大肠癌不同部位粘膜细胞中增殖细胞核抗原表达的研究
作者：徐德龙 王克诚 刘宁青 肖文华 魏梅新
单位：(河北医科大学第三医院外科，石家庄050051)
关键词：结肠直肠肿瘤；诊断；癌基因蛋白质类；分析；肠粘膜；代谢
河北医科大学学报000206
摘 要 目的 探讨增殖细胞核抗原在大肠癌及癌周不同部位粘膜细胞中的表达及意义。方法 采取正常大肠10例，大肠癌远旁、近旁和癌粘膜各30例。用免疫组化染色(SP法)检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果 PCNA染色阳性物质主要定位于细胞核。PCNA阳性细胞在大肠癌组织中的分布呈不同程度的异质性。正常大肠和大肠癌粘膜细胞中PCNA阳性细胞数分别为2.42±1.02和20.21±6.58，两组间比较有极显著性差异(P<0.01)。大肠癌远旁、近旁和癌粘膜细胞中PCNA阳性细胞数分别为4.26±2.14、7.43±3.26和20.21±6.58，各组间比较均有极显著性差异(P<0.01)。PCNA的表达与大肠癌的分化程度、分期和淋巴结转移有关；与组织学类型无关。结论 PCNA是反映细胞增殖活性的重要指标。结合病理形态学观察，同时检测PCNA的表达，能更客观更准确地判断大肠癌的恶性程度和生物学特性,以及大肠癌切缘细胞的增殖活性和癌变潜能。
, http://www.100md.com
中图号 R735.3+4
EXPRESSION OF PROLIFERATING CELL NUCLEAR ANTIGEN IN
DIFFERENT LOCATIONS OF COLON CANCER MUCOSA
Xu Delong Wang Kecheng Liu Ningqing Xiao Wenhua Wei Meixin
Department of Surgery,the Third Hospital of Hebei Medical University (Shijiazhuang 050051)
ABSTRACT Objective To study the significance of proliferating cell nuclear antigen (PCNA)expression in different locations of mucosa of colon cancer. Methods S-P (Streptavidin / Peroxidasa) immunohistochemical staining was used to detect PCNA in 30 cases of colon carcinoma and 10 cases of normal colon mucosa. Results The positive PCNA staining was found in cell nuclei.The distribution of PCNA in colon cancer.was heterogenous in various degrees. The number of PCNA positive cells in normal colon mucosa and carcinoma was (2.42±1.02) and (20.21±6.58) respectively. The difference was statistically significant (P<0.01). The number of PCNA positive cells in distant mucosa of the cancer,adjacent mucosa of cancer and cancer mucosa was respectively (4.26±2.14), (7.43±3.26) and (20.21±6.58),with statistical significance (P<0.01). In colon cancer the expression of PCNA was correlated with the degree of differentiation, stage and lymphatic metastases and was not related to the histological type of colon cancer. Conclusion PCNA was an important marker to reflect cell proliferation. Combined with pathological observation, the expression of PCNA can more objectively and more accurately distinguish the degree of proliferation and malignancy in colon carcinoma, as well as malignant potentiality in the cutting margin cells of colon cancer.
, 百拇医药
MeSH colorectal neoplasms/diag;oncogene proteins/anal;intestinal mucosa/metab
增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)是DNA聚合酶δ的辅助蛋白，是DNA复制的必需物质，其含量与细胞增殖状况密切相关，现已成为检测肿瘤细胞增殖动力学的可靠指标[1]，并与肿瘤的浸润、转移和复发等生物学特性有关。目前认为，利用免疫组化方法检测PCNA的表达，在评价肿瘤细胞群体增殖活性方面优于其它技术[2]，并与流式细胞术测定的S期细胞百分率、ki-67标记指数和BrdU标记指数间有很好的相关性[3,4] 。本文研究并探讨了大肠癌不同部位(癌、癌近旁和癌远旁)粘膜细胞中PCNA的表达及其意义。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 材料:痔切除时，用活检钳咬取并经病理证实的正常直肠粘膜10例。根治性手术切除的大肠癌30例，标本离体后，立即沿肠管纵轴剖开铺展，分别取癌远旁(距肿瘤边缘5～10 cm)、癌近旁(距肿瘤边缘2 cm)和癌粘膜各1块(0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm)。30例大肠癌的组织学类型：管状腺癌21例，乳头状腺癌5例，粘液腺癌3例，印戒细胞癌1例。分化程度：高分化6例，中分化22例，低分化2例。分期：A期5例，B期14例，C期9例，D期2例。
1.2 方法:①标本处理：采取标本后立即用 10%中性福尔马林固定，12～24 h后石蜡包埋，作6 μm连续切片,分别作HE染色和PCNA免疫组化染色。②试剂：PCNA单克隆抗体Pc10、SP即用型试剂盒和DAB显色试剂盒均为美国Zymed公司产品。③染色方法：过氧化酶标记的链霉卵白素染色(SP法)，用磷酸盐缓冲液代替一抗做阴性对照。④PNCA染色结果的判断：光镜下观察细胞核被染成黄褐色者为阳性细胞。采用双盲法选取有代表性的腺上皮区域，以D16目镜测微网在400倍下 (面积0.1024 mm2)，计数网格中的阳性细胞数，每张切片计数10个网格，取其均值作为该切片PCNA阳性细胞数。⑤统计学处理:PCNA均数间的比较用t检验。
, 百拇医药
2 结 果
PCNA染色阳性物质主要定位于细胞核，呈弥漫或颗粒状着色。PCNA阳性细胞在大肠癌组织中的分布呈不同程度的异质性。
在正常大肠粘膜细胞，PCNA阳性细胞很少，为(2.42±1.02)(n=10)。大肠癌粘膜细胞，PCNA阳性细胞密集，为(20.21±6.58)(n=30)。两组间比较，有极显著性差异(P<0.01)。
在大肠癌及癌周不同部位粘膜细胞，PCNA的表达各不相同。癌远旁、近旁和癌粘膜细胞PCNA阳性细胞数分别为(4.26±2.14)、(7.43±3.26)和(20.21±6.58)，三组间比较，有极显著性差异(P<0.01)。不同分化的大肠癌粘膜细胞，PCNA阳性细胞数按高、中和低分化的顺序递增，分别为(16.70±5.74)(n=6)、(20.46±6.45)(n=22)和(28.10±3.85)(n=2)，三组间两两比较，均有显著性差异(P<0.05)。不同分期的大肠癌，PCNA阳性细胞数分别为A期(17.80±3.72)(n=5)，B期(18.24±5.46)(n=14)，C期(23.67±5.74)(n=9)，D期(24.50±5.63)(n=2)。A期与C期、A期与D期、B期与C期、B期与D期比较，均有显著性差异；A+B期与C+D期比较，有极显著性差异(P<0.01)。有淋巴结转移和无淋巴结转移的大肠癌PCNA阳性细胞数分别为(23.82±5.63)(n=11)和(18.13±4.06)(n=19)，两组间比较有极显著性差异(P<0.01)。不同组织学类型的大肠癌，PCNA阳性细胞数比较，均无显著性差异(P>0.05)。在大肠癌组织中PCNA阳性细胞密集，并可见簇状聚集现象，但并非所有的癌细胞都呈均匀一致的阳性或阴性。阳性细胞着色深浅不一，部分阳性细胞呈颗粒状强阳性着色。
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3 讨 论
大肠癌及癌周不同部位粘膜，PCNA阳性细胞数依癌远旁、近旁和癌的顺序递增，且均较正常大肠粘膜多，说明癌近旁和癌远旁粘膜细胞均有较高的增殖活性。癌近旁和癌远旁粘膜细胞的高增殖活性可能是大肠癌根治性切除术后复发的重要原因，因此，对切缘细胞具有高增殖活性的患者应视为高危人群。大肠癌粘膜PCNA的表达，按高、中、低分化的顺序，PCNA阳性细胞数依次增多，说明同时检测大肠癌细胞PCNA表达较单纯根据病理分级评估肿瘤细胞的增殖活性和恶性程度更客观准确。有淋巴结转移的大肠癌较无淋巴结转移者，PCNA阳性细胞数明显增多，提示高增殖活性的大肠癌更易向周围淋巴结转移。按A期、B期、C期、D期的顺序，PCNA阳性细胞数依次递增，A期与B期、C期与D期比较差异虽无显著性，但A+B期与C+D期比较有极显著性差异，这是否与淋巴结转移情况有关，尚须进一步研究。总之，大肠癌PCNA的表达与其分化程度、分期和淋巴结转移有关，与国外学者对胃癌[1,5]、膀胱癌[6]、前列腺癌[7]和乳癌[8]的研究结果相同。大肠癌组织中PCNA阳性细胞不仅数量多，且呈异质性分布，阳性细胞的细胞核染色深浅也不同，说明并非所有的癌细胞都呈同步增殖或具有相同的增殖活性。
, http://www.100md.com
参 考 文 献
[1]Dietrich DR. Toxicological and pathological applications of PCNA, a novel endogenous marker for cell proliferation. Crit Rev Toxicol, 1993,23(1):77
[2]Tsujihashi H,Nakanishi A, Matsuda H,et al. Cell proliferation of human bladdar tumors, determined by BRDURD and ki-67 immunostaining.J Urol,1991,145(4):846
[3]Fontanini G,Pingitore R, Bigini D. Growth faction in non-small cell lung cancer estimated by proliferating cell nuclear antigen and comparision with ki-67 labelling and DNA flow cytometry data.J Am Pathol, 1992,141(5):1285
, 百拇医药
[4]Siitonen SM, Isola JJ, Rantala IS, et al. Intratumor variation in cell proliferation in breast carcinoma as determined by anti-proliferating cell nuclear antibody and automated image analysis .Am J Pathol, 1993,99(2):226
[5]Maeda T,Chung Y,Onoda N,et al. Proliferating cell nuclear antigen labeling index of preoperative biopsy specimens in gastric carcinoma with special reference to prognosis. Cancer,1994,73(3):528
[6]Lipponen PK,Eskelinen MJ. Cell proliferation of transitional cell bladder tumour determined by PCNA/cyclin immunostaining and its prognostic value. Br J Cancer, 1992,66(1):171
, http://www.100md.com
[7]Nemoto R,Kawamura H, Miyakawn I, et al. Immunohistochemical detection of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) cyclin in human prostate adenocarcinoma. J Urol, 1993,149(1):1
[8]Thomas M, Noguchi M, Kitagawa H, et al. Prognostic value of proliferating cell nuclear antigen labelling index in breast carcinoma. J Clin Pathol, 1993,46(4):525
(1998-10-14 收稿), http://www.100md.com
单位：(河北医科大学第三医院外科，石家庄050051)
关键词：结肠直肠肿瘤；诊断；癌基因蛋白质类；分析；肠粘膜；代谢
河北医科大学学报000206
摘 要 目的 探讨增殖细胞核抗原在大肠癌及癌周不同部位粘膜细胞中的表达及意义。方法 采取正常大肠10例，大肠癌远旁、近旁和癌粘膜各30例。用免疫组化染色(SP法)检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果 PCNA染色阳性物质主要定位于细胞核。PCNA阳性细胞在大肠癌组织中的分布呈不同程度的异质性。正常大肠和大肠癌粘膜细胞中PCNA阳性细胞数分别为2.42±1.02和20.21±6.58，两组间比较有极显著性差异(P<0.01)。大肠癌远旁、近旁和癌粘膜细胞中PCNA阳性细胞数分别为4.26±2.14、7.43±3.26和20.21±6.58，各组间比较均有极显著性差异(P<0.01)。PCNA的表达与大肠癌的分化程度、分期和淋巴结转移有关；与组织学类型无关。结论 PCNA是反映细胞增殖活性的重要指标。结合病理形态学观察，同时检测PCNA的表达，能更客观更准确地判断大肠癌的恶性程度和生物学特性,以及大肠癌切缘细胞的增殖活性和癌变潜能。
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中图号 R735.3+4
EXPRESSION OF PROLIFERATING CELL NUCLEAR ANTIGEN IN
DIFFERENT LOCATIONS OF COLON CANCER MUCOSA
Xu Delong Wang Kecheng Liu Ningqing Xiao Wenhua Wei Meixin
Department of Surgery,the Third Hospital of Hebei Medical University (Shijiazhuang 050051)
ABSTRACT Objective To study the significance of proliferating cell nuclear antigen (PCNA)expression in different locations of mucosa of colon cancer. Methods S-P (Streptavidin / Peroxidasa) immunohistochemical staining was used to detect PCNA in 30 cases of colon carcinoma and 10 cases of normal colon mucosa. Results The positive PCNA staining was found in cell nuclei.The distribution of PCNA in colon cancer.was heterogenous in various degrees. The number of PCNA positive cells in normal colon mucosa and carcinoma was (2.42±1.02) and (20.21±6.58) respectively. The difference was statistically significant (P<0.01). The number of PCNA positive cells in distant mucosa of the cancer,adjacent mucosa of cancer and cancer mucosa was respectively (4.26±2.14), (7.43±3.26) and (20.21±6.58),with statistical significance (P<0.01). In colon cancer the expression of PCNA was correlated with the degree of differentiation, stage and lymphatic metastases and was not related to the histological type of colon cancer. Conclusion PCNA was an important marker to reflect cell proliferation. Combined with pathological observation, the expression of PCNA can more objectively and more accurately distinguish the degree of proliferation and malignancy in colon carcinoma, as well as malignant potentiality in the cutting margin cells of colon cancer.
, 百拇医药
MeSH colorectal neoplasms/diag;oncogene proteins/anal;intestinal mucosa/metab
增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)是DNA聚合酶δ的辅助蛋白，是DNA复制的必需物质，其含量与细胞增殖状况密切相关，现已成为检测肿瘤细胞增殖动力学的可靠指标[1]，并与肿瘤的浸润、转移和复发等生物学特性有关。目前认为，利用免疫组化方法检测PCNA的表达，在评价肿瘤细胞群体增殖活性方面优于其它技术[2]，并与流式细胞术测定的S期细胞百分率、ki-67标记指数和BrdU标记指数间有很好的相关性[3,4] 。本文研究并探讨了大肠癌不同部位(癌、癌近旁和癌远旁)粘膜细胞中PCNA的表达及其意义。
1 材料与方法
, 百拇医药 1.1 材料:痔切除时，用活检钳咬取并经病理证实的正常直肠粘膜10例。根治性手术切除的大肠癌30例，标本离体后，立即沿肠管纵轴剖开铺展，分别取癌远旁(距肿瘤边缘5～10 cm)、癌近旁(距肿瘤边缘2 cm)和癌粘膜各1块(0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm)。30例大肠癌的组织学类型：管状腺癌21例，乳头状腺癌5例，粘液腺癌3例，印戒细胞癌1例。分化程度：高分化6例，中分化22例，低分化2例。分期：A期5例，B期14例，C期9例，D期2例。
1.2 方法:①标本处理：采取标本后立即用 10%中性福尔马林固定，12～24 h后石蜡包埋，作6 μm连续切片,分别作HE染色和PCNA免疫组化染色。②试剂：PCNA单克隆抗体Pc10、SP即用型试剂盒和DAB显色试剂盒均为美国Zymed公司产品。③染色方法：过氧化酶标记的链霉卵白素染色(SP法)，用磷酸盐缓冲液代替一抗做阴性对照。④PNCA染色结果的判断：光镜下观察细胞核被染成黄褐色者为阳性细胞。采用双盲法选取有代表性的腺上皮区域，以D16目镜测微网在400倍下 (面积0.1024 mm2)，计数网格中的阳性细胞数，每张切片计数10个网格，取其均值作为该切片PCNA阳性细胞数。⑤统计学处理:PCNA均数间的比较用t检验。
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2 结 果
PCNA染色阳性物质主要定位于细胞核，呈弥漫或颗粒状着色。PCNA阳性细胞在大肠癌组织中的分布呈不同程度的异质性。
在正常大肠粘膜细胞，PCNA阳性细胞很少，为(2.42±1.02)(n=10)。大肠癌粘膜细胞，PCNA阳性细胞密集，为(20.21±6.58)(n=30)。两组间比较，有极显著性差异(P<0.01)。
在大肠癌及癌周不同部位粘膜细胞，PCNA的表达各不相同。癌远旁、近旁和癌粘膜细胞PCNA阳性细胞数分别为(4.26±2.14)、(7.43±3.26)和(20.21±6.58)，三组间比较，有极显著性差异(P<0.01)。不同分化的大肠癌粘膜细胞，PCNA阳性细胞数按高、中和低分化的顺序递增，分别为(16.70±5.74)(n=6)、(20.46±6.45)(n=22)和(28.10±3.85)(n=2)，三组间两两比较，均有显著性差异(P<0.05)。不同分期的大肠癌，PCNA阳性细胞数分别为A期(17.80±3.72)(n=5)，B期(18.24±5.46)(n=14)，C期(23.67±5.74)(n=9)，D期(24.50±5.63)(n=2)。A期与C期、A期与D期、B期与C期、B期与D期比较，均有显著性差异；A+B期与C+D期比较，有极显著性差异(P<0.01)。有淋巴结转移和无淋巴结转移的大肠癌PCNA阳性细胞数分别为(23.82±5.63)(n=11)和(18.13±4.06)(n=19)，两组间比较有极显著性差异(P<0.01)。不同组织学类型的大肠癌，PCNA阳性细胞数比较，均无显著性差异(P>0.05)。在大肠癌组织中PCNA阳性细胞密集，并可见簇状聚集现象，但并非所有的癌细胞都呈均匀一致的阳性或阴性。阳性细胞着色深浅不一，部分阳性细胞呈颗粒状强阳性着色。
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3 讨 论
大肠癌及癌周不同部位粘膜，PCNA阳性细胞数依癌远旁、近旁和癌的顺序递增，且均较正常大肠粘膜多，说明癌近旁和癌远旁粘膜细胞均有较高的增殖活性。癌近旁和癌远旁粘膜细胞的高增殖活性可能是大肠癌根治性切除术后复发的重要原因，因此，对切缘细胞具有高增殖活性的患者应视为高危人群。大肠癌粘膜PCNA的表达，按高、中、低分化的顺序，PCNA阳性细胞数依次增多，说明同时检测大肠癌细胞PCNA表达较单纯根据病理分级评估肿瘤细胞的增殖活性和恶性程度更客观准确。有淋巴结转移的大肠癌较无淋巴结转移者，PCNA阳性细胞数明显增多，提示高增殖活性的大肠癌更易向周围淋巴结转移。按A期、B期、C期、D期的顺序，PCNA阳性细胞数依次递增，A期与B期、C期与D期比较差异虽无显著性，但A+B期与C+D期比较有极显著性差异，这是否与淋巴结转移情况有关，尚须进一步研究。总之，大肠癌PCNA的表达与其分化程度、分期和淋巴结转移有关，与国外学者对胃癌[1,5]、膀胱癌[6]、前列腺癌[7]和乳癌[8]的研究结果相同。大肠癌组织中PCNA阳性细胞不仅数量多，且呈异质性分布，阳性细胞的细胞核染色深浅也不同，说明并非所有的癌细胞都呈同步增殖或具有相同的增殖活性。
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参 考 文 献
[1]Dietrich DR. Toxicological and pathological applications of PCNA, a novel endogenous marker for cell proliferation. Crit Rev Toxicol, 1993,23(1):77
[2]Tsujihashi H,Nakanishi A, Matsuda H,et al. Cell proliferation of human bladdar tumors, determined by BRDURD and ki-67 immunostaining.J Urol,1991,145(4):846
[3]Fontanini G,Pingitore R, Bigini D. Growth faction in non-small cell lung cancer estimated by proliferating cell nuclear antigen and comparision with ki-67 labelling and DNA flow cytometry data.J Am Pathol, 1992,141(5):1285
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[4]Siitonen SM, Isola JJ, Rantala IS, et al. Intratumor variation in cell proliferation in breast carcinoma as determined by anti-proliferating cell nuclear antibody and automated image analysis .Am J Pathol, 1993,99(2):226
[5]Maeda T,Chung Y,Onoda N,et al. Proliferating cell nuclear antigen labeling index of preoperative biopsy specimens in gastric carcinoma with special reference to prognosis. Cancer,1994,73(3):528
[6]Lipponen PK,Eskelinen MJ. Cell proliferation of transitional cell bladder tumour determined by PCNA/cyclin immunostaining and its prognostic value. Br J Cancer, 1992,66(1):171
, http://www.100md.com
[7]Nemoto R,Kawamura H, Miyakawn I, et al. Immunohistochemical detection of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) cyclin in human prostate adenocarcinoma. J Urol, 1993,149(1):1
[8]Thomas M, Noguchi M, Kitagawa H, et al. Prognostic value of proliferating cell nuclear antigen labelling index in breast carcinoma. J Clin Pathol, 1993,46(4):525
(1998-10-14 收稿), http://www.100md.com