and FasL system play an important role of immune-privilege in the development and progression of bladder cancer; Fas may be a predictor for biological behaviors and prognosis of bladder cancer.
, 百拇医药
Key words：Bladder neoplasm; Fas; Apoptosis
肿瘤细胞能在体内迅速增长和扩散而不被机体免疫系统清除，一直是受人关注的问题。近年来随着对Fas及其配体FasL的研究深入，人们对肿瘤免疫逃避乃至肿瘤耐药性等问题有了新的认识[1～5]，但目前对于膀胱癌Fas和FasL系统的研究甚少。本组应用免疫组化方法检测Fas和FasL蛋白在膀胱癌组织中表达并探讨其意义。
1 材料与方法
1.1 材料
收集膀胱移行细胞癌手术标本72例，年龄29～78岁，平均49.3岁，男56例、女16例，47例行肿瘤切除、17例行膀胱部分切除、8例行全膀胱切除。按WHO分级标准，Ⅰ级20例、Ⅱ级31例、Ⅲ级21例；按UICC分期，T0～T1期46例、T2～T4期26例，61例获随访1年以上，复发15例。16例正常膀胱粘膜组织作为对照。
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⒈2 免疫组化方法
所有标本均为石蜡包埋的存档标本，切片厚4μm。免疫组化采用SP方法。Fas(1∶100)和FasL(1∶50,抗原修复)均为兔抗多克隆抗体，系Santa.Cruz公司产品，SP试剂盒为Zymed公司产品，DAB显色，苏木素复染。PBS替代一抗作为阴性对照，结肠癌组织作为阳性对照。
1.3 结果评估
根据染色程度和范围综合判断。阳性细胞数≤10%为阴性(-)、>10%为阳性，其中≤30%为(+)、≤60%为(++)、>60%为(+++)。统计方法：χ2检验。
2 结果
2.1 分布
Fas和FasL均主要分布于移行上皮细胞和癌细胞胞浆中，部分病例Fas可见胞膜和核膜分布，炎症细胞也可见两者阳性染色(图1～4)。
, 百拇医药
图1 膀胱癌(G1T1)Fas表达(SP法,×400)
图2 膀胱癌(G2T1)Fas表达(SP法,×400)
图3 正常膀胱粘膜Fas表达(SP法,×400)
图4 膀胱癌(G2T2)FasL表达(SP法,抗原修复×400)
2.2 表达
, 百拇医药
Fas和FasL在膀胱癌中表达均显著低于正常膀胱粘膜中表达(P<0.05)，Fas表达与肿瘤分级、分期和复发之间有密切相关(P<0.05)，而FasL表达与上述三者之间均无相关性(P>0.05)，具体见表1。
表1 Fas和FasL在膀胱组织中表达及其与膀胱癌病理特征之间关系 病理特征
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Fas表达
FasL表达
-
+
, http://www.100md.com P值
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0
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癌
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8
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有
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>0.05
注：表中P值为各组内Fas或FasL表达之间比较的结果
, 百拇医药
Fas表达与FasL表达之间关系：正常膀胱粘膜中两者表达基本一致；膀胱癌中两者表达之间也呈密切正相关(P<0.05)，具体见表2。复发者中两者表达之间关系也见表2。
表2 膀胱癌及肿瘤复发者中Fas与FasL表达之间关系 FasL表达
膀胱癌Fas表达
肿瘤复发者Fas表达
低表达
高表达
低表达
高表达
FasL低表达
15
, 百拇医药
21
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FasL高表达
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注：低表达：-和+；高表达：++和+++
3 讨论
Fas是一种属于肿瘤坏死因子受体超家族的膜蛋白，分子量为45KD；FasL则是肿瘤坏死因子超家族成员，分子量为40KD。研究表明Fas系统在介导细胞凋亡过程中可能起着重要的信号传递作用。当Fas与FasL以三聚体形式结合，可诱导表达Fas的细胞发生凋亡[1]。
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研究证实许多肿瘤细胞表达Fas和/或FasL[2,4,6,7]，但对于膀胱癌中两者表达的研究了解甚少。本组结果显示正常膀胱粘膜和癌组织中均见Fas和FasL表达，而且两者表达之间密切相关，提示Fas系统参与膀胱细胞凋亡过程。膀胱癌组织中两者表达均显著低于正常组织，其中Fas表达减少更为显著，提示由于Fas系统异常而导致细胞凋亡障碍、从而促使膀胱癌的发生发展，表明Fas和FasL在膀胱癌发病中起着重要作用。
近年研究显示，Fas系统在肿瘤免疫逃避机制中起着重要作用。一方面肿瘤细胞通过减少Fas表达，逃避了T淋巴细胞的攻击作用[6,7]；其次，肿瘤细胞通过表达FasL对T淋巴细胞进行免疫反击[3～5]；第三，一些肿瘤细胞虽然表达Fas，但其能够抵制T淋巴细胞FasL介导的凋亡[8]；此外，Fas突变能够导致凋亡信号传导途径的改变[7]。从表2可以看出膀胱癌中Fas和FasL表达的模式并非呈单一型;肿瘤复发者中两者的表达也并非一致，复发者中Fas和FasL均低表达的仅为4/15、而两者高表达的为7/15，提示膀胱癌的发病与Fas和FasL系统异常而逃避免疫清除有密切关系，而且其逃避机体免疫清除的机制可能是多样性。本组同时发现相当一部分组织中浸润淋巴细胞表达FasL，但其周围的肿瘤细胞却生长活跃、PCNA指数显著高于膀胱癌平均水平[9]，而且部分肿瘤复发者中也发现此现象，进一步支持了膀胱癌发生发展过程中存在着免疫逃避的现象。因此，如何克服肿瘤免疫逃避是将来肿瘤预防、治疗新的方向。
, 百拇医药
一些研究显示Fas和FasL表达与肿瘤浸袭转移有一定关系[7,8]。Mizutanl等[10]也发现膀胱癌患者血清中一种能够拮抗Fas功能的可溶性Fas的水平显著增高，而且其水平与生存率和外周血淋巴细胞毒性负相关。本组结果则显示Fas表达与膀胱癌分级、分期和肿瘤复发之间均有密切关系，提示Fas表达强度可以反映膀胱癌恶性程度、侵袭深度和复发机率，其有可能成为预示膀胱癌生物学行为和预后的标记物。但本组发现FasL表达与膀胱癌分级、分期及复发之间均无显著关系，推测FasL异常改变主要发生在肿瘤早期阶段。
通讯作者：谢庆祥：Tel：86-596-2941472
[参考文献]
[1] Schulze OK. The Fas/APO-1 receptor and its deadly ligand [J]. Trends Cell Biol,1994,4：421～425.
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[3] Griffith TS,Brunner T,Fletcher SM,et al. Fas ligand-induced apoptosis as a mechanism of immune privilege [J]. Science,1995,270：1189～1192.
[4] O'Connell BJ, O'Sullivan GC, Collins JK, et al . The Fas counterattack:Fas mediated T cell killing by colon cancer cells expressing Fas ligand [J]. J Exp Med, 1996,184:1075～1082.
, 百拇医药
[5] 王晋豫,骆抗先,陈泊,等.表达FasL的肝癌细胞诱导淋巴细胞凋亡-肿瘤细胞的反击免疫机制[J].中华医学杂志,1998,78:580～581.
[6] Leithauser F,Dhein J,Mechtershimer G,et al. Constitutive and induced expression of APO-1,a new member of the nerve growth factor /tumor necrosis factor receptor superfamily,in normal and neoplastic cells [J]. Lab Invest,1993,69:415～429.
[7] Hedlund TE,Duke RC,Schleicher MS,et al.Fas-mediated apoptosis in seven human prostate cancer cell lines: correlation with tumor stage [J].Prostate, 1998:36:92～101.
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[8] Ungefroren H, Voss M, Jansen M,et al. Human pancreatic adenocarcinomas express Fas and Fas ligand yet are resistant to Fas-mediated apoptosis [J]. Cancer Res,1998,58:1741～1749.
[9] 谢庆祥，汪鸿，缪友仁，等.膀胱癌碱性成纤维细胞生长因子表达的意义及其与增殖细胞核抗原的关系[J].中华实验外科杂志，1998,15:431～432.
[10] Mizutani Y,Yoshida O,Bonavida B.Prognostic significance of soluble Fas in the serum of patients with bladder cancer [J]. J Urol, 1998,160:571～576.
收稿日期：1999-03-23;修回日期：1999-04-25, http://www.100md.com