纤维素酶在黄连提取工艺中的应用
作者：马桔云 赵晶岩 姜颖 于喜水
单位：马桔云 于喜水 赵晶岩(黑龙江省医药工业研究所，哈尔滨 150040)；颖(黑龙江完达山制药厂)
关键词：纤维素酶；酶解；盐酸小檗碱
中草药000213 摘 要 用黄连提取小檗碱之前，经纤维素酶进行酶解，可以提高小檗碱的收率，从而考察是否可将纤维素酶用于其它中药材的提取中，达到提高有效成分收率的目的。
近年来，纤维素酶在国外各个领域得到广泛应用，例如：食品工业，饮料工业，制取各种糖类以及提取天然产物等。然而我国的工业化用酶目前仍不普遍。大部分的中药材的细胞壁是由纤维素构成的，植物的有效成分往往被包裹在细胞壁内；纤维素则是由β-D-葡萄糖以1，4-β葡萄糖苷键连接，用纤维素酶酶解可以破坏β-D-葡萄糖键，使植物细胞壁破坏，有利于对有效成分的提取。根据这个原理，我们选用黄连提取小檗碱，对其加酶组和未加酶组进行对有效成分小檗碱提取的影响。
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1 实验材料和药品
纤维素酶粗品(活力单位2 000 U/g)海林万力达集团公司提供；盐酸小檗碱对照品中国药品生物制品检定所提供；黄连为黑龙江省药材站购进，经黑龙江省医药工业研究所生药鉴定室王有志副主任药师鉴定为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.的根茎；日本岛津CS-930双波长薄层扫描仪。
2 实验方法与结果
2.1 黄连中小檗碱提取工艺[1]：黄连粗粉50 g(酶解)
置渗漉筒中
渗漉液
滤液
干燥粗品 
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图1 层析图
2.2 黄连中小檗碱的酶提取工艺：此工艺比原工艺多了一步酶解实验，即每克生药10 U的量(0.25 g)加入纤维素酶，充分搅拌，其它工艺同原工艺2.1。
2.3 薄层层析：将加酶粗提取物甲醇溶液(1)，未加酶粗提物甲醇溶液(2)，盐酸小檗碱甲醇溶液(3)，于硅胶G薄层板上展开，取出，晾干，紫外灯下观察比较。
展开剂：正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)，展距10 cm。层析结果见图1。
2.4 收率与提取结果的比较：对不同工艺提取物进行含量测定[2]，结果见表1。
表1 加酶与未加酶提取小檗碱含量(%)
加酶法
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未加酶法
P
Ⅰ
3.633
2.107
Ⅱ
3.663
2.079
Ⅲ
4.965
3.020
Ⅳ
4.424
, 百拇医药
2.415
Ⅴ
4.483
2.953
Ⅵ
4.2336
2.5148
<0.01
3 小结与讨论[2]
从纤维素酶提取黄连有效成分小檗碱实验中，可以初步看出，在纤维素酶的作用下，小檗碱提取量大大提高，由t检验可以看出P<0.01，两种工艺提取方法对比，有极显著差异。新工艺只是比原工艺多了一步向其中加入了0.25 g纤维素酶，其它各步都是完全平行进行的，因此可以否认由于实验不平行引起的提取量的差异。通过薄层层析可以看出加酶组提取的成分与未加酶组提取的成分一致，说明酶的加入对所提有效成分没有影响，因此考虑是否将它用于黄连提取的工业化中，能否将其用于其它天然产物的提取，需考虑酶的浓度、底物的浓度、温度、酸碱度、抑制剂和激动剂等对提取物有何影响，有待进一步深入探讨。■
马桔云 女，1984年毕业于黑龙江中医学院，医学学士，副主任药师，黑龙江医药工业研究所植化研究室主任。主要从事中药的开发与新药的研究。参与多个新药的研究，在《中成药》、《中国中药杂志》、《黑龙江医药》等学术刊物上发表论文20余篇。
参考文献
1，唐得时主编.中药化学.北京：人民卫生出版社，1996：38
2，李 红，等.中草药，1994，25(3)：6
(1999-6-25 收稿), 百拇医药
单位：马桔云 于喜水 赵晶岩(黑龙江省医药工业研究所，哈尔滨 150040)；颖(黑龙江完达山制药厂)
关键词：纤维素酶；酶解；盐酸小檗碱
中草药000213 摘 要 用黄连提取小檗碱之前，经纤维素酶进行酶解，可以提高小檗碱的收率，从而考察是否可将纤维素酶用于其它中药材的提取中，达到提高有效成分收率的目的。
近年来，纤维素酶在国外各个领域得到广泛应用，例如：食品工业，饮料工业，制取各种糖类以及提取天然产物等。然而我国的工业化用酶目前仍不普遍。大部分的中药材的细胞壁是由纤维素构成的，植物的有效成分往往被包裹在细胞壁内；纤维素则是由β-D-葡萄糖以1，4-β葡萄糖苷键连接，用纤维素酶酶解可以破坏β-D-葡萄糖键，使植物细胞壁破坏，有利于对有效成分的提取。根据这个原理，我们选用黄连提取小檗碱，对其加酶组和未加酶组进行对有效成分小檗碱提取的影响。
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1 实验材料和药品
纤维素酶粗品(活力单位2 000 U/g)海林万力达集团公司提供；盐酸小檗碱对照品中国药品生物制品检定所提供；黄连为黑龙江省药材站购进，经黑龙江省医药工业研究所生药鉴定室王有志副主任药师鉴定为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.的根茎；日本岛津CS-930双波长薄层扫描仪。
2 实验方法与结果
2.1 黄连中小檗碱提取工艺[1]：黄连粗粉50 g(酶解)
置渗漉筒中渗漉液滤液干燥粗品 , http://www.100md.com
图1 层析图
2.2 黄连中小檗碱的酶提取工艺：此工艺比原工艺多了一步酶解实验，即每克生药10 U的量(0.25 g)加入纤维素酶，充分搅拌，其它工艺同原工艺2.1。
2.3 薄层层析：将加酶粗提取物甲醇溶液(1)，未加酶粗提物甲醇溶液(2)，盐酸小檗碱甲醇溶液(3)，于硅胶G薄层板上展开，取出，晾干，紫外灯下观察比较。
展开剂：正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)，展距10 cm。层析结果见图1。
2.4 收率与提取结果的比较：对不同工艺提取物进行含量测定[2]，结果见表1。
表1 加酶与未加酶提取小檗碱含量(%)
加酶法
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未加酶法
P
Ⅰ
3.633
2.107
Ⅱ
3.663
2.079
Ⅲ
4.965
3.020
Ⅳ
4.424
, 百拇医药
2.415
Ⅴ
4.483
2.953
Ⅵ
4.2336
2.5148
<0.01
3 小结与讨论[2]
从纤维素酶提取黄连有效成分小檗碱实验中，可以初步看出，在纤维素酶的作用下，小檗碱提取量大大提高，由t检验可以看出P<0.01，两种工艺提取方法对比，有极显著差异。新工艺只是比原工艺多了一步向其中加入了0.25 g纤维素酶，其它各步都是完全平行进行的，因此可以否认由于实验不平行引起的提取量的差异。通过薄层层析可以看出加酶组提取的成分与未加酶组提取的成分一致，说明酶的加入对所提有效成分没有影响，因此考虑是否将它用于黄连提取的工业化中，能否将其用于其它天然产物的提取，需考虑酶的浓度、底物的浓度、温度、酸碱度、抑制剂和激动剂等对提取物有何影响，有待进一步深入探讨。■
马桔云 女，1984年毕业于黑龙江中医学院，医学学士，副主任药师，黑龙江医药工业研究所植化研究室主任。主要从事中药的开发与新药的研究。参与多个新药的研究，在《中成药》、《中国中药杂志》、《黑龙江医药》等学术刊物上发表论文20余篇。
参考文献
1，唐得时主编.中药化学.北京：人民卫生出版社，1996：38
2，李 红，等.中草药，1994，25(3)：6
(1999-6-25 收稿), 百拇医药