洛泰对异丙肾上腺素诱导大鼠急性心肌缺血的保护作用
作者：雷秀玲 董雪峰 李玲 陈植和
单位：雷秀玲(昆明医学院药理教研室,昆明 650031)；董雪峰(昆明滇虹药业有限公司)；李玲 陈植和(云南省天然药物药理重点实验室)
关键词：洛泰；异丙肾上腺素；大鼠；急性心肌缺血；心电图
中国临床药理学与治疗学000215
目的 观察三七总皂甙的新剂型——洛泰(血塞通粉针剂，主要成分为三七总皂甙)对大鼠急性心肌缺血的保护作用。方法 采用微量异丙肾上腺素(ISO)恒速静注造成大鼠急性心肌缺血的模型，动态观测Ⅱ导联心电图S-T段的变化，以ST段降低及∑ST为指标反映缺血程度。结果 静脉注射洛泰50,100 mg.kg-1，对ISO 诱导大鼠急性心肌缺血有一定程度的保护作用, 呈剂量依赖性，其中以100 mg.kg-1组对心电图的改善作用较明显。灌胃给予洛泰对ISO 诱导大鼠实验性急性心肌缺血也有一定程度的减轻作用，但没有统计学差异。结论 采用改进的大鼠急性心肌缺血模型具有稳定性和重复性好、快捷有效、易掌握、耗费药品少等优点，适宜于初筛药物。同时实验结果提示静脉和灌胃两种途径给予洛泰对大鼠急性心肌缺血均具有一定程度的保护作用。
, http://www.100md.com
中图分类号 R282.7
Powdered injections of luotai protect against ISO-induced
experimental myocardial ischemia model on rats
LEI Xiu-Ling
(Department of Pharmacology, Kunming Medical College, Kunming 650031)
DONG Xue-Feng
(Department of Pharmacology, Kunming Medical College, Kunming 650031)
, 百拇医药
LI Leng
(Department of Pharmacology, Kunming Medical College, Kunming 650031)
CHEN Zhi-He
(Department of Pharmacology, Kunming Medical College, Kunming 650031)
Aim Powdered injections of luotai consist of total saponins of panax notoginseng(PNS) which protect against ischemia injury from myocardial reperfusion injury.Methods ISO-induced acute myocardial ischemia model in rat was made, which decreased S-T sigments in ECG.Luotai after intravenous injection or oral can protect against S-T sigment significant reduction and ∑ST after ISO induced acute myocardial ischemia .Results Luotai 50 mg.kg-1 and 100 mg.kg-1 significantly inhibited S-T sigment decreases. Conclusion Luotai protect ISO induced acute myocardial ischemia and has dose-dependent effect.This ISO-induced acute myocardial ischemia model in rat has some significant advantages,for example,higher stability, good duplication, quickly filtrates, easily masters.
, 百拇医药
Key words powdered injections of luotai(consist of PNS); isoproterenol(ISO); rat; myocardial ischemia; electrocardiogram
洛泰(血塞通粉针剂，主要成分为三七总皂甙)具有活血化淤、增加脑血流量、保护脑缺血的作用，并对结扎大鼠冠脉所致心肌缺血后再灌注损伤也有保护作用等[1～3]。本文参阅国外文献[4]，采用改进的大鼠急性心肌缺血模型，即用微量异丙肾上腺素(ISO)恒速静注造成大鼠急性心肌缺血的模型，以动态观测心电图S-T段的降低及ΣST降低为指标反映缺血程度，观察静脉和灌胃两种途径给予洛泰对大鼠急性心肌缺血的保护作用。为血塞通的剂型改造及三七资源的开发利用提供一定的药理学依据。
1 材料
1.1 动物 健康SD大鼠，体重(245±38)g,雌雄兼用(由云南省天然药物药理重点实验室动物室提供，合格证号：云卫动管第A012)。
, 百拇医药
1.2 药品 洛泰(血塞通粉针剂，主要成分为三七总皂甙,由昆明制药厂提供,批号：970103，用洛泰溶剂溶解，再用蒸馏水稀释后备用)。 异丙肾上腺素(ISO,上海天丰制药厂, 批号:9612029)。nifedipine(Sigma公司)。
1.3 仪器 6511 型心电图机(日本光电公司)；ZCZ-50 自动抽注机( 浙江医科大学医学仪器实验厂)。
表1 静脉注射洛泰对大鼠心电图S-T段的影响 组别
剂量/mg.kg-1
恒速给ISO后S-T段下移/mV
1/min
2/min
, 百拇医药
3/min
4/min
5/min
溶媒
0.10±0.07
0.12±0.08
0.15±0.06
0.19±0.08
0.19±0.08
洛泰
50
0.05±0.03*
, 百拇医药
0.08±0.06
0.11±0.05
0.12±0.02
0.10±0.04**
洛泰
100
0.06±0.03*
0.06±0.04*
0.06±0.04*
0.09±0.05**△
, 百拇医药 0.07±0.03**△
Nifedipine
0.1
0.05±0.03*
0.07±0.05*
0.08±0.04*
0.12±0.06
0.12±0.06
与洛泰溶剂对照组比较*P<0.05,**P<0.01;与洛泰小剂量组比较△P<0.05表2 洛泰灌胃对大鼠心电图S-T段的影响 组别
, 百拇医药 剂量/mg.kg-1
恒速给ISO后S-T段下移/mV
1/min
2/min
3/min
4/min
5/min
溶媒
0.09±0.10
0.12±0.11
0.14±0.09
, http://www.100md.com
0.16±0.08
0.15±0.08
洛泰
100
0.08±0.03
0.09±0.03
0.11±0.05
0.15±0.06
0.15±0.03
洛泰
200
0.06±0.04
, 百拇医药
0.10±0.03
0.13±0.04
0.14±0.07
0.13±0.07
Nifedipine
0.1
0.04±0.03
0.07±0.04*
0.09±0.05
0.12±0.06
0.12±0.06
, 百拇医药 与洛泰溶剂对照组比较*P<0.05
2 方法
2.1 分组 静脉给药组:大鼠随机分为4组，每组10只，分别为：①洛泰小剂量组(50 mg· kg1);②洛泰大剂量组(100 mg.kg-1);③nifedipine组(100 μg.kg-1);④洛泰溶剂对照组。
灌胃给药组：大鼠随机分为4组, 每组10只，分别为 ①洛泰小剂量组(100 mg.kg-1);②洛泰大剂量组(200 mg.kg-1);③nifedipine组(100 μg.kg-1);④生理盐水对照组。 以上4组每天灌胃给药一次, 连续给药7 d。
, http://www.100md.com
2.2 造型 用25%乌拉坦1 g.kg-1，ip,麻醉大鼠。测给药前心电图，用ISO筛选合格动物, 即ISO 10 μg.kg-1恒速iv 5 min(ST段压低>0.1 mV为合格, 按1 mV=10 mm 定标)。静脉给药组大鼠于30 min 后再按上述分组分别静脉缓推给药,于给药后5 min 重复给予ISO,观察并记录Ⅱ导联心电图J点(ST 段) 变化,连续记录15 min。灌胃给药组大鼠于末次给药后1 h重复给予ISO, 观察并记录Ⅱ导联心电图J点(ST 段) 变化,连续记录15 min。
2.3 统计学处理 采用组间配对t检验。
3 结果
3.1 静脉注射洛泰对ISO诱导大鼠急性心肌缺血的作用 见表1、图1。
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由表1、图1可见， 不同剂量的洛泰及nifedi- pine均有一定程度的减轻大鼠心电图S-T段下移的作用, 以洛泰大剂量组(100 mg.kg-1)的作用更为显著, 呈剂量依赖性。
图1 静脉注射洛泰对ISO诱导大鼠心肌缺血的保护作用
—◆—洛泰小剂量，—■—洛泰大剂量，—▲—nifedipine,—*—洛泰溶剂
3.2 灌胃给予洛泰对ISO诱导大鼠心肌缺血的保护作用 见表2、图2。
由表2、图2可见，灌胃给予洛泰对大鼠心电图S-T段下移有一定减轻作用, 但无统计学差异。
, 百拇医药
图2 灌胃给予洛泰对ISO诱导大鼠心肌缺血的保护作用
—◆—洛泰小剂量，—■—洛泰大剂量，—▲—nifedipine,—*—洛泰溶剂
4 讨论
经典的实验性心肌缺血方法是结扎冠脉造成心肌缺血[5]。但此方法要求有一定的技术难度，不适宜初筛。药物诱导大鼠急性心肌缺血的方法，国内有报道用垂体后叶素诱导大鼠实验性心肌缺血[6]，此方法观测S-T段改变不够稳定，动物个体差异较大，故多用于离体器官实验。国内也有报道用异丙肾上腺素皮下注射或腹腔注射诱导大鼠心肌缺血或心肌坏死[7～10]，其不足之处在于异丙肾上腺素的用量悬殊较大，一般在40～100 mg.kg-1，最小为1 mg.kg-1，最大达500 mg.kg-1，连用2次或2～3 d，所造成的心肌缺血不够稳定。本实验中采用恒速静脉注射微量异丙肾上腺素(10 μg.kg-1，连续5 min)诱导大鼠急性心肌缺血的模型，具有稳定性和重复性好、快捷有效、易掌握、耗费药品少等优点。在改进大鼠实验性急性心肌缺血模型过程中，发现在一次或多次给予ISO引起短暂的心肌缺血后，会产生对再次给ISO的耐受性，即产生心肌缺血的预适应现象[11～13]；同时有少数动物对异丙肾上腺素不敏感。这就必须预先筛选合格动物，经反复摸索发现在动物筛选合格后，需要间隔30 min(一般10 min基本恢复，30 min心电图完全恢复正常。此期间注意给麻醉动物保温)，再给待测药物进行实验。实验结果表明，静脉和灌胃给予洛泰对ISO 诱导大鼠实验性急性心肌缺血均有一定程度的减轻作用，其中以静注洛泰100 mg.kg-1组对改善心电图S-T段下移的作用较显著，呈剂量依赖性。结果提示洛泰对大鼠实验性急性心肌缺血具有一定程度的保护作用。这为血塞通的剂型改造及洛泰的临床应用提供一定的药理学依据，也为开发高技术含量的三七类药品和充分利用云南省丰富的三七药源提供一定的依据。
, 百拇医药
云南省科委应用基础青年基金资助项目(№96C076Q)
雷秀玲，硕士，副教授，主要从事心血管药理、免疫药理及天然药物药理的实验研究。
参考文献
1，李杏,陈俊秀,孙家钧. 三七皂甙对大鼠实验性心肌缺血再灌注损伤的保护作用. 中国药理学报,1990;11(1):26
2，武杰雄，陈俊秀.三七总皂甙的负性变频和变力作用.中国药理学报,1988;9(5):409
3，张宝恒.三七药理作用的研究进展.中草药,1984;15(11):34
4，Harada K,Fukata Y,Miwa A,et al.Effect of KRN2391,a Novel Vasodilator,on Various Experimental Anginal Models in Rats, Japan J. Pharmacol.1993;63:65
, 百拇医药
5，徐叔云,苄如濂,陈修,主编.药理实验方法学.第2版.北京：人民卫生出版社，1982
6，杨传彪,侯士良.补心镇痛口服液抗心肌缺血的药理研究.安徽中医学院学报，1995;14(4):59
7，谢秀琼，主编.中药新制剂开发与应用.第1版.人民卫生出版社，1995：160
8，朱全明.异丙肾上腺素致动物心肌坏死的实验方法.山东医学院学报,1981;(3):80
9，邓汉武,李元建,沈乃,等.辽东惚木总甙对大鼠实验性心肌缺血的保护作用.中国药理学与毒理学杂志，1988;2(1):20
10，上海中医学院冠心病研究协作组. 益母草对大鼠异丙肾上腺素性心肌缺血的治疗作用及机理研究. 中医杂志， 1980;(10):68
11，陈莹莹,鲁巍峰,夏强.缺血预处理的心肌保护作用机制及其临床意义.心血管病学进展,1997;18 (5):271
12，武旭东,徐成斌.心肌缺血预处理机制的研究进展. 心血管病学进展,1997;18 (5):27
13.，鲁巍峰，夏强，张雄,等.丹参注射液加强缺血预处理对大鼠心肌的保护作用.中草药,1998；29(7)：460
2000-03-21 收稿，2000-04-26 修回, 百拇医药
单位：雷秀玲(昆明医学院药理教研室,昆明 650031)；董雪峰(昆明滇虹药业有限公司)；李玲 陈植和(云南省天然药物药理重点实验室)
关键词：洛泰；异丙肾上腺素；大鼠；急性心肌缺血；心电图
中国临床药理学与治疗学000215
目的 观察三七总皂甙的新剂型——洛泰(血塞通粉针剂，主要成分为三七总皂甙)对大鼠急性心肌缺血的保护作用。方法 采用微量异丙肾上腺素(ISO)恒速静注造成大鼠急性心肌缺血的模型，动态观测Ⅱ导联心电图S-T段的变化，以ST段降低及∑ST为指标反映缺血程度。结果 静脉注射洛泰50,100 mg.kg-1，对ISO 诱导大鼠急性心肌缺血有一定程度的保护作用, 呈剂量依赖性，其中以100 mg.kg-1组对心电图的改善作用较明显。灌胃给予洛泰对ISO 诱导大鼠实验性急性心肌缺血也有一定程度的减轻作用，但没有统计学差异。结论 采用改进的大鼠急性心肌缺血模型具有稳定性和重复性好、快捷有效、易掌握、耗费药品少等优点，适宜于初筛药物。同时实验结果提示静脉和灌胃两种途径给予洛泰对大鼠急性心肌缺血均具有一定程度的保护作用。
, http://www.100md.com
中图分类号 R282.7
Powdered injections of luotai protect against ISO-induced
experimental myocardial ischemia model on rats
LEI Xiu-Ling
(Department of Pharmacology, Kunming Medical College, Kunming 650031)
DONG Xue-Feng
(Department of Pharmacology, Kunming Medical College, Kunming 650031)
, 百拇医药
LI Leng
(Department of Pharmacology, Kunming Medical College, Kunming 650031)
CHEN Zhi-He
(Department of Pharmacology, Kunming Medical College, Kunming 650031)
Aim Powdered injections of luotai consist of total saponins of panax notoginseng(PNS) which protect against ischemia injury from myocardial reperfusion injury.Methods ISO-induced acute myocardial ischemia model in rat was made, which decreased S-T sigments in ECG.Luotai after intravenous injection or oral can protect against S-T sigment significant reduction and ∑ST after ISO induced acute myocardial ischemia .Results Luotai 50 mg.kg-1 and 100 mg.kg-1 significantly inhibited S-T sigment decreases. Conclusion Luotai protect ISO induced acute myocardial ischemia and has dose-dependent effect.This ISO-induced acute myocardial ischemia model in rat has some significant advantages,for example,higher stability, good duplication, quickly filtrates, easily masters.
, 百拇医药
Key words powdered injections of luotai(consist of PNS); isoproterenol(ISO); rat; myocardial ischemia; electrocardiogram
洛泰(血塞通粉针剂，主要成分为三七总皂甙)具有活血化淤、增加脑血流量、保护脑缺血的作用，并对结扎大鼠冠脉所致心肌缺血后再灌注损伤也有保护作用等[1～3]。本文参阅国外文献[4]，采用改进的大鼠急性心肌缺血模型，即用微量异丙肾上腺素(ISO)恒速静注造成大鼠急性心肌缺血的模型，以动态观测心电图S-T段的降低及ΣST降低为指标反映缺血程度，观察静脉和灌胃两种途径给予洛泰对大鼠急性心肌缺血的保护作用。为血塞通的剂型改造及三七资源的开发利用提供一定的药理学依据。
1 材料
1.1 动物 健康SD大鼠，体重(245±38)g,雌雄兼用(由云南省天然药物药理重点实验室动物室提供，合格证号：云卫动管第A012)。
, 百拇医药
1.2 药品 洛泰(血塞通粉针剂，主要成分为三七总皂甙,由昆明制药厂提供,批号：970103，用洛泰溶剂溶解，再用蒸馏水稀释后备用)。 异丙肾上腺素(ISO,上海天丰制药厂, 批号:9612029)。nifedipine(Sigma公司)。
1.3 仪器 6511 型心电图机(日本光电公司)；ZCZ-50 自动抽注机( 浙江医科大学医学仪器实验厂)。
表1 静脉注射洛泰对大鼠心电图S-T段的影响 组别
剂量/mg.kg-1
恒速给ISO后S-T段下移/mV
1/min
2/min
, 百拇医药
3/min
4/min
5/min
溶媒
0.10±0.07
0.12±0.08
0.15±0.06
0.19±0.08
0.19±0.08
洛泰
50
0.05±0.03*
, 百拇医药
0.08±0.06
0.11±0.05
0.12±0.02
0.10±0.04**
洛泰
100
0.06±0.03*
0.06±0.04*
0.06±0.04*
0.09±0.05**△
, 百拇医药 0.07±0.03**△
Nifedipine
0.1
0.05±0.03*
0.07±0.05*
0.08±0.04*
0.12±0.06
0.12±0.06
与洛泰溶剂对照组比较*P<0.05,**P<0.01;与洛泰小剂量组比较△P<0.05表2 洛泰灌胃对大鼠心电图S-T段的影响 组别
, 百拇医药 剂量/mg.kg-1
恒速给ISO后S-T段下移/mV
1/min
2/min
3/min
4/min
5/min
溶媒
0.09±0.10
0.12±0.11
0.14±0.09
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0.16±0.08
0.15±0.08
洛泰
100
0.08±0.03
0.09±0.03
0.11±0.05
0.15±0.06
0.15±0.03
洛泰
200
0.06±0.04
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0.10±0.03
0.13±0.04
0.14±0.07
0.13±0.07
Nifedipine
0.1
0.04±0.03
0.07±0.04*
0.09±0.05
0.12±0.06
0.12±0.06
, 百拇医药 与洛泰溶剂对照组比较*P<0.05
2 方法
2.1 分组 静脉给药组:大鼠随机分为4组，每组10只，分别为：①洛泰小剂量组(50 mg· kg1);②洛泰大剂量组(100 mg.kg-1);③nifedipine组(100 μg.kg-1);④洛泰溶剂对照组。
灌胃给药组：大鼠随机分为4组, 每组10只，分别为 ①洛泰小剂量组(100 mg.kg-1);②洛泰大剂量组(200 mg.kg-1);③nifedipine组(100 μg.kg-1);④生理盐水对照组。 以上4组每天灌胃给药一次, 连续给药7 d。
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2.2 造型 用25%乌拉坦1 g.kg-1，ip,麻醉大鼠。测给药前心电图，用ISO筛选合格动物, 即ISO 10 μg.kg-1恒速iv 5 min(ST段压低>0.1 mV为合格, 按1 mV=10 mm 定标)。静脉给药组大鼠于30 min 后再按上述分组分别静脉缓推给药,于给药后5 min 重复给予ISO,观察并记录Ⅱ导联心电图J点(ST 段) 变化,连续记录15 min。灌胃给药组大鼠于末次给药后1 h重复给予ISO, 观察并记录Ⅱ导联心电图J点(ST 段) 变化,连续记录15 min。
2.3 统计学处理 采用组间配对t检验。
3 结果
3.1 静脉注射洛泰对ISO诱导大鼠急性心肌缺血的作用 见表1、图1。
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由表1、图1可见， 不同剂量的洛泰及nifedi- pine均有一定程度的减轻大鼠心电图S-T段下移的作用, 以洛泰大剂量组(100 mg.kg-1)的作用更为显著, 呈剂量依赖性。
图1 静脉注射洛泰对ISO诱导大鼠心肌缺血的保护作用
—◆—洛泰小剂量，—■—洛泰大剂量，—▲—nifedipine,—*—洛泰溶剂
3.2 灌胃给予洛泰对ISO诱导大鼠心肌缺血的保护作用 见表2、图2。
由表2、图2可见，灌胃给予洛泰对大鼠心电图S-T段下移有一定减轻作用, 但无统计学差异。
, 百拇医药
图2 灌胃给予洛泰对ISO诱导大鼠心肌缺血的保护作用
—◆—洛泰小剂量，—■—洛泰大剂量，—▲—nifedipine,—*—洛泰溶剂
4 讨论
经典的实验性心肌缺血方法是结扎冠脉造成心肌缺血[5]。但此方法要求有一定的技术难度，不适宜初筛。药物诱导大鼠急性心肌缺血的方法，国内有报道用垂体后叶素诱导大鼠实验性心肌缺血[6]，此方法观测S-T段改变不够稳定，动物个体差异较大，故多用于离体器官实验。国内也有报道用异丙肾上腺素皮下注射或腹腔注射诱导大鼠心肌缺血或心肌坏死[7～10]，其不足之处在于异丙肾上腺素的用量悬殊较大，一般在40～100 mg.kg-1，最小为1 mg.kg-1，最大达500 mg.kg-1，连用2次或2～3 d，所造成的心肌缺血不够稳定。本实验中采用恒速静脉注射微量异丙肾上腺素(10 μg.kg-1，连续5 min)诱导大鼠急性心肌缺血的模型，具有稳定性和重复性好、快捷有效、易掌握、耗费药品少等优点。在改进大鼠实验性急性心肌缺血模型过程中，发现在一次或多次给予ISO引起短暂的心肌缺血后，会产生对再次给ISO的耐受性，即产生心肌缺血的预适应现象[11～13]；同时有少数动物对异丙肾上腺素不敏感。这就必须预先筛选合格动物，经反复摸索发现在动物筛选合格后，需要间隔30 min(一般10 min基本恢复，30 min心电图完全恢复正常。此期间注意给麻醉动物保温)，再给待测药物进行实验。实验结果表明，静脉和灌胃给予洛泰对ISO 诱导大鼠实验性急性心肌缺血均有一定程度的减轻作用，其中以静注洛泰100 mg.kg-1组对改善心电图S-T段下移的作用较显著，呈剂量依赖性。结果提示洛泰对大鼠实验性急性心肌缺血具有一定程度的保护作用。这为血塞通的剂型改造及洛泰的临床应用提供一定的药理学依据，也为开发高技术含量的三七类药品和充分利用云南省丰富的三七药源提供一定的依据。
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云南省科委应用基础青年基金资助项目(№96C076Q)
雷秀玲，硕士，副教授，主要从事心血管药理、免疫药理及天然药物药理的实验研究。
参考文献
1，李杏,陈俊秀,孙家钧. 三七皂甙对大鼠实验性心肌缺血再灌注损伤的保护作用. 中国药理学报,1990;11(1):26
2，武杰雄，陈俊秀.三七总皂甙的负性变频和变力作用.中国药理学报,1988;9(5):409
3，张宝恒.三七药理作用的研究进展.中草药,1984;15(11):34
4，Harada K,Fukata Y,Miwa A,et al.Effect of KRN2391,a Novel Vasodilator,on Various Experimental Anginal Models in Rats, Japan J. Pharmacol.1993;63:65
, 百拇医药
5，徐叔云,苄如濂,陈修,主编.药理实验方法学.第2版.北京：人民卫生出版社，1982
6，杨传彪,侯士良.补心镇痛口服液抗心肌缺血的药理研究.安徽中医学院学报，1995;14(4):59
7，谢秀琼，主编.中药新制剂开发与应用.第1版.人民卫生出版社，1995：160
8，朱全明.异丙肾上腺素致动物心肌坏死的实验方法.山东医学院学报,1981;(3):80
9，邓汉武,李元建,沈乃,等.辽东惚木总甙对大鼠实验性心肌缺血的保护作用.中国药理学与毒理学杂志，1988;2(1):20
10，上海中医学院冠心病研究协作组. 益母草对大鼠异丙肾上腺素性心肌缺血的治疗作用及机理研究. 中医杂志， 1980;(10):68
11，陈莹莹,鲁巍峰,夏强.缺血预处理的心肌保护作用机制及其临床意义.心血管病学进展,1997;18 (5):271
12，武旭东,徐成斌.心肌缺血预处理机制的研究进展. 心血管病学进展,1997;18 (5):27
13.，鲁巍峰，夏强，张雄,等.丹参注射液加强缺血预处理对大鼠心肌的保护作用.中草药,1998；29(7)：460
2000-03-21 收稿，2000-04-26 修回, 百拇医药